实验技术手册(细胞免疫方面)
免疫学实验
免疫学实验免疫学实验是一项非常重要的研究领域，它涉及到研究人体免疫系统的机制和功能，并通过实验手段来深入了解和探索免疫系统对疾病的防御和治疗作用。
在本文中，我们将介绍免疫学实验的一些基本概念和常见的实验方法，以及它们在研究和治疗免疫相关疾病中的应用。
首先，我们来了解一下免疫学实验中常用的一些基本概念。
免疫学实验主要涉及到免疫细胞、抗体和抗原的相互作用。
免疫细胞是人体免疫系统的重要组成部分，包括巨噬细胞、淋巴细胞等。
抗体是由免疫细胞产生的一种特殊蛋白质，它可以识别和结合到体内外入侵的病原体，激活免疫系统进行防御。
而抗原则是一种能够引起免疫系统反应的物质，可以是细菌、病毒、真菌等。
在免疫学实验中，常见的实验方法包括免疫组化、流式细胞术、ELISA等。
免疫组化是一种用于检测组织或细胞中某一种特定蛋白质的方法，它可以通过使用特异性抗体来标记和检测目标蛋白质的位置和表达水平。
流式细胞术则是一种通过流式细胞仪进行细胞表面标记和分析的方法，它可以对不同类型的免疫细胞进行鉴定和分类。
ELISA是一种用于检测和分析抗体和抗原相互作用的方法，它基于酶标记免疫吸附技术，可以测定目标物质的浓度和活性水平。
除了这些基本方法，免疫学实验还可以进一步应用于研究和治疗免疫相关疾病。
免疫学实验可以帮助我们深入了解免疫系统在疾病中的作用机制，例如自身免疫疾病、感染性疾病等。
通过实验手段，我们可以研究免疫细胞的活性和功能，并探索潜在的治疗策略。
例如，在免疫细胞治疗中，我们可以通过实验手段提取、修饰和培养免疫细胞，并将其用于治疗癌症、自身免疫疾病等疾病。
此外，免疫学实验还有助于研发和评估新型的免疫药物和疫苗。
通过实验方法，我们可以研究药物在免疫系统中的作用机制和疗效，并评估其用于治疗疾病的潜力。
免疫学实验在疫苗研发中也发挥着重要的作用，通过评估免疫细胞对疫苗的反应和效果，我们可以确定疫苗的安全性和有效性。
总结起来，免疫学实验是一项非常重要且广泛应用的研究领域。
学习手册-细胞干重法
学习手册《情境：细胞干重法》引导文-单元设计-实训指导书子情境：引导文细胞干重法阅读材料材料一、浊度法浊度法：可用来测量菌浓度·其原理是发酵罐中的发酵液按照一定的流速进入流通式比色皿中，用500-600nm的波长检测发酵液的光密度·然后发酵液再流回发酵罐中·所测的OD值与细胞浓度成正比。
浊度法:可用来测量菌浓度.其原理是发酵罐中的发酵液按照一定的流速进入流通式比色皿中,用500-600nm的波长检测发酵液的光密度.然后发酵液再流回发酵罐中.所测的OD值与细胞浓度成正比.也常用于免疫测定，基本原理是：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。
当反应液中保持抗体过量时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。
免疫浊度测定法按照仪器设计的不同可以分为两种，即比浊仪测定（turbidimetermeasure）和散射比浊仪测定（nephelomitermeasure）。
比浊仪测定是测量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰减，其读数以吸光度A表示。
A什反映了入射光与透射光的比率（A=2－log10T，T代表浊度百分比）。
散射比浊仪测定是测量入射光遇到质点（复合物）后呈一定角度散射的光量，该散射光经放大后以散射值表示。
完成以下信息！浊度法的原理是。
材料二、微生物群体生长规律微生物细胞数量的增加称为微生物群体生长。
由于微生物个体微小的特殊性，难以针对单个微生物细胞或个体的生长繁殖的研究进行，故除特定的研究目的外，一般所言的微生物生长是指群体生长。
