碱性蛋白酶产生菌的筛选(1)

高产碱性蛋白酶菌株的筛选及酶学性质的研究

高产碱性蛋白酶菌株的筛选及酶学性质的研究高产碱性蛋白酶菌株的筛选及酶学性质的研究摘要：蛋白酶是一类广泛存在于生物体中的酶类，其具有多种功能。

碱性蛋白酶是一类pH值适宜碱性环境下活性较高的蛋白酶，应用广泛。

本研究旨在筛选出一株高产碱性蛋白酶的菌株，并对其酶学性质进行研究。

引言：蛋白酶在生物体内起着关键的生物调节和代谢调控作用。

碱性蛋白酶是一类活性较高、pH值适宜碱性环境下较为稳定的蛋白酶，被广泛应用于生物工程、制药、食品加工等领域。

因此，筛选高产碱性蛋白酶菌株并对其酶学性质进行研究具有重要意义。

材料与方法：本研究选取了富含烟碱的土壤样品作为实验用菌株的来源。

首先进行了初步筛选，将土壤样品分别接种于含有碱性蛋白酶基质的琼脂平板上，并在适宜的培养条件下进行孵育。

随后，对形成菌落的菌株进行二次筛选，通过培养基的碱性蛋白酶活性测定，筛选出活性较高的菌株，并进行进一步培养。

结果：经过初步筛选和二次筛选，从富含烟碱的土壤样品中分别筛选出了两株高产碱性蛋白酶的菌株。

其中，菌株A的碱性蛋白酶活性达到了每毫升1000 U，菌株B的碱性蛋白酶活性为每毫升800 U。

讨论：这两株高产碱性蛋白酶的菌株在富含烟碱的土壤样品中被筛选出来，表明烟碱可能对菌株具有诱导产碱性蛋白酶的作用。

此外，本研究所筛选出的菌株的蛋白酶活性较高，这对于蛋白质降解和利用具有积极的意义。

酶学性质：对菌株A和菌株B分别进行了酶学性质的研究。

结果表明，这两株菌株的碱性蛋白酶在pH 9.0的条件下具有较高的活性，其酶活性逐渐下降，当pH值低于7.0时基本失活。

在温度方面，菌株A的蛋白酶活性在40°C达到最高值，而菌株B的最适温度为45°C。

进一步的研究发现，菌株A的蛋白酶受到金属离子Cu2+的抑制，而菌株B的蛋白酶对Cu2+较为稳定。

结论：本研究成功筛选出两株高产碱性蛋白酶的菌株，并对其酶学性质进行了研究。

结果显示，这两株菌株的碱性蛋白酶具有较高的活性，适应性较强。

产碱性蛋白酶菌株的筛选

产碱性蛋白酶菌株的筛选碱性蛋白酶是在碱性范围内水解蛋白质肽键的酶类，一般最适pH值为9~11，属内肽酶中的丝氨酸蛋白水解酶类，主要用于加酶洗涤剂中，在制革、纺织、医药、化妆品等的生产中也有广泛的应用。

目前，全世界所生产的酶中碱性蛋白酶占到总产量的30%左右，显示出良好的使用性能和经济价值。

碱性蛋白酶广泛存在于细菌、放线菌和真菌中，其中以芽孢杆菌属的碱性蛋白酶研究的最深入。

微生物来源的碱性蛋白酶都是胞外酶，与动植物来源的碱性蛋白酶相比具有产酶量高，适合大规模工业生产的优点。

因此，微生物碱性蛋白酶被认为是最重要的应用型酶类。

本实验从盐碱地采集土样，从中分离出若干株产碱性蛋白酶的菌株。

培养基。

平板培养基( %) : 酵母粉1. 5，蛋白胨0. 5，氯化钠0. 5，琼脂1. 6，pH9。

分离培养基( %) : 酵母膏1. 5，脱脂奶粉0. 5，琼脂1. 6，pH9。

种子培养基%) : 葡萄糖1. 0，蛋白胨0. 5，酵母膏0. 5，KH2PO40. 1，MgSO40. 02，Na2CO31. 0，pH9。

土样采集。

选取采集地点地表植被根系周围的土壤，先除去地表浮土及植被根系，然后挖取深约5cm 的土壤样品。

样品处理。

将土样混合均匀，4℃冰箱保存。

菌株分离( 平板分离法)。

取10g土样装入90ml 无菌生理盐水的三角烧瓶中，100r /min 旋转摇床培养20min，取10 -3，10 -4，10-5稀释液分别涂布于平板培养基上，每个浓度涂布3 个培养皿。

