实验2 药物特殊杂质检查(学生)
药物的特殊杂质检查方法 ppt课件
高效液相色谱法工作流程
峰面积归一化法：杂质峰占所有峰总面积中 比例不超过一定数值来限量。
• 杂质含量=（杂质峰面积/总峰面积） × 100%
如：苯丙醇中苯丙酮的检查，苯丙醇溶液 测定吸收度比值A247nm/A258nm不得大于0.79。
（五）对光吸收性质的差异
2. 原子吸收分光光度法
是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收发 自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测 元素的含量。 限量检查时：对照品液 = 供试品 + 限量---a
一、利用药物和杂质在物理性质上的差异
（一）臭味及挥发性质的差异
例如：间苯二酚中苯酚检查：本品0.25g，缓缓加热不得 有苯酚臭。浓过氧化氢中不挥发性杂质检查：10ml水浴蒸干 残渣＜15mg。
（二）颜色差异
例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查：取本品2.0g， 加NaOH试液10ml，加水25ml，与黄色3号比色液比，不得 更深。
（一）薄层色谱法
（3）对照药物法
当无适合的杂质对照品，尤其是供试品 显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差 异，难以判断限量时，可用与供试品相同的 药物作为对照品，此对照物中所含待检杂质 需符合限量要求，且稳定性好。
供试品 符合要求药物
（一）薄层色谱法
2、灵敏度法
少数药物还利用试验条件下显色剂对杂质 的检测限来控制其限量。
盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶G薄 层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛-硫酸 显色，紫外灯下检视，除主斑点外，不得显 其他斑点。
（二）纸色谱法
第三章 药物的杂质检查 (2)
各杂质峰面积乘以相应的ƒ后与对照液主成分峰面积比较。
Ax Cs=
.ƒ
As'/Cs'
例：红霉素中红霉素B、红霉素C及有关物质的检查
红霉素A是主要活性物质
方法：取本品， 用磷酸盐缓冲液(pH7.0)-甲醇(15 ： 1)溶解并稀释制成每l m l 中约含4mg的溶液， 作为供试品溶液；精密量取5ml,置100ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)-甲醇(15 ： 1)稀释至 刻度,摇匀,作为对照溶液。照红霉素A组分项下的色谱条件，取对照溶液20ul注人液相色谱仪， 调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的50%,精密量取供试品溶液与对照溶液各
❖ 一般杂质：在自然界中分布较广泛，在多种药物 的生产和贮存过程中易引入的杂质，如酸、碱、 水分、Cl-、SO42-、铁盐、重金属、砷盐、残渣等。
❖ 特殊杂质：是指在特定的药物生产和贮藏过程中 引入的杂质，也称有关物质。这类杂质随药物不 同则不同。
（四）杂质的限量 ( Limit Test )
1、杂质限量
① 杂质对照品法
适用于已知杂质并能够得到杂质对照品的情况
② 供试品溶液自身稀释对照法
适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况(仅限于 二者的颜色相近或相同的情况)
③ 杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照并用法
适用于存在多个杂质
④ 对照药物法
无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色和 主成分颜色有差异，难以判断限量。
吡罗昔康中检查“有关物质”
薄层：硅胶GF254（含NaOH） 展开剂：三氯甲烷-丙酮-甲醇（25:25:5） 检视：紫外灯（254nm）
规定： 如显杂质斑点，其颜
色与对照溶液所显主斑 点相比较，不得更深
2-乙酰水杨酸等药物中特殊杂质的检查
实验原理
实验操作
仪器与注意事项
思考题
Experimental Principle
5CH3OH + 2MnO4- + 6H+ 3Mn2+ + 2MnO4- + 2H2O 5HH2CHO + 2Mn2+ + 8H2O 5MnO2 + 4H+
甲醇在磷酸溶液中，被高锰酸钾氧化成甲醛，用偏重
亚硫酸钠除去过量的高锰酸钾,甲醛与变色酸在浓硫酸存 在下，先缩合，随之氧化，生成对醌结构的蓝紫色化合物。
35 ℃水浴，60 min
观察溴化汞试纸，样品与标准砷 溶液（1 μg /mL）生成的砷斑比 较，颜色不得更深。
实验目的与要求
实验原理
实验操作
仪器与注意事项
思考题
Procedures and methods
