药物中特殊杂质的检查资料
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药物的检查—特殊杂质的检查(药物分析课件)
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（4）面积归一化法
适合于所有杂质都能出峰，粗 略测定杂质峰面积 可求出各峰（各组分）占总量 的百分数。
杂质检查法：气相色谱法(GC)
用于药物中挥发性杂质的检查,如药物中 残留溶剂、农药残留量等。 检查方法同高效液相色谱法.
4
菪碱的检查）
二、化学性质上的差异
1.酸碱性的差异
举例：硫酸阿托品中其他生物碱的检查
阿托品的碱性大于其他碱：阿托品＞山莨菪碱＞东莨菪碱、
樟柳碱
硫酸阿托（杂质：东、山、樟）
HCl [BH]+（溶解）
氨水 碱化
要求：不得出现浑浊
溶液中 浑浊 （盐酸阿托品） (其他碱游离)
[BH]+
化学性质上的差异
2.氧化还原性的差异
举例：葡萄糖亚铁中高铁盐的检查
10mlHCl 本品5g (100ml水) 3g KI
I2
Na2S2O3滴定 淀粉指示剂
蓝色消失
含Fe3+≤0.1%
特殊杂质检查方法---分光光度法
分光光度 法
1.紫外-可见分光光度法 （肾上腺素中肾上腺酮检查）
2.原子吸收分光光度法 （维生素C中铁、铜检查）
内标加校正因子法
校正因子 ( f ) AS / CS AR / CR
含量(CX )
f
AX AS / CS
S：内标 R：对照品 X：样品
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（2）外标法
含量(C X
)
CR
AX AR
R：对照品 X：样品
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（3）主成分自身对照法（不加校正因子）
药物中特殊杂质的检查方法
供试品液 = ----------------b 符合规定时 b ＜(a-b); b ＞(a-b)不合格。
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
主要用于药物中无效或低效晶型检查，如甲 苯咪唑中A晶型检查
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
A 晶型
C 晶型
在640cm-1
有强吸收
吸收很弱
盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶G 薄层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛-硫 酸显色，紫外灯下检视物质的分离、分析。 有时也用于检查放射性药物注射液中 的放射化学杂质。
如：苯丙醇中苯丙酮的检查，苯丙醇溶液 测定吸收度比值A247nm/A258nm不得大于0.79。
（五）对光吸收性质的差异
2. 原子吸收分光光度法
是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收 发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待 测元素的含量。 限量检查时：对照品液 = 供试品 + 限量---a
例: 肾上腺素中肾上腺酮的检查
肾上腺素的盐酸溶液 （2mg/ml）在310nm处 的吸光度不得过0.05。 已知酮体在该波长处的 吸收系数为453，计算 出酮体的限量。
（五）对光吸收性质的差异
1. 紫外分光光度法
有的杂质紫外吸收光谱与药物的紫外吸收 光谱重叠，但可以通过控制供试品溶液的吸收 度比值来控制杂质的量。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀：如氯化钠中 钡盐的检查。
（四）杂质与一定试剂反应产生颜色：阿司匹林中 游离水杨酸的测定。
（五）杂质与一定试剂反应产生气体：盐酸乙基吗 啡中铵盐检查。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（六）药物经有机破坏后检查杂质
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
主要用于药物中无效或低效晶型检查，如甲 苯咪唑中A晶型检查
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
