弯曲菌属与螺杆菌属
第十一章 弯曲菌属和螺杆菌属
采用C-13同位素呼吸试验检测的方法，患者只需要向特定 的一次性专用呼吸检测卡中轻吹一口气，就能检查出引起 胃肠病的病因“幽门螺杆菌”在患者体内的感染数量。通 过口服C-13尿素胶囊，进入胃部后，如果胃部存在幽门螺 杆菌，则此菌就会分解尿素酶水解尿素，尿素被水解后形 成CO₂（二氧化碳）随血液进入肺部并以气体排出，然后 检测患者呼出的气体中有没有被标记的C-13，如果有的话， 代表存在幽门螺杆菌。但需要注意的是，幽门螺杆菌正常 人体内都有，但是超过100dpm便易引起癌变。而且具有 传染性，是世界卫生组织指定的一类致癌源。
形小杆菌 • 暗视野或相差显微镜：投镖样或螺旋样运动
核酸检测
PCR方法检测粪便中弯曲菌核酸
（四）分离培养
• 关键：选择性培养基和孵育条件 • 常用培养基：改良的Skirrow’s 培养基、Campy-BAP等 • 培养条件：5%O2、10%CO2及85%N2 • 温度和时间：
空肠和大肠弯曲菌最适温度为42℃，一般72h后观察菌落； 胎儿弯曲菌最适温度是37℃，一般培养72h~7d观察菌落。 故临床标本需分别置于37℃和42℃中培养，以防漏检。 • 弯曲菌的菌落特征: 菌落细小，粉红灰色、灰白或黄灰色、轻微黏液样， 有些菌落沿接种线有拖尾样外观
• 弯曲菌能引起动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾 病。对人致病的有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等。 可根据生长温度、生化反应结果进行鉴定
• 螺杆菌属有20余种，其中幽门螺杆菌是引起胃部疾病的重要 病原体，可以产生大量高活性脲酶。通过快速测定脲酶的活 性或代谢产物可以帮助诊断幽门螺杆菌感染
第十一章 弯曲菌属检验 螺杆菌属检验
南昌大学第二附属医院 张黎明
第一节 弯曲菌属
一、分类
11第十一章 弯曲菌属检验、螺杆菌属检验 (1)
第十一章弯曲菌属检验、螺杆菌属检验一、名词解释1.Helicobacter pylori二、选择题【A1型题】1.弯曲菌属中引起腹泻的常见病原菌是A、空肠弯曲菌B、大肠弯曲菌C、胎儿弯曲菌D、粘膜弯曲菌E、猪肠弯曲菌2.大多数的弯曲菌生长时的最佳气体环境是A、5%氧气、10%二氧化碳及85%氮气B、普通大气C、20%氧气、10%二氧化碳及70%氮气D、10%二氧化碳E、5%氧气、20%二氧化碳及75%氮气3.主要引起肠外感染的细菌是A、空肠弯曲菌B、大肠弯曲菌C、胎儿弯曲菌D、粘膜弯曲菌E、猪肠弯曲菌4.与吉兰-巴雷综合症有关的细菌是A、空肠弯曲菌B、大肠弯曲菌C、胎儿弯曲菌D、粘膜弯曲菌E、猪肠弯曲菌5.空肠/大肠弯曲菌的最适生长温度是A、4℃B、25℃C、37℃D、42℃E、50℃6.可用于幽门螺杆菌快速诊断的方法是A、脲酶试验B、糖类发酵试验C、氧化酶试验D、DNA酶试验E、触酶试验7. 关于幽门螺杆菌的形态特征，错误的是A、菌体细长弯曲呈螺形、S形或海鸥形B、革兰染色阴性C、菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛D、在固体培养基上生长时，除典型的形态外，有时可出现杆状或圆球状E、有芽胞位于次极端8.关于幽门螺杆菌的培养特性，错误的是A、微需氧B、相对湿度在98%以上为宜C、营养要求较高D、生长缓慢E、最适生长温度为25℃9.关于幽门螺杆菌的生化反应特性，错误的是A、不能利用糖类B、产生的脲酶相当于普通变形杆菌的20～70倍C、对酸敏感D、氧化酶阴性E、生理浓度的胆盐可抑制幽门螺杆菌生长10.关于弯曲菌的生物学特性，错误的是A、革兰阴性，菌体弯曲B、两端单鞭毛或一端单鞭毛C、对热敏感D、全部对头孢噻吩耐药E、37℃均能生长【B型题】11～14题：A、4℃生长B、头孢噻吩耐药C、奈啶酸耐药D、马尿酸盐水解试验阳性E、脲酶阳性11.胎儿弯曲菌12.空肠弯曲菌13.空肠弯曲菌空肠亚种14.幽门螺杆菌【X型题】15.实验室为了分离弯曲菌，应至少同时放置几个温度条件下培养，才能不漏检A、4℃B、25℃C、37℃D、42℃E、56℃16. 幽门螺杆菌感染可引起以下哪些疾病A、胃炎B、胃癌C、消化性溃疡D、腹泻E、肝炎17.空肠弯曲菌下列哪些试验是阳性A、氧化酶试验B、马尿酸盐水解试验C、醋酸吲哚水解试验D、血浆凝固酶试验E、糖发酵试验三、问答题1.临床检查幽门螺杆菌感染有哪些手段？。
