雌激素受体基因突变的研究进展_王晓稼
ER受体测定
雌激素受体及孕激素受体测定人乳腺癌组织中，有60～70％的组织存在雌激素受体(ER)及／或孕激素受体(PR)，其存在状况与诊断、治疗及判断预后有关。
受体阳性者约60％用抗相应受体治疗有效；阴性者亦有10％的有效反应率。
测定ER及PR的常用方法包括生物化学及形态学两大类；前者为对受体蛋白作定量测定，后者是观察受体在肿瘤组织，包括细胞内的分布及半定量测定。
近年来在测定方面屡有改进，如单克隆技术、高效液相及细胞流式计数测定的应用等,尚未作为常规方法应用。
目前我国开展的生物化学方法有葡聚糖包裹活性炭液吸附法(DCC法)及蔗糖密度梯度超离心法(SDG法)；形态学方面有17-FE细胞化学法及免疫组织化学法(荧光法及酶联法)。
由于各自条件不同，所用测定方法也不相同。
为便于对资料进行对比分析，本章介绍这些方法，以便统一标准。
第一节生物化学法一、葡聚糖包裹活性炭液吸附法(DCC法)该类方法系通过3H标记的雌激素与受体的特异性竞争结合来检测受体，包括DCC法（葡聚糖包裹活性炭液吸附法，DextranCoatedCharcoal）、SDG法（蔗糖密度梯度超离心法，SucroseDensity GraientUltracontrifugation）、HPA（羟基磷石灰分析法，Hydroxylapatit e）、鱼精蛋白沉淀法、琼脂糖凝胶电泳法（AGE）等，以DCC法和SDG法为经典方法。
(一)测定原理在一定条件下，以氚标记雌二醇([3H]E2)为配体，与受体结合，以葡聚糖包裹活性炭液吸附游离的甾体激素，用液闪法测定与受体结合的标记激素含量，表示受体的量。
以激素与受体结合的动力学方法计算受体含量。
(二)测定方法1．标本处理：乳腺癌标本离体后立即分成两份，一份送病理检查，另份立即放入冰壶，送实验室作受体测定。
剪除待测标本中肿瘤周围的各种正常组织及坏死组织后，以生理盐水冲洗，吸干后置液氮罐中保存，待测定。
2．制备上清液：全过程均在0～4℃下进行。
雌激素研究进展
关于雌激素的研究进展摘要：本文对雌激素的基础化学，生物合成，作用机理等作了总结，围绕雌激素的受体与相关病变的关系，对国内外雌激素及其有关机制的研究进展进行了介绍。
包括雌激素相关受体的研究，雌激素受体在睾酮影响细胞衰老作用的研究，雌激素与乳腺癌、骨质疏松的关系等的研究进展。
关键词：雌激素；受体；调节机制；生理作用；研究成果Research on the progress of estrogenAbstract：In this paper, the basis of estrogen chemical, biological synthesis, summarized the mechanism, such as around the estrogen receptor and related diseases the relationship between estrogen and its domestic and foreign research progress in the mechanism are introduced. Including estrogen-related receptor, estrogen receptor, the impact of cell senescence in the role of testosterone study, estrogen and breast cancer, the relationship between osteoporosis research progress.Key words： Estrogen ；Receptor ；Adjustment mechanism ；Physiological role；Research results雌激素是性激素的一种。
卵泡成熟后分泌两类雌激素：雌酮，雌二醇及雌三醇，作用是促雌性器官发育，排卵；卵黄卵泡发育成黄体，黄体分泌孕酮(也称黄体酮或妊娠酮) ，作用是激动子宫准备受孕，促进乳腺发育，抑制排卵，停止月经，抑制动情急减少子宫收缩等。
雌激素受体与癌症的研究进展
食道癌在我国有明显的地理聚集现象，高发病率及高病死率地区相当集中。
其发病率在河北、河南、江苏、山西、陕西、安徽、湖北、四川、福建等省在各种肿瘤中高居首位，其中河南省病死率最高，以下依次为江苏、山西、河北、陕西、福建、安徽、湖北等省。
年平均病死率在100/10万以上的县市有21个，最高的是河北省邯郸市(303.37/10万)和磁县(149.19/10万)，山西省的阳城(169.22/10万)和晋城(143.89/10万)，河南省的鹤壁市(169.22/10万)和林州市(131.79/10万)。
对流行地区分布的深入分析发现，同一省的不同地区可以存在迥然不同的发病情况，高、低水平地区相距很近，而病死率水平却可相差几十倍到二、三百倍。
