实验药物中特殊杂质的检查
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药物的检查—特殊杂质的检查(药物分析课件)
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（4）面积归一化法
适合于所有杂质都能出峰，粗 略测定杂质峰面积 可求出各峰（各组分）占总量 的百分数。
杂质检查法：气相色谱法(GC)
用于药物中挥发性杂质的检查,如药物中 残留溶剂、农药残留量等。 检查方法同高效液相色谱法.
4
菪碱的检查）
二、化学性质上的差异
1.酸碱性的差异
举例：硫酸阿托品中其他生物碱的检查
阿托品的碱性大于其他碱：阿托品＞山莨菪碱＞东莨菪碱、
樟柳碱
硫酸阿托（杂质：东、山、樟）
HCl [BH]+（溶解）
氨水 碱化
要求：不得出现浑浊
溶液中 浑浊 （盐酸阿托品） (其他碱游离)
[BH]+
化学性质上的差异
2.氧化还原性的差异
举例：葡萄糖亚铁中高铁盐的检查
10mlHCl 本品5g (100ml水) 3g KI
I2
Na2S2O3滴定 淀粉指示剂
蓝色消失
含Fe3+≤0.1%
特殊杂质检查方法---分光光度法
分光光度 法
1.紫外-可见分光光度法 （肾上腺素中肾上腺酮检查）
2.原子吸收分光光度法 （维生素C中铁、铜检查）
内标加校正因子法
校正因子 ( f ) AS / CS AR / CR
含量(CX )
f
AX AS / CS
S：内标 R：对照品 X：样品
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（2）外标法
含量(C X
)
CR
AX AR
R：对照品 X：样品
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（3）主成分自身对照法（不加校正因子）
药物分析-卡因类药物特殊杂质的检查
Mobile phase:0.5%HAc-CH3CN (0.5%HAc)=87: 13 flow rate: 1.0 ml/min
Detection wavelength: 254 nm
2、质谱条件
Positive Scan mode 80~600 mau 喷雾电压：4000V 裂解电压：70V 干燥气（N2）：9.5 L/min 干燥气压力：40psi 干燥气温度：350℃
Agillent 安捷伦 Waters 沃特斯 Bruker 布鲁克 Varian 瓦里安 AB 美国应用生物系统 Shimadzu 岛津 Finnigan 菲尼根
LC-MS分析： 1、色谱条件 Zobax SB-C18 (150 mm×4.6 mm, i.d., 5 μm) Column temperature: 25 ℃
8
8
三、盐酸利多卡因注射液中2,6—二甲基苯胺及 其他杂质的检查
采用高效液相色谱法
不加校正因子的主成分自身稀释对照法
限量： 2,6—二甲基苯胺 0.04%
其他单个杂质
0.5%
其他杂质总限量 1.0%
（四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查
CH3 O
NHC
C3H7 N
HCl
CH3
长效酰胺类局麻药， R-盐酸罗哌卡因心脏毒性大 临床使用S－盐酸罗哌卡因
检查方法
2010版：HPLC法
固定相：C18
流动相：磷酸缓冲（含庚烷磺酸钠）-ห้องสมุดไป่ตู้甲醇
检测波长：279nm
外标法计算限量
2005年版 原理： ☆TLC 杂质对照品法
☆对氨基苯甲酸最低检出量为0.01μg ☆苯胺最低检出量0.01μg
二、盐酸氯普卡因注射液中有关物质和光解产物的 检查
Detection wavelength: 254 nm
2、质谱条件
Positive Scan mode 80~600 mau 喷雾电压：4000V 裂解电压：70V 干燥气（N2）：9.5 L/min 干燥气压力：40psi 干燥气温度：350℃