A 晶型
C 晶型
在640cm-1
有强吸收
吸收很弱
盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶G 薄层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛-硫 酸显色，紫外灯下检视物质的分离、分析。 有时也用于检查放射性药物注射液中 的放射化学杂质。
如：苯丙醇中苯丙酮的检查，苯丙醇溶液 测定吸收度比值A247nm/A258nm不得大于0.79。
（五）对光吸收性质的差异
2. 原子吸收分光光度法
是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收 发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待 测元素的含量。 限量检查时：对照品液 = 供试品 + 限量---a
例: 肾上腺素中肾上腺酮的检查
肾上腺素的盐酸溶液 （2mg/ml）在310nm处 的吸光度不得过0.05。 已知酮体在该波长处的 吸收系数为453，计算 出酮体的限量。
（五）对光吸收性质的差异
1. 紫外分光光度法
有的杂质紫外吸收光谱与药物的紫外吸收 光谱重叠，但可以通过控制供试品溶液的吸收 度比值来控制杂质的量。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀：如氯化钠中 钡盐的检查。
（四）杂质与一定试剂反应产生颜色：阿司匹林中 游离水杨酸的测定。
（五）杂质与一定试剂反应产生气体：盐酸乙基吗 啡中铵盐检查。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（六）药物经有机破坏后检查杂质
药物分析实验：实验四 药物中特殊杂质的检查
HPLC法(主成分自身对照法）
判定方法： ❖ 规定杂质峰数目 ❖ 规定杂质峰面积
2、系统适应性差
环维黄样星D (TLC)：
①其他生物碱检查薄层色谱系统适用性差,无法分出环维 黄杨星D中杂质;
②由于点样量低,无法控制环维黄杨星D中杂质;
③含量测定方法由于专属性差,难于控制样品中环维黄杨
星D的实际含量。
实验四 药物中特殊杂质的检查
1
一、目的要求
Hale Waihona Puke 1 掌握本实验中药物特殊杂质的来源、检查方
法和原1理。
2 掌握特殊杂质检查的操作方法及杂质限量计
算；
3 4 5
2
二、实验原理
取本品0.10g ，加乙醇1ml 溶解后，加冷水适量使成50ml，立即加新 制的稀硫酸铁铵溶液〔取盐酸溶液(9→100)1ml ，加硫酸铁铵指示液 2ml 后，再加水适量使成 100ml〕1ml ，摇匀；30秒钟内如显色，与 对照液（精密称取水杨酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml ，摇匀， 再加水使成1000ml，摇匀，精密量取1ml ，加乙醇1ml 、水48ml与 上述新制的稀硫酸铁铵溶液1ml ，摇匀）比较，不得更深(0.1％) 。
Gymnastone（HPLC）:
0.30
0.15
0.20 0.10
0.10 0.05
AU
AU
0.00 0.00
0.00
5.00
10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00
5.00
10.00
15.00
20.00
分钟
流动相：超纯水-乙腈分钟(60:40,V/V)；检测器： 30%～70%（0～30 min）,70%
特殊杂质的检查-文档资料
H
+
酸钠定量反应,生成重氮盐,用永停法指示 反应终点
Ar-NH2+RCOOH Ar-N2 Cl +NaCl+2H2O
+ -
Ar-NHCOR+H2O Ar-NH2+NaNO2+ 2HCl
• 测定的主要条件
重氮化反应的速度受多种因素的影响,亚硝酸钠滴 定液及反应生成的重氮盐也不够稳定,。 (1)加适量溴化钾加快反应速度:在盐酸存在下,重氮化 反应历程为: NaNO2+HCl HNO2+NaCl HNO2+HCl NOCl+H2O
+ -
（3）温度（10-30℃）条件下滴定：通常温 度高重氮化反应速度快；但温度太高，可 使亚硝酸逸失，并可使重氮盐分解： Ar-N Cl +H2O Ar-OH+N2 +HCl 一般温度每升高10℃，重氮化反应速度加 快2.5倍，但重氮盐的分解速度相应加速2 倍；所以滴定一般在低温下进行。由于低 温时反应太慢，经试验可在室温下进行。
