高效液相色谱法测定不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量

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高效液相色谱法测定辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质

高效液相色谱法测定辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质
1.范围：
用高效液相色谱法测定辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质的方法及辣度表示方法。

本方法的检出限：辣椒素、二氢辣椒素均为1mg/Kg，线性范围为
1mg/L-150mg/L。

2.试样提取：
在样品中加入甲醇—四氢呋喃混合溶剂25ml，用保鲜膜封口，用针扎几个小孔，然后在60℃浴条件下，使用超声波清洗器提取30min。

用滤纸过滤，收集滤液，然后将滤渣连同滤纸重新加甲醇—四氢呋喃混合溶剂25ml，使用超声波清洗器提取10min，重复两次，将三次过滤收集的滤液合并，用氮吹仪在70℃温度下浓缩至10ml—20ml，然后用甲醇—四氢呋喃混合溶剂定容至50ml，经过滤器(0.45µm微孔过滤膜)过滤后进行色谱分析。

根据样品中辣椒素类物质总量和检测器的灵敏度，必要时可以适当调整稀释倍数。

3.色谱参考条件：
色谱柱：Kromasil C-18 (4.6mm*250mm 5um)
流动相：甲醇：水=65：35
进样量：10 µl
流速：1.0 ml/min
紫外检测波长：280nm
柱温箱温度：30℃
4.结果：
按照色谱条件，进行HPLC分析，用标准物质色谱峰的保留时间定性；根据辣椒素、二氢辣椒素标准曲线及试样中的峰面积定量。

高效液相色谱法测定辣椒制品中的合成辣椒碱

关键词：高效液相色谱法；辣椒制品；合成辣椒碱
中图分类号：Ｔ２７３Ｓ０．文献标识码：Ａ文章编号：１００６—２１（０）３— ２５—０５３２１００２１４
ＤｅｅｍｉａｉｎｏｏｉａｍｉｅｉｈｌｐｏｃｓｂｔｒｎｔｆｎｎｖｏｄｎｃｉｒｄｕｔｙＨＰＬｉＣ
ｔｅｌｅｒｅｕｔｎｗａ＝７８．Ｃ＋２５６（ｈｉａｑａｉｓＹｎｏ１０５１．ｒ＝０９９．９５），ｎｈａｇｒｏｅｏｅｙｗｓ９１８ａｄｔｅｒｎｅｆｒｃｖｒａ．０～９．０．ｏｃｕ９２％Ｃｎｌ—
ｍ呈良好的线性关系，回归方程为Ｙ＝７８．ｃ＋２５６（＝．９５，方法回收率９．０～９．０之Ｌ１０５１．ｒ０９９）１８９２％间。结论：该方法简便、重现性好，可作为辣椒制品中合成辣椒碱的检测方法。
Ｎａｉｇ５００１；２．ＧｕｎｘｉｅＭｏｍｒｃｌｕａｃｎｌｇｓａｃｎｎｎ３０ａｇｉＢａｓｄｅＡｇｉｕｔｒｌＴｅｈｏｏｙＲｅｅｒｈ
ａｄＰｏｔｎＣｎｒ，Ｂｉ３６２ｎｒｉｅｔｍｏｏｅａｅ５３１）ｓ
ＣＩＥＮｉ－ＩＭｎｇ．ｉＤＥＮＧ，ＨＵＡＮＧｕ — ｕｅ＇，ＬＩＰｉ，ＬＩＸｉｏ－ｉｗｅ，ＹｕＨｉｘｎｇＵａｌ

高效液相色谱法测定辣椒制品中的碱性橙和碱性玫瑰精含量

高效液相色谱法测定辣椒制品中的碱性橙和碱性玫瑰精含量杨琳1，陈青俊1，梁晶晶1，王京1，丁献荣2，吴平3(1.浙江公正检验中心有限公司，浙江杭州 310009 ；2.浙江公正检验中心有限公司浙中分公司，浙江义乌 322000；3.杭州娃哈哈集团有限公司，浙江杭州 310009)摘要：辣椒制品中的非食用色素工业染料经甲醇-水(7:3，V /V )超声振荡数次提取，高速离心，采用HPLC 系统用20mmol/L 醋酸铵溶液和甲醇梯度洗脱，采用二极管阵列检测器检测，用外标法峰面积定量。