如将少量细菌纯培养物接种入新鲜的液体培养基，在适宜的条件下培养，定期取样测定单位体积培养基中的菌体（细胞）数，可发现开始时群体生长缓慢，后逐渐加快，进入一个生长速率相对稳定的高速生长阶段，随着培养时间的延长，生长达到一定阶段后，生长速率又表现为逐渐降低的趋势，随后出现一个细胞数目相对稳定的阶段，最后转入细胞衰老死亡期。
免疫学实验技术教学设计
04
实验技术在教学中的意义
01
提高学生的实践能力
0 2 培 养 学 生 的科学素养 和创新能力
03
帮助学生理解免疫学的基本原理和 概念
提高学生的实验操作技能和实验设 计能力
04
05
培养学生的团队合作精神和沟通能 力
实验技术发展现状与趋势
免疫学实验技术在医学、生物学等 领域的应用越来越广泛
实验技术的发展与创新，推动了免 疫学研究的深入
教师姓名：李明 教学经验：10年 教学成果：发表多篇论文，获得多项教学奖项 教学方法：注重实践操作，注重学生动手能力的培养 教学特色：注重实验技术的创新和应用，注重培养学生的创新思维和实践能力
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免疫学实验技术教学设计
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目录
01 02 03 04 05 06
免疫学实验技术概述
免疫学实验技术教学目标与内容
免疫学实验技术教学方法与手段
免疫学实验技术教学评价与反馈
免疫学实验技术教学资源与平台 免疫学实验技术教学师资队伍与建
设
01
免疫学实验技术概述
实验技术定义与分类
实验技术的自动化、智能化趋势明 显，提高了实验效率和准确性
实验技术的标准化、规范化，提高 了实验结果的可靠性和可比性
实验技术的绿色化、环保化趋势， 减少了对环境的污染和破坏
02
免疫学实验的基本原理和方法
添加 标题
掌握免疫学实验的数据分析和结果 解释
01
免疫学实验技术：研究免疫反应和 免疫机制的实验方法
03
细胞免疫学实验技术：研究细胞免 疫反应的实验方法，如细胞培养、 细胞融合等
05
免疫检验实践报告模板
免疫检验实践报告模板实验目的和背景:免疫检验是一种重要的生命科学实验技术，常用于血液和组织样本中特定分子（抗原或抗体）的定量或定性检测。
本实验旨在学习和实践免疫检验技术，掌握基本的操作步骤和数据分析方法。
实验材料和仪器:1. 抗原样本（如蛋白质或病毒）2. 目标抗体或抗体标记物（如酶标记抗体）3. 酶标仪或荧光仪4. 显色底物或荧光底物5. 酶标板或微孔板6. 相关试剂和缓冲液实验步骤:1. 准备工作：将所需的试剂和材料准备好，按照实验方案设置实验组和对照组。
2. 样本处理：首先，对待测样本进行处理，如离心、稀释等，以获得适宜的浓度。
3. 样本孔的涂覆：将酶标板（或微孔板）中每个孔涂覆特定的抗原或样本。
4. 孵育：将酶标板置于恒温孵育箱或温床中进行适当时间的孵育，以促进抗原和抗体的结合。
5. 洗涤：将酶标板反复洗涤，以去除未结合的物质。
6. 抗体结合：加入特定的抗体或抗体标记物，使其与已结合的抗原发生特异性结合。
7. 洗涤：再次反复洗涤，以去除未结合的抗体或抗体标记物。
8. 底物反应：加入适当的底物，如显色剂或荧光底物，通过酶催化或荧光发射反应来检测特定信号。
9. 反应停止：加入适当的反应停止剂，终止底物反应，停止信号生成。
10. 读取数据：使用酶标仪或荧光仪测量孔的吸光度或荧光强度，获得相应的实验结果数据。
11. 数据分析：根据实验设计和对照组的结果，进行数据统计和分析，计算样本中目标分子的浓度或定性结果。
实验结果和讨论:根据实验所得的数据，对每组样本进行统计分析和比较，计算目标分子的浓度或定性结果。
分析结果可根据需求和目的，进行图表展示或其他形式的数据呈现。