Agillent 安捷伦 Waters 沃特斯 Bruker 布鲁克 Varian 瓦里安 AB 美国应用生物系统 Shimadzu 岛津 Finnigan 菲尼根
LC-MS分析： 1、色谱条件 Zobax SB-C18 (150 mm×4.6 mm, i.d., 5 μm) Column temperature: 25 ℃
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三、盐酸利多卡因注射液中2,6—二甲基苯胺及 其他杂质的检查
采用高效液相色谱法
不加校正因子的主成分自身稀释对照法
限量： 2,6—二甲基苯胺 0.04%
其他单个杂质
0.5%
其他杂质总限量 1.0%
（四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查
CH3 O
NHC
C3H7 N
HCl
CH3
长效酰胺类局麻药， R-盐酸罗哌卡因心脏毒性大 临床使用S－盐酸罗哌卡因
检查方法
2010版：HPLC法
固定相：C18
流动相：磷酸缓冲（含庚烷磺酸钠）-ห้องสมุดไป่ตู้甲醇
检测波长：279nm
外标法计算限量
2005年版 原理： ☆TLC 杂质对照品法
☆对氨基苯甲酸最低检出量为0.01μg ☆苯胺最低检出量0.01μg
二、盐酸氯普卡因注射液中有关物质和光解产物的 检查
特殊杂质检查法
2.阿司匹林中检查游离水杨酸 游离水杨酸来源：a.生产中未 反应完全；b、贮存中水解 影响：游离水杨酸酸性较强， 对胃粘膜43;Fe3+一不反应 SA+Fe3+一紫堇色
检查方法：样品管：取样品0.1g，加乙醇 1ml溶解 1ml 加水至50m1 标准管：水杨酸0.1g加水溶解，加醋酸 加水至1000m1,取出1.0m1加 乙醇1ml，水48ml。 样品管、标准管均加新制成稀硫酸铁铵 lml，摇匀30"内如显色，比较不得更深。
③加校正因子的主成分自身对照法 将供试溶液稀释成与杂质限度相 当浓度作为对照溶液，分别取供试溶 液和对照溶液进样分析，供试液中各 杂质峰面积总和与校正因子相乘后与 对照溶液主成分峰面积比较，计算供 试品中杂质的含量。
校正因子（f） =
AS / CS AR / CR
（C x） f × =
Ax ′ AS / C'S
例如ChP2000枸橼酸乙胺嗪中检查N-甲 基哌嗪。 板：硅胶G薄层板 点样：供试品（50mg/ml甲醇液， 对照品(N-甲基哌嗪50μg/ml甲醇液）， 各10μl 展开剂：氯仿：甲醇：氨水(13： 5：1） 显色剂：置碘蒸气中显色。 规定：供试品液所显与对照品液 相应的杂质斑点，颜色不得深于对照 品液主斑点。
L = 杂质量/ 供试品量×100% = 2×10 ×100% = 0.06%
0.05 453× 100 −3
3）吸附或分配性质的差异（色谱差异） （1）TLC:根据药物与杂质对吸附剂 的吸附或展开剂的解析能力不同，加以 分离和检查。 ①利用待检杂质的纯品作对照：用待 检杂质纯品（或可能存在的杂质纯品） 作为对照液，与供试液点于同一薄层板 上，展开和定位后进行检查。
②不加校正因子的主成分自身对照法
特殊杂质的检查
CO2 [O] H2N COOH H2N O O 检查方法 精密量取本品加乙醇稀释使成每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液,作为供试品溶液;另取对氨基苯甲酸对照品,加乙醇制成每1ml中含30μg的溶液,作为对照品溶液去上述两种溶液各10μl, 在硅胶H薄层板上点样,用展开剂展开后用对二甲氨基苯甲醛(2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml,加冰醋酸5ml制成)喷雾显色.供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点, 其颜色与对照品溶液的主斑点比较,不得更深.