采用硅胶H-CMC薄层色谱法检查 时,对氨基苯甲酸的最低检出量为0.01 μg.检查久贮变色的产品发现除主斑点 盐酸普鲁卡因和分解产物对氨基苯甲 酸外,还有一个杂质斑点,经和已知结构 物质对照,确证为苯胺,最低检出量为 0.01 μg
五.含量测定
I. 亚硝酸钠滴定法 • 原理:芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝
药典对本品“有关物质”项下检查，以对 氯 苯乙酰胺为对照品。
检查方法 取本品的细粉，乙醚溶解后至 澄清，取上清液作为供试品溶液；另取含 对氯苯乙酰胺的乙醇溶液适量，用乙醚稀 释成每1ml中含50μg的溶液作为对照溶液。 在同一硅胶GF 薄层板上点样，展开后，置 紫外灯（254nm）下检视，供试品溶液如 显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较， 不得更大，更深。
+
酸钠定量反应,生成重氮盐,用永停法指示 反应终点
Ar-NH2+RCOOH Ar-N2 Cl +NaCl+2H2O
+ -
Ar-NHCOR+H2O Ar-NH2+NaNO2+ 2HCl
• 测定的主要条件
重氮化反应的速度受多种因素的影响,亚硝酸钠滴 定液及反应生成的重氮盐也不够稳定,。 (1)加适量溴化钾加快反应速度:在盐酸存在下,重氮化 反应历程为: NaNO2+HCl HNO2+NaCl HNO2+HCl NOCl+H2O
+ -
（3）温度（10-30℃）条件下滴定：通常温 度高重氮化反应速度快；但温度太高，可 使亚硝酸逸失，并可使重氮盐分解： Ar-N Cl +H2O Ar-OH+N2 +HCl 一般温度每升高10℃，重氮化反应速度加 快2.5倍，但重氮盐的分解速度相应加速2 倍；所以滴定一般在低温下进行。由于低 温时反应太慢，经试验可在室温下进行。
采用硅胶H-CMC薄层色谱法检查 时,对氨基苯甲酸的最低检出量为0.01 μg.检查久贮变色的产品发现除主斑点 盐酸普鲁卡因和分解产物对氨基苯甲 酸外,还有一个杂质斑点,经和已知结构 物质对照,确证为苯胺,最低检出量为 0.01 μg
五.含量测定
I. 亚硝酸钠滴定法 • 原理:芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝
药典对本品“有关物质”项下检查，以对 氯 苯乙酰胺为对照品。
检查方法 取本品的细粉，乙醚溶解后至 澄清，取上清液作为供试品溶液；另取含 对氯苯乙酰胺的乙醇溶液适量，用乙醚稀 释成每1ml中含50μg的溶液作为对照溶液。 在同一硅胶GF 薄层板上点样，展开后，置 紫外灯（254nm）下检视，供试品溶液如 显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较， 不得更大，更深。
药物分析-卡因类药物特殊杂质的检查
8
8
三、盐酸利多卡因注射液中2,6—二甲基苯胺及 其他杂质的检查
采用高效液相色谱法
不加校正因子的主成分自身稀释对照法
限量： 2,6—二甲基苯胺 0.04%
其他单个杂质
0.5%
其他杂质总限量 1.0%
（四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查
CH3 O
NHC
C3H7 N
HCl
CH3
长效酰胺类局麻药， R-盐酸罗哌卡因心脏毒性大 临床使用S－盐酸罗哌卡因
高效毛细管电泳
HO HO
HO HO
HO H
H N
CH3 CH3
çµ ¹Ñ (mv)
300 280 260 240 220 200 180 160 140 120 100
80 60 40 20
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 Ê±ä¼ (min)
Agillent 安捷伦 Waters 沃特斯 Bruker 布鲁克 Varian 瓦里安 AB 美国应用生物系统 Shimadzu 岛津 Finnigan 菲尼根
LC-MS分析： 1、色谱条件 Zobax SB-C18 (150 mm×4.6 mm, i.d., 5 μm) Column temperature: 25 ℃
Mobile phase:0.5%HAc-CH3CN (0.5%HAc)=87: 13 flow rate: 1.0 ml/min
