反相高效液相色谱梯度洗脱法测定本芴醇有关物质
反相HPLC法测定雷公藤内酯醇的含量和有关物质
反相HPLC法测定雷公藤内酯醇的含量和有关物质司徒洁敏;贾国慧【摘要】Objective: To establish a RP-HPLC analytical method for the determination of content and related substances of triptolide. Methods:The RP-HPLC was performed on a column of Discovery SUPELCO C18 (150 mm×4.6 mm, 5μm) with mobile phase of acetonitrile and water at detection wavelength of 219 nm and 25℃. Isocratic elution was used for the determination of content and gradient elution for related substances. Results:The calibration curve of triptolide was linear in the range of 8~48 µg/ml (R2=1.000 0). The average recovery was 99.48%with the RSD of0.59%. The sample solution was stable.Conclusion:The method is quick and accurate, has good specificity, and its sensitivity meets determination requirements.% 目的：建立反相高效液相色谱法,测定雷公藤内酯醇的含量和有关物质.方法：采用Discovery SUPELCO C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水为流动相,含量等度洗脱测定、有关物质梯度洗脱测定,检测波长219 nm,柱温25℃.结果：雷公藤内酯醇含量测定方法中,样品溶液在8~48µg/ml浓度范围内线性关系良好(R2=1.0000),平均回收率为99.48%,RSD为0.59%,溶液稳定性好.结论：方法快速、准确,专属性好,灵敏度符合测定要求.【期刊名称】《上海医药》【年(卷),期】2012(000)021【总页数】4页(P49-52)【关键词】雷公藤内酯醇;雷公藤内酯酮;梯度洗脱;高效液相色谱【作者】司徒洁敏;贾国慧【作者单位】上海医药集团股份有限公司中央研究院上海 201203;上海医药集团股份有限公司中央研究院上海 201203【正文语种】中文【中图分类】O657.72;R284.1雷公藤内酯醇是第一个被确认具有松香烷结构的二萜类三环氧内酯化合物。
反相高效液相色谱法测定虫草制剂中核苷类化合物的含量
反相高效液相色谱法测定虫草制剂中核苷类化合物的含量【摘要】目的建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定虫草制剂中腺苷和尿苷含量的方法。
方法采用水浴温浸和加热回流的方法,制备供试品溶液。
色谱柱为Hypersil C18柱(200 mm×4.6 mm)流动相为pH 6.5磷酸盐缓冲液∶甲醇(85∶15),检测波长为260 nm。
结果方法的平均加样回收率:腺苷为98.9%,RSD为1.4%(n=6);尿苷为97.9%,RSD为1.5%(n=5),腺苷在23.2～928.0 mg/L范围内线性关系良好,尿苷在16.0～640.0 mg/L范围内线性关系良好。
结论此方法简便、准确,重现性好,可作为判定虫草制剂质量的一种方法。
【关键词】冬虫夏草;金水宝胶囊;至灵胶囊;宁心宝胶囊;反相高效液相色谱法;核苷类化合物冬虫夏草(Cordyceps sinensis)是滋补强壮的名贵中药,具有补虚损,益精气,补肺益肾,止咳,化痰,止血,滋阴壮阳,阴阳并补等功效,临床上广泛应用于急、慢性支气管炎、支气管哮喘、肺气肿等,疗效卓著,其所含的核苷类成分为其有效成分之一,其中腺苷具有改善心脑血液循环[1]、防止心律失常[2]、抑制神经递质释放和调节腺苷酸环化酶活性[3]等作用,已被用作冬虫夏草的质控指标[4]。
但由于天然冬虫夏草对生长环境有特殊的要求,故自然资源极其匮乏。
