脐带来源的华通氏胶间充质干细胞的分离、特性及应用前景
人脐带间充质干细胞的分离、培养及鉴定
人脐带间充质干细胞的分离、培养及鉴定韩华;薛改;张俊勤;闫萍;李艳丽【摘要】目的：探讨人脐带华通胶间充质干细胞体外分离、培养、鉴定及冻存、复苏的方法。
方法收集健康足月新生儿脐带组织，采用组织块贴壁法分离、培养脐带间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞表面抗原，将细胞冻存3个月后复苏，鉴定复苏后细胞的特性。
结果组织块贴壁法获得脐带间充质干细胞成功率高；细胞表面高表达CD29、CD44、CD90和CD105，不表达造血干细胞表型CD34、CD45等；冻存后再复苏细胞活性高达80％～90％。
结论组织块贴壁法可以从人脐带华通胶中较好的分离、培养出间充质干细胞，为干细胞移植实验研究和临床治疗提供了理想的细胞来源。
%Objective To exploreisolating,culturing,identifying,freezing and thawing mesenchymal stem cells(MSCs)approach from Wharton j elly of human umbilical cord.Methods The MSCs were isolated from neonate umbilical cord,cultured by tissue explants adherent method.The surface markers were identified by flow cytometry.Passage cells,frozen 6 months, were thawed,then their biological characteristics were identified.Results MSCs were easily obtained from Wharton j elly of human umbilical cord via the proposed approach of tissue adherence.The flow cytometry analysis showed that MSCs expressed CD29,CD44,CD90 and CD105 positively,but negatively for CD34,CD45.The living cells of MSCs were 80%-90% after having been frozen and the thawed cells had the same characteristics as the previous.Conclusion MSCs can be successfully isolated from Wharton j elly of human umbilical cord by this method. The stem cells derived from Wharton j elly of humanumbilical cord may be a novel alternative source of human MSCs for experimental and clinical applications.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P21-23)【关键词】脐带;间充质干细胞;胎血【作者】韩华;薛改;张俊勤;闫萍;李艳丽【作者单位】河北省人民医院妇产科，河北石家庄 050051;中国人民解放军白求恩国际和平医院药剂科，河北石家庄 050082;河北省人民医院妇产科，河北石家庄 050051;河北省人民医院妇产科，河北石家庄 050051;中国人民解放军第二六○医院病理科，河北石家庄 050041【正文语种】中文【中图分类】R394.2干细胞是一群具有自我更新和分化潜能的细胞，根据发育状态可以分为胚胎干细胞和成体干细胞。
人脐带间充质干细胞的生物学特性及其在血液系统疾病中的应用
人脐带间充质干细胞的生物学特性及其在血液系统疾病中的应用宋希拿;何祎;韩俊领【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2009(015)002【摘要】间充质干细胞是一种具有自我更新和多向分化能力的成体干细胞,在组织工程、基因治疗和造血干细胞移植领域具有较好的应用前景.骨髓是间充质干细胞的经典来源.近年研究显示,人脐带中也存在大量间充质干细胞,由于脐带来源间充质干细胞具有来源广泛、取材方便、相对纯净、含量丰富以及免疫原性低等优点,正逐渐成为间充质干细胞研究领域的热点之一.本文就其生物学特征、优势以及在血液系统疾病中的应用前景等予以综述.