第16章 弯曲菌属与螺杆菌属
第十六章弯曲菌属与螺杆菌属一、选择题（一）、A1型题（标准型）1.引起牛的感染性不育的是A.胎儿弯曲菌胎儿亚种B.胎儿弯曲菌性病亚种C.空肠弯曲菌D.简明弯曲菌E.海鸥弯曲菌2.25℃生长,42℃不生长的是A.胎儿弯曲菌B.大肠弯曲菌C.猪肠弯曲菌D.空肠弯曲菌E.简明弯曲菌3.HP定植的最佳部位是A.胃体B.胃窦C.十二指肠D.喷门E.幽门4.诊断HP的无创伤性检查方法是A.快速脲酶试验B.分离培养C.碳标记尿素呼吸试验D.病理组织活检E.直接镜检5.可鉴别大肠弯曲菌与胎儿弯曲菌的是A.生长温度差异B.革兰染色镜检C.营养要求不同D.菌落特征E.生长所需气体环境的不同6.微需氧菌的培养条件为A.3%O2,17%CO2,80%N2B.5%O2,10%CO2,85%N2C.10%O2,15%CO2,75%N2D.15%O2,5%CO2,80%N2E.10%O2,5%CO2,85%N27.与胃癌密切相关的是A.嗜肺军团菌B.空肠弯曲菌C.恶臭假单胞菌D.幽门螺杆菌E.流感嗜血杆菌8.弯曲菌属中引起腹泻的常见病原菌是A.胎儿弯曲菌B.大肠弯曲菌C.简明弯曲菌D.海鸥弯曲菌E.空肠弯曲菌9.马尿酸水解试验阳性的是A.胎儿弯曲菌胎儿亚种B.胎儿弯曲菌性病亚种C.痰液弯曲菌痰液亚种D.空肠弯曲菌空肠亚种E.空肠弯曲菌多依尔亚种10.在25℃,42℃都能生长的是A.胎儿弯曲菌B.猪肠弯曲菌C.空肠弯曲菌D.黏膜弯曲菌E.直线弯曲菌11.HP与空肠弯曲菌的鉴别可用A.快速脲酶试验B.氧化酶试验C.触酶试验D.γ-谷氨酰转肽酶试验E.精氨酸胺肽酶试验(二)、A1 型题(否定型)1.HP的生物学性状不包括A.微需氧菌B.生长缓慢C.营养要求较高D.对温度要求较高E.生化反应活跃2.HP的快速诊断方法不包括的是A.分离培养B.血清学试验C.快速脲酶试验D.直接镜检E.碳标记呼吸试验3.HP的生化鉴定试验错误的是A.快速脲酶试验阳性B.氧化酶阳性C.触酶阴性D.硝还阴性E.马尿酸水解试验阴性（三）、B1型题（配伍题）问题1～3A.CAMP 试验B.Ascoli试验C.霍乱红试验D.Elek平板毒力试验E.快速脲酶试验1.可用于HP快速诊断的是2.炭疽芽孢杆菌的初步鉴定试验为3.可用于弧菌属细菌初步鉴定的是二、填空题1.与HP毒力密切相关的两种物质是__________和___________。
第八章 螺形菌
其致病因素与肠毒素、内毒素、细胞毒素、 侵袭力有关 感染后能产生特异性血清抗体
螺杆菌属
（Helicobacter）
最适温度：37℃ 不能生长：42 ℃，25 ℃
幽门螺杆菌
（H.pylori，HP）
与萎缩性胃炎、胃、十二指肠溃疡和胃癌 等疾病相关 HP感染非常普遍，平均世界人口的50％被 感染 1982年，由澳大利亚学者巴里•马歇尔 (Barry J. Marshall)和罗宾•沃伦(J. Robin Warren)首次发现 2005年度诺贝尔医学奖
微生物学检查法
防治原则
加强水源管理；培养良好个人卫生习惯 疫苗预防
O1群霍乱弧菌死菌苗 口服疫苗
治疗
及时补充液体和电解质 抗生素的使用
副溶血性弧菌
根据菌体O抗原不同，现已有13个血清群 嗜盐（halophilic），培养以含3.5%～8% NaCl为 宜；神奈川现象（Kanagawa phenomenon,KP） 主要引起食物中毒 传播途径：烹饪不当的海产品、盐腌制品或生熟 不分所传播 潜伏期5~72小时，可从自限性腹泻至中度霍乱样 病症 治疗可用抗菌药物 严重病例需输液和补充电解质