近年来研究人员从天然冬虫夏草中分离出来的虫草真菌,经培养、发酵得到人工培养菌丝体[5-6],为药源紧缺的天然冬虫夏草开辟出新的有效的药源,已开发出金水宝胶囊、至灵胶囊和宁心宝胶囊等多种虫草制剂。
本实验拟采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对其中核苷类成分同时测定分析,以达到质量综合评价的目的。
实验结果表明,两种核苷类成分在同一色谱条件下均得到较好分离,并可进行含量测定。
该方法样品预处理简便,回收率高,易于操作。
1仪器和药品1.1仪器高效液相色谱仪(美国Waters公司);Waters 510输液泵(美国Waters 公司);U6K进样阀;Waters 484型紫外检测器;Base 810色谱工作站(美国Waters公司);Hamilton微量进样器(瑞士Bonaduz公司)。
反相高效液相色谱法同时测定3-羟基-2-萘甲酸和2-萘酚
反相高效液相色谱法同时测定3-羟基-2-萘甲酸和2-萘酚景丽洁，王树清，李健秀（吉林化工学院，吉林吉林132022）摘要：研究采用反相高效液相色谱法C18柱，同时测定3-羟基-2-萘甲酸和2-萘酚，甲醇1水=70130（体积比）为流动相，检测波长为225nm。
3-羟基-2-萘甲酸和2-萘酚的相对标准偏差分别为0.6%、0.7%，回收率分别为100.4%~102.0%、97.50%~99.08%关键词：3-羟基-2-萘甲酸；2-萘酚；高效液相色谱法中图分类号：0657.7+2文献标识码：A文章编号：0367-6358（2000）03-0150-03Simultaneous Determination of3-hydroxyl-2-NaphthoicAcid and2-Naphthol by Reversed-phase highPerformance Liguid ChromatographyJING Li-jie，WANG Shu-ging，LI Jian-xiu（Jilin Institute of Chemical Technology，Jilin Jilin132022，China）Abstract：Simultaneous determination of3-hydroxyl-2-naphthoic acid and2-naphthol was studied by re-versed-phase high performance liguid chromatography with C18column，methanol/water=70/30（V/V）as mobile phase.The detection wavelength was225nm.The relative standard deviations of3-hydroxyl-2-naphthoic acid and 2-naphthoI were 0.6%、0.7%，the recoveries were 100.4%102.0%、97.50%99.08%respectiveIy.Key words ：3-hydroxyI-2-naphthoic acid ；2-naphthoI ；high performance Iiguid chromatography修稿日期：1999-11-273-羟基-2-萘甲酸通常称为2，3-酸，是合成有机染料、颜料及医药的中间体。
高效液相色谱测定苯萘蒽的含量演示教学
高效液相色谱测定苯萘蒽的含量高效液相色谱测定苯萘蒽的含量一实验目的1 熟悉HPLC的结构和操作2 了解反相高效液相色谱法3 掌握峰面积归一化法定量方法二实验原理1 仪器结构储液器→高压泵→进样器→色谱柱→检测器→记录仪↓↓梯度洗脱馏分收集器2 分离原理在反相高效液相色谱中其分离原理取决于组分与固定相间作用力的大小差异，组分的非极性相对最强，与固定相作用最强，故保留时间最长，最后被洗脱。
3 归一化法（1）定量校正因子：f i’ 即mi=fi’*A i（2）实验一般用相对定量校正因子：f i f i =A s*m i/A i*m s式中i指样品；s 指标准品，用各组分的标准样品可求出各组分的f i（3）求各组分含量X i=A i*f i/(A1f1+A2f2+…A n f n)*100%三仪器与试剂1 shimudza高效液相色谱仪，7725i手动进样伐，微量注射器（25μL）,C18柱（250mm×4.6mm,5μm）,超声波脱气机，抽滤器。
2 试剂：甲醇、苯、萘和蒽均为分析纯，水为二次蒸馏水，苯、萘和蒽标准溶液（浓度均为100μg/mL），未知浓度的苯、萘和蒽混合溶液。