【总页数】4页(P166-169)【作者】宋希拿;何祎;韩俊领【作者单位】协和干细胞基因工程有限公司,天津市脐带血造血干细胞库,天津,300384;协和干细胞基因工程有限公司,天津市脐带血造血干细胞库,天津,300384;中国医学科学院,北京协和医学院,血液学研究所,血液病医院,天津,300020;协和干细胞基因工程有限公司,天津市脐带血造血干细胞库,天津,300384;中国医学科学院,北京协和医学院,血液学研究所,血液病医院,天津,300020【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.人脐带间充质干细胞的研究进展及在心脏疾病中的应用 [J], 田洪榛;柏翠芳;陈光辉2.人脐带间充质干细胞的生物学特性及应用前景 [J], 张彦;黄平平3.人脐带间充质干细胞的生物学特性、分化及应用研究 [J], 王成俊;张涵;李鲁生;程洪斌;安沂华4.血细胞分析仪联合血细胞形态学观察在筛查血液系统疾病中的应用价值研究 [J], 农树红5.西达本胺在血液系统疾病中的应用研究进展 [J], 王晶;吴涛;白海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人脐带间充质干细胞研究进展及应用前景_张亚斌
人脐带间充质干细胞研究进展及应用前景张亚斌1，解莉楠21.天津市脐带血造血干细胞库，天津300384；2.东北林业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150040［摘要］人脐带间充质干细胞（hUCMSC ）是来源于发育早期中胚层和外胚层、存在于脐带沃顿胶和血管周围组织中的一类具有自我更新、增殖和多向分化潜能的干细胞。
当前主要通过分离、扩增传代培养，然后超低温保存的方法提取保存hUCMSC 。
与其他来源的干细胞相比，hUCMSC 具有来源广泛、可塑性强、对供者无不利影响、无伦理争论限制等优势，并且具有很强的向多组织分化的潜能，因此hUCMSC 成为在组织工程、造血干细胞移植及基因治疗等研究领域具有巨大潜力的种子细胞，在临床应用方面有十分广阔的前景。
［关键词］人；脐带；间充质干细胞［中图分类号］Q25［文献标识码］A［文章编号］1009-0002（2013）03-0437-04Research Progress and Prospect of Application of Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem CellsZHANG Ya-Bin 1*,XIE Li-Nan 21.Tianjin Cord Blood Bank,Tianjin 300384;2.College of Life Science,Northeast Forestry University,Harbin 150040;China*Corresponding author,E-mail:zhangyabin_0225@［Abstract ］Human umbilical cord mesenchymal stem cells （hUCMSC ）,which originate from mesoderm and ecto ⁃derm at the early stage of embryonic development and inhabit the area of Wharton-jelly and perivascular tissue of umbilical cord,have been classified as a self-renewal,proliferating and multi-potential differentiating cell line.Ac ⁃cording to current technique level,hUCMSC are preserved by means of cryopreservation following enzyme-diges ⁃tion,separation,and subcultural amplification.Being superior to stem cells from other sources,hUCMSC benefit an abundant source,relatively higher plasticity while less ethical controversy,no adverse affection to donors during harvest and naturally the multiple-differentiation potential like other stem cell families.Consequently,the stem cellfamily of hUCMSC has become a clinic prospective candidate in field of tissue engineering,hematopoietic stem cell transplantation and genetic therapy.[Key words]human;umbilical cord;mesenchymal stem cellsdoi:10.3969/j.issn.1009-0002.2013.03.033综述胚胎干细胞的研究已被列为20世纪90年代世界十大科技成就之首，因此干细胞的研究包括间充质干细胞的研究已成为最具发展前景的领域之一。