由高病死率水平到低病死率水平常形成明显梯度，呈不规则同心圆状分布。
主要的高病死率水平地区分布在：河南、河北、山西三省交界(太行山)地区；四川北部地区；鄂豫皖交界(大别山)地区；闽南和广东东北部地区；苏北以及新疆哈萨克族聚居地区。
在世界范围内同样存在高发区，哈萨克斯坦的古里亚夫、伊朗北部的土库曼、南非的特兰斯开等，/NewsDetail.asp?DetailNewsId=5526 /NewsDetail.asp?DetailNewsId=5526雌激素受体与癌症的研究进展作者：孟萌， 夏雅娟， 李建云作者单位：孟萌(内蒙古农业大学动物科学与医学学院中兽医教研室,内蒙古,呼和浩特,010018)， 夏雅娟,李建云(内蒙古地方病防治研究中心,内蒙古,呼和浩特,010010)刊名：内蒙古医学杂志英文刊名：INNER MONGOLIA MEDICAL JOURNAL年，卷(期)：2008，40(7)被引用次数：1次1.Masami Muramatsu.Satoshi Inone Estrogen receptor:How do they control reproductive and nonreproductive functions 2000(270)2.M Beato.J Klug Steroid hormone receptors:an update 2000(06)3.荣顺星雌激素受体的研究进展[期刊论文]-职业卫生与应急救援 2005(23)4.Kazuogiro Ikeda.Satoshi Inoue Estrogen receptor and their downstream targets in cancer 2004(05)5.赵桂香雌激素受体亚型的研究现状[期刊论文]-国外医学(妇产科学分册) 2002(29)6.唐波.姜军雌激素受体α阴性乳腺癌雌激素受体α基因启动子区CpG岛甲基化和肼苯哒嗪去甲基化作用[期刊论文]-中华病理学杂志 2005(34)7.李薇雌激素受体及其与恶性肿瘤的关系[期刊论文]-国外医学(生理、病理科学与临床分册) 20018.朱雨岚.刘伟.费娜雌激素受体在人类垂体腺瘤中的表达[期刊论文]-中华神经医学杂志 2005(04)9.雷元卫.陈廷喧胆管癌性激素受体的表达及其临床病理学意义[期刊论文]-湖北省卫生职工医学院学报 2004(17)10.毛卫华.徐锦屏.毛建林肺癌组织中雌孕激素受体表达及临床意义[期刊论文]-浙江实用医学 2005(10)11.石素胜.刘秀云.何祖根肝癌组织雌激素受体表达与生物学特征的研究[期刊论文]-癌症 200012.姚青.穆红.张建民前列腺病变中E-cadherin、p16和ER表达及意义[期刊论文]-临床与实验病理学杂志2004(06)13.谭文华.刘巍.关咏梅雌激索受体亚型与妇科肿瘤的关系[期刊论文]-中国优生与遗传杂志 2005(13)14.温宏武雌激素受体βmRNA在子宫内膜癌中的表达及其意义[期刊论文]-中华妇产科杂志 2001(36)15.朱建华.叶棋浓.江泽飞ERβ表达载体的构建及其在肿瘤细胞中的功能研究[期刊论文]-中华肿瘤杂志 200316.Aninda Basu.Brian G Genes related to estrogen action in reproduction and breast cancer 2005(10)17.孙刚.马斌林.赵峰雌激素调节蛋白pS2乳腺浸润性导管癌表达及其临床意义[期刊论文]-肿瘤学杂志 2005(11)18.贵春山.沈建华.罗小民雌激素受体和选择性雌激素受体调节剂的研究进展[期刊论文]-中国药物化学杂志 200519.Adriana Stoica.Elizabeth Pentecost.Mary Beth Martin Effect of arsenite on estrogen receptor-αexpression and activity in MCF -7 breast cancer cells 2000(141)20.Kirk T.kitchin.Kathleen Wallace Arsenite binding to synthetic peptides based on the Zn finger region and the estrogen binding region of the human estrogen receptor-α 2005(206)1.会议论文张传山.胡沛臻.马福成.王映梅.朱晓慧.王文亮乳腺癌预后评估与p27Kipl和雌激素受体表达间的关系2002乳腺癌(breast carcinoma)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,流行病学的研究资料表明,近年来乳腺癌的发病率在我国女性患者中有明显的增加,已成为严重危害女性生命的主要疾病之一.有关乳腺癌的发病机制,目前仍不清楚.p27kipl(cyclin-dependent kinase inhibitor p27kipl)是由Polyak在MV1Lu细胞系中发现的一种新的CDKIs蛋白.研究表明,p27kipl可以阻止细胞通过G1/S期转换"关卡",对细胞周期具有负调控的作用;p27kipl的低于预测乳腺癌的侵袭性、指导治疗和评估预后.本研究应用免疫组化技术结合组织病理学观察,同时检测了p27kipl和ER在乳腺癌组织中的表达与分布,初步探讨了p27kipl和ER在乳腺癌发生、发展以及预后评估方面的作用,为乳腺癌的临床治疗提供了一定的理论依据。
