芦丁的提取
新试验一-芦丁的提取、分离与鉴定
实验一 芦丁的提取、精制与鉴定一、实验目的与要求l 、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法；2、掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷，苷元和糖部分的鉴定方法。
R=-glu-rha 芦丁 R=H 槲皮素芦丁溶解度：冷水1：8000 热水1：200冷乙醇1：300 热乙醇1：30难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。
槲皮素溶解度：冷乙醇1：650 热乙醇1：60可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中。
二、实验原理本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质，用热水提取和精制；芸香苷属于苷类化合物，可被稀酸水解成槲皮素（苷元），葡萄糖和鼠李糖。
芦丁和槲皮素通过化学反应，色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。
三、实验内容（一）提取分离和纯化l 、芦丁的提取：2、精制（重结晶）：3、芦丁的水解：OO OHOH OROH HO流程图如下：槐米（20g ）研碎，于500ml 烧杯中，加350，250ml 水煮沸15min,10min棉花过滤150ml ，1%H 2SO 4直火加热水解30min放置 1-1.5h ，抽滤精品芦丁（水浴浓缩至2ml ）(二)鉴定l 、化学检识取芦丁和槲皮素少量，置2支试管中分别加乙醇8ml 使溶解(1)盐酸—镁粉反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加浓盐酸5滴，再加少量镁粉，观察颜色变化。
(2)Molish 反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加10%α—萘酚0.5ml 摇匀，倾斜试管，沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml ，静置，观察二层溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。
(3)FeCL 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯化铁乙醇液几滴，观察颜色变化。
(4) AlCl 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯化铝乙醇液几滴，先置可见光下观察后，置紫外灯下观察颜色变化。
芦丁制备与精制的原理
芦丁制备与精制的原理芦丁是一种天然活性成分，广泛存在于苦橙、金丝小橘、温州莲等柑橘属植物的果实和叶片中。
它具有较强的抗氧化、抗炎、抗缺血/再灌注损伤、抗肿瘤等药理活性，被广泛应用于药物、食品和化妆品等领域。
芦丁的制备与精制原理主要包括提取和分离纯化两个步骤。
芦丁的制备一般采用常规的有机溶剂提取法。
首先，将干燥的草药或果实研磨成较细的粉末，然后加入合适的有机溶剂如乙醇、甲醇、乙酸乙酯等，经过搅拌和超声波处理使芦丁等活性成分充分溶解。
接下来，采用过滤或离心等手段将固液混合物分离，将溶液收集并去除溶剂。
最后，通过浓缩、结晶、干燥等工艺步骤得到粗提芦丁产品。
芦丁的精制主要是指对粗提芦丁进行纯化，以提高其纯度和活性。
精制过程一般包括以下几个步骤：溶剂提取、溶剂分配、溶剂回收和结晶等。
首先是溶剂提取，将粗提芦丁溶解在合适的溶剂中，通过溶剂提取的方法去除不溶性杂质。
常用的溶剂有乙酸乙酯、丙酮、甲醇等。
在溶剂提取过程中，可以调整溶剂与样品的比例、提取时间等条件，以获得较好的提取效果。