人脐带间充质干细胞的应用研究现状
人脐带间充质干细胞的应用研究现状摘要：众所周知，脐带是母亲与婴儿营养传送的介质，脐带间还包含羊膜，而羊膜经过研究发现包含两条脐脉，还有一条脐静脉，通过研究人员研究发现，脐带间含有一种特殊的胚胎结缔组织，将其命名为华尔通氏胶，近年来，为了寻找更多的成人干细胞来源，研究人员将注意力转向了"废弃物"的脐带，通过偶然研究发现，脐带中含有的干细胞是很有医用价值的，自2013年以来，Mitchell等人提出对脐带间华尔通氏胶来源进行大量研究，以及在其基质细胞间发现许多干细胞，并进一步研究干细胞特性，运用于临床诊治，为临床应用提供了新的思路和方向。
本文浅谈人脐带间充质干细胞的医学领域的应用以及干细胞应用前景。
关键词：人脐带间、充质干细胞、应用研究一、关于人脐带间充质干细胞的分离与培养不同的实验室有不同的分离和培养方法，结果也不同。
目前主要有两种方法：组织块消化法和酶消化法。
当组织块连接到分离方法时，可以在组织块连接壁上看到长梭形细胞。
大约5天后，当细胞融合到70%-80%,0.25%胰蛋白酶，10%琼脂糖培养基和胰蛋白酶消化离体心脏，1:2或1:3时，对于培养基的更换时间控制在两到三天更换一次，经过九到十天的培养，可以观察到干细胞的形态发生变化。
此时将胶原酶、胰蛋白酶、透明质酸酶或各种酶的组合添加到组织块中，以获得直接生长在细胞壁上的单个细胞。
在此过程中细胞很容易被损伤，因为充质干细胞通过酶消化快速分离，在一定程度上保证了细胞的存活，但在一定程度上通过酶系统降解细胞外膜，所以细胞很容易被损伤，在培养干细胞时，应该在处理脐带采集经过一到两天内进行培养，培养过程必须遵循无菌原则，添加生长因子可促进细胞生长。
细胞可以通过冷冻来分离。
这种情况下不仅不会使得干细胞组织受到伤害，进一步保留干细胞完好，这种冷冻溶液是含有高浓度胎牛血清和7%或10%二甲基亚砜甘油的冷冻介质。
细胞在此介质中生长，不会失活，在温度升高至室温时，细胞活性迅速恢复。
人脐带华通胶间充质干细胞的生物学特性及研究新进展
人脐带华通胶间充质干细胞的生物学特性及研究新进展何蓓;杨晓清【摘要】Human umbilical cord Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cell (hWJ-MSC) is a kind of adult stem cell which has self-renewal ability, multiline age differentiation potential. As isolated from discarded tissue (umbilical cord) after birth, they are considered wide resource, easy to be acquired and not restricted by ethics. Compared to other source of adult stem cells such as bone marrow mesenchymal stem cells, hWJ-MSC has lower immunogenicity, higher proliferation, more primitive stem cell performance, which make hWJ-MSC become a new cell resource. hWJ-MSC has great therapeutic potential in cell transplantation, gene therapy for various diseases. In this review, we will discuss the biological characteristics, proliferation and differentiation potential, and immunological characteristics of hWJ-MSC, and mainly focus on the latest progress of their application on various diseases.%人脐带华通胶间充质干细胞(human umbilical cord Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cell,hWJ-MSC)是一类具有自我更新、多向分化潜能的成体干细胞.