测定的主要条件 重氮化反应的速度受多种因素的影响,亚硝酸钠滴定液及反应生成的重氮盐也不够稳定,。 (1)加适量溴化钾加快反应速度:在盐酸存在下,重氮化反应历程为: NaNO2+HCl HNO2+NaCl HNO2+HCl NOCl+H2O NO+Cl- Ar-NH2 Ar-NH-NO Ar-N=N-OH Ar-N2+Cl- 慢 快 快
注意： 第一步反应的快慢与含芳伯氨基化合物 中芳伯氨基的游离程度有密切关系： 芳伯氨基的碱性较弱 在一定强度酸性溶液 中成盐比例较小 游离的芳伯氨基多 重氮化反 应速度就快；反之亦反。 KBr 使重氮化反应加速的原理 HCl+KBr KCl+HBr HNO2+HBr NOBr+H2O （1） 若供试液中仅含HCl,则： HNO2+HCl NOCl+H2O （2） （1）式的平衡常数比（2）式约大300倍，生 成NOBr量大的多从而加速了重氮化反应的进行。
检查方法 本品1.0g，加甲醇溶液（1 2）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml，摇匀放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50 μg用同一方法制成的对照品比较，不得更深（0.005%） 对氨基酚对照溶液不稳定，应临用前新鲜配制。
测定的主要条件 重氮化反应的速度受多种因素的影响,亚硝酸钠滴定液及反应生成的重氮盐也不够稳定,。 (1)加适量溴化钾加快反应速度:在盐酸存在下,重氮化反应历程为: NaNO2+HCl HNO2+NaCl HNO2+HCl NOCl+H2O NO+Cl- Ar-NH2 Ar-NH-NO Ar-N=N-OH Ar-N2+Cl- 慢 快 快
注意： 第一步反应的快慢与含芳伯氨基化合物 中芳伯氨基的游离程度有密切关系： 芳伯氨基的碱性较弱 在一定强度酸性溶液 中成盐比例较小 游离的芳伯氨基多 重氮化反 应速度就快；反之亦反。 KBr 使重氮化反应加速的原理 HCl+KBr KCl+HBr HNO2+HBr NOBr+H2O （1） 若供试液中仅含HCl,则： HNO2+HCl NOCl+H2O （2） （1）式的平衡常数比（2）式约大300倍，生 成NOBr量大的多从而加速了重氮化反应的进行。
检查方法 本品1.0g，加甲醇溶液（1 2）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml，摇匀放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50 μg用同一方法制成的对照品比较，不得更深（0.005%） 对氨基酚对照溶液不稳定，应临用前新鲜配制。
药物分析实验：实验四 药物中特殊杂质的检查
限度=0.1/1000/0.1X100%=0.1% 3
氢化可的松中其它甾体的检查
• 1、进样或点样溶液浓度太低
98.6%
TLC检查其他甾体特点：
（1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接 近。
氢化可的松
•
碱性四氮唑蓝试液 皮质激素C17-a-醇酮基具有还原性,在强碱 溶液中能将四氮唑蓝定量地还原为甲瓒
取本品加氯仿-甲醇（9 ：1）制成3.0mg/ml作为供试液， 精密量取适量，加氯仿-甲醇（9 ：1）稀释成0.06mg/ml作 为对照液；照薄层色谱法，各取5μl，分别点于同一硅胶G 板上，以 为展开剂，展开后晾干，在105℃干燥10分钟，
放杂质冷斑，点喷，以不碱得性多四于氮3唑个蓝，1试其液颜，色立与即对检照视液，的供主试斑品点溶比液较如，显 不得更深。2
限量% . % %
控制总杂质限量是多少?
2010年版-氢化可的松有关物质
• 【检查】有关物质 取本品，精密称定，用甲醇溶解并稀释制成每l m l 中约含氢化可的松0. 5mg的溶液，作为供试 品溶液；精密量取1ml， 置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻 度，摇匀，作为对照溶液；另取泼 尼松龙对照品，精密称定，加 流动相溶解并定量稀释制成每l m l 中约 含5ug的溶液， 作为 对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对 照溶液20uL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，1使主成分峰高约为 满量程的30%。再精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各 20uL，分别注入液相色谱仪，2记录色谱图至供试品溶液主成分峰保 留时间的3倍，供试品中如有与对照品溶液色谱图中泼尼松龙峰保留 时间一致的 峰，3按外标法以峰面积计箅，4不得过0.5%;5其他单个杂 质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0. 5倍（0. 5%),6各 杂质峰面积 的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍。7供试品溶液色谱图中任何 小于对照溶液主峰面积0.01倍的 峰可忽略不计。
氢化可的松中其它甾体的检查
• 1、进样或点样溶液浓度太低
98.6%
TLC检查其他甾体特点：
（1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接 近。
氢化可的松
•
碱性四氮唑蓝试液 皮质激素C17-a-醇酮基具有还原性,在强碱 溶液中能将四氮唑蓝定量地还原为甲瓒
取本品加氯仿-甲醇（9 ：1）制成3.0mg/ml作为供试液， 精密量取适量，加氯仿-甲醇（9 ：1）稀释成0.06mg/ml作 为对照液；照薄层色谱法，各取5μl，分别点于同一硅胶G 板上，以 为展开剂，展开后晾干，在105℃干燥10分钟，
放杂质冷斑，点喷，以不碱得性多四于氮3唑个蓝，1试其液颜，色立与即对检照视液，的供主试斑品点溶比液较如，显 不得更深。2
限量% . % %
控制总杂质限量是多少?