雌激素受体与相关疾病研究进展
雌激素受体与相关疾病研究进展雌激素受体（ERα）是一种蛋白质分子，作用是与雌激素结合成为激素-受体复合物，使雌激素发挥生物学效应。
作为配体活化转录因子的核受体家族成员之一，雌激素参与靶细胞的增殖与分化。
经过多年的研究调查显示：雌激素受体的功能受很多因素的影响，主要是因子的调节。
它还与很多疾病有着密切关系。
该文旨在介绍与其有关的几类调节因子与相关的疾病以及环境对其的影响。
[Abstract] Estrogen receptor-α （ER alpha）is a kind of protein molecule，the role is in combination with estrogen become estrogen receptor complexes，making estrogen produce biological effect. As a member of the nuclear receptor family of ligands activation of transcription factors，estrogen take part in the proliferation and differentiation of target cell. After years of research shows that：the function of the estrogen receptor is affected by many factors，mainly is the adjustment factor. It also has close relationship with many diseases. This paper aims to introduce its associated with related types of regulating factor and the influence of environment on the disease.[Key words] Hormone receptor （ER alpha）regulating factor；Disease；Environment作为激素受体家族中重要一员，雌激素受体既具核受体，还具膜受体[1]。
yiganyuzi
参考文献:[1] Dong Z,Huang C,Ma W.PI3kinase in si gnal transduction,cell transformation,and as a target for chemopreventi on of cancer[J].AnticancerRes,1999,19(5A):3743 3747.[2] A mundadottrirl L,Leder P.Si gnal transduction pathways activated andrequired for mammary carcinogenesis in re and required for ma mmarycarcinogenesis in respons e to specific oncogenes[J].Oncogene,1998,16(6):737 746.[3] Tanabe K,Ki m R,Inoue H,e t al.Antisense Bcl 2and HER 2oligonucleotide treatment of breast cancer cells enhances thei r sensi tivity to an ticancer drugs[J].Int J Oncol,2003,22(4):875 881.[4] Yu D.Mechanis ms of ErbB 2mediated paclitaxel resi stance and trastuz umab mediated pacli ta xel sens iti zati on in ErBb2overexpressing breastcancers[J].Semi n Oncol,2001,28[5Suppl16]:12.