由于其取自分娩过程中的废弃物——脐带,因此来源广泛、取材方便、不受任何伦理学限制,同时相对其他来源的成体干细胞例如骨髓间充质干细胞,hWJ-MSC免疫原性更弱、增殖能力更强、干细胞性能更加原始,使其成为一种新型的细胞来源,广泛应用于各种疾病模型的细胞移植以及基因治疗.综述新近研究的hWJ-MSC的生物学性状、增殖分化潜能、免疫性能以及其在各类疾病中的应用进展.【期刊名称】《国际妇产科学杂志》【年(卷),期】2016(043)001【总页数】5页(P94-98)【关键词】干细胞;间质干细胞;脐带;治疗;人脐带华通胶间充质干细胞【作者】何蓓;杨晓清【作者单位】226001 江苏省南通大学附属医院妇产科;226001 江苏省南通大学附属医院妇产科【正文语种】中文△审校者人脐带内、脐血管周围含有丰富的基质即华通胶，胶内含有大量间充质干细胞——人脐带华通胶间充质干细胞（human umbilical cord Wharton′s jellyderived mesenchymal stem cells，hWJ-MSC），该干细胞能够稳定表达间充质干细胞特有的分子标记物。
脐带来源的华通氏胶间充质干细胞的分离、特性及应用前景
233CARCINO GENESIS ，TERATO GENESIS &MUTA GENESIS脐带来源的华通氏胶间充质干细胞的分离、特性及应用前景丁赛，张红霞，朱海英*(海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室，上海200433)收稿日期：2021-11-21；修订日期：2022-05-13基金项目：国家自然科学基金(32171387)作者信息：丁赛，E-mail ：。
*通信作者，朱海英，E-mail ：【摘要】间充质干细胞(MSCs)的来源非常广泛。
虽然各种组织来源的MSCs 生物学特性不尽相同，但在标准培养条件下该类细胞均可以贴壁生长；细胞群体中有95%以上的细胞表达典型的间充质标记分子，如CD73、CD90和CD105，但缺乏造血标记分子CD14、CD19、CD34、CD45和CD79a 的表达；特别是均具有分化为成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞的能力。
这些性质是国际细胞治疗协会给出的定义该类细胞的最低标准。
脐带间充质干细胞是指来源于新生儿脐带组织中的多能干细胞。
目前来看，从脐带不同解剖学部位(区室)获得的MSCs 的生物学性质也存在差异，其中从脐带华通氏胶中分离获得的华通氏胶间充质干细胞，在增殖能力、分化潜能、免疫调节能力等方面均明显优于其他区室来源的间充质干细胞，是用于组织器官损伤修复及免疫调节的一种理想的“种子”细胞，被认为具有更好的临床应用前景。
本文围绕近年来华通氏胶间充质干细胞的分离建系、增殖特性、分化潜能以及临床应用方面的研究进展进行了综述，其中重点介绍了化学诱导分化方案的建立和优化，认为与通过遗传改变诱导重编程方法相比，化学诱导分化方法具有更好的临床应用潜力。
【关键词】脐带；华通氏胶；间充质干细胞；分化潜能；分离；增殖特性中图分类号：R329.2+8文献标志码：A文章编号：1004-616X(2022)03-0233-04doi ：10.3969/j.issn.1004-616x.2022.03.011间充质干细胞最早在骨髓中被发现和鉴定，随后在人体胚胎及成体的多种组织中被陆续鉴定出来，这些组织主要包括成体骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺等组织以及羊水、脐带和脐带血等。
人脐带华通氏胶间充质干细胞的分离_培养_鉴定及冻存_复苏
见 明显钙结节;成脂诱导 14 d，有明显的脂滴出现，油红 O 染色阳性。 冻 存 再 复 苏 细 胞 活 力 达 80%，细 胞 免 疫 表 型 及 成
骨、成脂诱导显示与冻存前细胞呈相同的特性。 结论：组织块培养法可从人脐带华通氏胶中分离、培养出纯度较高间充
质干细胞，冻存、复苏不改变其特性。
[关键词] 人脐带间充质干细胞；华通氏胶；细胞培养；诱导分化；冻存
定其向成骨、成脂方向诱导分化的能力；将 P1 细胞冻存 6 个月后复苏，鉴定复苏后细胞的特 性。 结果：植块法容易从人
脐带华通氏胶中获得间充质干细胞； 组织块贴壁后 6 d 可见组织 块周围细胞爬出， 原代培养 14~18 d 细胞融合 70%~
80%；P3 代细胞强烈表达 CD73、CD90、CD105，不表达 CD14、CD34、CD45、CD79a 和 HLA-DR；成骨诱导分化后 10 d，可
图 1 剪成 2 cm 脐 图 2 剔 除 脐 静 脉 图 3 剥 离 的 华 通
带小段
及脐动脉
氏胶