2010年版-氢化可的松有关物质
• 【检查】有关物质 取本品，精密称定，用甲醇溶解并稀释制成每l m l 中约含氢化可的松0. 5mg的溶液，作为供试 品溶液；精密量取1ml， 置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻 度，摇匀，作为对照溶液；另取泼 尼松龙对照品，精密称定，加 流动相溶解并定量稀释制成每l m l 中约 含5ug的溶液， 作为 对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对 照溶液20uL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，1使主成分峰高约为 满量程的30%。再精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各 20uL，分别注入液相色谱仪，2记录色谱图至供试品溶液主成分峰保 留时间的3倍，供试品中如有与对照品溶液色谱图中泼尼松龙峰保留 时间一致的 峰，3按外标法以峰面积计箅，4不得过0.5%;5其他单个杂 质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0. 5倍（0. 5%),6各 杂质峰面积 的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍。7供试品溶液色谱图中任何 小于对照溶液主峰面积0.01倍的 峰可忽略不计。
药物中特殊杂质的检查方法
供试品液 = ----------------b 符合规定时 b ＜(a-b); b ＞(a-b)不合格。
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
主要用于药物中无效或低效晶型检查，如甲 苯咪唑中A晶型检查
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
A 晶型
C 晶型
在640cm-1
有强吸收
吸收很弱
盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶G 薄层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛-硫 酸显色，紫外灯下检视物质的分离、分析。 有时也用于检查放射性药物注射液中 的放射化学杂质。
如：苯丙醇中苯丙酮的检查，苯丙醇溶液 测定吸收度比值A247nm/A258nm不得大于0.79。
（五）对光吸收性质的差异
2. 原子吸收分光光度法
是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收 发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待 测元素的含量。 限量检查时：对照品液 = 供试品 + 限量---a
例: 肾上腺素中肾上腺酮的检查
肾上腺素的盐酸溶液 （2mg/ml）在310nm处 的吸光度不得过0.05。 已知酮体在该波长处的 吸收系数为453，计算 出酮体的限量。
（五）对光吸收性质的差异
1. 紫外分光光度法
有的杂质紫外吸收光谱与药物的紫外吸收 光谱重叠，但可以通过控制供试品溶液的吸收 度比值来控制杂质的量。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀：如氯化钠中 钡盐的检查。
（四）杂质与一定试剂反应产生颜色：阿司匹林中 游离水杨酸的测定。
（五）杂质与一定试剂反应产生气体：盐酸乙基吗 啡中铵盐检查。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（六）药物经有机破坏后检查杂质
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
主要用于药物中无效或低效晶型检查，如甲 苯咪唑中A晶型检查
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
A 晶型
C 晶型
在640cm-1
有强吸收
吸收很弱
盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶G 薄层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛-硫 酸显色，紫外灯下检视物质的分离、分析。 有时也用于检查放射性药物注射液中 的放射化学杂质。
如：苯丙醇中苯丙酮的检查，苯丙醇溶液 测定吸收度比值A247nm/A258nm不得大于0.79。
（五）对光吸收性质的差异
2. 原子吸收分光光度法
是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收 发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待 测元素的含量。 限量检查时：对照品液 = 供试品 + 限量---a
例: 肾上腺素中肾上腺酮的检查
肾上腺素的盐酸溶液 （2mg/ml）在310nm处 的吸光度不得过0.05。 已知酮体在该波长处的 吸收系数为453，计算 出酮体的限量。
（五）对光吸收性质的差异