接下来是溶剂分配，通过调整不同溶剂和水的配比，使得芦丁溶解度在不同溶剂中产生相应差异，从而达到分离纯化的目的。
分配过程一般采用萃取法，将溶解芦丁的有机相与无机相进行分离。
常用的溶剂有正己烷、氯仿、甲醇等。
然后是溶剂回收，将分离得到的活性成分溶液中的溶剂去除或回收，以减少生产成本。
回收过程主要是通过蒸馏、浓缩等方法进行，将溶剂蒸发去除或者回收利用。
最后是结晶，将纯化得到的溶液进行结晶，得到纯度较高的芦丁晶体。
结晶操作一般采用冷却结晶或蒸发结晶等方法。
在结晶过程中，需要适当调整温度、浓度和结晶速度等条件，以获得结晶物质的合适晶型和晶体形态。
整个制备与精制过程中，碱性条件、温度、pH值以及溶剂的选择等因素对芦丁的产率和纯度有重要影响。
同时，还需要严格控制操作工艺，避免杂质的混入，以确保芦丁的品质。
总结起来，芦丁的制备与精制主要通过提取和纯化两个步骤进行。
芦丁提取精制 和水解的操作流程
芦丁提取精制和水解的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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综合实验一 芦丁的提取鉴定和复方芦丁胶囊的制备
综合性实验一芦丁的提取鉴定和复方芦丁胶囊的制备研究材料：槐花米提取成分：芦丁制剂：胶囊本实验提供了参考的提取方法，要求学生自行设计一种不同的提取方法。
一、实验目的⑴比较黄酮类化合物不同提取的方法的产品提取率；⑵掌握黄酮类化合物的一般鉴别原理及方法；⑶掌握硬胶囊剂制备的一般工艺过程，及用胶囊板手工填充胶囊的方法；⑷掌握硬胶囊的质量检查内容及方法。
二、实验原理⑴芦丁提取原理槐花米为一常用中药，可用作止血药，具有清肝泻火、治疗肝热目赤、头痛眩晕的功效。
其主要含有黄酮类成分，其中芦丁的含量高达12％～20％，另含有少量的皂苷。
芦丁（rutin）亦称芸香苷，C27H30O6·3H2O淡黄色针状结晶。
有减少毛细血管通透性的作用，临床上主要是治疗高血压的辅助药物。
其广泛存在于植物中，现已发现含有芦丁的植物有70多种，其中以槐花米和荞麦叶中含量较高，可作为提取芦丁的原料。
本实验参考的提取方法是利用芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，用碱水为溶剂煮沸提取，提取液加酸酸化后又成为游离的芦丁而析出，利用芦丁对冷水和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制，并通过显色反应和纸色谱法进行检识。
并比较两种提取方法的优缺点。
⑵胶囊剂的制备及质量控制基本概念胶囊剂（capsules）系指将药物盛装于硬质空胶囊或具有弹性的软质胶囊中制成的固体制剂。
一般可分为硬胶囊剂、软胶囊剂和肠溶胶囊剂。
本次实验是制备硬胶囊，将一定量的药物加辅料制成均匀的粉末或颗粒，充填于空胶囊中，或将药物粉末（颗粒）直接分装于空胶囊中制成。
空胶囊的规格由大到小分为000、00、0、1、2、3、4、5号共8种，一般常用的是0～5号。
⑶胶囊剂的质量控制①外观胶囊剂应整洁，不得有粘结、变形或破裂现象，并应无异臭。
②装量差异平均装量0.30g以下，装量差异限度为±10％；0.30g或0.30以上，装量差异限度应为±7.5％。
③崩解度与溶出度胶囊剂作为一种固体制剂，通常应作崩解度、溶出度或释放度检查。
槐米中芦丁的提取注意事项
槐米中芦丁的提取注意事项
提取槐米中的芦丁需要注意以下几点：
1. 原料选择：选择质量好、成熟度合适、没有明显病虫害的槐米。
2. 清洁处理：在提取过程之前，应对槐米进行清洁，去除杂质和灰尘等。
3. 切碎处理：将槐米研磨成适当的颗粒大小，以方便后续的提取过程。
4. 提取方法选择：芦丁的提取一般可以采用酒精提取、水提取、超临界流体提取等方法。
根据实际情况选择适合的提取方法。
5. 操作温度控制：提取过程中，应根据芦丁的理化性质和提取方法的要求控制合适的温度，避免温度过高或过低对芦丁的分解或热不稳定性造成影响。