Detection wavelength: 254 nm
2、质谱条件
Positive Scan mode 80~600 mau 喷雾电压：4000V 裂解电压：70V 干燥气（N2）：9.5 L/min 干燥气压力：40psi 干燥气温度：350℃
药物中特殊杂质的检查
药物中特殊杂质的检查<i>杂质检查</i>药物中特殊杂质的检查一、目的要求1．掌握阿司匹林片、盐酸普鲁卡因注射液、盐酸四环素片中特殊杂质检查的基本原理和方法；2．掌握薄层色谱法在药物杂质检查中的应用；3．掌握薄层色谱法的基本操作；4. 掌握检验结果的处理与判断，能够规范书写检验原始记录及检验报告书；5. 正确并更科学合理地解释检验中的现象，处理检验中的异常情况。
二、试剂与仪器1．试剂（查阅《中国药典》，进行所用试剂的配制）2. 仪器纳氏比色管、玻璃板（5×15cm）、全自动点样器、层析缸、可见分光光度计三、实验步骤（一）阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查取本品5片，研细，用乙醇30mL分次研磨，并移入100mL量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即过滤，精密量取滤液2mL，置50mL纳氏比色管中，用水稀释至50mL，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液（取1mol/L盐酸溶液1mL，加硫酸铁铵指示液2mL后再加水使成100mL）3mL，摇匀，30秒钟内如显色，与对照液（精密量取0.01%水杨酸溶液4.5mL，加乙醇3mL，0.05%酒石酸溶液1mL，用水稀释至50mL，再加上述新配制的稀硫酸铁铵溶液3mL，摇匀）比较，不得更深。
（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查薄层板的制备：取硅胶H2.5g，加0.5%羧甲基纤维素钠水溶液5.5～6mL调成糊状，均匀涂布于光滑、平整、洁净的玻璃板（5×15cm）上，置水平台上晾干，在110℃烘0.5小时，置干燥器备用。
操作：精密量取本品，加乙醇稀释使成每1mL中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。
另取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1mL中含30μg 的溶液，作为对照品溶液。
吸取上述两种溶液各10微升，分别点样于同一羧甲<i>杂质检查</i>基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：14）为展开剂，展开后，取出，晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100mL，加入冰醋酸5mL制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。
药物杂质检查 特殊杂质检查
二、特殊杂质检查方法
2、利用药物和杂质在化学性质上的差异 酸碱性的差异 ✓ 利用杂质的酸、碱性。规定消耗滴定 液的体积、规定pH值范围、指示剂法 氧化还原性的差异 ✓ 利用药物与杂质之间的氧化还原电位 的差异进行检查 杂质与一定试剂反应产生气体 ✓ 砷、硫、碳酸盐、氨或胺盐、氰化物 杂质与一定试剂反应产生沉淀
目录页
Contents
1.药物中杂质的来 源及其种类
3.特殊杂质检查
2.一般杂质检查
3.特殊杂质检查
Part3 特殊杂质检查
一、特殊杂质的概念
1、特殊杂质 在生产和贮藏过程中可能引入特有的杂质
二、特殊杂质检查方法
1、利用药物和杂质在物理性质上的差异 臭味及挥发性的差异 ✓ 药物（特别是挥发性药物）中如存在具有特殊气味的杂质，可以由气味判 断该杂质的存在
✓如麻醉乙醚异臭检查，控制原料乙醇中引入的杂醇油以及乙醛和过氧化物等杂质。方 法为：取供试品10ml，置于瓷蒸发皿中，使自然挥发，挥散完毕后，不得有异臭
Part3 特殊杂质检查
二、特殊杂质检查方法
1、利用药物和杂质在物理性质上的差异 颜色的差异
✓ 某些药物自身无色，但从生产中引入了有色的有关物质，或其分解产物有颜色 ✓维生素C溶液颜色检查：加水溶解应澄清无色
溶解行为的差异
✓ 有的药物可溶于水、有机溶剂或酸、碱中，而其杂质不溶；反之，杂质可溶而药物不溶
旋光性质的差异