霍乱弧菌
（V. cholerae）
烈性传染病霍乱的病原体 O1群霍乱弧菌(V.cholerae O1)古典生物型 ： 1817~1923，第1－6次世界霍乱大流行 O1群霍乱弧菌El Tor生物型 ： 1961~，第7次世界霍乱大流行 O139血清群霍乱弧菌(V.cholerae O139)，又称 孟加拉型霍乱弧菌（V.cholerae Bengal）： 1992.10，有可能成为引起第8次世界霍乱大流 行的新菌株
（Ｖ．parahemolyticus）
弯曲菌属
07.螺形菌
第二节 副溶血性弧菌
副溶血性弧菌是一种嗜盐性细菌，存在 于近海岸的海水和鱼、贝类海产品中，具有 致病性的菌株能引起人类食物中毒，是我国 沿海地区最常见的一种食物中毒
1、G－ 菌，常呈弧状、杆状、丝状等多 形性，菌体一端有单鞭毛，营养要求不高， 故在外界可长期生存。本菌特点嗜盐，在含 3.5%-4.5%NaCl的培养基中最易生长，在无 盐蛋白胨水中生长很差，甚至不生长。生长 的pH范围是7.0-9.5，最适pH为7.7
2、绝大多数致病性副溶血性弧菌能产
生溶血毒素使人或家兔的红细胞溶解。其溶
血能力与该菌的致病力呈平行关系，而大多
数非致病性菌株则无此毒素。该毒素也具有
肠道毒性
3、副溶血性弧菌引起的食物中毒 经海产品及盐淹渍后，经2-26h潜伏期后
发病 主要症状是腹痛、腹泻，呕吐及发热，粪便为水样 或糊状，少数有血水样便或粘液血便。多发于夏秋季， 病程较短，一般恢复较快
90%以上。
幽门螺杆菌与萎缩性胃炎、胃、十二指肠溃疡和胃癌等
疾病相关。
一、生物学特性
形态结构 G-,细长弯曲呈螺形。一 端或两端有多根带鞘鞭毛， 运动活泼有动力。鞭毛在定 居中起锚住作用。
培养特性
1. HP为微需氧菌，最适温度为37℃
2. HP对湿度(85%以上)要求较高，营养要求较高
需含血液才能生长，常用血琼脂培养基，经
72h才长出菌落
3. HP的菌落形态为圆形孤立的小菌落，无色半 透明呈露滴状
生化反应
• HP生化反应不活跃，不能利用糖类。
• HP具有大量高活力的胞外脲酶，故脲酶活性的
测定可作为HP的快速诊断方法。
• 还能产生氧化酶、触酶、碱性磷酸酶、α-谷
氨酰转肽酶、亮氨酸胺肽酶和DNA酶等。
微生物学检验弯曲菌属和幽门螺杆菌及检验PPT课件
• 专性需氧 • 营养要求不高 • 氧化酶：＋ • O/F：O • Mac生长：＋ • 产生水溶性色素
2021/3/12
铜绿假单胞菌－－形态染色
• 革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单 或丛鞭毛
2021/3/12
铜绿假单胞菌－－培养特性
• 专性需氧、营养要求不高 • 最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长 • 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素，
Campy-BAP） • 两种类型菌落：扁平湿润边缘不整齐，
沿穿刺线扩散生长；圆形、突起、湿润 、黏液样外观
2021/3/12
生化反应
• 氧化酶阳性 • 触酶阳性 • 不分解和不发酵糖 • 不分解尿素
2021/3/12
临床意义
• 传播方式：经口感染 • 致病物质：产生肠毒素、细胞毒素、内
毒素等致病物质 • 空肠弯曲菌可引起急性肠炎、格林巴利
标本
分离培养 （血平板、麦毛染色
2021/3/12
氧化酶
O/F 硝酸盐还原
KIA斜面底层不变色 其他生化反应
测验1
• 关于铜绿假单胞菌，错误的是 A 革兰阴性杆菌 B 氧化酶－、触酶－ C 硝酸盐还原－ D 产生水溶性蓝绿色素 E 菌落有金属光泽
2021/3/12