6. 时间控制：提取时间的长短对提取效果有一定的影响。
根据不同的提取方法和需求，控制提取时间合适。
7. 槐米与提取剂的比例：槐米与提取剂的比例也会影响到提取效果。
根据实际情况调整比例，达到较好的提取效果。
8. 环境保护：在提取过程中应注意环境保护，避免对环境造成污染。
9. 实验设备清洁：提取过程中的实验设备应保持清洁，避免杂质的污染。
10. 合理储存：提取后的芦丁样品应储存在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射和潮湿，以免对芦丁的稳定性造成影响。
以上是提取槐米中芦丁时需要注意的一些事项，具体操作还需根据实际情况和提取方法的要求进行调整。
芦丁的提取实验计算题
芦丁的提取实验计算题
要提取芦丁需要进行溶剂提取实验。
假设实验使用乙醇作为溶剂，下面是芦丁提取实验的计算题。
1. 若有100 g芦丁的含量为10%，请问用乙醇提取芦丁，平均每克芦丁所需的乙醇量为多少？（假设提取过程中乙醇不发生反应，乙醇溶液与芦丁完全可混合，而且全部的乙醇都被用于提取）
答案：芦丁的质量为100 g * 10% = 10 g，所需乙醇量为10 g * (1/10 g/g) = 1 g/g。
2. 若要制备50 g含量为5%的芦丁提取物，需要用多少克的芦丁和多少毫升的乙醇？假设提取过程中乙醇不发生反应，乙醇溶液与芦丁完全可混合，而且全部的乙醇都被用于提取。
答案：所需芦丁质量为50 g * 5% = 2.5 g。
平均每克芦丁所需的乙醇量为1 g/g（根据问题1的计算结果）。
因此，所需乙醇量为2.5 g * (1 g/g) = 2.5 g。
3. 假设从100 mL芦丁溶液中提取芦丁，芦丁的浓度为10
mg/mL，提取过程中乙醇不发生反应，乙醇溶液与芦丁完全可混合，而且全部的乙醇都被用于提取。
提取完后得到了5 g的芦丁提取物，求实际上提取收率是多少？
答案：100 mL芦丁溶液中的芦丁质量为100 mL * 10 mg/mL = 1000 mg = 1 g。
实际上得到的芦丁提取物质量为5 g。
因此，
实际上的提取收率为5 g / 1 g = 500%。
这可能由于提取过程中的其他因素，比如溶剂蒸发引起。
芦丁的提取分离与鉴定实验步骤
芦丁的提取分离与鉴定实验步骤芦丁是一种常见的中药化合物，具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等多种药理活性。
其提取分离与鉴定是中药研究和应用的重要环节之一、下面将介绍芦丁的提取分离与鉴定的实验步骤。
一、实验材料和仪器设备准备：1.实验材料：苦橙干燥植物材料、无水乙醇、石油醚、正己烷、醋酸乙酯、以及色谱柱填料等。
2.仪器设备：真空泵、旋转蒸发器、离心机、高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计等。
二、芦丁的提取：1.将苦橙植物材料粉碎成粉末，并称取适量的粉末样品。
2.将粉末样品加入具有提取性质的溶剂中（如乙醇），在室温下进行搅拌提取一定时间。
3.使用滤纸或过滤杯过滤掉植物残渣，得到提取液。
4.通过旋转蒸发器将提取液中的溶剂蒸发掉，得到精制的芦丁提取物。
三、芦丁的分离与纯化：1.将精制的芦丁提取物溶解在适量的溶剂中，制备样品溶液。
2.使用色谱柱装填适合的色谱填料（如硅胶），并将样品溶液注入柱上。
3.使用不同极性溶剂按梯度洗脱柱上的化合物。
4.通过比色法或紫外可见分光光度计测定洗脱液中芦丁的吸收强度，并收集含有目标化合物的部分。
5.通过旋转蒸发器将洗脱液中的溶剂蒸发掉，得到芦丁的分离纯化产物。
四、芦丁的鉴定：1.使用高效液相色谱仪对分离纯化产物进行分析。
2.调节适宜的流动相，并设定合适的检测波长和流速。
3.使用芦丁的标准品制备不同浓度的标准曲线，用于定量分析。
4.将分离纯化产物溶解在流动相中，进行色谱分析并记录色谱图。