[5] As ada M,Yamada T,Ichijo H,e t al.Apoptosi s i nhibi tory activity of c ytopl as mic p1(Cip1PWAF1)in monoc ytic differentiation[J].EMBO J,1999,18(5):1223 1234.[6] Gross man SR,Perez M,Kung AL,et al.p300PMD M2co mple xes participate i n MDM2mediated p53degradati on[J].Mol Cell,1998,2(4):405 415.[7] Lamb J A,Ventura JJ,Hess P,e t al.Jun D mediates s urvi val signalingby the J NK si gnal transducti on pathway[J].Mol Cell,2003,11(6):1479 1489.[8] Jin W,Wu L,Li ang K,et al.Roles of the PI3K and Mek pathways inRas medi ated chemo resis tance in breas t cancer cells[J].Br J Cancer,2003,89(1):185 191.[9] Jordan NJ,Gee J M,Barrow D,e t al.Increased cons tituti ve ac tivity ofPKB Akt in tamoxifen resi stant breas t cancer MCF 7cells[J].BreastCancer Res Treat,2004,87(2):167 180.[10] Michael JF.Phos phoinosi tide3kinas e si gnalli ng in breas t cancer:howbi g a role might it play?[J].Breas t Cancer Res,2001,12(3):304312.[11] Piwien Pili puk G,Huo JS,Schwartz J.Growth hormone si gnal transducti on[J].J Pediatr Endocri nol Metab,2002,15(6):771 786.[12] Weinstei n Oppenhei mer CR,Blaloc k WL,Steelman LS,et al.The Rafs ignal transduc ti on cascade as a target for chemotherapeutic i nterventionin growth factor responsive tumors[J].Pharmacol Ther,2000,88(3):229 279.[13] Salh B,M arotta A,Matthews on C,et al.Investigati on of M ek MAP kinase R SK pathway in human breast cancer[J].Anticancer Res,1999,19(1B):731 740.[14] Ding S,Chamberlain M,McLaren A,et al.Cross talk between si gnalingpathways and the multidrug resistant protein MDR 1[J].Br J Cancer,2001,85(8):1175 1184.[15] Iwase H,Zhang Z,Omoto Y,et al.Clinical significance of the expression of es trogen receptors alpha and beta for endocrine therapy of breas tcancer[J].Cancer Chemother Pharmacol,2003,52[Suppl1]:S34 38.[16] Spei rs V,Malone C,Walton DS,et al.Increased expres sion of estrogenreceptor mRNA i n ta moxifen resis tant breast cancer patients[J].Cancer Res,1999,59(21):5421 5424.[17] 王晓稼,郑树.选择性雌激素受体调节剂耐药受体机制研究进展[J].国外医学分子生物学分册,2001,23(4):203 206.[18] Treeck O,Z hou R,Diedrich K,et al.Tamoxifen long term treatment invitro alters the apoptotic res ponse of MCF 7breas t cancer cells[J].Anticancer Drugs,2004,15(8):787 793.