四实验步骤1 将实验用流动相进行过滤和脱气处理2 开机，依次打开泵、检测器、工作站。
调整色谱条件（检测波长：254mnv=1.0mL/min,流动相，甲醇：水=80：20，柱温：室温），平衡色谱系统。
3 基线平稳后，取混合溶液5μL进样，记录各峰tR和A，重复两次。
分别取苯、萘和蒽的标准溶液各5μL，依次进样，以确定混合物中各组分的峰的位置。
4 清洗色谱柱，关机。
五结果处理1 根据纯品的出峰时间，确定混合物中各组分出峰顺序。
2 以苯为标准物，计算各组分的相对定量（质量）校正因子。
3 计算样品中各组分的百分含量。
六思考题1 归一化法定量有何优缺点？如果样品中各组分不能完全流出时，用此方法定量是否合适？为什么？2 解释样品中各组分的洗脱顺序。
高效液相色谱梯度洗脱法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rb1、人参皂苷+Rg1和三七皂苷+R1含量
马雯霞
（西安医学院第二附属医院，陕西 西安 710038）
摘要：目的 采用高效液相色谱梯度洗脱法测定三七总皂苷中人参皂苷 Rb1、人参皂苷 Rg1 和三七皂苷 R1 的含量。方法 色谱柱为 C18 柱 （250 mm × 4. 6 mm，3. 5 μm），流动相为乙腈 － 水、梯度洗脱，检测波长为 203nm，流速 1. 0 mL ／ min，柱温为室温。结果 人参皂苷 Rg1 进 样量线性范围是 6. 0 耀 18 μ（g r = 0. 996 7），平均回收率为 98. 79% ，ＲSＤ = 0. 33%（ n = 6）；人参皂苷 Rb1 进样量线性范围是 6. 0 耀 18μg （ r = 0. 996 4），平均回收率为 98. 64% ，ＲSＤ = 0. 46%（ n = 6）；三七皂苷 R1 进样量线性范围是 1. 6 耀 4. 8 μ（g r = 0. 997 1），平均回收率 为 98. 84% ，ＲSＤ = 0. 56%（ n = 6）。结论 该方法准确、灵敏度高，可用于三七总皂苷的质量控制。
Steroid Biochemistry and Ｍolecular Biology，2002，8（2 4 － 5）：315 － 222.
[ 9 ] 张 晶，杨 静，汤宏斌，等 . 异甘草素对人宫颈癌细胞增殖的抑制
(收稿日期：２0１４ － 0２ － １９；修回日期：２0１４ － 0３ － １３ )
４３
156 290 C － 239213，r = 0. 996 4（ n = 5），进 样 量 在 6. 0 耀 18μg 范围内与峰面积线性关系良好；三七皂苷 R1 的线性方程为 A = 49 031 C － 64 293，r = 0. 997 1 ( n = 5 ) ，进 样 量 在 1. 6 耀 4. 8μg 范 围内与峰面积线性关系良好。
反相高效液相色谱法同时检测发酵液中的L-苯丙氨酸和β-苯乙醇
, , ! ) 苯乙醇是香料和化妆品 行 业 中 使 用 量 最 多 的 香 味 成
分。利用酵母的 ,3?#/43 代 谢 途 径， 把 ;) 苯 丙 氨 酸 生 物 转 化 为 ! ) 苯乙醇是一种很好的生 产 天 然 ! ) 苯 乙 醇 的 方 法。 在 ! ) 苯乙醇产生菌的菌种选育和发酵工艺研究过程中， 需要建立 一种对生物转化体系中 ; ) 苯 丙 氨 酸 和 ! ) 苯 乙 醇 组 分 和 含 量 的快速检测方法。本 文 利 用 反 相 高 效 液 相 色 谱 法 同 时 测 定 发酵液中的 ; ) 苯丙氨酸 和 ! ) 苯 乙 醇。 该 法 无 需 衍 生 和 梯 度 洗脱， 有较宽的线性 范 围 及 较 低 的 检 测 限， 可作为微生物转 化发酵体系中 ; ) 苯丙氨酸和 ! ) 苯乙醇的定量测定方法。
#" 结果与讨论
# # !" 流动相和流速的确定 , , 文献 ［&］ 中 采 用 乙 腈 ) 水 为 流 动 相， 但 乙 腈 的 价 格 较 高， 为此另配制 流 动 相 进 行 试 验。 结 果 表 明， 流 动 相 为 甲 醇)水 （ 体积 比 为 ’" 1 ’" ） 时 分 离 效 果 最 好。 同 时， 对不同流速 （ "- (" ， &- "" 和 &- !" -; G -/1 ） 下 的 分 离 情 况 进 行 考 察。 与
收稿日期： !""’ )"( )"$
参考文献：
［&］ , <3"12 9 !? ，;++ F ; ，<3&" < <’ ! B/&74/ B/&+12 ，!""" ，)" （!） ：&%!