5.通过比较分离纯化产物的保留时间和峰面积与标准曲线的关系，定量分析样品中芦丁的含量。
通过以上的步骤，可以完成芦丁的提取分离与鉴定工作。
实验过程中要注意实验条件的控制，如提取溶剂的选择、色谱柱填料的选择和流动相的调节等。
同时，还应注意实验操作的规范和安全，确保实验的准确性和可重复性。
芦丁的提取
实验从槐花米中提取芦丁P.198【实验目的】通过从槐花米中提取芦丁的实验,掌握用酸碱调节提取中药活性成分的方法.【实验原理】槐花米又名槐米,是槐花的花蕾.性凉,味苦,功能凉血,止血,主治肠风,痔血,便血等症.槐花米的主要活性成分是芦丁.芦丁又名芸香苷,不仅存在于槐花米中(含量达10-20%),在荞麦叶等中,也有存在.结构式如下: 从结构式中不难看出,芦丁实际上是由黄酮与糖(葡萄糖和鼠李糖)形成的苷.由于含有黄酮结构,所以,呈黄色.黄酮部分连有许多酚-OH,故易溶于碱液,酸化复析出,这是本实验采用酸-碱调节法来提取芦丁的依据.纯芦丁为淡黄色针状结晶,不溶于乙醇,氯仿等有机溶剂,熔点为188℃(理论值),带三个结晶水的熔点为174-178℃.芦丁能增强毛细管的韧性,适用于毛细管脆弱的患者.【实验步骤】称取15g槐花米,用粉碎机研成粉状.置于250ml烧杯中,加入150ml饱和石灰水[1],于石棉网上加热至沸,并不断搅拌,煮沸15分钟后,抽滤[2].滤渣再用100ml饱和石灰水煮沸10分钟,抽滤.合并两次滤液,用5%盐酸调节至pH3-4[3].放置1-2小时,使沉淀完全,抽滤,并用水洗涤2-3次,即得芦丁粗品.将粗品置于250ml的烧杯中,加水150ml,在石棉网上加热至沸,不断搅拌,并慢慢加入约50ml 饱和石灰水,调节溶液pH值为8-9,待沉淀溶解后,趁热过滤.滤液置于250ml的烧杯中,用5%盐酸调节至pH4-5,静置30分钟.芦丁即以浅黄色结晶析出,抽滤,并用水洗涤1-2次,烘干,称重[4],测熔点.【注解】[1] 加入饱和石灰水既可达到用碱液提取芦丁的目的,同时,还可除去槐花米中的多糖粘液质.[2] 抽滤时,宜先小心倾出上层清液,再慢慢倒出带结晶的溶液,以防结晶过早堵住滤纸孔.后面的抽滤均需如此.[3] 注意小心滴加,约需7-8ml稀盐酸.如果滴加过多,pH值过低,芦丁(苷类)则易水解.[4] 产量约为1.5g.【实验结果】产品的外观性状产量【问题与讨论】1 本实验中,开始用饱和石灰水提取,再用酸调节到pH3-4,这段pH值范围较宽;后来又用饱和石灰水调节到pH3-4,再用酸调节到pH4-5,这段pH值范围较窄.为什么要这样做如果反过来(先调窄后调宽)行不行2 在一开始用酸调节pH值时,某生不小心,加入的稀盐酸过量,pH值小于3-4,请问对实验会产生什么后果为什么3 根据这个实验,请总结出用酸碱调节法提取中药活性成分的适用条件及一般原理.实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定槐米为豆科植物槐(Sophora japonica L.)的未开放花蕾.味苦性凉,具清热凉血,止血之功.常用于治疗多种出血症:肠风便血,痔血,尿血,衄血,崩漏下血,赤血下痢等.槐米常炒炭应用.槐米的主要化学成分为芦丁,其含量可达12～16%,其次含有槲皮素,三萜皂苷,槐花米甲素,槐花米乙素,槐花米丙素等.芦丁具有Vitp样作用,可降低毛细血管脆性和调节通透性.临床上用作毛细血管脆性引起的出血症,常作为高血压症的辅助治疗药.[目的要求]1.通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作.2.掌握槲皮素的制备原理及操作.3.熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用4.通过芦丁的结构检识,了解苷类结构研究的一般程序和方法.[实验原理]芦丁(rutin):C27H30O16·3H2O,浅黄色针状结晶,mp174～178℃(含三分子水);188℃(无水物).