[19] Deblois G,Gi guere V.Li gand independent c oactivation of EralphaAF21by steroid receptor RNA ac tivator(SRA)vi a MAPK activation[J].J Steroi d Biochem Mol Biol,2003,85(2 5):123 131.[20] Schi ff R,Massarweh SA,Shou J,et al.Cros s talk bet ween estrogen receptorand growth factor pathway s as a molecular target for overcoming gendoc rine resistance[J].Clin Cancer Res,2004,10(1Pt2):331S 336S.收稿日期:2005 05 14 修回日期:2005 09 24乙型肝炎病毒整合及致癌机制的研究进展王 涛1(综述),王 一2(审校)(1.山东省潍坊市解放军第89医院病理科,山东潍坊261021;2.上海市东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室,上海200438)关键词:乙型肝炎病毒;肝细胞瘤;整合中图分类号:R735.7文献标识码:A文章编号:1006 2084(2005)12 1087 03乙型肝炎病毒(HBV)是急慢性病毒性肝炎的主要致病因素,也是肝硬化、原发性肝细胞癌(HCC)的促发因素,据估计, HBV感染率占世界总人口的5%,长期慢性感染者终生期50%发生HCC。
乳腺癌雌激素受体基因的突变与变异
乳腺癌雌激素受体基因的突变与变异多年来，雌激素受体（ER）被作为乳腺癌内分泌治疗和预后评估的一个重要指征。
然而，异常的ER结构可能对于正确地评估ER 状况显得尤为重要。
因为虽然可以检测出异常结构ER的存在，但实际上它缺乏其功能，从而导致假阳性结果。
同样，一些不能通过生化及免疫组化检测出来而实际上具有生物学活性的ER的存在也会导致假阴性结果。
因此，探讨ER的突变和变异状况具有重要意义。
例如，不需要配体就能传送雌激素信号的受体蛋白存在可能就会导致对内分泌治疗的抵抗；此外，功能不良的ER的突变也可能导致乳腺癌的预后不良。
一、野生型雌激素受体结构和功能ER基因定位于q24和q27之间的第6对染色体的短臂上，由8个外显子组成。
野生型ER蛋白的相对分子质量大约为 65 000，与雌二醇具有很高的亲和性［1］。
ER属于配体激活的核转录因子的大家族，后者包括其他的类固醇激素受体、甲状腺激素受体、视黄酸受体、维生素D受体和大量尚未明确配体的所谓“孤立受体”。
用A～F 6个字母分别代表这些受体序列排列中的6个区域。
E 区主要组成了配体结合区，该区包括外显子4到8和装配配体结合的一个疏水区。
DNA 结合区包括二个锌指结构，使其能够与上游雌激素依赖基因启动区的特异性雌激素反应元件或单元（HRE）相协调［2，3］，外显子2和3编码该区域，具有激活功能的为AF1和AF2两个转录区。
AF1包括A、B区的大部分，核受体含有两个转录激活功能（AF）区，分布位于受体C端的激素结合区（AF2）和N端区（AF1），AF2为激素依赖性，而AF1是激素非依赖的。
AF2还是核受体与其他转录介导因子（共激活因子或共抑制因子等）相互作用的部位。
甾体激素受体的每个AF均具有明显的细胞特异性特点，即使对于某一特定的靶基因而言，靶基因启动子的组成特性也能影响AF（特别是AF2）的转录活性。
D区包括核的定位信号，即所谓的“桥接区”，它并不依赖于配体结合。
选择性雌激素受体调节剂的组织选择性作用及机制的研究进展
选择性雌激素受体调节剂的组织选择性作用及机制的研究进展蒋莉;张绍芬
【期刊名称】《现代妇产科进展》
【年(卷),期】2008(17)2
【摘要】选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor
modulator,SERM)是一类结构多样的化合物,能在不同组织发挥不同的雌激素激动或拮抗作用。
其选择性作用机制与自身分子结构、雌激素受体、共调节蛋白以及非基因效应等多方面因素有关,目前仍未完全明确。
因雷洛昔芬在骨和心血管组织中
表现为雌激素激动作用,在子宫和乳腺组织表现为雌激素拮抗作用,受到了关注,而它在脑、前列腺等组织中的作用尚待研究。
现对SERMs的选择性作用机制,以及在骨、子宫、乳腺、心血管、脑、前列腺组织的选择性作用做一综述,重点介绍雷洛昔芬。
【总页数】4页(P139-142)
【关键词】选择性雌激素受体调节剂;雷洛昔芬
【作者】蒋莉;张绍芬
【作者单位】上海市复旦大学附属妇产科医院
【正文语种】中文
【中图分类】Q579.13