结果显示：4种工业染料在0.25～20.0μg/mL 范围内的峰面积与质量浓度的线性关系良好，加标回收率为94.4%～101.9%。

该方法简便易行，准确可靠。

关键词：辣椒制品；碱性橙；碱性玫瑰精；高效液相色谱；二极管阵列检测器Determination of Basic Orange and Basic Rhodamine B in Cayenne Pepper by RP-HPLCYANG Lin 1，CHEN Qing-jun 1，LIANG Jing-jing 1，WANG Jing 1，DING Xian-rong 2，WU Ping 3(1. Zhejiang Gongzheng Testing Center Co. Ltd., Hangzhou 310009, China ；2. Zhejiang Gongzheng Testing Center Co. Ltd.,Zhezhong Filiale, Yiwu 322000, China ；3. Hangzhuo Wahaha Group Co. Ltd., Hangzhou 310009, China) Abstract ：An HPLC method for the determination of inedible basic colorants (basic orange and basic rhodamine) in cayenne pepper was established. Samples were extracted with methanol-water (7:3, V /V ) under ultrasonic assistance and the extract was centrifuged. The supernatant was then analyzed by HPLC-DAD with gradient elution (20 mmol/L ammonium acetate and methanol as mobile phase) and quanti ﬁ ed by external standard method. The concentrations of four industrial dyes (basic orange 2, 21 and 22 and basic rhodamine) in the range of 0.25–20.0 μg/mL showed good linearity with peak area. Recovery rates of basic orange 2, 21 and 22 and basic rhodamine in a known sample were in the range of 94.4%–101.9%. The HPLC method was simple and accurate.Key words ：cayenne pepper ；basic orange ；basic rhodamine ；HPLC ；diode array detector (DAD)中图分类号：O657.7 文献标识码：A文章编号：1002-6630(2012)24-0303-04收稿日期：2011-08-15碱性橙是一种偶氮类碱性工业染料，俗名“王金黄”、“块黄”等，主要用于纺织品、皮革制品及木制品的染色[1]；碱性玫瑰精又称罗丹明B 或玫瑰红B ，主要用于纸张和化妆品着色，也用于制色淀和染蚕丝，这两种染料都已经被认定长期食用是可以使人致癌的物质[2]，都被列为食品禁用物质[3]。

高效液相色谱法测定雀辣中辣椒素及类似物的含量

分析检测高效液相色谱法测定雀辣中辣椒素及类似物的含量白铭松，何佳艳，熊彩云，袁　潘，李成功，潘文丽*（祥云县综合检验检测院，云南大理 671000）摘　要：目的：优化探索适合雀辣中辣椒素和二氢辣椒素的含量测定方法，并对雀辣中的辣椒素及二氢辣椒素进行测定，为雀辣资源的开发利用开展基础研究。

方法：通过对不同的提取方法进行优化，得到较优的方法并测定不同地区雀辣中辣椒素及二氢辣椒素的含量。

结果：辣椒素在0.019 2～0.191 8 mg·mL-1线性良好，相关系数大于0.999 9，二氢辣椒素在0.015 7～0.157 5 mg·mL-1线性良好，相关系数为0.999 8；方法回收率为91.06%～101.22%，RSD为0.8%～2.1%。

雀辣中辣椒素含量为（3.190±0.025）～（5.308±0.022）mg·g-1，二氢辣椒素含量为（0.868±0.021）～（1.082±0.018）mg·g-1，普洱雀辣中辣椒素及二氢辣椒素含量高于西双版纳雀辣。