1. 紫外分光光度法
有的杂质紫外吸收光谱与药物的紫外吸收 光谱重叠，但可以通过控制供试品溶液的吸收 度比值来控制杂质的量。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀：如氯化钠中 钡盐的检查。
（四）杂质与一定试剂反应产生颜色：阿司匹林中 游离水杨酸的测定。
（五）杂质与一定试剂反应产生气体：盐酸乙基吗 啡中铵盐检查。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（六）药物经有机破坏后检查杂质
药物中特殊杂质的检查
实验二 药物(yàowù)中特殊杂 质的检查
精品PPT
一、目的要求 1.掌握本实验中药物特殊杂质的来源 (láiyuán)； 2.掌握特殊杂质检查的操作方法。
精品PPT
二、实验(shíyàn)原理
•
特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引
入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、
• 2.H板：玻璃背面先贴上标签（H板），取硅胶 H粉5g，加18毫升CMC-Na，同上法制板，平推 ，勿动！！--制板完让老师(lǎoshī)看板，认可 后方能离开。
精品PPT
精品PPT
（三）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基(ānjī)苯甲酸的 检查
检查 吸取上述两种溶液各10μl（毛细管高度(gāodù)约 2.0cm），分别点于同一含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅 胶H薄层板上。以苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4）为 展开剂，展开后，晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对 二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml制成）喷 雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜 色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
5品30片片0025g片研细用乙醇片研细用乙醇15ml分分次研磨并移入次研磨并移入50ml量瓶中充分振摇用水稀释至刻量瓶中充分振摇用水稀释至刻度摇匀立即滤过精密量取续滤液度摇匀立即滤过精密量取续滤液2ml置置50ml纳纳氏比色管中用水稀释至氏比色管中用水稀释至50ml立即加新制的稀硫酸铁立即加新制的稀硫酸铁铵溶液铵溶液3ml摇匀摇匀20秒钟内如显色与对照液精密秒钟内如显色与对照液精密量取量取001水杨酸标准溶液水杨酸标准溶液45ml加乙醇加乙醇3ml005酒酒石酸溶液石酸溶液1ml用水稀释至用水稀释至50m
原理：
精品PPT
一、目的要求 1.掌握本实验中药物特殊杂质的来源 (láiyuán)； 2.掌握特殊杂质检查的操作方法。
精品PPT
二、实验(shíyàn)原理
•
特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引
入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、
• 2.H板：玻璃背面先贴上标签（H板），取硅胶 H粉5g，加18毫升CMC-Na，同上法制板，平推 ，勿动！！--制板完让老师(lǎoshī)看板，认可 后方能离开。
精品PPT
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（三）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基(ānjī)苯甲酸的 检查
检查 吸取上述两种溶液各10μl（毛细管高度(gāodù)约 2.0cm），分别点于同一含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅 胶H薄层板上。以苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4）为 展开剂，展开后，晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对 二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml制成）喷 雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜 色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
5品30片片0025g片研细用乙醇片研细用乙醇15ml分分次研磨并移入次研磨并移入50ml量瓶中充分振摇用水稀释至刻量瓶中充分振摇用水稀释至刻度摇匀立即滤过精密量取续滤液度摇匀立即滤过精密量取续滤液2ml置置50ml纳纳氏比色管中用水稀释至氏比色管中用水稀释至50ml立即加新制的稀硫酸铁立即加新制的稀硫酸铁铵溶液铵溶液3ml摇匀摇匀20秒钟内如显色与对照液精密秒钟内如显色与对照液精密量取量取001水杨酸标准溶液水杨酸标准溶液45ml加乙醇加乙醇3ml005酒酒石酸溶液石酸溶液1ml用水稀释至用水稀释至50m