✓ 比旋度（旋光度）的数值可以用来反映药物的纯度，限定杂质的含量 ✓ 中国药典规定使用钠光谱的D线（589.3nm）测定药物在特定溶液中的旋光度
✓黄体酮在乙醇中的比旋度范围限定。硫酸阿托品（无旋光性）50 mg/ml水溶液的旋光 度不得过-0.4°（特殊杂质莨菪碱为左旋体）
2、利用药物和杂质在化学性质上的差异 酸碱性的差异 ✓ 利用杂质的酸、碱性。规定消耗滴定 液的体积、规定pH值范围、指示剂法 氧化还原性的差异 ✓ 利用药物与杂质之间的氧化还原电位 的差异进行检查 杂质与一定试剂反应产生气体 ✓ 砷、硫、碳酸盐、氨或胺盐、氰化物 杂质与一定试剂反应产生沉淀
目录页
Contents
1.药物中杂质的来 源及其种类
3.特殊杂质检查
2.一般杂质检查
3.特殊杂质检查
Part3 特殊杂质检查
一、特殊杂质的概念
1、特殊杂质 在生产和贮藏过程中可能引入特有的杂质
二、特殊杂质检查方法
1、利用药物和杂质在物理性质上的差异 臭味及挥发性的差异 ✓ 药物（特别是挥发性药物）中如存在具有特殊气味的杂质，可以由气味判 断该杂质的存在
✓如麻醉乙醚异臭检查，控制原料乙醇中引入的杂醇油以及乙醛和过氧化物等杂质。方 法为：取供试品10ml，置于瓷蒸发皿中，使自然挥发，挥散完毕后，不得有异臭
Part3 特殊杂质检查
二、特殊杂质检查方法
1、利用药物和杂质在物理性质上的差异 颜色的差异
✓ 某些药物自身无色，但从生产中引入了有色的有关物质，或其分解产物有颜色 ✓维生素C溶液颜色检查：加水溶解应澄清无色
溶解行为的差异
✓ 有的药物可溶于水、有机溶剂或酸、碱中，而其杂质不溶；反之，杂质可溶而药物不溶
旋光性质的差异
✓ 比旋度（旋光度）的数值可以用来反映药物的纯度，限定杂质的含量 ✓ 中国药典规定使用钠光谱的D线（589.3nm）测定药物在特定溶液中的旋光度
✓黄体酮在乙醇中的比旋度范围限定。硫酸阿托品（无旋光性）50 mg/ml水溶液的旋光 度不得过-0.4°（特殊杂质莨菪碱为左旋体）
实验九 甲硝唑、对乙酰氨基酚中特殊杂质的检查
实验九 甲硝唑、对乙酰氨基酚中特殊杂质的检查
一、目的要求
1、了解药物杂质的概念及来源；理解药物杂质检查的意义。
2、掌握甲硝唑中特殊杂质的检查方法及实验原理。
3、掌握对乙酰氨基酚中特殊杂质的检查方法及实验原理。
二、实验原理
1、甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑的检查 N
N CH 3H O 2N AgNO 3,NH 3.H 2O N N
CH 3Ag O 2N
2、对乙酰氨基酚中对氨基酚的检查
三、仪器与试剂
仪器：锥形瓶，水浴锅，布氏漏斗，真空泵，纳氏比色管，移液管，洗耳球。
药品：甲硝唑、对乙酰氨基酚
试剂：1%浓氨溶液、硝酸银试液、甲醇溶液（1-2）、碱性亚硝基铁氰化钠试液、对氨基酚
四、实验内容
1、甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑的检查
取甲硝唑0.5g 置小锥形瓶中，加1%浓氨溶液20ml ，置水浴中加热使溶解，放冷，15min 后，滤过；弃去初滤液，取续滤液10ml 置纳氏比色管中，加硝酸银试液1ml ，溶液应澄清。
2、对乙酰氨基酚中对氨基酚的检查
取对乙酰氨基酚1.0g 置纳氏比色管中，加甲醇溶液（1-2）20ml 溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml ，摇匀，放置30min ；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g 加对氨基酚50μg 用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.005%）。
检查结果如不显色，与对照液的比较可省略。
五、思考题
1、试述甲硝唑中特殊杂质的名称、来源及进行杂质检查的实验原理（以反应式表示）。
2、对乙酰氨基酚在贮存过程中颜色变红的原因是什么？
3、对乙酰氨基酚中可能存在的杂质有哪些？如何检查？。
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实验二 药物中特殊杂质的检查
一、目的要求 1.掌握本实验中药物特殊杂质的来源； 2.掌握特殊杂质检查的操作方法。
二、实验原理
•
特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程
