【CN109628526A】一种提高N乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法【专利】

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一种N-乙酰氨基葡萄糖的发酵生产方法[发明专利]

专利名称：一种N-乙酰氨基葡萄糖的发酵生产方法专利类型：发明专利
发明人：穆晓玲,唐浩,刘干,王舒,吴琼琼,葛严峰
申请号：CN202011641719.5
申请日：20201231
公开号：CN112760348A
公开日：
20210507
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种N‑乙酰氨基葡萄糖的发酵生产方法。

所述方法先利用大肠杆菌进行发酵，在发酵过程中接种枯草芽孢杆菌继续进行发酵；所述大肠杆菌为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，于2018年5月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC 15756。

本发明提供的方法通过利用大肠杆菌CGMCC 15756与枯草芽孢杆菌配合，进行混菌发酵，使二者平衡共生，避免了单独采用大肠杆菌CGMCC 15756发酵时，因副产物快速积累导致发酵速度明显减慢甚至提前终止的问题，显著提高了发酵终点N‑乙酰氨基葡萄糖的产量和转化率，降低了谷氨酸、乙酸等副产物的含量。

申请人：安徽丰原发酵技术工程研究有限公司
地址：233000 安徽省蚌埠市禹会区胜利西路777号
国籍：CN
代理机构：北京睿阳联合知识产权代理有限公司
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发酵生产n-乙酰氨基葡萄糖的工艺流程

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一种生产氨基葡萄糖的方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611001491.7(22)申请日 2016.11.14(71)申请人中国科学院微生物研究所地址 100101 北京市朝阳区北辰西路1号院甲3号，微生物所F419(72)发明人胡美荣　王雷　陶勇　(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司 11245代理人关畅　何叶喧(51)Int.Cl.C12P 19/26(2006.01)C12N 1/21(2006.01)C12R 1/19(2006.01)(54)发明名称一种生产氨基葡萄糖的方法(57)摘要本发明公开了一种生产氨基葡萄糖的方法。

本发明提供了一种生产氨基葡萄糖的方法，包括如下步骤：以N-乙酰氨基葡萄糖为原料，在工程菌的作用下，生产氨基葡萄糖；所述工程菌为表达功能蛋白的重组菌，是将编码所述功能蛋白的功能基因导入出发菌得到的；所述功能蛋白为N-乙酰-6-磷酸氨基葡萄糖脱乙酰酶或几丁二糖脱乙酰酶。

采用本发明提供的方法制备氨基葡萄糖，反应条件温和、工艺路线简单、产物纯度高、适合大规模的工业化生产，非常适于推广应用。

权利要求书1页说明书6页序列表8页附图1页CN 108070628 A 2018.05.25C N 108070628A1.一种生产氨基葡萄糖的方法，包括如下步骤：以N-乙酰氨基葡萄糖为原料，在工程菌的作用下，生产氨基葡萄糖；所述工程菌为表达功能蛋白的重组菌，是将编码所述功能蛋白的功能基因导入出发菌得到的；所述功能蛋白为N-乙酰-6-磷酸氨基葡萄糖脱乙酰酶或几丁二糖脱乙酰酶。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述N-乙酰-6-磷酸氨基葡萄糖脱乙酰酶为EcDac蛋白；所述EcDac蛋白为如下(a1)或(a2)：(a1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(a2)将序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的其衍生的蛋白质。

一种制备氨基葡萄糖的方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011472878.7(22)申请日 2020.12.15(71)申请人山东润德生物科技有限公司地址 271200 山东省泰安市新泰市经济开发区润德路78号(72)发明人卢健行　韩宁　张新平　赵鹏　吴祥舟　卢建功　(74)专利代理机构济南光启专利代理事务所(普通合伙) 37292代理人张瑜(51)Int.Cl.C07H 1/00(2006.01)C07H 1/06(2006.01)C07H 5/06(2006.01)(54)发明名称一种制备氨基葡萄糖的方法(57)摘要本发明涉及氨基葡萄糖技术领域，尤其涉及一种制备氨基葡萄糖的方法，包括如下步骤：(1)将甲壳素或壳聚糖、水解呈酸性的铵盐溶液、挥发性有机醇的混合液置于密闭反应容器中，然后对反应容器加热，反应完成后进行固液分离，得到水解液，备用；(2)对步骤(1)得到的水解液进行加热，得到氨基葡萄糖粗料液，备用；(3)将步骤(2)的氨基葡萄糖粗料液通过阳离子交换膜、阴离子交换膜，得到氨基葡萄糖溶液，备用；(4)将步骤(3)的氨基葡萄糖溶液干燥，去除其中的水分，即得。