难溶于冷水(1:8000～10000),可溶于热水(1:180～200),热甲醇(1:10),冷甲醇(1:100),热乙醇(1:60),冷乙醇(1:650);难溶于乙醚,三氯甲烷,石油醚,乙酸乙酯,丙酮等,易溶于碱液.槲皮素(quercetin):C15H10O7·2H2O,黄色结晶,mp313～314℃(2分子结晶水),316℃(无水物).能溶于冷乙醇(1:290),易溶于沸乙醇(1:23),可溶于甲醇,乙酸乙酯,冰醋酸,吡啶,丙酮等;难溶于水,苯,石油醚等溶剂.芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出,可利用此性质进行提取分离.利用芦丁易溶热水,热乙醇,较难溶于冷水,冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制.芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖,鼠李糖,依此进行制备槲皮素.通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定.[实验内容]一,芦丁的提取分离及精制方法⑴槐米粗粉(50g)置1000ml烧杯中,加入500ml饱和石灰水,加热,并维持pH8～9煮沸20分钟,趁热用脱脂棉滤过滤液药渣用300ml饱和石灰水煮沸10分钟,维持pH8～9趁热滤过滤液药渣(×)合并在60℃～70℃下用浓HCl调pH至4 ～5静置,抽滤沉淀低温(80℃)干燥,称重.按1:200的比例加水,加热使溶解,趁热滤过滤液静置,抽滤,减压干燥,计算收率芦丁精制品方法⑵利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离.槐米粗粉沸水煮沸5～10分钟,反复2次趁热滤过水提取液药渣放冷沉淀析出(粗芦丁)热水重结晶或乙醇重结晶芦丁结晶二,槲皮素的制备称取精品芦丁1g置250ml烧瓶中加2%H2SO4200ml加热回流1小时放冷,静置,抽滤酸性滤液沉淀中和水洗两次,干燥乙醇重结晶中性滤液称重,计算收率浓缩黄色细针状结晶浓缩液(槲皮素)(供糖的PC鉴定)三,检识反应1.芦丁的定性反应取芦丁适量,加乙醇使溶解,分成三份供下述试验用:(1)盐酸镁粉试验:取样品液适量,加2滴浓HCl,再酌加少许镁粉,即产生剧烈的反应,并逐渐出现红色至深红色.(2)锆-枸试验:取样品液适量,然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液,注意观察颜色变化,再加入2%枸椽酸的甲醇溶液,并详细记录颜色变化.(3)α-萘酚-浓硫酸反应:取样品液适量,加等体积的l0%α-萘酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁缓加浓硫酸,注意观察两液界面的颜色.2.芦丁的UV(1)鉴定试剂的配制①甲醇钠溶液:取0.25g金属钠,切碎,小心加入色谱甲醇10ml中,此液置于玻璃瓶中,用橡皮塞密封.②三氯化铝溶液:取1g无水三氯化铝,小心加入色谱甲醇20ml中,放置24小时后全部溶解即得.③醋酸钠:用无水粉末醋酸钠.④⑤硼酸饱和溶液:取无水硼酸,加入适量色谱甲醇,制成饱和溶液.(上述贮备液可放置六个月)(2)芦丁溶液的配制精密称取芦丁纯品0.5g,用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度.(3)光谱的测定①甲醇光谱:取样品液置石英杯中,至200～500nm内进行扫描,重复一次,观察紫外光谱.②甲醇钠光谱:取样品液置石英杯中,加入甲醇钠溶液3滴后,立即测定,放置5分钟后再测一次.③三氯化铝光谱,在盛有样品液的石英杯中,加入三氯化铝6滴,放置1分钟后进行测定.测定后加入3滴盐酸溶液(盐酸:水=1:1)再进行测定.④醋酸钠光谱:取样品液约3ml,加入过量的无水醋酸钠固体,摇匀(杯底剩有约2mg的醋酸钠),加入醋酸钠后两分钟内测定,5分钟到10分钟后再测定一次.3.