【相关文献】
1.选择性雌激素受体调节剂耐药受体机制研究进展 [J], 王晓稼;郑树
2.选择性雌激素受体调节剂对骨关节炎作用的研究进展 [J], 肖亚平;戴慕巍;田发明;
张柳
3.选择性雌激素受体调节剂抗氧化作用的研究进展 [J], 郭里;周经委(综述);姚兵(审校)
4.选择性雌激素受体调节剂对AD的作用研究进展 [J], 任晓倩;唐苏苏;洪浩
5.选择性雌激素受体调节剂对AD的作用研究进展 [J], 任晓倩; 唐苏苏; 洪浩
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雌激素受体α基因多态性与女性相关疾病的研究进展
（ ．九 江 市妇 幼保 健 院药 剂科 ， 西 九 江 ３ ２ ０ ；２ 南 昌大 学 医学院生 理教研 室 ， 昌 ３ ０ ０ ） １ 江 ３０ ０ ． 南 ３ ０ ６
关 键词 ： 雌激素受体； 基因多态性； 女性疾病
中 图分类 号 ： ５９ １ ３Ｒ １ Ｑ １．＋ ；７
究进 展作 一 综述 。
１ 雌 激 素 受体 ａ基 因结 构 与功 能
Ｅ Ｒ属 于核 受 体 超 家 族 成 员 ， 一 类 配 体 依 赖 是
性 转 录 因子 ， 位于胞 质 或胞核 中 ， 通过 与雌 激 素结合 发挥 作用 。Ｅ ａ基 因 位 于 ６号 染 色 体 长 臂 ２区 ５ Ｒ
６ ０ ， ５个 结 构 性 功 能 域 （ Ｂ、 Ｄ、 Ｆ ， ６０ ０ 有 Ａ／ Ｃ、 Ｅ、 ） 长 度 约 为 １ ０ ｋ ， 含 ８个 外 显 子 和 ７个 内含 子ｌ 。 ４ ｂ 包 ３ ］ １ 氨基 端 Ａ／ ） Ｂ区 ，为转 录激 活 Ａ － Ｆ １区 ， 有 非 配 具 体 依赖 的激 活某 些启 动子 的功 能 ； ） ２ 中央 的 Ｃ区 具
骨骼 、 脏 、 管 、 经 、 肤 等 组 织 ， 一 种 能 与雌 心 血 神 皮 是 激素 特异 性结 合 的糖 蛋 白 ，具 有 特 异 性 强 、 和力 亲 高和 结合 容量 低 的特性 。Ｅ 包括 ａ和 ８２种 亚型 ， Ｒ
两者 的区别 主 要 在 于其 ｃ末端 配体 结 合 区 和 Ｎ 端 活性 转化 区不 同 ， 以及 在 靶 组 织 的 分 布 密 度 不 同。 １８ ９ ６年 Ｓ ．Ｇｒｅ ｅ ｎ等［ 成 功 地 克 隆 出 Ｅ １ Ｒａ基 因 。
（ｓｒ ｇ ｎｒｃｐｏ ，Ｅ ） 合 而调 节 一 系列 基 因 的 ｅ ｔ ｅ ｅｅ ｔｒ Ｒ 结 ｏ
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4M iller JS,Kl ingsporn S,Lund J,et al.Bone M arrow Trans-plant,1994;14(4):555～5625Poggi A,Sargiacomo M,Biass oni R,et al.Proc Natl Acad Sci USA,1993;90(10):4465～44696Robertson M J,M amley TJ,Donahue C,et al.J Immunol,1993;150(5);1705～17147Nagashima S,M ailliard R,Kashii Y,et al.Blood,1998;91(10):3850～3861(收稿:1999-08-17 修回:1999-11-01)雌激素受体基因突变的研究进展浙江大学肿瘤研究所(杭州310009) 王晓稼综述 郑 树审校摘要 在乳腺癌生物学特性研究和内分泌治疗中雌激素受体(ER)起重要的作用。
已有足够的证据显示ER在mRNA水平可能发生突变或变异,这些ERm RN A突变[ER(m)m RN A]可能会影响乳腺癌的生物学行为。
本文就ER变异体(v ariants)的产生机制、检测和应用作一综述。
关键词 雌激素受体 基因 突变 雌激素受体(ER)对乳腺癌生物学特性和临床内分泌治疗研究有着重要的意义。
早在1985年Sluyser 和M ester曾提出存在基因表达水平ER突变或变异的可能性,这些ER变异体(variants)可以在没有E2的参与下诱导基因转录。
至今,已有足够的证据显示ER 在mRNA水平的突变,因为有许多的ERmRN A突变[ER(m)mRNA]被报告,但尚没有确定相应有临床价值的变异或突变ER蛋白———ER(v)或ER(m),而且ERm RN A的突变在癌组织和正常组织中均可被发现[1,2]。
因此,ER在基因水平突变对乳腺癌生物学行为的影响及其临床意义有待深入的研究。
一、正常ER的结构ER蛋白全长为595个氨基酸,分子量为67kD。
研究还发现ER至少有两种,即α受体和β受体。
ER 蛋白分子从N-端到羧基端共分成6个功能区:A、B、C、D、E和F,它们分别或协同担任一定的功能。
氨基端(A/B区)主要为AF-1功能区,C区为DNA结合区,羧基端(E/F区)为AF-2功能区和配体结合区(LBD)[3,4]。