根据数据分析结果，进一步讨论实验的准确性、可靠性和实用性，并与实验设计和预期结果进行比较和讨论，探讨可能的影响因素和改进措施。
结论:根据本次免疫检验实验的结果和讨论，得出对目标分子浓度或定性结果的结论。
根据实验的目的和背景，提出进一步的研究方向或实验优化建议。
蛋白免疫印迹杂交(WesternBlot)技术手册
蛋白免疫印迹杂交〔Western Blot〕技术手册A蛋白样本提取制备蛋白样品制备是Western Blotting 的第一步，更是打算WB 成败的关键步骤，总体原则和留意事项：1：尽可能提取完全或降低样本简洁度只集中于提取目的蛋白〔通过承受不同提取方法或选择不同的试剂盒产品〕2：保持蛋白的处于溶解状态〔通过裂解液的PH 盐浓度外表活性剂、复原剂等的选择〕3：提取过程防止蛋白降解、聚拢、沉淀、修饰等，〔低温操作，参与适宜的蛋白酶和磷酸酶抑制剂〕4：尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子〔通过参与核酸酶或实行不同提取策略〕5：样品分装，长期于-80℃中保存，避开反复冻融。
A-1细胞或组织裂解A-1-1细胞裂解裂解液Lysis buffer 或商品化蛋白抽提试剂盒的选择*目的蛋白分布定位推举裂解液Lysis buffe 推举试剂盒全细胞NP-40 or RIPA〔附录1〕全蛋白抽提试剂盒细胞质〔可溶蛋白〕Tris-HCl〔附录1〕胞浆蛋白和核蛋白抽提试剂盒线粒体蛋白提取试剂盒细胞质〔细胞骨架等不溶蛋白〕Tris-Triton〔附录1〕蛋白分级抽提试剂盒细胞质〔磷酸化蛋白〕磷酸化蛋白抽提试剂盒细胞膜NP-40 or RIPA〔附录1〕膜蛋白抽提试剂盒蛋白分级抽提试剂盒细胞核RIPA〔附录1〕核蛋白抽提试剂盒线粒体RIPA〔附录1〕线粒体蛋白抽提试剂盒亚细胞定位蛋白抽提试剂盒细胞裂解操作方法：1培育的细胞经预冷的PBS 漂洗2 次，裂解液中参与蛋白酶和磷酸酶抑制剂〔种类与量见本节2〕2吸净PBS，参与预冷的裂解液，〔(1 ml per 107cells/100mm dish/150cm2flask; 0.5ml per 5x106cells/60mm dish/75cm2flask).3用细胞刮子刮取贴壁细胞，将细胞及裂解液温存地转移至预冷的微量离心管中，44℃摇动30 min54℃离心12,000 rpm，20 min〔根椐细胞种类不同调整离心力〕6轻轻吸取上清，转移至预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀.A-1-2组织裂解1 用灭菌的预冷的工具分别目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解，2 将组织块放在圆底的微量离心管或Eppendorf 管中，参与液氮冻结组织于冰上均质研磨，长期可保存于-80°C，3每约5 mg 参与约300 μl 预冷的裂解液lysis buffer，冰浴匀浆后置于4℃摇动2 小时，裂解液体积与组织样本量有适当比例，〔最终的蛋白浓度至少到达0.1 mg/ml, 抱负的蛋白浓度应为1-5 mg/ml).44℃离心12,000 rpm，20 min，轻轻吸取上清，转移至预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀,A-2蛋白酶和磷酸酶抑制剂推举购商品化蛋白酶和磷酸酶抑制剂复合试剂盒或COOKTAIL。
血液科实验室操作手册
血液科实验室操作手册第一章：概述1. 引言：随着医学技术的不断发展，血液科实验室在疾病诊断和治疗中起着重要的作用。
本手册旨在为血液科实验室的操作人员提供准确、规范的操作指引，以确保实验室工作的高效性和结果的可靠性。