芦丁及槲皮素的色谱支持剂:中速层析滤液(5×20cm)展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层样品:自制槲皮素的乙醇溶液自制芦丁的乙醇溶液对照品:槲皮素标准品的乙醇溶液芦丁标准品的乙醇溶液显色剂:三氯化铝乙醇溶液喷雾4.糖的纸色谱检识支持剂:中速层析滤纸(5×20cm)样品:取水解后的滤液10ml,水浴加热,且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至PH中性,过滤,取滤液并浓缩至2mI左右,放冷后,供纸色谱点样用.对照品:1%葡萄糖标准品醇溶液及1%鼠李糖标准品醇溶液展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层显色剂:喷以邻苯二甲酸苯胺溶液,105℃烘烤5分钟至斑点显色清晰.[实验说明及注意事项]1.用石灰水调节芦丁提取溶液的PH,既可以达到碱提取芦丁的目的,还可以除去槐米中含有的大量粘液质.但钙离子浓度及pH值均不宜过高,否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀,同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏.2.用HCl调PH时,应注意PH不要过低,因为PH过低(PH2以下)会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解,同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏,导致收率下降.3 .注意观察槲皮素制备过程中的实验现象.[思考题]1.苷类结构检识的一般程序2.苷类水解有几种催化方法3.怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O位上4.怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖5.UV在黄酮类化合物结构鉴定中的应用.+鼠李糖+葡萄糖。
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实验从槐花米中提取芦丁P.198
【实验目的】
通过从槐花米中提取芦丁的实验,掌握用酸碱调节提取中药活性成分的方法.
【实验原理】
槐花米又名槐米,是槐花的花蕾.性凉,味苦,功能凉血,止血,主治肠风,痔血,便血等症.槐花米的主要活性成分是芦丁.
芦丁又名芸香苷,不仅存在于槐花米中(含量达10-20%),在荞麦叶等中,也有存在.结构式如下: 从结构式中不难看出,芦丁实际上是由黄酮与糖(葡萄糖和鼠李糖)形成的苷.由于含有黄酮结构,所以,呈黄色.黄酮部分连有许多酚-OH,故易溶于碱液,酸化复析出,这是本实验采用酸-碱调节法来提取芦丁的依据.
纯芦丁为淡黄色针状结晶,不溶于乙醇,氯仿等有机溶剂,熔点为188℃(理论值),带三个结晶水的熔点为174-178℃.
芦丁能增强毛细管的韧性,适用于毛细管脆弱的患者.
【实验步骤】
称取15g槐花米,用粉碎机研成粉状.置于250ml烧杯中,加入150ml饱和石灰水[1],于石棉网上加热至沸,并不断搅拌,煮沸15分钟后,抽滤[2].滤渣再用100ml饱和石灰水煮沸10分钟,抽滤.
合并两次滤液,用5%盐酸调节至pH3-4[3].放置1-2小时,使沉淀完全,抽滤,并用水洗涤2-3次,即得芦丁粗品.
将粗品置于250ml的烧杯中,加水150ml,在石棉网上加热至沸,不断搅拌,并慢慢加入约50ml 饱和石灰水,调节溶液pH值为8-9,待沉淀溶解后,趁热过滤.滤液置于250ml的烧杯中,用5%盐酸调节至pH4-5,静置30分钟.芦丁即以浅黄色结晶析出,抽滤,并用水洗涤1-2次,烘干,称重[4],测熔点.
