listeria李斯特菌的检验
李斯特菌检验及快检技术
李斯特菌检验及快检技术一、引言1.对李斯特菌的介绍2.李斯特菌的危害性3.检测技术的重要性二、李斯特菌检验技术的基本原理1.传统的检测方法2.分子生物学的检测方法三、李斯特菌快检技术的基本原理1.免疫学快检技术2.核酸检测快检技术四、李斯特菌检验技术的应用1.食品中李斯特菌的检测2.体外环境中李斯特菌的检测五、结论1.总结李斯特菌检测技术的优缺点2.展望李斯特菌检测技术未来的发展方向附注：写论文除了需要提纲，还需要深入调研、资料整理、论文撰写等工作。
如需帮助，欢迎发起新的任务。
第一章：引言李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性的革兰氏杆菌，是一种人畜共患病菌，能够引起严重的人类食源性感染（Listeriosis）。
该菌可以从土壤、水、粪便中分离出来，同时也可以从生食或未经充分加热的食物中分离出来，因此是食品安全领域中的一个相关热点。
根据世界卫生组织的数据，每年全球有超过2000万人感染李斯特菌，其中约70%的患者死亡，还有很多人因为骨髓炎、中枢神经系统炎症等病症而面临长期的治疗和严重的健康风险。
因此，对李斯特菌的检测技术具有极大的现实意义。
第二章：李斯特菌检验技术的基本原理李斯特菌的检测技术可分为传统的检测方法和现代的分子生物学检测方法两种。
1.传统的检测方法传统的李斯特菌检测方法包括了传统的培养法、浸泡法、热激法、膜过滤法、小样品快速检测等。
其中，传统培养法是最常用的方法之一，通过在特定富营养液中定期供气供养菌株，使其持续繁殖，从而可以在培养皿上观察到典型的李斯特菌菌落。
但是，传统的培养法需要数日至数周才能获得结果，无法满足急速检测的要求，此外，还有可能会因为培养条件不当而遗漏不易培养的物种，或者因污染而致假阳性结果。
2.分子生物学的检测方法分子生物学检测法包括了PCR技术、荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH）、核酸芯片技术、蓝色荧光蛋白标记技术（Green Fluorescent Protein, GFP）和基于质谱技术的全扫描方法等。
李斯特氏菌检验
对小鼠的致病力试验： 取0.5ml的1010cfu/ml的浓缩菌液注射小 白鼠腹腔3-5只，致病株于3-5日内死亡。单 核细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌 对小鼠有致病性。
研究表明，只有单核增生李斯特氏菌和人类的李斯特 氏菌症（listeriosis）相关。
概述
单增李斯特氏菌能引起人、畜的李斯特氏菌病，感染后 主要表现为败血症、脑膜炎和流产等。易感人群主要为孕妇、 老人、新生儿和免疫缺陷人群。大多数发达国家人类李斯特 菌病发生率约为每一百万人2-15例，死亡率为13%-34%。
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鉴定-溶血试验
将羊血琼脂平板底面划分小格，从TSA-YE 上挑取菌落刺种到血平板上，每格刺种一 个菌落，并刺种阳性对照菌(单增李斯特菌 和绵羊利斯特菌)和阴性对照菌(英诺克李斯 特菌)，于35℃培养24h-48h，穿刺时尽量接 近底部，但不要触到底面，同时避免琼脂 破裂。 于明亮处观察，单增和斯氏在刺种 点周围产生狭小的透明溶血环，无害无溶 血环，伊氏产生大的透明溶血环。
种的生化特征见下表：
溶血 反应 硝酸 盐 还原 尿素 酶 甘露 醇 菌 种 MR/VP 鼠李糖 木糖
单核细胞增生李斯
特氏菌 绵羊李斯特氏菌 英诺克李斯特氏菌 威尔斯李斯特氏菌 西尔李斯特氏菌 格氏李斯特氏菌 默尔李斯特氏菌