由于已弄清ER的全长序列,目前临床上免疫组化法所用的ER抗体已经采用了基因重组人ER蛋白诱导的单克隆抗体,使得临床ER结果的假阳性率明显降低。
但由于ER单抗的制备主要针对ER 蛋白氨基端或羧基端的某些区段,因此,无法有效地反映ER的变异情况。
二、ER基因水平变异的机制(一)外显子丢失主要是hnRN A剪接过程中发生外显子的缺失,使ERmRNA不同程度地缩短,在ER基因8个外显子中以2～7单一或联合缺失最常见,其联合丢失可发生在3/4、4/5、5/6和4/7等。
在这些突变ERmRNA(M t ERmRNA)中以第5外显子缺失ER(ERΔ5或称ERdelta5)研究较多。
由于第5外显子部分相当于ER 蛋白的配体结合区(激素结合区),在体外研究中发现ER(-)的BT-20细胞系和ER(+)的MCF-7细胞系中均可检测到ERdelta5mRN A,而且还首次分离到一种42kD的ER(m)蛋白。
此外,有人认为在ER(-)/ Pg R(+)肿瘤细胞中ERΔ5mRNA表达量更高。
ER ■5尽管缺少了激素结合区(HBD),但仍能在没有E2参与下和DNA结合并激活雌激素敏感基因的转录,诱导P gR等蛋白合成[5]。
(二)单个位点基因突变1998年G arcia首先发现ER第257位核苷酸C※T突变,使B区第86位氨基酸由丙氨酸(Ala)变成缬氨酸(Val),并在66例ER(+)乳腺癌中检测到8例这种变异ERmRNA[1]。
1997年Casta发现在人ER第167位(B区)丝氨酸(Ser)磷酸化后其转录活性降低70%,且被丙氨酸Ala取代后其与DNA结合的亲和力降低10倍[6]。
1997年Henttu确定,ER羧基端(HBD)第366位赖氨酸在构成ERα-螺旋中起重要作用,当其被Ala替代后将降低A F-2的活性及ER和SRC-1的结合,但不影响RI P-140[7]。
最近,Ekena在ER配体识别区(第515～535位氨基酸)中发现,第521位甘氨酸(Gly)、第524位组氨酸(His)、第525位亮氨酸(Leu)和第528位蛋氨酸(M et)发生改变将影响ER对·51·2000年2月 第27卷第1期配体的识别和结合[8]。
(三)核苷酸序列的插入主要是mRNA形成过程中发现外显子序列的重复,而使ERmRNA和ER蛋白加长,如第6外显子、第3/4外显子等完全性重复。
此外,还可出现一个与第5内含子同源的69个核苷酸序列插入在第5、6外显子之间,即相当于ER蛋白第412和第413氨基酸之间插入23个氨基酸序列,使ER(v)分子量增加到68.8kD。
1997年Wang克隆和序列分析研究提示,hnRNA在剪接过程中错误地将第5内含子作为外显子保留下来,是由于其5′端邻近第6外显子的核苷酸由A※G发生突变所致,该位点正好为第5内含子的剪接位点[9]。
(四)基因甲基化或蛋白磷酸化修饰ER基因在DNA水平的甲基化可能成为ER变异的重要原因之一,这些改变使hnRN A剪接过程发生错误而导致ERm RN A的异常。
此外,ER蛋白中一些关键氨基酸的磷酸化作用也同样改变了ER的空间结构和功能,如B区118位Ser经磷酸化变成Ala,可使其转录活性降低30%～40%,而不影响其与配体(E2)或DNA(即ERE)的亲和力[10]。
1999年Chen[11]发现C区第336位Ser在PKA(蛋白激酶)作用下磷酸化成谷氨酸(G lu),使ER的二聚作用受抑制,而不能与DNA结合,如转变为A la则上述作用仅受到一定影响;当加入17-雌二醇或4-羟三苯氧胺(4-O HT)后上述抑制作用可被逆转,而ICI182,780则不能。
研究还发现ERα在无配体存在下可通过DBD之间的相互作用形成二聚体,只是当ER结合配体后L BD才对其二聚功能起调节作用,而ICI182,780则可通过LBD防止其形成二聚体。
在ERα/ERβ细胞中,同样可在ERα第236位Ser被PK A磷酸化,但此时4-OHT不能克服P KA对ER二聚作用的抑制。
三、ER突变的检测及其应用(一)ER(m)的检测目前ER突变或变异的检测在mRNA水平报道较多,但至今尚没有检测到有临床价值的与mRNA突变一致的变异ER蛋白。
1990年瑞典学者Zhang[12]以SSCP和DNA测序检测30例转移性乳腺癌的ERm R-N A突变,检测到3个突变类型:47位Ser※T hr,531位Ly s※Glu和537位Ty r※Asn。
经进一步研究发现第3种类型ER(m)具有E2非依赖转录活性,其537位突变氨基酸正好位于羧基端E区第8外显子起始点,该位点的磷酸化与ER二聚功能、转录激活功能和激素结合过程有关,这种ER(m)在形态上的改变尽管可以模仿ER与激素结合并形成二聚体,但其复合物仅有基本的反向激活功能,在复发转移的乳腺癌中如果检测到这种ER(m)则可能与其进展或激素耐药有关。