2. 实验室设备概述：血液科实验室通常配备了一系列仪器设备，如血液细胞分析仪、血液凝固分析仪、血型鉴定仪等。
操作人员应熟悉这些设备的使用方法和维护要求，确保设备的正常运行。
3. 安全操作：在进行实验室操作时，操作人员应时刻注意安全。
包括佩戴个人防护装备、正确处理实验室废弃物、遵循实验室安全规程等。
第二章：血液标本采集1. 采血点选择：选择合适的采血点对于获取准确的血液标本至关重要。
在常见的采血点中，比如肘部静脉、手背静脉等，操作人员应根据具体情况选择合适的采血点。
2. 采血方法：采血时，操作人员应注意选择适当的针头规格、采血器等，并掌握正确的采血技术，以避免出现血栓形成、血液溢出等问题。
3. 血液标本处理：采集到的血液标本需要进行适当的处理，如标本分装、保存等。
操作人员应标注标本的相关信息，并按照实验要求妥善保存。
第三章：血液细胞分析1. 血细胞计数：进行血细胞计数时，操作人员应按照仪器的要求，准确调整相关参数，并根据标本的特点选择适当的稀释倍数。
同时，注意消毒仪器和容器以避免交叉感染。
2. 血细胞分类：对于不同种类的血细胞，操作人员需根据其形态和染色特点进行准确的分类和计数。
熟练掌握相关技巧，提高分类准确性。
3. 血细胞形态学检查：在进行血细胞形态学检查时，操作人员应注意准备良好的血液涂片，熟悉各种染色方法和显微镜的使用，以正确鉴定异常细胞及相关病理变化。
第四章：血凝分析1. 凝血酶时间测定：在进行凝血酶时间测定时，操作人员应准确选择适当的试剂和稀释液，并掌握正确的操作流程，以确保测定结果的准确性。
2. 凝血因子测定：对于凝血因子的测定，操作人员需按照试剂说明书的要求，调配好标准品和控制品，并合理安排各步骤的执行顺序，避免因处理不当导致误差。
免疫组化实验报告
免疫组化实验报告一、实验目的本实验的主要目的是了解免疫组化技术的基本原理、方法和应用。
并在实验中掌握标本制备、抗体与抗原的反应、染色等技术。
通过本次实验，还可以深入了解体内各种细胞和组织中存在的不同蛋白质的分布、表达和定位情况，对于发现疾病发生机制、诊断疾病以及分子生物学和细胞生物学研究方向的选定等都有着重要的启示和指导意义。
二、实验原理免疫组化是一种基于抗原抗体反应的化学染色技术，该技术主要通过标记特定的抗体，标记可以是荧光、放射性或酶等，再与被检测的抗原结合，形成物质团，以便对其在组织切片或细胞中的分布、表达和定位情况进行观察和研究。
其原理如下：1.抗原抗体反应抗体是一种高度特异性的蛋白质，它通过与与其特异性结合的抗原组成免疫复合物来介导免疫反应，具有非常高的结合亲和力。
2.荧光标记技术荧光标记技术是免疫组织化学中常用的标记技术之一，其主要特点是具有快速、高度敏感和高特异性等优点，目前广泛应用于免疫荧光显微镜的检测中。
三、实验材料与方法1.材料（1）黏片刀（2）盛装杯（3）离心机（4）玻璃切片（5）氯仿（6）牛血清白蛋白（7）丙酮（8）PBS（9）荧光标记的二抗（10）DAPI（11）溶解铁（12）抗体2.方法（1）标本制备将含有细胞和组织的标本制成薄片，经过常规组织学和细胞学处理，制成玻璃切片。
然后，将其离心获取细胞和组织，摆放在混合溶液中振荡。
将抗体稀释至适宜浓度，与标本混合，进行PFA定制，随后进行冷却缓存，制备成样品。
将标本与荧光二抗混合，适当搅拌，使其充分反应。
然后，在暗室中进行荧光显微镜检测，观察标本发出的光强。
DAPI可添加至样品中，使得核糖体更容易用眼观察。
四、实验结果通过本次实验得到的结果如下。
制作标本时，需要仔细阅读操作手册，遵循严格的操作步骤，操作清洁、细致、稳定。
制作好的标本应该是样品清晰、明亮、无噪点的。
提取到的抗原抗体在能够有效反应的基础上，需要尽可能的达到最佳的配比，以充分发挥其效果。
检验实习手册