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李斯特菌形态复杂性类群分离鉴定观象思
李斯特菌形态复杂性类群分离鉴定观象思李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种以革兰氏阳性菌属于分枝杆菌科的细菌，被广泛认为是一种主要致病性菌，因其在食品中引起的食物中毒而引起关注。
为了确定李斯特菌的存在和防止其对公共卫生的威胁，需要进行形态复杂性类群的分离鉴定。
李斯特菌的形态复杂性类群分离鉴定主要包括以下几个步骤：1. 样品采集：首先，需要采集可能含有李斯特菌的样品。
常见的样品包括生鲜食品、家禽肉类和乳制品等。
采集样品时，需要使用无菌容器，并避免与外界环境污染。
2. 样品预处理：样品预处理是为了去除潜在的抑制因素，以提高李斯特菌的分离效率。
预处理包括样品的去外壳、灭菌、稀释等步骤。
3. 李斯特菌的分离：将经过预处理的样品进行分离。
常用的方法有平板法和富集法。
平板法是将稀释后的样品均匀涂在含有偏光鲁巴通（PALCAM）选择性培养基的平板上，培养在37°C下进行。
富集法则是将样品在选择性富集培养基中进行不同时间的富集培养，以达到李斯特菌的富集目的。
4. 形态特征观察：分离出的李斯特菌经过纯化后，可以进行形态特征观察。
李斯特菌为革兰氏阳性菌，其形态为短杆状，有时呈分枝状。
此外，李斯特菌在PALCAM平板上有一种典型的蓝色菌落形成，可以作为初步鉴定的依据。
5. 生化试验：为了进一步确定分离菌株是否为李斯特菌，可以进行一系列的生化试验。
常用的生化试验包括氧化/发酵代谢试验、酪蛋白降解试验、柠檬酸利用试验等。
这些试验可以通过观察细菌在不同培养基上的代谢特性来确定菌株的身份。
6. 分子生物学鉴定：在生化特性鉴定的基础上，还可以使用分子生物学技术进一步确定菌株的身份。
常用的分子生物学方法包括PCR（聚合酶链反应）和16S rRNA基因测序。
这些方法可以通过检测李斯特菌特有的基因序列或比对菌株序列与数据库的相似性来确诊。
总结一下，李斯特菌的形态复杂性类群分离鉴定是一个多步骤的过程，需要进行样品采集、预处理、分离、形态观察、生化试验和分子生物学鉴定。
单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究
单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究引言：单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种潜伏在食品中常见的致病菌，能引起严重的食物中毒，威胁着人类的健康与生命安全。
因此，研究和发展一种快速、高效的检测技术对于食品安全至关重要。
本文旨在探讨目前关于单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术的研究进展，并为进一步的研究和应用提供参考。
一、单核细胞增生性李斯特菌简介单核细胞增生性李斯特菌是一种革兰氏阳性菌，能在广泛的温度（0-45℃）和pH（4.4-9.6）范围内生长，且具有金属抗药性。
在食品中，该菌可以通过肉类、蔬菜和奶制品等途径传播，使其成为食品安全的重要隐患之一。
由于该菌对常规的煮沸和加热处理具有一定的抵抗能力，因此需借助有效的检测技术对其进行快速、准确的检测。
二、传统检测方法的局限性目前常用的单核细胞增生性李斯特菌检测方法主要包括传统培养方法、蛋白酶结合效应（ELISA）和分子生物学方法等。