结论：本文建立的方法快速、稳定、准确、节省溶剂，适合雀辣中辣椒素和二氢辣椒素含量的测定。

关键词：雀辣；辣椒素；二氢辣椒素；高效液相色谱Determination of Capsaicin and Its Analogues in QueLa by High Performance Liquid ChromatographyBAI Mingsong, HE Jiayan, XIONG Caiyun, YUAN Pan, LI Chenggong, PAN Wenli*(Xiangyun Inspection and Testing Institute for Comprehensive Control, Dali 671000, China) Abstract: Objective: To optimize and explore a suitable method for determining the content of capsaicin and dihydrocapsaicin in QueLa, and to determine the capsaicin and dihydrocapsaicin in QueLa to provide basic research for the development and utilization of QueLa resources. Method: By optimizing diﬀerent extraction methods, a better method was obtained and the content of capsaicin and dihydrocapsaicin in diﬀerent regions of QueLa was determined. Result: The linearity of capsaicin is good within 0.019 2～0.191 8 mg·mL-1, with a correlation coefficient greater than 0.999 9. The linearity of dihydrocapsaicin is good within 0.015 7～0.157 5 mg·mL-1, and the correlation coefficient was 0.999 8; the recovery rate of the method is 91.06%～101.22%, and the RSD is 0.8%～2.1%. The content of capsaicin in QueLa is (3.190±0.025)～(5.308±0.022) mg·g-1, and the content of dihydrocapsaicin is (0.868±0.021)～(1.082±0.018) mg·g-1. The content of capsaicin and dihydrocapsaicin in Pu’er QueLa is higher than that in Xishuangbanna QueLa. Conclusion: The established method is rapid, stable, accurate, and solvent efficient. It is suitable for the determination of capsaicin and dihydrocapsaicin in QueLa.Keywords: QueLa; capsaicin; dihydrocapsaicin; high performance liquid chromatography雀辣资源主要分布于云南普洱地区、西双版纳地区和德宏地区。

HPLC法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量

ＤｅｅｍｉｔｏｏｐｓｃｎａｔｒｎａｉｎｆＣａａｉｉｎｄｈＤｉｙｄｒａａｃｎｎＧｅｒｌＡｌｌｉｆＣａａｉｉｂｙＨＰＬＣＯｃｐｓｉｉｉｎｅａｋａｏｄｓｏｐｓｃｎ
ＳＩｏｓｅｇＺＬ—ｏｇｒｈｎｚｏｓｉｌｆＣＺｅｇｈｕ４００ｈｎ）Ｈ —ｈｎ，ＵｉｎｅｇｈｕＢｈＺＨｏｐｔＴＭ，ｈｎｚｏ５０ＺＣｉａａｏＡｓａｔｂｔｃ：ＯｂｅｔｅＴｓｂｉｈａＬｔｏｅｅｍｉｅｔｅｔｒｃｐｌｏｓｉｅｔｃｐａｃｎｒｊｃｉｏｅｔｌｎＨＰＣｍｅｈｄｔｄｔｒｎｖａｓｏｈｗｏｐｉｉａｎｔｕｎ — ａｓｉｉｎｃｔ
ｐｒｎｃｐｏｔｔｎｔｉｅｒ／ｌａｏｄｓｏｐｓｉｉ．ｉｉａｃｎｓｉｕｅｇｎｅａａｋｌｎｌｉｆＣａａｃｎＫｅｒｓｅｅａｌｌｏｄｆＣａｓｉｉｙｗｏｄ：ｇｎｒａｋａｉｓｏｐａｃｎ：ｃｐｓｉｉ；ｄｈｄｒｃｐａｃｎ；ＨＰＣ：ｃｎｔｎｔｄｔｒｉａｔｎｌａａｃｎｉｙｏａｓｉｉＬｏｅｅｅｍｎｉｏ
ｍｅｈｄｉｏｖｎｉｎｔｔｅｒｓｔｉｃｕｒｔｎｄｒｌｂｅｎｄｃｎｅｏｄｔｒｉｅｔｅｃｎｔｎｔｏｏｔｏｓｃｎｅｅ，ｈｅｕｌｓａｃａｅａｅｉｌ，ａａｂｅｕｓｄｔｅｅｍｎｏｅｆｔａｈｗ