本发明的方法能够在不采用酸液水解的情况下实现甲壳素或壳聚糖的水解，缓解了污染问题。

权利要求书1页说明书6页CN 112521426 A 2021.03.19C N 112521426A1.一种制备氨基葡萄糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将甲壳素或壳聚糖、水解呈酸性的铵盐溶液、挥发性有机醇的混合液置于密闭反应容器中，然后对反应容器加热，反应完成后进行固液分离，得到水解液，备用；(2)对步骤(1)得到的水解液进行加热，得到氨基葡萄糖粗料液，备用；(3)将步骤(2)的氨基葡萄糖粗料液通过阳离子交换膜、阴离子交换膜，得到氨基葡萄糖溶液，备用；(4)将步骤(3)的氨基葡萄糖溶液干燥，去除其中的水分，即得。

一种N-乙酰氨基葡萄糖的制备方法[发明专利]

专利名称：一种N-乙酰氨基葡萄糖的制备方法
专利类型：发明专利
发明人：卢健行,刘长峰,张建华,卢建功,吴祥舟,韩宁申请号：CN201910951816.5
申请日：20191009
公开号：CN110590869A
公开日：
20191220
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于医药化工领域，公开了一种N‑乙酰氨基葡萄糖的制备方法。

本发明N‑乙酰氨基葡萄糖的制备方法包括以下步骤：将甲壳素与乳酸甘氨酸盐酸盐、六氟异丙醇溶解制得粗母液，再使用微孔膜过滤器过滤制得精母液；将精母液与1‑丙基璜酸基‑3‑甲基咪唑硫酸氢盐离子液体混合制得降解液；往降解液中加入活性炭脱色，过滤；滤液浓缩，降温，加入有机溶剂结晶，过滤得N‑乙酰氨基葡萄糖粗品，用无水乙醇浸泡后搅拌过滤，干燥即得所述N‑乙酰氨基葡萄糖。

通过本发明方法制备的N‑乙酰氨基葡萄糖收率高，所得N‑乙酰氨基葡萄糖纯度可以达到99.9％以上，且该制备方法工艺简单，成本较低，所使用的溶剂可以回收利用，环保经济，适合大规模的推广和应用。

申请人：山东润德生物科技有限公司
地址：271200 山东省泰安市新泰市经济开发区润德路78号
国籍：CN
代理机构：济南光启专利代理事务所(普通合伙)
代理人：赵文成
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N-乙酰氨基葡萄糖的合成方法[发明专利]

[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101235058A [43]公开日2008年8月6日[21]申请号200810034134.X [22]申请日2008.02.29[21]申请号200810034134.X[71]申请人上海大学地址200444上海市宝山区上大路99号[72]发明人华子义沈忠明殷建伟朱正芳 [74]专利代理机构上海上大专利事务所代理人何文欣[51]Int.CI.C07H 13/06 (2006.01)C07H 5/06 (2006.01)权利要求书 1 页说明书 4 页附图 2 页[54]发明名称N－乙酰氨基葡萄糖的合成方法[57]摘要本发明涉及一种N－乙酰氨基葡萄糖的合成方法。

该方法的具体步骤为：将D－葡萄糖胺盐酸盐和乙醇按2～2.5∶100的质量比溶于水中，调节该溶液的pH值为9～10；过滤，取滤液，搅拌下加入乙酸酐，其加入量为原料D－葡萄糖胺盐酸盐量的50～60wt％；搅拌反应2小时后，用无水乙醇进行重结晶；过滤，晶体再用水重结晶，得棒状食品级N－乙酰氨基葡萄糖。