然而，这些方法存在着以下局限性：1. 传统培养方法耗时长，需要较长的培养时间才能获得结果，无法快速检测；2. ELISA方法虽然具有较高的灵敏度和特异性，但其需要复杂的样品处理和实验步骤，使得检测过程繁琐；3. 分子生物学方法虽然能够提供较快的检测结果，但其仪器成本高，技术要求较高，限制了其在实际应用中的推广。
三、快速检测技术的研究进展随着科学技术的发展，研究人员不断探索和开发更为快速、准确的单核细胞增生性李斯特菌检测技术。
以下是几种常见的快速检测技术：1. 荧光定量聚合酶链反应（qPCR）技术：该技术以其高效、精确和快速的特点，被广泛应用于单核细胞增生性李斯特菌的检测。
qPCR技术可以快速扩增和定量样品中的特定基因片段，结合荧光定量技术实现李斯特菌的快速检测和定量。
2. 微生物芯片技术：微生物芯片是基于生物芯片技术的一种新型检测平台，可实现对多种菌种的快速识别和检测。
研究人员通过设计特定的探针，可以在芯片上同时检测多种致病菌，包括单核细胞增生性李斯特菌，提高了检测效率和准确性。
单核细胞增生性李斯特菌可视化检测方法的建立与评价
单核细胞增生性李斯特菌可视化检测方法的建立与评价单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）是一种常见的食源性致病菌。
近年来,由该菌引起的食品安全事件频繁发生,严重威胁着人类的健康和社会经济的发展。
该菌可感染人和动物引发李斯特菌病。
临床症状为脑炎、脑膜炎、败血症等,病死率较高。
因此,对其进行现场监控与快速准确检测已成为公共卫生检测领域的研究热点问题之一。
目前,单增李斯特菌的实验室检测方法,主要有传统分离培养生化鉴定法、免疫学检测方法和分子生物学检测方法,这些方法均存在着耗时长、灵敏性低、对实验条件和操作人员要求较高等不足。
因此开发具有操作简单、快速、灵敏的单增李斯特菌检测新方法,对于李斯特菌病的防控工作具有重要的意义。
本课题研究旨在依据单增李斯特菌的结构性质和致病机制,将分子生物学技术,纳米技术相结合,构建针对食品中单增李斯特菌的快速、灵敏、简便的可视化检测方法。
为环境生物毒素研究提供新思路和新方法,也为食品安全的现场检测提供技术支持。
主要研究内容包括以下四个部分:第一部分单增李斯特菌鸡卵黄抗体IgY的制备及纯化鉴定（1）以单增李斯特菌灭活菌悬液,分别制备弗氏完全佐剂疫苗和弗氏不完全佐剂疫苗。
采用皮下多点注射法将疫苗接种于鸡胸处皮下,收集免疫前后鸡蛋,采用聚乙二醇沉淀法提取卵黄抗体,采用凝胶过滤层析法对卵黄抗体IgY进行分离纯化,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对所得抗体IgY进行纯度鉴定。
结果显示,纯化前的IgY除目标链之外出现多条杂带,纯化之后的IgY仅有目标链显现,表明纯化后抗体纯度较高。
（2）采用BCA蛋白定量试剂盒测定卵黄抗体蛋白含量。
经测定所提取IgY 的蛋白含量范围为5.51-22.89mg mL<sup>-1</sup>,第15周所提取的IgY的蛋白含量最高,为22.89 mg·mL<sup>-1</sup>。
单增李斯特菌检测技术
CHROMagar菌落较典型，易与杂菌区分，对 高污染食品中的杂菌抑制性较差
L.M在PALCAM培养基生长特征
L.M在OXA培养基生长特征
单增李斯特菌在科玛嘉李斯特显色培养基上 的菌落形态
染色镜检
将上述可疑纯培养物做革兰氏染色并做湿片检查; 利斯特菌为革兰氏阳性短杆菌, 大小为0.4～ 0.5μm×0.5～2.0μm；用生理盐水制成菌悬液, 在油镜或相差显微镜下观察, 该菌出现轻微旋转或翻 滚样的运动。
单增李斯特菌溶血反应 阳性对照：CMCC54004、
CMCC54007 阴性对照：英诺克李斯