原理：
河北科技大学HPLC法进行地塞米松磷酸钠中特殊杂质的检查及含量测定
实验五HPLC法进行地塞米松磷酸钠中特殊杂质的检查及含量测定一．目的要求1.掌握实验中药物特殊杂质的来源和检察原理。
2.掌握高效液相色谱法用于特殊杂质检查及含量测定的方法。
二、实验方法有关物质取本品，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；取地塞米松对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成每1ml中约含1mg的溶液，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液与对照品溶液各1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使地塞米松磷酸钠色谱峰的峰高为满量程的15%～20%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。
供试品溶液色谱图中如有与地塞米松保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，含量不得超过0.5%；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液中地塞米松磷酸钠峰面积的1/2，其他杂质峰面积的和不得大于对照溶液中地塞米松磷酸钠峰面积的2倍。
【含量测定】照高效液相色谱法（附录V D）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以三乙胺溶液（取三乙胺7.5ml，加水至1000ml,用磷酸调节pH值至3.0±0.05）－甲醇－乙腈（55：40：5）为流动相；检测波长为242nm.理论板数按地塞米松磷酸钠峰计算一般为7000，地塞米松磷酸钠与地塞米松的分离度应大于4.4。
测定法取本品适量，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用流动相定量稀释制成每1ml中含40μg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取地塞米松磷酸钠对照品适量，精密称定，同法测定。
按外标法以峰面积计算，即得。
四、注意事项：五、思考题：1.何谓反相高效液相色谱法？其常用的固定相和流动相有哪些？如何选择？2.液相色谱流动相、样品前处理注意事项有哪些？。
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三、盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查
1、杂质来源： 水解产生对氨基苯甲酸，进一步脱羧、氧化成有色杂质， 使注射剂颜色变黄、疗效下降、毒性增加。
NH2 [H2O] NH2 - CO2 NH2 [O] O
COOCH2CH2N(C2H5)2
COOH
O
检查方法 ： TLC法（杂质对照法）
实验原理
1、杂质对照法： 杂质已知且有杂质对照品 对照品：对氨基苯甲酸 供试品：盐酸普鲁卡因
薄层色谱操作要点
薄层板的制备 点样 展开 斑点确定
G板和H板的制备
玻璃板洗净，吹干，待用。 G板：玻璃背面先贴上标签（G板），取硅胶G粉5g，加18毫 升水，向同一个方向研磨混合，去除表面气泡，从中心倒入洁 净玻璃板，研钵棒助涂布均匀(快速)，拍板，转向，再拍板， 平推，勿动！！，晾干，用前烘干活化。 H板：玻璃背面先贴上标签（H板），取硅胶H粉5g，加18毫 升CMC-Na，同上法制板，平推，勿动！！ 制板完让老师看板，认可后方能离开。每人一个G板一个H板
薄层板的制备
点样
展开
斑点确定
1、先放入板，再加展开剂15mL，浸没0.5-1cm，样品点不得浸 入展开剂。 2、薄层板先置于盛有展开剂的色谱缸中饱和3-5min，使得展 开剂蒸汽，缸内大气，薄层达到平衡，避免边缘效应 3、待展开至10cm~15cm，取出，晾干，按规定方法检测。 4、层析缸必须密闭，否则影响分离效果。相邻两组互换层析 缸，实验完毕，展开剂应回收。 展开中 预饱和
实验原理
2010版用HPLC法
水杨酸对照液 阿司匹林
阿司匹林无游离酚羟基，不与Fe3+ 作用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇
色，可检出1μg的游离水杨酸。
+Fe3++H2O
Fe ↓硫酸铁铵
OH
合格
对照液颜色 > 供试液颜色
紫堇色
实验步骤
1、样品前处理 取本品30片（0.025g/片），研细，用乙醇15ml分次研磨，并 移入50ml量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即滤 过，取续滤液。 样品管 对照管 4.50mL0.01%水杨酸标液 50ml 2.00mL续滤液 3mL 乙醇 纳氏 水稀释至50mL 1.00mL酒石酸溶液 比色 3mL硫酸铁铵 水稀释至50mL 管 3mL硫酸铁铵 比较颜色，不得更深（1.5%）