反相高效液相色谱法测定植物油中苯并(a)芘含量
反相高效液相色谱法测定植物油中苯并(a)芘含量田玉霞【摘要】将适量的试样溶解于石油醚中,用中性氧化铝柱净化,用石油醚洗脱苯并(a)芘,荧光检测器检测.结果显示,苯并(a)芘色谱峰面积与质量浓度在0～50 μg/L的范围内呈良好的线性关系(r=0.999 5)；方法的最低检测限为0.2μg/kg.苯并(a)芘的回收率为88.3％～98.5％.证明该方法准确、灵敏、快捷,建立了一种反相高效液相色谱法测定植物油中苯并(a)芘含量的方法.【期刊名称】《粮食与食品工业》【年(卷),期】2013(020)001【总页数】3页(P61-62,65)【关键词】苯并(a)芘;植物油;反相高效液相色谱法【作者】田玉霞【作者单位】国家粮食储备局西安油脂科学研究设计院西安710082【正文语种】中文【中图分类】TS227苯并（a）芘是多环芳香族碳氢化合物中具有代表性的、国际公认的强致癌物质之一，通过呼吸道、消化道、皮肤等均可被人体或动物吸收，能够导致人和动物的肿瘤和癌变，高剂量时甚至能够引起免疫抑制，对健康造成潜在的威胁。
食用油脂本身并不含有或很少含有苯并（a）芘，但在种植、加工、运输和烹调过程中，往往受到污染。
世界各国规定了食用油脂中苯并（a）芘的最大残留限量，欧盟208／2005号文件规定食用油脂中苯并（a）芘的最大限量为2μg／kg，我国《食用植物油卫生标准》（GB 2716—2005）规定苯并芘最大限量为10μg／kg。
食用油脂中苯并（a）芘的国标方法主要采用HPLC－FLD法，本方法参考国家标准方法，采用中性氧化铝净化样品，采用荧光检测器测定，建立了一种准确度较高、前处理操作简单、适用范围广的方法，满足国内实验室对食用油脂中苯并（a）芘残留测定的要求。
1 材料与方法1.1 材料与设备仪器（1）除特殊要求外，所用试剂为分析纯试剂。
水：符合GB／T 6682规定的一级水要求；石油醚（沸程30℃～60℃）或正己烷：色谱纯；乙腈：色谱纯；四氢呋喃：色谱纯；甲苯：色谱纯；无水硫酸钠。
高效液相色谱中用于梯度洗脱的有机溶剂的纯度测试
!!!!!!!!!!!!!!!""""仪器装置与实验技术高效液相色谱中用于梯度洗脱的有机溶剂的纯度测试邓华刘满仓朱彭龄#（兰州大学化学系，兰州730000）摘要在反相高效液相色谱中，空白梯度基线的漂移和杂质峰，可能由含水溶剂和有机溶剂中杂质所引起的。
当含水溶剂通过预柱在线净化后，根据空白梯度色谱图可测试有机溶剂的纯度。
按照此法，对国产不同等级的乙腈和甲醇进行了测试，指明这些试剂用于梯度洗脱的可能性。
关键词高效液相色谱，梯度洗脱，有机溶剂，基线漂移，杂质峰!前言当进行反相高效液相色谱的空白梯度试验时，尤其是用低波长高灵敏度设置紫外检测时，在色谱图上可能出现一些杂质峰。
它们主要是由作为弱溶剂的水相中杂质所引起的。
杂质峰的存在可能给建立梯度洗脱方法造成困难〔1〕。
朱彭龄等曾提出预柱在线净化除去高压梯度洗脱时来自含水溶剂杂质的方法〔2〕。
反相色谱梯度洗脱中通常使用的强溶剂是甲醇或乙腈。
在市场上可以买到它们色谱纯级的商品。
从纯度上考虑，色谱纯的溶剂自然是作为梯度洗脱溶剂的理想选择；但由于价格上的原因，在我国分析工作者也经常以分析纯的溶剂代用。
本工作的目的是对几种国产有机溶剂进行测试和对比，说明这些试剂用于梯度洗脱的可能性，为色谱分析选择合适的溶剂提供依据。
高压梯度洗脱中含水溶剂的杂质通过预柱除去，根据空白梯度洗脱色谱图中杂质峰的情况，就能判断被测试的溶剂能否用于梯度洗脱。
"实验部分".!试剂和材料被测试的有机溶剂是乙腈（分析纯，天津化学试剂二厂，批号：960312），乙腈（高效液相色谱用溶剂，一级，山东禹王工业总公司化工厂，批号：980406），乙腈（高效液相色谱用溶剂，二级，山东禹王工业总公司化工厂，批号：980416），甲醇（分析纯，天津化学试剂二厂，批号：981208），甲醇（高效液相色谱用溶剂，山东禹王工业总公司化工厂，批号：970501）。