特菌（Lin） L1：（-）；L2、L3、L4、
L5：（+）
协同溶血试验 (cAMP)
在血平板上平行接种金黄色葡萄球菌和马红
球菌 (R.equi), 在它们中两者之间垂直接种
可疑利斯特菌, 但不要触及它们, 于30℃培 养24h～48 h, 检查平板中垂直接种点对溶 血环的影响。靠近金黄色葡萄球菌接种点的 单核细胞增生李斯特菌的溶血增强, 斯氏李
加拿大由单增李斯特氏菌污染肉制品引发李斯特菌 病暴发，导致十几人死亡。很多国家都已经采取措 施来控制食品中的单增李斯特氏菌，并制定了相应 的标准。
形态与染色
革兰氏阳性小杆菌，长 0.5~2 μ m ，宽 0.4~0.6 μ m，直或稍弯，常呈 V 字形，成对 排列。
无芽胞，一般不形成荚膜。
22~25 ℃环境中形成 4 根鞭毛，运动活泼； 32 ℃时仅形成一根鞭毛，动力缓慢。
腹腔注射 3～5只, 每只0.5 mL，观察小 鼠死亡情况。致病株于2～5d 内死亡。 试验时可用已知菌作对照。单核细胞增
食品中单增李斯特菌检测
食品中单增李斯特菌检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测实验目的1）了解单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性。
2）熟悉单核细胞增生李斯特氏菌的分离鉴定方法。
基本原理单核细胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)归属于李斯特菌属(Listeria)。
单核细胞增生李斯特菌是李斯特菌属中唯一对人致病的病菌。
李斯特菌是一种细胞内寄生菌，它不仅可能存在于肉类产品中，也可能存在于乳制品、蔬菜、沙拉及海产品等日常食物里面。
此菌广泛分布于自然界中，在土壤、排污下水、地表水、青贮饲料、烂菜中均可分离到。
人也可作为无症状携带者。
据报道，健康人粪便中该菌的携带率为0.6％～16％，4％～8％的水产品、5％～10％的奶及其制品、30％以上的肉制品及15％以上的家禽均被该菌污染。
李斯特菌能在1～45℃的温度下生存，能在家用电冰箱的冷藏室内较长时间生长、繁殖。
该菌为革兰氏阳性短杆菌，有的菌体略弯曲，两端钝圆，大小约为0.4～0.5μm ′0.5～2.0μm。
多单在，有时是V字型排列。
无芽孢，不产生荚膜。
在陈旧培养物中或粗糙型菌落的菌体长度可达6～20μm 或更长的丝状。
在20～25℃培养时可产生2～4根鞭毛而运动，但在37℃培养时鞭毛发育不良，无运动性。
本菌需氧或兼性厌氧，生长温度为1～45℃，最适温度为30～37℃。
对营养要求不高，可在普通琼脂培养基中生长，但在血琼脂培养基或胰酪胴琼脂上生长更好。
加入0.2％～1％(W/V)的葡萄糖及2％～3％(V/V)的甘油生长更佳。
在含1%(W/V)NaCl的复合培养基中能生长。
在4℃可缓慢增殖，形成菌落约需7d。
在液体培养基中培养18～24h后，肉汤呈轻度均匀混浊，数天后形成粘稠沉淀附着于管底，摇动时沉淀呈螺旋状，继续培养可形成颗粒状沉淀。
不形成菌环、菌膜。
在营养琼脂上，光滑(S)型可形成直径0.5～1.5mm、圆形、露滴状半透明、低隆起、边缘整齐、表面有细致纹理的蓝灰色菌落，斜射光照射时，菌落呈特征性蓝绿光泽。
单核增生李斯特氏菌检测概述
单核增生李斯特氏菌检测概述单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性的致病菌，能够在低温下生存繁殖，并在恶劣环境中形成生物被膜，使其对抗不良条件。
该菌可引起人类的李斯特菌病（Listeriosis），也是一种可以通过食品传播的重要病原体。