襄樊职业技术学院学生实习手册（医学检验技术专业）系（院）：班级：实习医院：姓名：年月日～年月日填写说明1、此手册主要用于考核实习生在各科（室）实习中的表现和取得的成绩，由科（室）主任、带教老师和校内指导老师负责评定填写。
2、实习科（室）是指直接指导学生毕业实习的教学组织。
由实习轮转的科（室）分别组织考核。
3、个人小结要据实填写，如操作技术方面可小结实习的项目、操作次数及掌握程度等方面的情况。
4、操作考核由各科室组织，常用技术项目由各科室抽取2-3项考核，但不重复。
5、日常测评及技能考核着重考核实习生基本知识的掌握情况，实际工作能力情况，服务态度、创新意识及优良作风的养成情况等。
6、实习全部结束，汇总实习生各科室出科成绩，请科教科（医教科）对每一位实习生进行全面综合考评并盖章。
襄阳职业技术学院医学院学生顶岗实习安全告知书为增强我院顶岗实习学生安全防范意识和法制观念，提高学生自我保护能力，确保顶岗实习任务顺利完成，现将有关安全事项告知如下：一、遵守国家法律法规，增强法制观念，遵守实习单位各项安全规章制度。
树立安全第一的意识，加强安全知识学习，不断提高自身安全意识和防范能力，确保人身和财物安全。
二、学生在实习期间须严格执行岗位安全规定，杜绝各种事故发生。
特别是在使用实习单位设备或进行其他技术操作时，须经指导老师同意并在其指导下，严格按照操作规程进行，防止实习安全事故发生。
三、严格请假手续，擅离实习岗位或请假超假不归，情节严重者将被勒令回校，学校将按有关规定取消实习资格、给予纪律处分直至取消毕业资格，并通报其家长。
四、注意防火、防盗，在实习期间，不用热得快、电炉、酒精炉和蜡烛；不在宿舍内烧饭、烧菜及使用煤气；远离易燃、易爆或有毒物品；不将数额较大的现金和贵重物品存放宿舍，宿舍无人要随时锁门，不轻信陌生人，不将手机、银行卡、家庭电话号码等个人信息及人物品等随意告诉或交给不熟悉的人，避免受到诈骗或遭受意外损失。
强烈安利 科研大牛推荐的100本生物医学方面的书籍，你确定不学习一下？
生物信息学算法导论（美）N.C.琼斯
SCI论文写作指导
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古人云：“书中自有颜如玉，书中自有黄金屋”，书可是我们获取知识的最佳渠道。今天 小喵给大家带来的是，一百本科研大牛推荐过的生物医学方面的书籍，小喵觉得无论是 医学生还是医生，都可以来学习学习哒！
分子生物学实验技术
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临床实验室检验手册内容
临床实验室检验手册内容本手册旨在提供临床实验室检验的相关信息和指导，以确保检验过程准确可靠，为病患的健康提供可靠的诊断和医疗服务。
遵循本手册的指导，既可以保证检验的质量，也能够提高实验室的工作效率。
一、实验室安全和质控要求1. 实验室安全确保实验室的安全是检验工作的首要任务。
在实验室内，应该遵守各种安全操作规程，包括但不限于佩戴个人防护装备、正确使用试剂和仪器设备、遵循废物处理流程等。
2. 质量控制质量控制是保证检验结果精确度和可靠性的基础。
为了保证质量控制的有效性，实验室需要建立质量控制体系、定期核查仪器设备，以及参与并评估外部质量评估计划。
二、标本采集和处理1. 标本采集关于标本采集的要求需根据具体的检验项目而定，例如，血液标本采集过程中需要遵循无菌技术，保证采集工具的干净和采集部位的消毒等。
2. 标本保存和运输标本采集后，应根据不同检验项目的要求，正确保存和运输标本。
有些标本需要进行冷藏，有些则需要离心和分离，因此需要在标本容器上正确标注相关信息和保存要求。
三、实验室常规检验项目要求实验室常规检验项目包括但不限于血液学、生化学、免疫学等，下面列举一些常见检验项目的要求：1. 血液学血液学检验项目要求有血细胞计数、血红蛋白测定、血小板计数等。