中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的
游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载
在中国药典正文各药品的质量标准中。
• 1.阿司匹林中的游离水杨酸:
• --杂质来源：原料残存（生产过程中乙酰化不完全）、水 解产生（贮存过程中水解）
• --检查原理：阿司匹林无游离酚羟基，不与高铁盐溶液作 用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇色，可检出1μg的游 离水杨酸。
原理： 水杨酸 FeCl3 pH4~6紫堇色
2.甾体激素中的有关物质：
TLC检查结果观察：
① 控制杂质斑点个数以控制杂质 种类； ② 供试品溶液所显杂质斑点不得 深于对照溶液的主斑点。
供
对
试
照
品
品
五、注意事项
1. 在阿司匹林中游离水杨酸的检查中，制备供试品溶液 所用的比色管须经干燥后使用，且供试品须用乙醇溶 解后才可加水稀释至刻度，否则供试品难以溶解。
2. 游离水杨酸检查时，供试品溶液要临用现配，避免阿 司匹林水解造成的误差。
--来源
•
原料、中间体、异构体、降解产物
• --特点
• （1）可能存在多个甾体杂质
• （2）结构类似
• 本实验中，氢化可的松中“其他甾体”（现 版药典称“有关物质”）的检查采用TLC法。
3.盐酸普鲁卡因注射液中的对氨基苯甲酸：
--杂质来源： 水解产生对氨基苯甲酸，进一步脱羧、
氧化成有色杂质，使注射剂颜色变黄、疗效下降、 毒性增加。
• 2.H板：玻璃背面先贴上标签（H板），取硅胶 H粉5g，加18毫升CMC-Na，同上法制板，平 推，勿动！！--制板完让老师看板，认可后方 能离开。
NH2
[H2O]
NH2
NH2
O
- CO2
[O]
Байду номын сангаас
COOCH2CH2N(C2H5)2
COOH
O
检查方法 ： TLC法
三、仪器与试药
• 阿司匹林原料药； • 盐酸溶液（9→100）； • 硫酸铁铵指示液； • 水杨酸对照品； • 冰醋酸；乙醇；甲醇； • 硅胶G；硅胶H； • 四氮唑蓝的甲醇溶液； • 氢氧化钠溶液； • 羧甲基纤维素钠水溶液； • 二氯甲烷；乙醚； • 盐酸普鲁卡因注射液； • 对氨基苯甲酸对照品；苯；丙酮；对二甲氨基苯甲醛
（二）氢化可的松中有关物质的检查
1. 供试品溶液和对照品溶液的制备 取本品，加氯仿-甲 醇（9:1）制成每1ml中含3.0mg的溶液，作为供试品溶 液。精密量取适量，加氯仿-甲醇（9:1）制成每1ml中 含60mg的溶液，作为对照品溶液。
2. 检查 吸取上述两种溶液各5μl （毛细管高度约2.0cm）， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇 -水（385：60：30：2）为展开剂，展开后，晾干，在 105℃干燥10min，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立 即检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，其 颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
溶液等。 • 电子天平；纳氏比色管；薄层板；展开槽；干燥箱等。
四、实验内容
（一）阿司匹林肠溶衣中游离水杨酸的检查
检查: 取本品30片（0.025g/片），研细，用乙醇15ml分 次研磨，并移入50ml量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻 度，摇匀，立即滤过，精密量取续滤液2ml，置50ml纳 氏比色管中，用水稀释至50ml，立即加新制的稀硫酸铁 铵溶液3ml，摇匀，20秒钟内如显色，与对照液（精密 量取0.01%水杨酸标准溶液4.5ml，加乙醇3ml，0.05%酒 石酸溶液1ml，用水稀释至50ml，再加上述新制的稀硫 酸铁铵溶液3ml，摇匀）比较，不得更深（1.5%）。
3. 进行水杨酸检查时，应在中性或弱酸性溶液（pH4~6） 中进行。若在强酸性溶液中，生成的紫兰色配合物会 分解褪色。
4. 点样时，宜分次点加，每次点加后，待其自然干燥或温热气流 吹干；点样基线距底边2.0cm，样点一般为圆点，直径为 2mm~4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜， 一般约为1.5cm~2.0cm。