可疑菌落（性状、色素）
初步鉴定 最后鉴定
色素鉴定 生化反应 42℃生长 分型
O/F：O 枸櫞酸盐利用＋ 精氨酸双水解＋ 乙酰胺酶＋ 明胶液化＋
铜绿假单胞菌－－检验方法
• 显微镜检查：标本直接涂片革兰染色镜 检；鞭毛染色镜检
• 培养：标本接种血平板、Mac平板分离 培养，血标本先增菌，再转种
2021/3/12
2021/3/12
弯曲菌与螺杆菌
诺贝尔生理学和医学奖
1983年Marshall和Warren首先用微需氧技 术从慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃粘膜 分离出弯曲状的细菌，并证明该细菌感染 胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡， 获得了2005年诺贝尔生理学和医学奖
一、分类
• 最初因形态、分离培养方法与弯曲菌属细菌相似， 又仅从胃标本中分离到，被称作胃弯曲菌样细菌
• 目前已有补体结合试验、胶乳凝集试验及ELISA 等，而以ELISA应用最为广泛，现有商品化的 ELISA、胶乳凝集试验试剂盒
• 用于检测患者血清中HP的菌体抗体或脲酶抗体
(六) 13C或14C标记尿素呼吸试 验
• 基本方法是患者禁食一夜，进食用13C或 14C标记的尿素， HP产生的脲酶分解尿素 释放带有同位素的CO2 ，因此可测定患者 呼气中释放带有同位素的CO2量，如CO2 含量超过标准，提示有HP存在。
• 该方法敏感性与特异性均很好， 只是需要 特殊的同位素测定仪。
小结
微氧环境， 营养要求较高。
弯曲菌：动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染 等疾病。 对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲 菌等。
幽门螺杆菌：引起胃炎的病原体，可以产生大量脲 酶。通过快速测定脲酶的活性或代谢产物可以临 床诊断
• 由于此菌在胃窦部多见，且形态、培养及某些生化 特性与弯曲菌属相似， DNA G+Gmol%也在弯曲菌 属范围内，故命名为幽门弯曲菌(campylobacter pylori)
• 1989年Goodwin等根据该菌的超微结构、形态、菌 体脂肪酸组成、生长特征和酶的活力、 16S rRNA 序列等，提出该菌不应归于弯曲菌属，后称为幽门 螺杆菌(Helicobacter pylori, HP)
[医学微生物学]弧菌属 螺杆菌属 厌氧性细菌
![[医学微生物学]弧菌属 螺杆菌属 厌氧性细菌](https://img.taocdn.com/s3/m/259696ca9e31433238689321.png)
教学目第弧的菌11与属章要求
(一）掌握霍乱弧菌生物学特性、致病物质 和所致疾病；掌握霍乱肠毒素及其作用机制； 副溶血性弧菌所致疾病。 （二）熟悉微生物学检查方法及防治原则。
弧菌属（Vibrio）
一大群菌体短小，弯曲成弧形的G-
第一节 霍乱弧菌（Vibrio cholerae）
第二节 副溶血性弧菌(V. parahemolyticus)
Vibrio cholerae 二、致病性与免疫性
（三）免疫性
感染霍乱弧菌后，机体可获得牢固免疫力。 SIgA起主要作用。
Vibrio cholerae
三、微生物学检查法
1.标本
污染水、食物和粪便，病人肛试子。
2.直接镜检
悬滴法观察细菌呈穿梭样运动；涂片 可见G－弧菌，鱼群状排列。
3.分离培养
碱性蛋白胨水或选择培养基TCBS增菌。
90%：十二指肠溃疡；50-80%胃溃疡 传染源：人 传播途径：粪-口途径
Helicobacter pylori 二、致病性与免疫性
幽门螺杆菌的感染可刺激机体产生IgM、 IgG和IgA型抗体，但是否对机体有保护作 用尚不清楚。
Helicobacter pylori
一、生物学特性