在进行这些检验项目时，需要严格按照标准操作程序，如正确选用试剂、准确计量、正确使用设备等。
2. 生化学生化学检验项目包括血糖、肝功能、肾功能等指标的测定。
在进行这些检验项目时，需要准确区分标本类型、合理选择试剂和仪器、严格按照操作程序进行分析，以确保结果准确可靠。
3. 免疫学免疫学检验项目常包括抗体检测、病毒感染等。
在进行这些检验时，需要严格控制环境条件，准确选择试剂和具备良好的仪器设备。
四、特殊检验项目要求除了常规检验项目外，还有一些特殊检验项目需求，下面列举一些例子：1. 分子生物学分子生物学检验项目包括核酸提取、PCR等。
在进行这些检验时，需要严密操作，准确选用试剂和反应体系，以确保结果的准确性。
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单克隆抗体的制备1975年，Köhler和Milstein创立了杂交瘤技术制备单克隆抗体，单克隆抗体具有特异性高，灵敏度高，重复性好，可供应量大，检测时间短以及能够查出混合物中的少量成分等优点。
1试验材料1.1试验动物和细胞雌性6～8周龄BALB/c小鼠SP2/0骨髓瘤细胞1.2主要实验试剂HRP标记羊抗小鼠IgG、福氏完全佐剂（FCA）、福氏不完全佐剂（FIA）、聚乙二醇（PEG）、二甲基亚砜（DMSO）、降植烷、TMB底物、HAT(50×)、HT(50×)、三抗溶液（100×）小鼠单抗Ig类和亚类鉴定用ELISA试剂盒均为SIGMA公司；DMEM粉、特级胎牛血清（FBS）均为GIBCO公司；牛血清白蛋白（BSA）1.3主要实验仪器和耗材CO2细胞培养箱（Thermo和上海新苗医疗器械制造有限公司WJ-160B-Ⅲ）酶联检测仪（BIO-RAD Model 680）血球计数板（上海求精生化试剂仪器有限公司）pH计（Sartorius赛多利斯科学仪器）APL高压灭菌锅（CL-32L）生物安全柜(ESCO北京五州东方科技发展有限公司)三恒电泳仪（JY600C）数显恒温磁力搅拌器（78HW-1，杭州仪表电机有限公司）电子分析天平（Sartorius赛多利斯科学仪器）分光光度计（WPA Biowav eⅡ+）进口液氮罐（Thermo）Protein A柱恒温水浴锅（HH-2金坛市科兴仪器厂）微型台式真空泵（GL-80ZB型，海门市）电热恒温培养箱（DHP-9032上海天恒医疗器械）低速离心机 (L-550长沙湘仪离心机仪器有限公司)高速冷冻离心机（SIGMA 2-16PK）倒置显微镜（Nikon TS100）超低温冰箱(Thermo)96孔酶标板（）96孔、24孔细胞培养板、T25培养瓶、35mm培养皿、60mm培养皿、100mm培养皿、冻存管0.22μm过滤器(PALL)2主要试剂配制2.1常规试剂配制PBS（或PB）（0.02mol/L，pH7.4）：A液（0.2 mol/L Na2HPO4）：Na2HPO4·12H2O 71.64g,加蒸馏水至1000ml；B液（0.2 mol/L NaH2PO4）：NaH2PO4·2H2O 3.12g,加蒸馏水至1000ml；取A液81ml加B液19ml混合，再用生理盐水（或蒸馏水）做10倍稀释即成。
饱和硫酸铵溶液（pH7.4）：称取80~85g A·R级(NH4)2SO4，以50~80℃蒸馏水100ml溶解，搅拌20min，趁热过滤。
冷却后以浓氨水（15N NH4OH）调pH至7.4。
配好的饱和硫酸铵，瓶底应有结晶析出。
取饱和硫酸铵40ml，加蒸馏水60ml稀释即成40%饱和硫酸铵。
2.2细胞融合试剂配制DMEM不完全培养基：DMEM粉1袋，3.7g NaHCO3，用1mol/L HCl调pH至7.2-7.3，加灭菌超纯水定容至1000ml。
0.22μm滤膜过滤除菌至1L试剂瓶中，4℃保存。