5. 展开前，薄层板需饱和3-5min。
6. 展开时，薄层板浸入展开剂的深度为距底边0.5cm~1.0cm（切 勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，待展开至10cm~15cm， 取出，晾干，按规定方法检测。层析缸必须密闭，否则影响分 离效果。实验完毕，展开剂应回收。
7. 碱性四氮唑蓝试液应临用新配，新鲜试剂应呈黄色，颜色变深 后不宜使用。
（三）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查
检查 吸取上述两种溶液各10μl（毛细管高度约2.0cm）， 分别点于同一含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H 薄层板上。以苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4）为 展开剂，展开后，晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液 （2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸 5ml制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的 杂质斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更 深。
8. 自身对照法仅限于杂质斑点与主成分斑点颜色相同或相近时使 用。
*杂质检查完毕的实验内容-G板和H板的制备
（每人做一个G和一个H 板）
• 玻璃板洗净，吹干，待用。
• 1.G板：玻璃背面先贴上标签（G板），取硅胶 G粉5g，加18毫升水，向同一个方向研磨混合， 去除表面气泡，从中心倒入洁净玻璃板，研钵 棒助涂布均匀(快速)，拍板，转向，再拍板， 平推，勿动！！
一、目的要求 1.掌握本实验中药物特殊杂质的来源； 2.掌握特殊杂质检查的操作方法。
二、实验原理
•
特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程
中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的
游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载
在中国药典正文各药品的质量标准中。
• 1.阿司匹林中的游离水杨酸:
• --杂质来源：原料残存（生产过程中乙酰化不完全）、水 解产生（贮存过程中水解）
• --检查原理：阿司匹林无游离酚羟基，不与高铁盐溶液作 用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇色，可检出1μg的游 离水杨酸。
原理： 水杨酸 FeCl3 pH4~6紫堇色
2.甾体激素中的有关物质：
TLC检查结果观察：
① 控制杂质斑点个数以控制杂质 种类； ② 供试品溶液所显杂质斑点不得 深于对照溶液的主斑点。
供
对
试
照
品
品
五、注意事项
1. 在阿司匹林中游离水杨酸的检查中，制备供试品溶液 所用的比色管须经干燥后使用，且供试品须用乙醇溶 解后才可加水稀释至刻度，否则供试品难以溶解。
2. 游离水杨酸检查时，供试品溶液要临用现配，避免阿 司匹林水解造成的误差。
--来源
•
原料、中间体、异构体、降解产物
• --特点
• （1）可能存在多个甾体杂质
• （2）结构类似
• 本实验中，氢化可的松中“其他甾体”（现 版药典称“有关物质”）的检查采用TLC法。
3.盐酸普鲁卡因注射液中的对氨基苯甲酸：
--杂质来源： 水解产生对氨基苯甲酸，进一步脱羧、
氧化成有色杂质，使注射剂颜色变黄、疗效下降、 毒性增加。
• 2.H板：玻璃背面先贴上标签（H板），取硅胶 H粉5g，加18毫升CMC-Na，同上法制板，平 推，勿动！！--制板完让老师看板，认可后方 能离开。
NH2
[H2O]
NH2
NH2
O
- CO2
[O]
Байду номын сангаас
COOCH2CH2N(C2H5)2
COOH
O
检查方法 ： TLC法
三、仪器与试药