1.2.2 脐带华通氏胶 MSCs 表型的测定 用流式细 胞仪对 P3 代 UC-MSCs 表面特异性抗原进行检测。 Tryple 酶消化待检细胞，PBS 洗涤 3 次，制成 1×106/ml 的细胞悬液。 将待检细胞样品分为每管 0.1 ml，加入 CD14 -FITC、CD45 -FITC、CD79a -APC、CD90 -APC、 CD34 -PE、CD73 -PE、CD105 -PE、HLA -DR -PE 一 抗，4 ℃孵育 30 min，流式细胞仪测定各类抗原的阳 性率。 1.2.3 脐 带 华 通 氏 胶 MSCs 诱 导 分 化 向 成 骨 细 胞 诱导分化：将 P3 代细胞消化后，调整细胞密度为 1×105/ml， 接 种 于 24 孔 板 内 ，1~2 d 后 细 胞 融 合 达 70%~80%， 此时以成骨细胞诱导培养液培养， 每 3 天全量换液 1 次，第 10 天茜素红染色；向脂肪细 胞 诱导分化：培养液改为成脂肪细胞诱导培养液，其余 同前，第 14 天油红 O 染色。 1.2.4 脐带华通氏胶 MSCs 的冻存、复苏 将 P1 代
脐带间充质干细胞应用研究进展
脐带间充质干细胞应用研究进展摘要】人脐带中富含间充质干细胞（MSCs）。
这些细胞能表达多种间充质干细胞标志物及多种干细胞相关基因，可分化为3个胚层衍生的多种成熟细胞，合成多种营养因子和细胞因子，支持造血干细胞等细胞的增殖和功能，并具有低免疫原性。
本文主要就脐带间充质干细胞的生物学特性、临床作用和应用前景作简要综述。
【中图分类号】R39 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）18-0343-01脐带是胎儿循环系统与母体相连的条状结构，外层被覆羊膜，内有两条脐动脉和一条脐静脉。
在脐动脉与脐静脉之间，还存在一种胚胎粘液样结缔组织：华尔通氏胶。
以华尔通氏胶为基质进行分离获取的细胞就是脐带间充质干细胞（HUMSCs）。
脐带间充质干细胞是一种来源于胚胎形成早期中胚层的一种多能干细胞，能分化为3个胚层衍生的多种成熟细胞、合成多种营养因子和细胞因子、支持造血干细胞等细胞的增殖和功能，并具有低免疫原性。
因此HUMSCs具有巨大的临床应用价值，近年来受到医学科研工作者的重视。
1.脐带间充质干细胞生物学特性脐带间充质干细胞既不是胚胎干细胞，也不是成体干细胞，而是与两者存在显著区别的一种新的多能间充质细胞。
和其他来源的间充质干细胞一样，脐带间充质干细胞在显微镜下为长条梭形，附壁生长，可表达多种造血干细胞标记，并可表达白血病抑制因子受体通路、端粒逆转录酶及胚胎干细胞特异基因Ⅰ等原始干细胞标记［1］。
在混合淋巴细胞检测下，脐带间充质干细胞表现为免疫抑制，并可阻止T细胞的增殖，异体移植HUMSCs可出现免疫耐受，显示脐带间充质干细胞是一种免疫缺陷细胞，异体移植不会出现免疫排斥反应［2］。
2.脐带间充质干细胞的临床应用研究由于脐带间充质干细胞来源较多，取材简便，容易分离，同时表现出免疫缺陷性，且基本不受伦理道德限制，近几年来众多学者致力于研究脐带间充质干细胞的临床应用研究，并取得了令人瞩目的成果。
2.1 UMSCs应用于神经系统损伤的研究研究显示［3］，以大鼠建立脑卒中模型后，将脐带间充质干细胞移植其体内，移植细胞可迁移进入缺血边缘区，分化形成神经细胞、胶质细胞及血管内皮细胞，诱导缺血脑组织中神经细胞及血管新生，增加缺血区域局部脑皮质血流灌注，提高神经营养因子表达水平。
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脐带来源的华通氏胶间充质干细胞的分离、特性及应用前景丁赛;张红霞;朱海英
【期刊名称】《癌变.畸变.突变》
【年(卷),期】2022(34)3
【摘要】间充质干细胞(MSCs)的来源非常广泛。
虽然各种组织来源的MSCs生物学特性不尽相同,但在标准培养条件下该类细胞均可以贴壁生长;细胞群体中有95%以上的细胞表达典型的间充质标记分子,如CD73、CD90和CD105,但缺乏造血标记分子CD14、CD19、CD34、CD45和CD79a的表达;特别是均具有分化为成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞的能力。
这些性质是国际细胞治疗协会给出的定义该类细胞的最低标准。
脐带间充质干细胞是指来源于新生儿脐带组织中的多能干细胞。
目前来看,从脐带不同解剖学部位(区室)获得的MSCs的生物学性质也存在差异,其
中从脐带华通氏胶中分离获得的华通氏胶间充质干细胞,在增殖能力、分化潜能、
免疫调节能力等方面均明显优于其他区室来源的间充质干细胞,是用于组织器官损
伤修复及免疫调节的一种理想的“种子”细胞,被认为具有更好的临床应用前景。
本文围绕近年来华通氏胶间充质干细胞的分离建系、增殖特性、分化潜能以及临床应用方面的研究进展进行了综述,其中重点介绍了化学诱导分化方案的建立和优化,
认为与通过遗传改变诱导重编程方法相比,化学诱导分化方法具有更好的临床应用
潜力。
【总页数】4页(P233-236)
【作者】丁赛;张红霞;朱海英
【作者单位】海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R329.28
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