HPLC法检测辣椒不同部位中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量

Ａｂｔａｔｈｕｎｎｓｆｅｐｒｓｏｔｂｔａｓｉｉａｄｉｏｐｕｄｅｉｄｆｍｃｐａｉ（ａｓｉ— ｓｃ：Ｔｅｒｉｔｔｏｐｅｉｃｎｒｕｄｔｃｐａｎｎｓｃｍｏｎｓｒｅｏａｓｉｎｃｐａｉｒｂｇａｅｐｉｅｏｃｔｄｖｒｃｃ
ｎｉｓ．Ｃｐａｃｎｉｙｒｃｐａｃａｅｔｅｓｏｇｓｂｒｉｇｅｅｔａｄａｅｍｒａ０ｏｅｔａｃｍｏ）ａｓｉｉａｄｄｈｄｏａｓｉｎｈｖｔｎｅｔｕｎｆｃｓｎｒｏｅｔｎ９％ｆｈｔｌｏ — ｄｎｉｈｒｎｆｈｔｏ
ｄｆｒｎａｔｆｐｐｅｓｂｉｅｅｔｐｒｏｅｐｒｙＨＰＬｆｓＣ
ＺＨＯＵＬ，ＬＡｎｈ，ＣＮＧＹｕｎｘｎｉＩＮＹｕ・ｅＨＥａ－ｉ，ＺＮＧＱｉｇｑｎＨＡｎ－ｉｇ
（ｎｉｅｎｎｅｅｒｈＣｎｅｆａｒｌｉｎｅｅＰｏｉｃ，Ｈｎａ５２０ＥｇｅｉｇＲｓａｃｅｔｏｔａＰｇｔｎＨｂｉｒｖｅａｄｎ０７５）ｎｒＮｕｍｅｉｎ
ｔｒａ０Ｃａｄｔｅｄｔｃｉｎｗａｅｅｇｈｗｓ２ｎｕｅＷ３￣ｎｈｅｅｔｖｌｎｔａ８ｍ．Ｔｈｔｏｓｃｎｅｉｎ，ｔｅｒｓｌｉａｃｒｔ，ａｄｉｃｎｓｏ１ｅｍｅｈｄｉｏｖｎｅｔｈｅｕｔｓｃｕａｅｎｔａｂｓｄｔｅｅｉｅｔｅｃｎｅｔｆａｓｉｉｎｉｙｒｃｐａｃｎｉｅｐｒＦｎｌ，ｗｔｉｅｈｓｍｅｈｄｔｅｅ－ｅｕｅｏｄｔｒｎｈｏｔｎｐａｃｎａｄｄｈｄｏａｓｉｉｎｐｐｅ．ｉａｙｍｏｃｌｅｕｉｚｄｔｉｔｏｄｔｒｌｏｍｉｅｃｐａｃｎａｄｄｈｄｏａｓｉｉｏｔｎｉｅｅｔｒｉｐｒｆｉｅｅｔｅｐｒ．Ｔｈｉｈｓｏｔｎｆａｓｉｉｎａｓｉｉｎｉｙｒｃｐａｃｎｃｎｅｔｎｄｆｒｎｕｔａｔｏｆｒｎｐｅｓｉｆｆｓｄｆｐｅｈｇｅｔｎｅｔｐａｃｎｃｏｃ

高效液相色谱法测定辣椒制品中的辣椒素类物质

高效液相色谱法测定辣椒制品中的辣椒素类物质孙胜枚【摘要】该研究采用了高效液相色谱法对辣椒制品中的辣椒素类物质进行检测,并对其提取条件和检测方法进行了研究.以乙醇∶水=70∶30 (V∶V)作为提取液,采用直接萃取法提取样品中的辣椒素和二氢辣椒素,以0.3％磷酸二氢钾溶液-乙腈(62∶38,V∶ V)为流动相,检测波长230 nm,Macherey-Nagel Nucleosil120-5 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离.结果表明,辣椒素和二氢辣椒素在20～100 μg/mL质量浓度范围线性关系良好(R12=0.999 8,R22=0.999 9),检出限为0.001 g/kg,加标回收率分别为93％～104％和86％～103％,相对标准偏差RSD ＜5％.该方法操作简单、快速,具有良好的准确性和精密度,可有效排除香辛料物质的杂峰干扰,适合各类辣椒制品中辣椒素类物质的检测.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)003【总页数】4页(P148-151)【关键词】高效液相色谱;辣椒素类物质;测定【作者】孙胜枚【作者单位】广东省江门市李锦记(新会)食品有限公司,广东江门529100【正文语种】中文【中图分类】TS262.5日常所食用的辣椒制品中的辣味主要来源于辣椒当中的辣椒素类物质。