37℃恒温箱倒置培养24h。

观察与保存: 培养24h、48h 后，挑选菌落形态、颜色不一致的菌落保存待用。

筛选采用平板划线法将保存的单菌落划线于分离培养基上。

37℃恒温培养箱中培养24h。

通过观察水解圈的大小初步判断菌株产酶能力的高低，挑选产生透明水解圈大的单菌落接2 环于装有5ml 液体发酵培养基的无菌试管中，30℃条件下旋转摇床培养24h。

5产蛋白酶菌株的筛选2019

三、器材
1.菌株从自然界筛选获得的蛋白酶产生菌株 2.溶液和试剂蛋白胨，酵母粉，脱脂奶粉，琼脂，干酪素，三氯醋酸，NaOH，
Na2CO3,Folin试剂，硼砂，酪氨酸，水等 3.仪器和用品三角烧瓶，培养皿，吸管，试管，涂布棒，玻璃搅拌棒，培养摇
床，高压灭菌锅，直尺，玻璃小漏斗和滤纸
四、操作步骤
1.牛奶平板培养基的配制及灭菌牛奶平板：在普通肉汤蛋白胨
固体培养基中添加终质量浓度为 1.5%的ห้องสมุดไป่ตู้奶
2.倒平板
四、操作步骤
3.制备土壤悬液 4.涂布 5.培养 6.观察记录
五、注意事项
培养基灭菌条件的控制。
六、实验结果
将菌落计数结果记录于下表中。
七、思考题
1.在选择平板上形成蛋白透明水解圈大小是否能作为判断菌株产蛋白酶能力的直接证据？为什么？ 2.简单设计一方案，从实验中初筛得到的产蛋白酶菌落里获得某个碱性蛋白酶的高产菌株。
产蛋白酶菌株的筛选
生物制药系 2019年12月
一、实验目的
学习用选择平板从自然界中分离胞外蛋白酶产生菌的方法。
二、实验原理
蛋白酶在轻工、食品、医药工业中用途非常广泛。微生物来源的碱性蛋白酶都是胞外酶，具有产酶量高，适合大规模工业生产等优点，被认为是最重要的一类营业性酶类。自然界筛选获取有用的微生物资源一直是微生物学的一项重要工作。自能够产生胞外蛋白酶的菌株在牛奶平板上生长后，其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈。水解圈与菌落直径的比值常被作为判断该菌株蛋白酶产生能力的初筛依据。

一株高产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及发酵条件的优化

收稿日期：２０１２ — ０７ —项目（Ｄ２０１０００１１４９）
作者简介：崔洪霞（】９７７一），女，黑龙江尚志人，博：士，副教授，主要研究方向为微生物与生化药学，Ｅｍａｉｌ：ｈｘｃｕｉ＠ｙｓｕ．ｅｄｕ．Ｃ／Ｉ。
一
株高产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及发酵条件的优化
崔洪霞。 ’ ，李春林，钱龙，孙滢，周艳艳，史云柯
（１．燕山大学环境与化学工程学院，河北秦皇岛０６６００４；２．河北省应用化学重点实验室，河北秦皇岛０６６００４；３．燕山大学里仁学院，河北秦皇岛０６６００４）
酶的强弱顺序为：ｐＨ值、培养时间、接种量、装液量，菌株ＳＤＬ９在较佳发酵条件下的发酵液的最大酶活力达１９７．５８Ｕ／ｍＬ。本研究表明从秦皇岛海域可以获得碱性蛋白酶高产菌株，丰富了菌种资源。
关键词：碱性蛋白酶；筛选；海泥；菌株ＳＤＬ９中图分类号：Ｑ９３９文献标识码：ＡＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００７ — ７９１Ｘ．２０１３．０１．０１５
０引言
近年来，碱性蛋白酶由于与传统的化学催化剂相比具有催化能力强、底物专一性高等优点，已被广泛应用于制革、银回收、医药、食品、饲料、化学工业、废物处理等生产及行业。其最早发现于猪胰脏中，而１９４５年又发现于地衣芽孢杆菌中，开辟了微生物碱性蛋白酶的来源。在碱性蛋白酶的