本发明方法平均得率在70％以上，产品符合出口质量标准，而且操作简便、成本较低、生产周期短。

同时由于生产用各种原料安全无毒，符合食品级产品的生产和质量要求。

200810034134.X权利要求书第1/1页 1.一种N-乙酰氨基葡萄糖的合成方法，其特征在于该方法的具体步骤为：a.将D-葡萄糖胺盐酸盐和乙醇按2～2.5∶100的质量比溶于水中，调节该溶液的pH值为9～10；b.过滤，取滤液，搅拌下加入乙酸酐，其加入量为原料D-葡萄糖胺盐酸盐量的50~60wt％；c.搅拌反应2小时后，用无水乙醇进行重结晶；d.过滤，晶体再用水重结晶，得棒状食品级N-乙酰氨基葡萄糖。

200810034134.X说明书第1/4页N-乙酰氨基葡萄糖的合成方法技术领域本发明涉及一种N-乙酰氨基葡萄糖的合成方法。

一种高产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌的构建及应用方法[发明专利]

专利名称：一种高产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌的构建及应用方法
专利类型：发明专利
发明人：魏哲
申请号：CN201410702685.4
申请日：20141129
公开号：CN104498517A
公开日：
20150408
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种高产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌的构建及应用方法，属于遗传工程技术领域。

本发明是通过对大肠杆菌中已有的代谢途径进行修饰和改造，阻断 N -乙酰氨基葡萄糖及其副产物分解和向胞内转运途径，同时引入外源的氨基葡萄糖乙酰化酶基因，在宿主内形成从葡萄糖到N-乙酰氨基葡萄糖的完整合成途径，构建的工程菌株能利用葡萄糖或甘油为底物，通过好气发酵培养合成 N -乙酰氨基葡萄糖，以实现工业化生产。

申请人：滨州市金朗生物科技有限公司
地址：256600 山东省滨州市高新区高五路208号
国籍：CN
代理机构：淄博佳和专利代理事务所
代理人：张雯
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N-酰基氨基葡萄糖及其制备方法[发明专利]

专利名称：N－酰基氨基葡萄糖及其制备方法专利类型：发明专利
发明人：郭振楚
申请号：CN200410023021.1
申请日：20040319
公开号：CN1623996A
公开日：
20050608
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种N－酰基氨基葡萄糖及其制备方法，是将有机酸与氨基葡萄糖偶联，改造成为N－酰基氨基葡萄糖，可用于治疗高血脂症，高甘油三脂症，低密度脂蛋白(a)血症及高血浆蛋白症，长期应用能减少冠心病、心肌梗塞及其它心脑血管病的发生率。

本发明制备技术一是将氨基葡萄糖中的氨基用对－甲氧基苯甲醛保护，以得到完全β－构型的N－酰基氨基葡萄糖；二是将酸或相应的酰卤为原料与β－构型保护的(用乙酰基保护羟基)N－酰基氨基葡萄糖盐酸盐偶联而得到完全β－构型的(用乙酰基保护羟基)氨基葡萄糖；三是所用原料氨基葡萄糖盐酸盐不必去除氯离子而直接进行氨基的保护反应；四是多数反应温度在低温或在稍高于常温下进行，节约能源，并可在稀酸、稀碱或毒性小的丙酮有机溶剂中进行，减少了污染，多数纯化是重结晶，产品纯度高，目标分子的质量与理论计算一致。