不合格
实验步骤
1. 供试品溶液和对照品溶液的制备 取本品，加氯仿-甲醇（9:1）制成每1ml中含3.0mg的溶液， 作为供试品溶液。精密量取适量，加氯仿-甲醇（9:1）制成每 1ml中含60mg的溶液，作为对照品溶液。 2. 检查 吸取上述两种溶液各5μl （毛细管高度约1.5cm）， 分别 点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（385： 60：30：2）为展开剂，展开后，晾干，在105℃干燥10min， 放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液如显 杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照溶液的主斑点比较， 不得更深。
解褪色。
二、氢化可的松中有关物质的检查 甾体激素中的有关物质： 1、杂质来源 原料、中间体、异构体、降解产物 2、特点 （1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似 本实验中，氢化可的松中“其他 甾体” 的检查采用TLC法（自身稀释 对照法）。 2010版用HPLC法
O HO H
CH2OH OH
H O
H
氢化可的松 天然皮质激素
实验原理
方法：
溶剂溶解 S 供试品溶液
一定量供试品溶液 对照溶液
一定比例稀释
杂质 主药 杂质
供试品溶液所显杂质斑点颜色不 得深于对照溶液的主斑点 四氮唑比色法： 肾上腺 皮质激 素药物 四氮唑盐 OHˉ 紫色斑点
供 试 品 溶 液 对 照 溶 液
本次实验内容
1
阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查
2
氢化可的松中有关物质的检查
3
盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查
(CH
生产工艺：
ONa ONa OH COONa H+ COOH
O
OCOCH O C 3 CH3
3 CO
O
OCOCH O ONa C ONa 3 CH3
COONa COOH H O CO 2+ H 2 加压，
薄层色谱操作要点
薄层板的制备 点样 展开 斑点确定 不要划线， 以免破坏硅 胶表面，毛 细管轻触表 面，不要捅 破硅胶。 2cm
1、点样工具为点样毛细管
2、点样时，宜分次点加，每次 点加后，待其自然干燥。
3、点样基线距底边2.0cm，样点 一般为圆点，直径2mm~4mm， 点间距离可视斑点扩散情况以不 影响检出为宜，一般约为 1.5cm~2.0cm。
实验二：
药物中特殊杂质的检查
药品中的杂质
一般杂质：
自然界中分布较广，在多种药物的生成和贮存过程中容 易引人的杂质，如氯化物，硫酸盐，铁盐，重金属，砷盐等。 特殊杂质：
指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质， 如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素 中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药 品的质量标准中。
注意事项： 1. 在阿司匹林中游离水杨酸的检查中，制备供试品溶液 所用的比色管须经干燥后使用，且供试品须用乙醇溶解 后才可加水稀释至刻度，否则供试品难以溶解。 2. 游离水杨酸检查时，供试品溶液要临用现配，避免阿 司匹林水解造成的误差。
3. 进行水杨酸检查时，应在中性或弱酸性溶液（pH4~6）
中进行。若在强酸性溶液中，生成的紫兰色配合物会分
杂质 主药
合格
薄层板：硅胶H板
展开剂：苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4） 显色剂：对二甲氨基苯甲醛
供 试 品 杂 质 对 照 品
杂质斑点与对照品主斑点比较，不得更深。
2010版用HPLC法
实验步骤
吸取盐酸普鲁卡因供试液和对氨基苯甲酸对照液各10μl （毛细管高度约2.0cm），分别点于同一含有羧甲基纤维素 钠为粘合剂的硅胶H薄层板上。以苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14： 1：1：4）为展开剂，展开后，晾干，用对二甲氨基苯甲醛 溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸 5ml制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质 斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
H2 S
贮藏水解：
ONa OH COONa COOH OH
O
(CH
O4 ,
70~ 75 C
。 CO2 加压，
)2 O
(CH3CO)2O
COOH
O2 ，
[O] H+
COOபைடு நூலகம் [O]
COOH
OH
O
H2 S
O4 ,
1、杂质来源
3 CO
70~ 75 C
)2 O
一、阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查
。
比色法：