辣椒素类物质主要包含有以下5种：辣椒素（capsaicin，CAP）、二氢辣椒素（dihydrocapsaicin，DCAP）、高辣椒素（homocapsaicin）、高二氢辣椒素（homodihydrocapsaicin）、降二氢辣椒素（nordihydrocapsaicin）［1-2］。

其中辣椒类制品辣感的主要来源是辣椒素和二氢辣椒素，占辣椒素类物质总含量90%以上［3］，因此这两种辣椒素类物质也是辣味水平研究的主要对象［4-5］。

目前对于辣椒素类物质含量的检测主要方法有：比色法、薄层色谱法、紫外分光光度法和高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法［6-9］。

高效液相色谱法测定荜茇止痛酊中胡椒碱的含量

高效液相色谱法测定荜茇止痛酊中胡椒碱的含量
文章概述
荜茇止痛酊是一种用于缓解疼痛症状的药物，其中的主要成分是胡椒碱。

本文
将介绍一种高效液相色谱法来测定荜茇止痛酊中胡椒碱的含量。

胡椒碱的特点
胡椒碱是唯一一种被广泛回收利用的辣味成分，其对人体具有多种益处。

但是，高剂量下胡椒碱会对胃黏膜造成不利影响，因此需要控制其在荜茇止痛酊中的含量。

高效液相色谱法
高效液相色谱法是目前使用最广泛的分离分析技术之一。

使用高效液相色谱法时，样品通过液相柱，在经过一段时间的梯度洗脱后进入检测器进行检测。

在这个过程中，几乎可以分离所有药物成分，并准确地测定其含量。

本文的研究内容
本文旨在通过使用高效液相色谱法测定荜茇止痛酊中胡椒碱的含量。

样品的制
备和实验操作将详细介绍，同时该方法的精密度和准确度也将进行评估。

步骤
1.将10mg的荜茇止痛酊样品完全溶于1ml甲醇中；
2.完全打散，通过毛细管柱过滤，将样品取出；
3.准备高效液相色谱仪，选取高效液相色谱柱进行检测；
4.输入检测参数后，进行样品检测；
5.重复多次实验，得出平均值。

结果评估
本实验通过多次重复实验发现，高效液相色谱法可以快速、准确地测定荜茇止
痛酊中胡椒碱的含量。

因此，本方法具有较高的精密度和准确度，适用于药品质量检测和疾病治疗的研究。

结论
本文进一步证明了高效液相色谱法作为一种高精度化学分析方法的优越性，并
且证实了高效液相色谱法的可靠性和有效性。

因此，在荜茇止痛酊的生产和质量检测中，我们可以采用该方法，确保胡椒碱含量的质量和安全。

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*基金项目：广东省2015年建设中医药强省科研课题（20152070）①广东省珠海市斗门区侨立中医院（广东省珠海市第二中医院）广东　珠海　519125通信作者：郑创钦高效液相色谱法测定不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量*郑创钦① 【摘要】　目的：探讨不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量的测定方法。

方法：采用高效液相色谱法，色谱柱选择Hanbon Sci.& Tech.Lichrospher C18（250.0×4.6 mm，5 μm）进行分离，流动相为甲醇：0.1%磷酸水溶液（65%~90%，0~45 min）梯度洗脱，检测波长为280 nm，柱温为28 ℃。

结果：辣椒碱的线性回归方程为：Y =11.918×106X-3.925×103（r =0.9997），辣椒碱在1.0007~4.0261 μg 范围内呈良好的线性关系，辣椒碱的平均回收率为99.93%，RSD=1.32%。

结论：高效液相色谱法用于测定辣椒中辣椒碱的含量，成分分离效果好，系统稳定性高，操作简单，同时适用于不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量测定，不同品种不同成熟度的辣椒中辣椒碱的含量具有差异性。