• 阿司匹林原料药； • 盐酸溶液（9→100）； • 硫酸铁铵指示液； • 水杨酸对照品； • 冰醋酸；乙醇；甲醇； • 硅胶G；硅胶H； • 四氮唑蓝的甲醇溶液； • 氢氧化钠溶液； • 羧甲基纤维素钠水溶液； • 二氯甲烷；乙醚； • 盐酸普鲁卡因注射液； • 对氨基苯甲酸对照品；苯；丙酮；对二甲氨基苯甲醛
（二）氢化可的松中有关物质的检查
1. 供试品溶液和对照品溶液的制备 取本品，加氯仿-甲 醇（9:1）制成每1ml中含3.0mg的溶液，作为供试品溶 液。精密量取适量，加氯仿-甲醇（9:1）制成每1ml中 含60mg的溶液，作为对照品溶液。
2. 检查 吸取上述两种溶液各5μl （毛细管高度约2.0cm）， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇 -水（385：60：30：2）为展开剂，展开后，晾干，在 105℃干燥10min，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立 即检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，其 颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
溶液等。 • 电子天平；纳氏比色管；薄层板；展开槽；干燥箱等。
四、实验内容
（一）阿司匹林肠溶衣中游离水杨酸的检查
检查: 取本品30片（0.025g/片），研细，用乙醇15ml分 次研磨，并移入50ml量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻 度，摇匀，立即滤过，精密量取续滤液2ml，置50ml纳 氏比色管中，用水稀释至50ml，立即加新制的稀硫酸铁 铵溶液3ml，摇匀，20秒钟内如显色，与对照液（精密 量取0.01%水杨酸标准溶液4.5ml，加乙醇3ml，0.05%酒 石酸溶液1ml，用水稀释至50ml，再加上述新制的稀硫 酸铁铵溶液3ml，摇匀）比较，不得更深（1.5%）。
3. 进行水杨酸检查时，应在中性或弱酸性溶液（pH4~6） 中进行。若在强酸性溶液中，生成的紫兰色配合物会 分解褪色。
4. 点样时，宜分次点加，每次点加后，待其自然干燥或温热气流 吹干；点样基线距底边2.0cm，样点一般为圆点，直径为 2mm~4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜， 一般约为1.5cm~2.0cm。
5. 展开前，薄层板需饱和3-5min。
6. 展开时，薄层板浸入展开剂的深度为距底边0.5cm~1.0cm（切 勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，待展开至10cm~15cm， 取出，晾干，按规定方法检测。层析缸必须密闭，否则影响分 离效果。实验完毕，展开剂应回收。
7. 碱性四氮唑蓝试液应临用新配，新鲜试剂应呈黄色，颜色变深 后不宜使用。
（三）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查
检查 吸取上述两种溶液各10μl（毛细管高度约2.0cm）， 分别点于同一含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H 薄层板上。以苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4）为 展开剂，展开后，晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液 （2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸 5ml制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的 杂质斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更 深。
8. 自身对照法仅限于杂质斑点与主成分斑点颜色相同或相近时使 用。
*杂质检查完毕的实验内容-G板和H板的制备
（每人做一个G和一个H 板）
• 玻璃板洗净，吹干，待用。
• 1.G板：玻璃背面先贴上标签（G板），取硅胶 G粉5g，加18毫升水，向同一个方向研磨混合， 去除表面气泡，从中心倒入洁净玻璃板，研钵 棒助涂布均匀(快速)，拍板，转向，再拍板， 平推，勿动！！