申请人：湖南科技大学
地址：411201 湖南省湘潭市桃园路
国籍：CN
代理机构：湘潭市汇智专利事务所
代理人：魏娟
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将成熟的N-乙酰氨基葡萄糖种子液按照12～15％接种量接种到含有发酵培养基的发
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CN 109628526 A
权利要求书
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酵罐中培养，控制发酵温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速250-450rpm，通气比0 .61 .0v/v/m，溶氧25％～27％，pH＝6 .8；
2 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，当发酵液的OD660nm为25～28时，按照前5h以 5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为25:3。
3 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述混合液的体积与发酵液的体积比为1:100。
( 19 )中华人民共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910077505 .0
(22)申请日 2019 .01 .28
(71)申请人丽珠集团福州福兴医药有限公司地址 350300 福建省福州市福清市江阴工业集中区南港大道8号
(72)发明人曾德桦暨火兴刘原君王为民
法 ( 57 )摘要
本发明涉及发酵工程技术领域，具体涉及一种提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法。发酵过程中，当发酵液的OD660nm大于或等于25时，按照前5h以5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合液，之后以 3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为 25:3。本发明在发酵培养过程中，当OD660nm大于或等于25时流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合液，控制半乳糖和L-天门冬氨酸的浓度和比例，通过在半乳糖中添加L-天门冬氨酸使得glmS与 gfa1过量表达增加氨基葡萄糖的积累浓度，最后将N-乙酰氨基葡萄糖产量提高至120g/L。
葡萄糖0 .54％，硫酸铵0 .35％，磷酸二氢钾1 .0％，硫酸镁0 .26％，稳定剂0 .46％，消泡剂0 .05％，氧化钙0 .0046％和微量元素0 .18％；
所述微量元素为七水硫酸铁5 .00g/L、硼酸0 .10g/L、一水硫酸锰0 .10g/L、七水硫酸锌 3 .80g/L、二水钼酸钠0 .10g/L和硫酸钴0 .10g/L的混合液。
9 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
配制种子培养基，控制温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速300-400rpm，通气比 1 .0-1 .2v/v/m，接入产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌进行培养，培养周期为9～12h，pH下降至 6 .4～6 .5，种子液的OD660nm大于或等于1时视为种子成熟；
权利要求书2页说明书8页
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权利要求书
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1 .一种提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，发酵过程中，当发酵液的 OD660nm大于或等于25时，按照前5h以 5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为25:3。
6 .根据权利要求4所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述成熟的N-乙酰氨基葡萄糖种子液的制备方法为：
配制种子培养基，控制温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速300-400rpm，通气比 1 .0-1 .2v/v/m，接入产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌进行培养，培养周期为9～12h，pH下降至 6 .4～6 .5，种子液的OD660nm大于或等于1时视为种子成熟。
当0 .54％的葡萄糖耗至0 .05％～0 .06％时开始流加质量浓度为75％的葡萄糖，使培养过程中的残糖维持在0 .01-0 .08％；
7 .根据权利要求6所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述种子培养基原料包括：
葡萄糖1 .0％、硫酸铵0 .18％、磷酸二氢钾0 .9％、硫酸镁0 .25％、稳定剂0 .36％和消泡剂0 .1％。
8 .根据权利要求5或7所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述稳定剂为一水柠檬酸，所述消泡剂为有机硅。
4 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
将成熟的N-乙酰氨基葡萄糖种子液按照12～15％接种量接种到含有发酵培养基的发酵罐中培养，控制发酵温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速250-450rpm，通气比0 .61 .0v/v/m，溶氧25％～27％，pH＝6 .8；
所述发酵培养基原料包括：葡萄糖0 .54％，硫酸铵0 .35％，磷酸二氢钾1 .0％，硫酸镁 0 .26％，稳定剂0 .46％，消泡剂0 .05％，氧化钙0 .0046％和微量元素0 .18％；
所述微量元素为七水硫酸铁5 .00g/L、硼酸0 .10g/L、一水硫酸锰0 .10g/L、七水硫酸锌 3 .80g/L、二水钼酸钠0 .10g/L和硫酸钴0 .10g/L的混合液；
当发酵液的OD660nm大于或等于25时，按照前5h以 5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为25:3。
5 .根据权利要求4所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基原料包括：
(74)专利代理机构福州市博深专利事务所(普通合伙) 35214
代理人林志峥
(51)Int006 .01)
(10)申请公布号 CN 109628526 A (43)申请公布日 2019.04.16
( 54 )发明名称一种提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方