本次预实验砷斑对比图
对照
样品
实验目的与要求
实验原理
实验操作
仪器与注意事项
思考题
Procedures and methods
实验目的与要求
3HBr + As(HgBr)3 黄色 3AsH(HgBr)2 3HBr + 3As2Hg3
实验操作 仪器与注意事项
棕色 棕黑色
思考题
+ AsH3
实验原理
Experimental Principle
2. 乙酰水杨酸中水杨酸的检查
乙酰水杨酸属芳酸酯类药物，在生产和贮存过程中均会 产生水杨酸。水杨酸对人体有毒。应对其进行限度检查。
实验目的与要求
实验原理
实验操作
仪器与注意事项
思考题
Procedures and methods
特殊杂质的检查
测定的主要条件 重氮化反应的速度受多种因素的影响,亚硝酸钠滴定液及反应生成的重氮盐也不够稳定,。 (1)加适量溴化钾加快反应速度:在盐酸存在下,重氮化反应历程为: NaNO2+HCl HNO2+NaCl HNO2+HCl NOCl+H2O NO+Cl- Ar-NH2 Ar-NH-NO Ar-N=N-OH Ar-N2+Cl- 慢 快 快
注意： 第一步反应的快慢与含芳伯氨基化合物 中芳伯氨基的游离程度有密切关系： 芳伯氨基的碱性较弱 在一定强度酸性溶液 中成盐比例较小 游离的芳伯氨基多 重氮化反 应速度就快；反之亦反。 KBr 使重氮化反应加速的原理 HCl+KBr KCl+HBr HNO2+HBr NOBr+H2O （1） 若供试液中仅含HCl,则： HNO2+HCl NOCl+H2O （2） （1）式的平衡常数比（2）式约大300倍，生 成NOBr量大的多从而加速了重氮化反应的进行。
检查方法 本品1.0g，加甲醇溶液（1 2）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml，摇匀放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50 μg用同一方法制成的对照品比较，不得更深（0.005%） 对氨基酚对照溶液不稳定，应临用前新鲜配制。
[药物分析] 实验2 药物中特殊杂质的检查
![[药物分析] 实验2 药物中特殊杂质的检查](https://img.taocdn.com/s3/m/5ac4e1c63968011ca20091ef.png)
【实验题目】药物中特殊杂质的检查【实验目的】1.掌握阿司匹林肠溶片、贝诺酯中特殊杂质检查的基本原理和方法。
2.掌握薄层色谱法在药物杂质检查中的应用。
3.掌握薄层色谱法的基本操作。
【实验原理】一阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查生产过程中乙酰化不完全或储藏过程中水解均可引入游离水杨酸，检查的原理是利用水杨酸可在弱酸性溶液中与高铁盐反应呈紫堇色（课本上的公式），而阿司匹林结构中无游离酚羟基，不发生该反应，因而对杂质的检出无干扰。
通过与一定量水杨酸对照液生成的色泽比较，从而控制游离水杨酸的限量。
二贝诺酯中有关物质的检查薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。
例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。
当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。
由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列斑点。
如作为标准的化合物在层析薄板上一起展开，则可以根据这些已知化合物的比移值对各斑点的组分进行鉴定，同时也可以进一步采用某些方法加以定量。
【实验仪器】50 ml纳氏比色管、50 ml量瓶、移液管、点样毛细管、玻璃板、研钵、研杵、量筒、胶头滴管、吹风机、展开槽、紫外灯、毛细点样管等。
【实验试药】一阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查阿司匹林肠溶片（厂家、批号）、稀硫酸铁铵溶液、0.01％水杨酸溶液、0.05％酒石酸溶液、乙醇（浓度？）、纯化水等。
二贝诺酯中有关物质的检查硅胶GF254、0.5％羧甲基纤维素钠水溶液、40.0 mg/ml贝诺酯溶液、0.4 mg/ml贝诺酯溶液、80μg/ml对乙酰氨基酚、无水乙醇、展开剂（二氯甲烷-乙醚-冰醋酸=80﹕15﹕4）、纯化水等。
药物中特殊杂质的检查方法
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
主要用于药物中无效或低效晶型检查，如甲 苯咪唑中A晶型检查
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
A 晶型
C 晶型
在640cm-1
有强吸收
吸收很弱
盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶G 薄层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛-硫 酸显色，紫外灯下检视物质的分离、分析。 有时也用于检查放射性药物注射液中 的放射化学杂质。
如：苯丙醇中苯丙酮的检查，苯丙醇溶液 测定吸收度比值A247nm/A258nm不得大于0.79。
（五）对光吸收性质的差异
2. 原子吸收分光光度法
是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收 发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待 测元素的含量。 限量检查时：对照品液 = 供试品 + 限量---a
例: 肾上腺素中肾上腺酮的检查
肾上腺素的盐酸溶液 （2mg/ml）在310nm处 的吸光度不得过0.05。 已知酮体在该波长处的 吸收系数为453，计算 出酮体的限量。
（五）对光吸收性质的差异
1. 紫外分光光度法
有的杂质紫外吸收光谱与药物的紫外吸收 光谱重叠，但可以通过控制供试品溶液的吸收 度比值来控制杂质的量。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀：如氯化钠中 钡盐的检查。
（四）杂质与一定试剂反应产生颜色：阿司匹林中 游离水杨酸的测定。
（五）杂质与一定试剂反应产生气体：盐酸乙基吗 啡中铵盐检查。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（六）药物经有机破坏后检查杂质
药物杂质检查 特殊杂质检查
2、利用药物和杂质在化学性质上的差异 酸碱性的差异 ✓ 利用杂质的酸、碱性。规定消耗滴定 液的体积、规定pH值范围、指示剂法 氧化还原性的差异 ✓ 利用药物与杂质之间的氧化还原电位 的差异进行检查 杂质与一定试剂反应产生气体 ✓ 砷、硫、碳酸盐、氨或胺盐、氰化物 杂质与一定试剂反应产生沉淀
目录页
Contents
1.药物中杂质的来 源及其种类
3.特殊杂质检查
2.一般杂质检查
3.特殊杂质检查
Part3 特殊杂质检查
一、特殊杂质的概念
1、特殊杂质 在生产和贮藏过程中可能引入特有的杂质
二、特殊杂质检查方法
1、利用药物和杂质在物理性质上的差异 臭味及挥发性的差异 ✓ 药物（特别是挥发性药物）中如存在具有特殊气味的杂质，可以由气味判 断该杂质的存在
✓如麻醉乙醚异臭检查，控制原料乙醇中引入的杂醇油以及乙醛和过氧化物等杂质。方 法为：取供试品10ml，置于瓷蒸发皿中，使自然挥发，挥散完毕后，不得有异臭
Part3 特殊杂质检查
二、特殊杂质检查方法
1、利用药物和杂质在物理性质上的差异 颜色的差异
✓ 某些药物自身无色，但从生产中引入了有色的有关物质，或其分解产物有颜色 ✓维生素C溶液颜色检查：加水溶解应澄清无色
溶解行为的差异
✓ 有的药物可溶于水、有机溶剂或酸、碱中，而其杂质不溶；反之，杂质可溶而药物不溶
旋光性质的差异
✓ 比旋度（旋光度）的数值可以用来反映药物的纯度，限定杂质的含量 ✓ 中国药典规定使用钠光谱的D线（589.3nm）测定药物在特定溶液中的旋光度
✓黄体酮在乙醇中的比旋度范围限定。硫酸阿托品（无旋光性）50 mg/ml水溶液的旋光 度不得过-0.4°（特殊杂质莨菪碱为左旋体）
药品质量检验技术综合实训教程中篇 药品质量检验单元实训 单元实训二药品中一般杂质检查法(二)
单元实训二 药品中一般杂质检查法（二）
一.实训目标 通过本实训，要求掌握药品干燥失重、炽灼残渣、 砷盐检查及pH值测定的方法及操作技能。 二.实训资料 （一）检验药品 名称：葡萄糖、头孢氨苄 （二）检验项目 检查葡萄糖的干燥失重、炽灼残渣及砷盐；测定头 孢氨苄的酸度。
单元实训二 药品中一般杂质检查法（二）
3.砷盐检查法 采用古蔡氏法。该法是利用金属锌与酸作用产生新 生态的氢与药品中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化 氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与同一条件 下定量标准砷溶液所产生的砷斑比较，以判定砷盐的限 量。 4.pH值测定法 除另有规定外，水溶液的pH值应以玻璃电极为指示 电极，饱和甘汞电极为参比电极的酸度计进行测定。酸 度计应定期进行计量检定，并符合国家规定。
4.结果判断 测定结果小于或等于规定限量判为符合规定，大 于规定限量判为不符合规定。
单元实训二 药品中一般杂质检查法（二）
（二）干燥失重的测定 1.实训用仪器与试药的准备 试药：变色硅胶。 2.操作方法 （1）将洗净的扁形称量瓶，连同敞开的玻璃盖在与 供试品同在105℃干燥3小时后，在温度降至70～80℃时， 取出并盖好盖子，放入干燥器内，降至室温，精密称定 其重量。 （2）称取葡萄糖0.6～1.4g，平铺在干燥至恒重的 扁形称量瓶中，精密称定其重量。