胎牛血清（FBS）的灭活：56℃，灭活30min，分装100ml或50ml一瓶，-20℃冻存。
10%FBS完全培养基：FBS 10ml，DMEM不完全培养基90ml，三抗溶液1ml，4℃保存。
20%FBS完全培养基：FBS 20ml，DMEM不完全培养基80ml，三抗溶液1ml，4℃保存。
HAT培养基：20%FBS培养基98ml，HAT（50×）贮存液2ml。
HT培养基：20%FBS培养基98ml，HT（50×）贮存液2ml。
冻存液：完全培养基:DMSO=9.2:0.8，即含8%DMSO，与培养过程中使用的血清保持一致，需新鲜配制。
2.3ELISA试剂配制(1) PBS 10×stock solution40g Na2HPO4·12H2O5g KH2PO481g NaCl1.0mL 20% NaN3 (20g NaN3溶解在100mL蒸馏水中)用蒸馏水溶解，定容到1L。
(2) Coating buffer1.59g Na2CO32.93g NaHCO31.0mL 20% NaN3用800mL蒸馏水溶解，调pH到9.6，定容到1L。
(3) Blocking buffer将0.5gBSA 溶解在100mL Coating buffer 中（即0.5%BSA溶液）。
(4) Tween buffer100mL PBS 10×stock solution5g BSA0.5mL Tween 201.0mL 20% NaN3用800mL蒸馏水溶解，定容到1L。
(5) Tween wash buffer45g NaCl2.5mL Tween 20用足量蒸馏水溶解，定容到5L。
(6) Enzyme substrate buffer97mL Diethanolamine（乙二醇胺）700mL 蒸馏水1.0mL 20% NaN3用大约100mL 1M浓盐酸调pH到9.8，然后加101mg MgCl2·H2O（相当于181.4mgMgCl2·12H2O），最后定容到1L。
(7) Substrate（现用现配）将1个NPP药片溶解在5mL Enzyme substrate buffer中，黑暗条件下保存。
（8）OPD底物缓冲液：0.2M Na2HPO4 25.7ml0.1M 柠檬酸 24.3ml加蒸馏水 50ml，pH 5.0（9）OPD底物（现配先用）OPD工作液配制：10ml底物缓冲液中加入5mg OPD，完全混匀后加H2O2(浓度30%)4µl/10ml即可，100µl/孔，492 nm的波长读数。
2.4SDS-PAGE试剂配制30%聚丙烯酰胺贮存液：29g丙烯酰胺，1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺，加蒸馏水至100ml，充分溶解后过滤，调pH7.0，4℃棕色瓶保存备用。
分离胶缓冲液（1.5mol/L Tris-HCl，pH8.8）：18.17g Tris碱，加蒸馏水约80ml，用浓盐酸调pH至8.8，加蒸馏水定容至100ml。
浓缩胶缓冲液（1.0mol/L Tris-HCl，pH6.8）：12.11g Tris碱，加蒸馏水约80ml，用浓盐酸调pH至6.8，加蒸馏水定容至100ml。
10%（w/v）SDS溶液：10g SDS，加蒸馏水定容至100ml。
10%（w/v）过硫酸铵：1g过硫酸铵，加10ml蒸馏水溶解，300μl/支分装-20℃冻存。
2×上样缓冲液：4%（w/v）SDS，2%（w/v）β-巯基乙醇，20%（v/v）甘油，0.2%（w/v）溴酚蓝，溶于0.1mol/L Tris-HCl（pH6.8）中。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：15.1gTris碱，72g甘氨酸，5g SDS，溶于1000ml 蒸馏水中。