反相高效液相色谱梯度洗脱法测定本芴醇有关物质
反相高效液相色谱梯度洗脱法测定本芴醇有关物质
本芴醇是一种具有重要活性成分的天然产物，它可以用于治疗各种疾病，其中反式高效液相色谱梯度洗脱法是一种常用的测定本芴醇有关
物质的方法。
它的操作非常简便，效果非常好。
一. 基本原理
反式高效液相色谱梯度洗脱法依赖于本芴醇分子的不同物理化学性质
使本芴醇的亲核分子不同，从而实现对本芴醇的准确测定。
由于不同
的分子因子，比如pH因子、气体添加量和溶剂比例等，影响本芴醇分
子的外部极性，使其形成不同的流动行为，由此实现对本芴醇各个组
分的有效分离，进而实现本芴醇清洗法的正确测定。
二. 原料准备
1. 色谱仪：由液相色谱柱，泵，检测器，洗脱塔组成。
2. 试剂：本芴醇，缓冲溶液，洗脱液，测定小百分点溶液。
3. 其他：称量秤，电子天平，分液器，浸渍管，小号滤膜等。
三. 实验步骤
1. 样品称量：用称量秤称取合适的本芴醇样品，以0.1mg的精度称量，
然后用电子天平校正精度；
2. 预洗脱：将称量的本芴醇样品分液到洗脱塔，再加入缓冲溶液，并
调节缓冲溶液流量，加入洗脱液持续洗脱，特别注意全程保持洗脱所
需要的pH值；
3. 测定：打开色谱仪，将测定小百分点溶液加至洗脱塔，调节试样的
流量，并且将所测的各组份的信号在屏幕上显示，在机器的控制下，
运用化学反应进行分析；
4. 数据处理：将所测数据储存到计算机中，并通过计算机进行数据分析，得出本芴醇有关物质的标准值。
四. 结论
反式高效液相色谱梯度洗脱法是一种测定本芴醇相关物质的常用方法，它不仅操作简便，而且效果明显，能够快速准确地测定本芴醇的各组份，是进行本芴醇检测分析的首选方法。
反相高效液相色谱法同时测定来曲唑含量及有关物质
反相高效液相色谱法同时测定来曲唑含量及有关物质摘要目的：采用反相高效液相色谱法同时测定来曲唑含量及有关物质。
方法：使用Agilent1100型高效液相色谱仪和ZORBAXXDB-C18色谱柱(150×4.6mm，5μm)，在流动相为水：乙腈=60：40、流速为1.0mL／min、紫外检测波长为230n／n的条件下测定来曲唑含量及有关物质。
结果：来曲唑含量测定的线性范围为2～100μg／mL，相关系数为0.99996。
日内和日间精密度均良好(RSD<1.0％)，且杂质和中间体对来曲唑及含量测定没有影响。
结论：本方法测定来曲唑含量及有关物质操作简便，结果正确，灵敏度高。
关键词来曲唑有关物质RP-HPLC含量测定来曲唑(letrozole)是Novartis公司开发上市的一种非甾体类芳香酶抑制剂，主要用于治疗晚期乳腺癌。
在美国药典(USP)27版中，来曲唑含量和有关物质测定均采用高效液相色谱法(HPLC)梯度洗脱法。
但在国内，来曲唑含量测定采用容量滴定法，而有关物质测定采用HPLC法。
笔者在实际工作中经对上述两种方法进行比较，建立了更为简便的HPLC方法，可以同时进行来曲唑含量及有关物质的测定。
经方法学验证，证实此方法简单、灵敏，专属性强，定量结果准确。
1仪器与试药1.1仪器Agilent1100型高效液相色谱仪，包括G1314A VWD检测器、G1315BDAD 检测器、G1311A型四元泵、G1329A型自动进样器、G1316A型柱温箱和G1322A 型脱气机。
1.2试药来曲唑对照品(USPreferencestandard，CATNO：35697；LOT：FOB170；USPROCKVILLE,MD)，来曲唑杂质对照品(USPreferencestandard，CATNO：1356982：LOT：GOD298；USPROCKVILLE,MD)，来曲唑(本公司研制样品)及各中间体(本公司研制)，乙腈(色谱纯)和水(超纯水)。