【注解】
[1] 加入饱和石灰水既可达到用碱液提取芦丁的目的,同时,还可除去槐花米中的多糖粘液质.
[2] 抽滤时,宜先小心倾出上层清液,再慢慢倒出带结晶的溶液,以防结晶过早堵住滤纸孔.后面的抽滤均需如此.
[3] 注意小心滴加,约需7-8ml稀盐酸.如果滴加过多,pH值过低,芦丁(苷类)则易水解.
[4] 产量约为1.5g.
【实验结果】
产品的外观性状
产量
【问题与讨论】
1 本实验中,开始用饱和石灰水提取,再用酸调节到pH3-4,这段pH值范围较宽;后来又用饱和石灰水调节到pH3-4,再用酸调节到pH4-5,这段pH值范围较窄.为什么要这样做如果反过来(先调窄后调宽)行不行
2 在一开始用酸调节pH值时,某生不小心,加入的稀盐酸过量,pH值小于3-4,请问对实验会产生什么后果为什么
3 根据这个实验,请总结出用酸碱调节法提取中药活性成分的适用条件及一般原理.
实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定
槐米为豆科植物槐(Sophora japonica L.)的未开放花蕾.味苦性凉,具清热凉血,止血之功.常用于治疗多种出血症:肠风便血,痔血,尿血,衄血,崩漏下血,赤血下痢等.槐米常炒炭应用.
槐米的主要化学成分为芦丁,其含量可达12～16%,其次含有槲皮素,三萜皂苷,槐花米甲素,槐花米乙素,槐花米丙素等.芦丁具有Vitp样作用,可降低毛细血管脆性和调节通透性.临床上用作毛细血管脆性引起的出血症,常作为高血压症的辅助治疗药.
[目的要求]
1.通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作.
2.掌握槲皮素的制备原理及操作.
3.熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用
4.通过芦丁的结构检识,了解苷类结构研究的一般程序和方法.
[实验原理]
芦丁(rutin):C27H30O16·3H2O,浅黄色针状结晶,mp174～178℃(含三分子水);188℃(无水物).难溶于冷水(1:8000～10000),可溶于热水(1:180～200),热甲醇(1:10),冷甲醇(1:100),热乙醇(1:60),冷乙醇(1:650);难溶于乙醚,三氯甲烷,石油醚,乙酸乙酯,丙酮等,易溶于碱液.
槲皮素(quercetin):C15H10O7·2H2O,黄色结晶,mp313～314℃(2分子结晶水),316℃(无水物).能溶于冷乙醇(1:290),易溶于沸乙醇(1:23),可溶于甲醇,乙酸乙酯,冰醋酸,吡啶,丙酮等;难溶于水,苯,石油醚等溶剂.
芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出,可利用此性质进行提取分离.利用芦丁易溶热水,热乙醇,较难溶于冷水,冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制.芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖,鼠李糖,依此进行制备槲皮素.通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定.
[实验内容]
一,芦丁的提取分离及精制
方法⑴
槐米粗粉(50g)
置1000ml烧杯中,加入500ml饱和石灰水,加热,并维持pH8～9
煮沸20分钟,趁热用脱脂棉滤过
滤液药渣
用300ml饱和石灰水煮沸10分钟,维持pH8～9
趁热滤过
滤液药渣(×)
合并
在60℃～70℃下用浓HCl调pH至4 ～5
静置,抽滤
沉淀
低温(80℃)干燥,称重.按1:200的比例加水,
加热使溶解,趁热滤过
滤液
静置,抽滤,减压干燥,计算收率
芦丁精制品
方法⑵利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离.