李斯特菌病在免疫功能低下的人群中很容易引起严重感染，包括孕妇、老年人、免疫抑制患者和新生儿。
检测单核增生李斯特氏菌的方法主要包括传统的培养方法和现代的分子生物学方法。
1.传统培养方法传统的培养方法是检测单核增生李斯特氏菌的主要方法之一、常用的培养基包括PALCAM（Polymyxin, Acriflavine, Lithium chloride and Cycloheximide）和OXOID Listeria Selective Agar等。
培养温度通常在30-37℃之间，因为单核增生李斯特氏菌可以在低温下生长。
在培养过程中，从食品样品或其他可能受污染的样品中提取菌落，并在培养基上进行培养。
培养时间通常为1-2天，培养过程中需要注意去除其他菌落的干扰。
2.分子生物学方法分子生物学方法是现代检测单核增生李斯特氏菌的常用方法，主要包括聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR等。
这些方法的优势在于其高度敏感性和特异性。
通过检测单核增生李斯特氏菌特有的基因或序列，可以快速准确地鉴定与检测其存在。
3.培养与分子生物学相结合的方法为了更好地检测单核增生李斯特氏菌，有些方法将传统培养与分子生物学相结合。
这种方法通常先进行培养，然后使用PCR或实时荧光定量PCR等技术进行进一步检测和鉴定。
这种方法较为耗时，但能够进一步提高检测的准确性。
需要注意的是，由于单核增生李斯特氏菌能够在低温下生存，因此在食品或样品中的检测非常重要。
常见的食品样品包括生肉、海鲜、冷冻食品、奶制品等。
对于食品企业来说，建立完善的食品安全管理体系和进行规范的监测是防止单核增生李斯特氏菌传播的重要措施。
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LM的实验室检测方法
单核细胞增生性李斯特菌 分离鉴定
上海市疾病预防控制中心 微生物室 许学斌
分类学
单核细胞增生性李斯特菌（人兽共患病原菌）
无害李斯特菌
绵羊李斯特菌伊氏亚种（偶致动物发病）
绵羊李斯特菌伦敦亚种 威氏李斯特菌 斯氏李斯特菌 格氏李斯特菌 默氏李斯特菌
流行病学
• 单核细胞增生性李斯特菌（简称LM）广 泛存在于自然界中，不易被冻融，在土 壤、地表水、污水、废水、植物、青储 饲料、烂菜中均有存在，易被禽畜类动 物食入或在宰杀过程中污染胴体而形成 人的食源性疾病污染源；乳及含乳类制 品是另一大类较易被污染的食品，近年 来，国外加强了对即食类食品（read-toeat）的LM检测。严防“病从口入”。
李斯特菌属生物学特征
• 李斯特菌属为兼性厌氧菌，不产生 芽孢，无分支，革兰阳性短杆菌， 细胞单生或短链状。 • 最适生长温度为30~37℃，但能在 4℃缓慢生长。
一般培养和生化特征
• 李斯特菌属在较老的或粗糙型培养 物上可能呈6~20μm的丝状菌体，在 28℃培养的菌体有1~5根周鞭毛，可 运动，在营养琼脂上37℃培养1~2d 为1~2mm菌落，在45℃角透射光斜 射下呈蓝灰色。
预防和干预措施
• LM在食品的一般热加工处理中能存活， 热处理会杀灭竞争性细菌群，使LM在没 有竞争的环境条件下易于存活，所以在 食品加工中，中心温度必须达到70 ℃持
续2分钟以上。由于可能存在二次污染，因此 蒸煮后防止二次污染是极为重要的。 • 冰箱中的食品可能增加LM食物中毒的危险， 需要加热后食用。 • 加强食品从生产源头到产品流通的全程控制， 提高安全评价标准。
LM的实验室检测方法