【关键词】　高效液相色谱法；　不同品种；　辣椒；　辣椒碱 Determination of The Content of Capsaicin in Different Kinds of Capsicum by High Performance Liquid Chromatography/ZHENG Chuang-qin.//Medical Innovation of China，2017，14（04）：019-022 【Abstract】　Objective：To study the method for the determination of capsaicin in different varieties of capsicum.Method：High performance liquid chromatography was used，and the separation was carried out on a Hanbon Sci. & Tech. Lichrospher C18 （250.0×4.6 mm，5 m）.The mobile phase consisted of methanol：0.1% phosphoric acid aqueous solution （65%-90%，0-45 min） gradient elution， detection wavelength was 280 nm， and the detection wavelength was 28 ℃.Result：The linear regression equation of capsaicin was Y =11.918×106X-3.925×103（r =0.9997），and the capsaicin showed a good linear relationship in the range of 1.0007-4.0261 μg.The average recovery of capsaicin was 99.93%，and RSD=1.32%.Conclusion：High performance liquid chromatography （RP-HPLC） can be used to determine the content of capsaicin in capsicum， and it has good separation effect，high system stability and simple operation.It can be applied to the determination of capsaicin in different varieties of capsicum.The content of capsaicin in different varieties of different maturity is different. 【Key words】　High performance liquid chromatography；　Different varieties；　Pepper；　Capsaicin First-author ’s address：Qiaoli Traditional Chinese Medicine Hospital of Doumen District in Zhuhai City（Second Traditional Chinese Medicine Hospital in Zhuhai City），Zhuhai 519125，China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.04.006 辣椒（Capsicum frutescence L）又称辣角、辣子、秦椒、番椒，属于茄科辣椒属植物[1]，起源于南美洲的秘鲁和中美洲的墨西哥一带，在大约十六世纪末期辣椒传入中国，被作为药物的调味品使用[2]。

辣椒传入我国之后其分布地区较广，品种多，应用范围广，具有一定的药用价值[3]。

《中国药典》2010版（一部）将其作为新增品种进行规定，并通过了高效液相色谱法测定辣椒碱成分的含量以控制辣椒的质量。

有研究表明，辣椒产生辣味的主要成分为辣椒碱，辣椒果实中的主要药用成分也是辣椒碱，辣椒碱类化合物具有镇痛、消炎、杀菌的作用，已经被应用于治疗风湿、跌打损伤、镇痛、糖尿病性神经痛以及银屑病等疾病中[4-6]。

本研究为了评价不同品种辣椒药材的质量，以辣椒中的有效成分辣椒碱为指标成分，采用高效液相色谱法对不同品种辣椒药材中的成分含量进行了测定，为辣椒药材的应用和质量控制提供参考，同时为从植物资源中提取辣椒碱类物质提供检测依据[7]。

1　仪器与试药1.1　实验仪器　Agilent HP 1200型高效液相色谱仪器（其中包括四元泵，自动进样器，DAD 检测系统，均属于美国Agilent公司生产）[8]，美国梅特勒BP-211D电子分析天平（精密度为0.0001 g），KQ5400型超声波清洗仪器（昆山市超声仪器有限公司生产），DHG-9275B型电热恒温鼓风干燥箱（北京生物科技有限公司），SB-2200EYE型旋转蒸发仪器（上海爱郎仪器有限公司）。

1.2　试药　试验中的不同辣椒药材购于本市农科院，并经相关专家鉴定为辣椒正品，将药材晒干、粉碎，置于干燥容器内备用[9]。

对照品辣椒碱（中国药品生物制品检定所，批号：111666-201005），甲醇溶液，乙腈，磷酸溶液均为色谱纯（北京化工科技有限公司），95%的乙醇溶液为药用级别，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果2.1　供试品溶液的配制　取同一批次的辣椒药材约30 g，粉成粗粉后取12 g精密称定后，置于500 mL的圆底烧瓶中[10]，加入药材体积9倍量的95%乙醇溶液，摇匀后放置于60 ℃恒温水浴锅上减压回流提取2.5 h后过滤，残渣称重后加入2倍量的95%乙醇溶液按照上述操作方式提取1次，将2次滤液合并后加入95%乙醇溶液定溶至216 mL，过0.45 μm的微孔滤膜，置于容量瓶-20 ℃冰箱中，储存，备用。