1998年Umekita[13]在35例ER(+)乳腺癌的复发转移灶(或淋巴结)中以序列分析ER基因中HBD 的突变情况,发现316位Val※Ile、344位G ly※Val、430位Ala※V al和494位Gly※Val四种变异。
将其所有的转移灶共117个标本以单克隆抗体ER和P R 进行免疫组化测定,发现尽管其ER仍持续高表达,但P R转阴在复发灶和淋巴结中分别为33%和6.7%,提示可能存在ER突变,而且其突变在转移灶较原发灶更常见,且PR(-)表型在某些乳腺癌中与疾病进展有关。
(二)ER(m)的应用1997年Pink[14]分离到一种77kD的ER(m)蛋白,确定为6/7外显子(位于HBD)的完全重复,其特性为不与E2或合成配体结合,但可与DN A结合,体外研究发现其能在ER(+)乳腺癌细胞中抑制E2的诱导作用。
此外,ER第537位酪氨酸磷酸化在ER结合E2及其结合容量的调节方面起重要作用。
当该位点发生突变后其作用将下降甚至丧失,如被苯丙氨酸取代后的ER(m)与E2的结合力仅为野生型ER的1/10[15]。
1997年G arcia将ER(m)转染到乳腺癌细胞后,发现E2和TAM可降低乳腺癌细胞的生长和侵袭力[16]。
目前,把ER变异体作为乳腺癌的临床常规检测项目尚不适合,但ER蛋白的变异在乳腺癌生物学研究和临床治疗方面起越来越重要的作用。
至此,不难看出乳腺癌从激素依赖到激素非依赖的进展中起重要作用的可能是那些ER变异体或突变体的表达或改变,因为任何蛋白在结构上的异常都会导致其功能上的改变,ER作为一种具有广泛生物学意义的细胞生长因子也不例外。
尽管这些ER(m) mRN A是否能在体内稳定翻译尚不清楚,但它们已经给乳腺癌内分泌治疗乃至基因治疗带来新的曙光。
参考文献1M cGuire W L,Chamness GC,Fuqua SA.J S teroid Biochem M ol Biol,1992;43(1-3):243～2472Dow s ett M,Daffada A,Chen CM,et al.Eur J C ancer,1997;33(8):1177～11833Ali S,M etzger D,Bornert JM,et al.EM BO J,1993;12(3): 1153～11604Katzenellenbogen BS.Biol Reprod,1996;54(2):287～2935Castles CG,Fuqua SA,Klotz DM,et al.Cancer Res,1993;53(24):5934～59396Casta E,Voroj eikina DP,Notides AC.Biochem J,1997;326·52·国外医学肿瘤学分册 (Pt1):149～1577Henttu PM,Kalkhoven E,Parker M G.M ol Cell Biol,1997;17(4):1832～18398Ekena K,W eis KE,Katzenel lenbogen JA.J Biol Chem,1997;272(8):5069～50759W ang M,Dolzlaw H,Fuqua S A.Breast Cancer Res Treat, 1997;44(2):145～15110Casta E,Chen CW,Vorojeikina DP,et al.J Steroid Biochem M ol Biol,1998;65(1-6):101～11011Chen D,Pace PE,Coombes R C.M ol Cell Biol,1999;19(2): 1002～101512Zhang QX,Borg A,Wolf DM,et al.Cancer Res,1997;57(7):1244～124913Umekita Y,S agara Y,Yoshida H.Jpn J Cancer Res,1998;89(1):27～3214Pink JJ,Frits ch M,Bilimoria M M,et al.Br J Cancer,1997;75(1):17～2715Arnold SF,M elamed M,Vorojeikina DP,et al.M ol En-docrinol,1997;11(1):48～5316Garcia M,Derocq D,Platet N,et al.J S teroid Biochem M ol Biol,1997;61(1-2):11～17(收稿:1999-08-19 修回:1999-10-25)肿瘤转移检测标志基因研究进展厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室(厦门361005) 乔玉欢厦门大学抗癌研究中心 陈瑞川综述摘要 用聚合酶链反应(PCR)方法检测肿瘤转移标志基因的研究报道逐年增多,PCR法检测循环肿瘤细胞和微转移,不仅可确认癌转移,而且对检测治疗的效果、强度和持续时间有指导意义,对肿瘤转移规律的研究也将有深远的影响。