考马斯亮蓝染色液：0.25g考马斯亮蓝R-250溶解于100ml甲醇、水、冰乙酸（9:9:2）混合物中，过滤除去未容物。
脱色液：甲醇:水:冰乙酸=1:7:2的混合物。
3试验方法单克隆抗体制备技术路线如图1-1。
3.1动物免疫根据常用免疫学实验技术，采用搅拌混合法，将100μg/ml的400μl抗原溶液与等体积的400μl佐剂充分混合，最终形成“油包水”的乳化状态。
初次免疫：用FCA乳化后，每只鼠打4针（腋下腹股沟淋巴结丰富处）每针0.2 ml，即免疫抗原剂量为每只40μg；3周后第二次免疫：用FIA乳化，剂量针数同上；3周后第三次免疫：不加佐剂直接腹腔注射，剂量同上。
三免后10d分别尾静脉采血，采用ELISA间接法测其效价，未达到效价要求的继续按三免方式每隔两周免疫一次，直至效价达到1：105。
融合前3d加强免疫：50μg OV A抗原量，腹腔注射，3d后取脾融合。
图1-1单克隆抗体制备技术路线图3.2小鼠血清效价的测定3.2.1包被抗原和酶标二抗的最适浓度以高纯度的抗原包被酶标板，包被浓度分别为5μg/ml、10μg/ml、50μg/ml，阳性对照取抗原蛋白免疫后小鼠血清作1:100、1:1000和1:10000稀释，阴性对照取未免疫的小鼠血清作1:100稀释，空白对照采用样品稀释液，HRP标记羊抗小鼠IgG分别稀释成1:1000、1:2500、1:5000、1:7500和1:10000。
检测结果中以空白对照值相对最小、阴性值与空白值之差小于0.1、以及阴阳性差别相对最大的包被抗原浓度和酶标二抗抗体稀释度为最适条件。
3.2.2小鼠血清效价的检测采用间接ELISA法测定小鼠血清效价。
小鼠尾静脉采血0.1ml，37℃放半小时后，在4℃过夜，4℃ 5000r/min离心10min，收集血清，用间接ELISA法检测血清效价，同时设阴性和空白对照。
间接ELISA法程序如下：1）包被：用包被液稀释OV A抗原，使浓度达到10μg/ml，以100μl/孔包被酶标板，置4℃过夜。
2）洗板：弃去酶标板孔内液体，用PBST洗涤三次，每次30min，拍干。
3）封闭：每孔加100μl封闭液封闭游离结合位点，37℃湿盒温育1h，洗板同上。
4）加待测样品：用样品稀释液适当稀释待检血清，阴性对照为同批正常鼠血清（100倍稀释），空白对照为样品稀释液，每孔加100μl，37℃湿盒温育1h，洗板同上。
5）加酶标二抗：将HRP标记羊抗小鼠IgG按1:5000稀释，每孔加100μl，需新鲜配制，37℃湿盒温育1h，用PBST洗涤6次，拍干。
6）显色：各孔加TMB底物液100μl，室温避光反应10min。
7）终止：各孔加50μl终止液终止反应。
8）读数：用酶联检测仪在450 nm波长处测定OD450值。
3.3杂交瘤细胞株的建立3.3.1饲养细胞的制备取未免疫的BALB/c小鼠眼动脉采血后拉颈处死，分离血清作为抗体检测时的阴性对照血清，-20℃冻存备用。
将小鼠尸体浸泡于75%酒清中5min，无菌条件下剪开腹部皮肤后撕开暴露出腹膜，在腹膜开一小口，用DMEM不完全培养基约10ml反复冲洗腹腔并收集巨噬细胞，放入50ml离心管，1000r/min离心10min，弃上清，用HAT培养基重悬细胞并计数，调整浓度在2×105/ ml左右。
将含腹腔巨噬细胞的培养液加入到4块96孔板内，每孔100μl（约两滴）。
放入37℃ 5%CO2培养箱内培养，24h后融合使用。
3.3.2SP2/0骨髓瘤细胞悬液的制备在融合前一周复苏SP2/0骨髓瘤细胞并扩大培养，骨髓瘤细胞生长快通常以1:10传代，使用10%FBS完全培养基培养，调整好细胞状态。
融合前12h需要换液一次，使大多数细胞在融合时处于对数生长期，细胞浑圆透亮、圆亮、形态均一，排列整齐，成半致密分布。