（一）形态与染色 ★
G－，弧型或逗点状，单鞭毛； 液体中，运动非常活泼，呈穿梭样； 涂片中，排列整齐，呈鱼群状。
Vibrio cholerae
一、生物学特性
（二）培养特性 ★
耐碱不耐酸，在pH8.8-9.0的碱性蛋白胨水、碱 性琼脂平板上生长良好。 TCBS培养基（thiosulfate-citrate-bile-sucrose, TCBS） （三）抵抗力
*1979-1981年，Warren和Marshall首次在胃活检 组织中发现并分离培养出Hp。
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二、临床意义
HP螺杆菌与萎缩性胃炎，胃、十二指肠溃疡和胃癌
等疾病相关： 鞭毛有助于HP与胃粘膜上皮细胞接触； 具有高活性胞外脲酶分解尿素，有助于细菌定植； 细胞毒素相关蛋白和空胞毒素；
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、三、形态及培养特性
革兰阴性，螺形、S形或海鸥形； 菌体一端或两端有多根鞭毛，运动活泼； 微需氧菌，在5%O2、10%CO2、85%N2的环境中 生长良好。
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心内膜炎等；
4
三、形态及培养特性
革兰阴性，菌体弯曲呈逗 点、弧形、S形、螺旋形 或海鸥展翅形； 运动活泼，呈投镖样或螺 旋样前进。
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微需氧菌； 最佳气体环境为含5%氧气、10%二氧化碳及85%氮气； 营养要求高； 含血Skirrow培养基； 在同一培养基上出现两种菌落； 灰白、湿润、扁平边缘不整的蔓延生长菌落及半透明、 圆形、凸起、有光泽的小菌落。
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营养要求较高； 常用的培养基有哥伦比亚血琼脂、心脑浸液血琼 脂、布氏菌血培养基等； 生长缓慢，需经3-5天才长出菌落：
圆形孤立的小菌落，无色半透明呈露滴状， 血平板上有轻度溶血； 沿接种线扩散生长，融合成片，扁平， 无色半透明。
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四、种属鉴定
形态和染色性 培养和菌落特征 37℃生长 氧化酶和触酶均阳性 脲酶强阳性 对萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感等
第十四章 弯曲菌属与螺杆菌属
弯曲菌属 Campylobacter
一 分类 二 临床意义 三 形态和培养特征 四 种属鉴定
2
一、分类
1984年伯杰手册将其分为5个种，近年来发现了 许多新种和亚种。 如空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等。
3
二、临床意义
经口摄入是本菌最主要的传播方式； 腹泻是空肠弯曲菌感染最常见的临床表现； 胎儿弯曲菌主要引起肠外感染，引起菌血症、
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四、种属鉴定
形态学检查 氧化酶阳性 生长温度 (25℃、37℃、42℃)试验
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菌种鉴定
奈啶酸、头孢噻吩敏感试验 马尿酸盐水解试验 醋酸吲哚水解试验
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螺杆菌属 Helicobacter
一 分类 二 临床意义 三 形态和培养特征 四 种属鉴定
9
一、分类
20余种
与人类疾病相关的主要是幽门螺杆菌(H. pylori)；