槐米粗粉
沸水煮沸5～10分钟,反复2次
趁热滤过
水提取液药渣
放冷
沉淀析出(粗芦丁)
热水重结晶
或乙醇重结晶
芦丁结晶
二,槲皮素的制备
称取精品芦丁1g
置250ml烧瓶中
加2%H2SO4200ml
加热回流1小时
放冷,静置,抽滤
酸性滤液沉淀
中和水洗两次,干燥
乙醇重结晶
中性滤液称重,计算收率
浓缩
黄色细针状结晶
浓缩液(槲皮素)
(供糖的PC鉴定)
三,检识反应
1.芦丁的定性反应
取芦丁适量,加乙醇使溶解,分成三份供下述试验用:
(1)盐酸镁粉试验:取样品液适量,加2滴浓HCl,再酌加少许镁粉,即产生剧烈的反应,并逐渐出现红色至深红色.
(2)锆-枸试验:取样品液适量,然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液,注意观察颜色变化,再加入2%枸椽酸的甲醇溶液,并详细记录颜色变化.
(3)α-萘酚-浓硫酸反应:取样品液适量,加等体积的l0%α-萘酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁缓加浓硫酸,注意观察两液界面的颜色.
2.芦丁的UV
(1)鉴定试剂的配制
①甲醇钠溶液:取0.25g金属钠,切碎,小心加入色谱甲醇10ml中,此液置于玻璃瓶中,用橡皮塞密封.
②三氯化铝溶液:取1g无水三氯化铝,小心加入色谱甲醇20ml中,放置24小时后全部溶解即得.
③醋酸钠:用无水粉末醋酸钠.
④⑤硼酸饱和溶液:取无水硼酸,加入适量色谱甲醇,制成饱和溶液.
(上述贮备液可放置六个月)
(2)芦丁溶液的配制
精密称取芦丁纯品0.5g,用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度.
(3)光谱的测定
①甲醇光谱:取样品液置石英杯中,至200～500nm内进行扫描,重复一次,观察紫外光谱.
②甲醇钠光谱:取样品液置石英杯中,加入甲醇钠溶液3滴后,立即测定,放置5分钟后再测一次.
③三氯化铝光谱,在盛有样品液的石英杯中,加入三氯化铝6滴,放置1分钟后进行测定.测定后加入3滴盐酸溶液(盐酸:水=1:1)再进行测定.
④醋酸钠光谱:取样品液约3ml,加入过量的无水醋酸钠固体,摇匀(杯底剩有约2mg的醋酸钠),加入醋酸钠后两分钟内测定,5分钟到10分钟后再测定一次.
3.芦丁及槲皮素的色谱
支持剂:中速层析滤液(5×20cm)
展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层
样品:自制槲皮素的乙醇溶液
自制芦丁的乙醇溶液
对照品:槲皮素标准品的乙醇溶液
芦丁标准品的乙醇溶液
显色剂:三氯化铝乙醇溶液喷雾
4.糖的纸色谱检识
支持剂:中速层析滤纸(5×20cm)
样品:取水解后的滤液10ml,水浴加热,且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至PH中性,过滤,取滤液并浓缩至2mI左右,放冷后,供纸色谱点样用.
对照品:1%葡萄糖标准品醇溶液及1%鼠李糖标准品醇溶液
展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层
显色剂:喷以邻苯二甲酸苯胺溶液,105℃烘烤5分钟至斑点显色清晰.
[实验说明及注意事项]
1.用石灰水调节芦丁提取溶液的PH,既可以达到碱提取芦丁的目的,还可以除去槐米中含有的大量粘液质.但钙离子浓度及pH值均不宜过高,否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀,同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏.
2.用HCl调PH时,应注意PH不要过低,因为PH过低(PH2以下)会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解,同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏,导致收率下降.
3 .注意观察槲皮素制备过程中的实验现象.
[思考题]
1.苷类结构检识的一般程序
2.苷类水解有几种催化方法
3.怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O位上
4.怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖
5.UV在黄酮类化合物结构鉴定中的应用.
+鼠李糖+葡萄糖。