2.试液的制备
确定试药及规格， 确定实验用量
按用量制备试液、 缓冲液、标准溶 液
3.杂质的检查 （1）干燥失重的测定
称量瓶恒重 并精密称定
精密称定 供试品量
干燥至恒重
装瓶、贴上标 签、备用
记录、 计算
结果判断
单元实训二 药品中一般杂质检查法（二）
（2）炽灼残渣的检查
坩锅恒重 并精密称定
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实验2 药物特殊杂质检查
一、目的要求
1、掌握葡萄糖分析中砷盐限度检查的原理和方法。
2、了解某些药物中特殊杂质的检查意义，并掌握其操作方法。
二、实验原理
As 3+
+3Zn +3H +3Zn 2++AsH
AsO 3
3-+3Zn
+9H +3Zn 2++AsH +H 2O AsO 43-+4Zn +11H +4Zn 2++AsH +4H 2O
AsH 3+3HgBr 23HBr +As(HgBr)3黄色2As(HgBr)3+AsH 33AsH(HgBr)2棕色As(HgBr)3
+AsH 3
3HBr +3As 2Hg 3
棕黑色
本实验采用古蔡（Gutzeit ）法检查药物中微量的砷盐，其原理为金属锌与酸作用生成新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，判断供试品中砷盐含量是否符合限量规定。
O OH OH
水杨酸
OCOCH 3
OH O 乙酰水杨酸
O
OH OH
+Fe
3+
+3H +
3
O O Fe /3
3
O H
利用乙酰水杨酸结构中无酚羟基，不能与高铁盐作用，而水杨酸则可与高铁盐反应呈紫(堇)色，与一定量水杨酸对照液生成的色泽比较，从而控制游离水杨酸的限量。
C 2H 5OOC 2H 5+2KI
H 2O
C 2H 5OC 2H 5I 2 2 KOH
+
++
I 2 遇淀粉显色，判断供试品中是否有过氧化物存在。
5CH 3OH+2MnO 4-+
6H +
5HCHO +2Mn 2++
8H 2O
3Mn 2++
2MnO 4-+2H 2
O
5MnO 2+
4H +
甲醇在磷酸溶液中，被高锰酸钾氧化成甲醛，用偏重亚硫酸钠除去过量的高锰酸钾，甲醛与变色酸在浓硫酸存在下，先缩合，随之氧化，生成对醌结构的蓝紫色化合物。
5CH3OH+2MnO4-+6H+5HCHO+2Mn2++8H
O
2
3Mn2++2MnO4-+2H
O5MnO2+4H+
2
碳酰氯水解溶于水后形成盐酸，利用酸碱中和的方法，来判断氯仿中酸度和碳酰氯是否超过限量。
三、操作步骤
1、葡萄糖中的砷盐检查
样品：葡萄糖2.0g置试砷瓶中→加水5mL溶解→加稀硫酸5mL与溴化钾溴试液0.5mL（10滴）→80℃水浴加热20min（始终保持有过量溴存在，必要时再补加适量溴化钾溴试液，并随时补充蒸散的水分）→放冷，加浓盐酸5mL与水适量使成28mL
标准：取标准砷溶液2.0mL置试砷瓶中→加蒸馏水21mL与浓盐酸5mL
→加碘化钾试液5mL与酸性氯化亚锡试液5滴→置室温放置10min→加锌粒1.5g，迅速将瓶塞（瓶塞上已安装好醋酸铅棉花及2张溴化汞试纸的试砷管）塞紧→保持反应温度在25-40℃之间（视反应快慢情况而定，但不超过40℃）1h→取出溴化汞试纸，将生成的砷斑与标准砷溶液（0.001mg As/mL）比较，颜色不得更深，结果附于实验报告上。
2、乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查50mL纳氏比色管
样品：乙酰水杨酸0.10 g→加乙醇5mL溶解后→加蒸馏水适量使成50mL
标准：水杨酸对照液1.0mL →加乙醇5mL，加蒸馏水适量使成50mL
→加新制的硫酸铁铵指示液1mL→摇匀，比较观察。
3、药用乙醚中过氧化物的检查具塞比色管
样品：精密吸取药用乙醚5.0mL→加新制的碘化钾淀粉溶液8mL→强力振摇1min→暗处放置30min→两液层均不得染色，按实验结果判断。
4、乙醇中甲醇的检查50mL纳氏比色管
样品：精密吸取乙醇检品溶液1mL
→加磷酸溶液0.2mL（4滴）与5%高锰酸钾溶液0.25mL（5滴），标准：精密吸取标准甲醇溶液1mL
30-35℃保温15min→滴加10%焦亚硫酸钠溶液至无色→冷却状态下，缓缓加入硫酸（3→4）溶液5mL→1%变色酸溶液0.1mL（2滴）→沸水水浴（100℃）加热20min以上→比色观察，写出实验结果。
四、实验记录和结果
五、注意事项：
1、本次实验中会使用到标准砷、溴化钾溴、浓盐酸、硫酸和乙醚等有毒腐蚀品，取用时注意安全。
2、试剂取好后要放回原处。
溴化钾溴试液、浓盐酸、酸性氯化亚锡试液和硫酸（3→4）在通风厨中，要
注意带手套，取用要尽量快。
回收试剂瓶在通风柜中。
3、称量用到2种药品，葡萄糖与乙酰水杨酸，注意标签。
六、思考题
1、稀硫酸的配置方法？
2、溴化钾溴试液的配置方法？
3、稀硫酸铁铵试液的配置方法？
4、碘化钾淀粉溶液的配置方法？。