2.2　对照品溶液的配制　精密称取辣椒碱对照品12.57 mg，置于25 mL的容量瓶中，加入95%的乙醇溶液定溶至刻度，摇匀后将不足的液体补充至刻度，得到0.503 mg/mL的辣椒碱对照品溶液[11]，置于-20 ℃冰箱中储存备用。

2.3　色谱条件的选择　采用高效液相色谱法，色谱柱选择Hanbon Sci.& Tech.Lichrospher C18（250.0×4.6 mm，5 μm）进行分离[12]，流动相为甲醇：0.1%磷酸水溶液（65%~90%，0~45 min）梯度洗脱，检测波长为280 nm，柱温为28 ℃，进样量为20 μL。

分别取2.2项下的对照品溶液和2.1项下的供试品溶液各20 μL，按照上述色谱条件，分别连续进样3次，辣椒碱和供试品样品中相邻色谱峰的分离度>1.5，以辣椒碱峰计算理论塔板数>4000。

记录色谱图，见图1~2。

2.4　线性关系考察　分别精密吸取2.2项下的对照品溶液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中[13]，用95%乙醇溶液稀释并定溶至刻度后得到不同浓度的辣椒碱对照品溶液。

分别吸取不同浓度的对照溶液各20 μL，按照2.3项下的色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标，对照品溶液浓度作为横坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程为：Y=11.918×106X-3.925×103（r=0.9997），辣椒碱在1.0007~4.0261 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

图1　辣椒对照品色谱图注：1：辣椒碱图2　辣椒供试品色谱图注：1：辣椒碱2.5　精密度考察　取2.2项下的辣椒碱对照品溶液，按照2.3项下的色谱条件，每次进样20 μL，连续进样5次，记录色谱峰面积并按照线性回归方程计算，结果表明辣椒碱对照品平均色谱峰面积为135697，其RSD值为1.23%，表明所采用的高效液相色谱仪器精密度良好。

2.6　稳定性考察　取同一批次的供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12、16、20 h内按照2.3项下的色谱条件分别进样20 μL，结果表明辣椒碱的平均峰面积为406 289，RSD值为1.02%，表明辣椒供试品溶液在20 h内稳定性较好。

2.7　重复性试验　取统一品种的辣椒样品6份，按照2.1项下的供试品溶液配制方法制备成待测样品溶液，按照2.3项下的色谱条件分别进样20 μL，测定辣椒碱含量[14]，结果表明辣椒碱的平均含量为1.326 mg/g，RSD值为0.32%，表明高效液相检测方法的重复性良好。

2.8　加样回收率试验　取已知含量的同一批次样品6份，精密称定，分别精密加入已知浓度的辣椒碱对照品溶液（辣椒碱含量为0.503 mg/mL）1.0、1.0、2.0、2.0、4.0、4.0 mL，按照2.1项下的供试品溶液的制备方法配制成溶液后[15]，按照2.3项下的色谱条件分别进样20 μL，按照线性回归方程进行分析，辣椒碱的加样平均回收率为99.93%，RSD 值为1.32%，见表1。

表1　加样回收率试验结果表（n=6）取样量（g）样品含量（mg）加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均加样回收率（%）RSD 值（%）5.9897 1.33950.5030 1.841099.9299.931.326.0025 1.34120.5030 1.843099.935.9944 1.3399 1.0060 2.343899.916.0326 1.3445 1.0060 2.349799.976.0127 1.3427 2.0120 3.351299.906.00281.34022.01203.351099.962.9　样品含量测定　取不同省份的辣椒药材样品，按照2.1项下的制备溶液方法制备成供试品溶液，取已知浓度含量的辣椒碱对照品溶液与供试品溶液各20 μL [16]，注入高效液相色谱仪器中按照2.3项下的色谱条件进行分析，按照线性关系方程计算不同省份辣椒样品中辣椒碱的含量。