• LM分子检测技术 PCR检测技术：用特异引物，一种依据 LM的毒力基因序列设计，常以hlyA、iap、 inl、Dth-18作为靶序列；另一种以LM的 16S序列或16S/23S中间保守区域为靶序 列设计引物。此外，近年被发展的PCRELISA、realtime-PCR等技术是尝试以分 子手段对LM作快速计数。
流行病学
• 食源性病例可以是散发或暴发流行， 主要传播媒介是污染的食品，也有 与食品无关的类似医院内的暴发， 主要发生在托儿所。在部分国家， 其发病率为0.5~0.8例/10万人。 • 发病机理和体液免疫的作用尚不清 楚。
致病性
• LM进入人体后发病与否和宿主的年 龄及免疫状态有关，该菌是一种细 胞内寄生菌，宿主对其的清除主要 依赖细胞免疫机制。
发病机制
• LM由寄生物介导的细胞内增殖，使它附 着及进入肠细胞粘膜与巨细胞吞噬系统； • 抗活化的巨噬细胞，LM有细菌性过氧化 物歧化酶，可使它抗活化巨噬细胞内过 氧化物（杀菌的毒性游离基团）分解作 用。 • 溶血素O，可以从培养物上清夜中获得， 有α 和ß 两种，为毒力因子。
LM的毒力因子
• 李斯特菌溶解素（LLO）： 系由hly基因编码的Hly蛋白，是一 种孔形成毒素，与破坏吞噬体，促 进菌体进入胞液有关，是主要的毒 力因子。 • ActA蛋白 • 磷脂酶C • P60蛋白
致病力检测
• 动物试验可用于分离的李斯特菌的潜在 毒力，如小鼠腹膜内接种、兔眼结膜接 种（Anton）试验、鸡胚绒毛膜尿囊接种。 但并非是常规的，因为大多数刚分离出 的单核细胞增生性李斯特菌株都有毒力。 • 已经建立了一种敏感的免疫抑制小鼠模 型，少量的有毒力菌即可导致小鼠在3d 内死亡。
针对LM的实验室检查原则
临床表现
• 感染LM的孕妇多表现有宫内感染并可发 生早产、流产、死胎，预后险恶。产下 的婴儿常在24~72h内死亡。 • 有时可侵犯上呼吸道而呈现咽峡炎的症 状，常伴有局部淋巴腺炎。 • 可引起人的心内膜炎，并可感染皮肤、 眼睛、泌尿道而引起皮肤损伤、结膜炎、 尿道炎等症状。
临床表现
• 人和动物感染LM时，以血中单核细胞明 显增多为重要特征，为此以前人们误以 为本菌是传染性单核细胞增多症的病原 菌。 • 发生LM的脑膜炎时，脑脊液的单核细胞 和中型粒细胞极度增多，糖下降而蛋白 升高。 • LM脑膜炎的临床症状的多样性和血清检 测无严格的特异性，为本病的诊断带来 一定困难，本病确诊依赖细菌培养。
绵羊李斯特菌哥伦比亚血平板48h菌落形态
绵羊李斯特菌平板在CHROMagar™平板 48h菌落形态（右）
其它李斯特菌在CHROMagar™平板 48h菌落形态
一种添加了半胱氨酸和蛋氨酸的HTM培养基
LM的实验室检测方法
• 数值分类鉴定和新型计数技术 最常用且普遍被认可的是API-Listeria test。 共包括10个生化反应，通过查询代码表 可以对LM和李斯特属内的菌作快速鉴定。 • 传统的计数以平板计数和MPN两种方法 为主。现在有一种经过改良的疏水网膜 （HGMF）技术适用于好氧菌计数，它 采用的ISO-GRIO系统，具有1600个小方 格的网膜，能浓缩样品细菌，除去抑制 物，同时利于细菌在培养基间转移时活 力的恢复。
李斯特菌鉴定
• 除个别菌外，触酶阳性，氧化酶阳 性，水解七叶苷，不水解尿素、明 胶，不产生H2S、吲哚。发酵葡萄糖 和其它种类糖产酸。 • 属的鉴定：革兰染色，湿标本中的 翻转运动试验，触酶阳性，发酵D葡萄糖产酸，水解七叶苷，VP阳性， 甲基红阳性。
李斯特菌鉴定
• 种的鉴定：窄的β溶血环，CAMP表 现和金黄色葡萄球菌有协同溶血作 用，不发酵木糖，微量鉴定系统 API-Listeria（法国生物梅里埃）和 Micro-IDListeria（OrganonTeknika）， 菌落DNA探针杂交。 • 血清型分型确认。
• 显色培养基快速鉴定技术： 针对LM的β-D-葡萄糖苷酶和毒力因子PIPLC酶，设计相应的底物，加入到常规 选择性培养基中，利用酶对底物的分解， 产生荧光物质或显色物质，使其菌落形 态或颜色不同于其它李斯特菌属和非李 斯特菌，从而实现对LM快速鉴定和菌落 数目的快速定量。这是当前开发新型显 色或 荧光鉴别培养基的基本原理。
• 采自正常无菌部位的临床标本可直接 接种在含5%羊、马、兔血的胰大胨琼 脂平板（TSA）上；血标本接种到常规 血培养瓶中；有菌部位的临床标本、 食品及环境标本，在接种平板前应先 选择性增菌。
LM的实验室检测方法
• 传统分离培养检测及鉴定方法： 对于分离培养后的可疑菌落做生化 反应试验、溶血试验、CAMP协同溶 血试验、典型运动及动物试验等鉴 定，被确定为李斯特菌后进一步进 行血清分型；增菌和选择性增菌是 不可缺少的步骤，增菌主要有冷增 菌和快速增菌两种。
流行病学
• 在临床上对成年人（非孕妇）主要 引起脑膜炎、脑炎或败血症；老年 人或免疫力低下者易感。主要损伤 中枢神经系统，死亡率（20~50%）， 预后不良。 • 对孕妇能造成感冒样菌血症，治疗 未及可危及胎儿。 • 潜伏期及感染剂量不明，可以从几 天到2~3个月。
流行病学
• LM的易感对象重点以孕妇为主，也 有新生儿脑膜炎病例和免疫力低下 的全身（中枢）或局部症状发病报 道。 • 由于该菌可通过眼及破损皮肤、粘 膜进入体内而造成感染，性接触也 是一种潜在的传播途径。
LM的实验室检测方法
• 1987年首先报道了针对LM鞭毛抗原的单 克隆抗体ELISA检验程序，可以在2~3d 内从污染样品中检出LM。 • 1992年以特异的单克隆抗体建立的夹心 ELISA方法能于20~24h内检出8~10cfu/g， 第一次做到以免疫学方法把LM与非病原 性李斯特菌分开。 • 2004年报道了以免疫为基础的生物传感 器可以在24h内检测10~100cfu/g样品。
CHROMagar™/BD/Oxoid/ALOA
LM在哥伦比亚血平板、显色平板、 MH血平板上24h的菌落形态
绵羊李斯特菌在哥伦比亚血平板、显 色平板、MH血平板上24h的菌落形态
其它李斯特菌的24h平板形态特征
LM在哥伦比亚血平板48h的溶血菌落
LM在CHROMagar™平板48h菌落形态
LM的毒力因子
• PrfA蛋白 • 内化素 • 表面蛋白P104： 除了内化素外，LM另一种表面蛋白 P104也已被证实对于肠道细胞的粘 附非常重要。
临床表现
• LM有嗜神经性质，所以患者表现以神经 症状最为明显。其中以李斯特性脑膜炎， 神经系统性李斯特病、败血症、脓毒血 症最为凶险，表现为起病急剧，发热 （39℃以上），意识障碍、昏迷、肢体 麻痹以及小脑功能障碍。病人即使幸免 遇难，也常常留下共济失调、失语、眼 球麻痹、肢体瘫痪等后遗症。病死率达 20~30%，使用抗生素治疗可降低病死率。
检测LM的hlyA、23SRNA 多重PCR体系（上海CDC提供）
LM多重PCR（上海CDC提供）
单一或多重PCR检测LM特异基因
其它和LM相关分子检测技术
• 探针检测技术：特异性好。 • BAX-system：自动PCR检测分析， 2002年被英国农业食品和监测局 （FSIS）采纳用来检测鲑鱼中的LM。 有报道利用改良的快速增菌法结合 BAX可以在24h内检测样品的LM。
LM的实验室检测方法
• 我国使用的检测LM方法主要有国标 法（GB4789.30-1994）和SN法 （SN0184-93）。国标法在LEB中增 菌后划线接种MMA平板，再分别于 SIM和TSI上作生化初筛，后于TSAYE平板上纯化后做系统生化鉴定、 报告结果。
不同LM的检测方法应用比较（文献）