碱性蛋白酶产生菌的筛选

文章编号:1001-3717(2006)01-0070-03碱性蛋白酶产生菌的筛选3李树文,陆秀华,尚海利(莱阳农学院生命科学院,山东青岛266109)摘要:本试验从5份土壤中共筛选出产碱性蛋白酶菌株9株,即SHL-4、SHL-6、SHL-7、SHL-10、SHL-8、SHL-11、SHL-12、SHL-18、SHL-20,其中SHL-4、SHL-6、SHL-7、SHL-10产酶效果较好;采用正交试验设计,初步地确定了菌株SHL-4产酶培养基组分,即蛋白胨0.5%、牛肉膏1.5%。

关键词:碱性蛋白酶;筛选;菌株中图分类号:Q939.97文献标识码:AScerrning R ning of Alkaline Protease Producing StrainsL I Shu2wen,L U Xiu2hua,SHAN G Hai2li(Life Science College,L AC,Qingdao266109,China)Abstract:Nine st rains producing alkaline p rotease were screened out f rom five soil samples,namely SHL-4、6、7、10、8、11、12、18、20,SHL-4、6、7、10of which wit h high protease activity.Through an or2 t hogonal test,t he p roducing protease cult ure medium of t he SHL-4st rain was confirmed preliminarily, namely0.5%of pepto ne,1.5%of beef ext ract.K ey w ords:alkaline protease;screening;st rain 碱性蛋白酶是指在碱性的条件下具有活性,能够水解蛋白质肽键的酶类。

碱性蛋白酶产生菌株的筛选及其酶学性质研究进展

菌属、赫曲霉、萨氏曲霉、硫曲霉、蜂蜜曲霉、
收稿日期：２００８—２— ８２
作者简介：伍先绍，男，（９３一）１８年，在读硕士研究生，研究方向为食品微生物学。
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立德链霉菌、费氏链霉菌、灰色链霉菌、蓝棕青霉、头孢霉、稻根耳霉、冠状耳霉、镰刀菌、鬼伞菌、细极链格孢、小球菌、嗜热圆酵母、解脂
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Байду номын сангаас
试验研究
碱性蛋白酶产生菌株的筛选及其酶学性质研究进展
伍先绍，贺稚非，刘琳，龚霄
（西南大学食品科学学院，重庆４０１）０７５
摘
要：筛选能产生碱性蛋白酶的微生物菌株以及对碱性蛋白酶的酶学性质进行研究，为碱性蛋白酶的
属有枯草芽孢杆菌、嗜碱性芽孢杆菌、地衣芽孢
杆菌１１２、嗜碱性短小芽孢杆菌Ｂ等Ｊ。由于微生物产生碱性蛋白酶分泌至胞外，适合工业化生产，且碱性蛋白酶应用非常广泛、需
杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、马铃薯芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、黏质赛氏杆菌、节杆菌属、假单胞
ＲｅｅｃｄａｎｅｉｃｅｎｎｓａｒｈａｖｃｎｓｒｅｉｇｍｉｒｂａＩｔａｎｒｄｕｅａｋｉｅｐｏｅｓｎＣＯｉＳｒｉＳｐｏｃａｌ — ｒｔａｅａｄｎｓｕｙｇｔｅｅｚｍａｉｈｒＣｅｉａｉｔｄｉｈｉｎｙｎｒｃＣａａｔｚｔｒＯｎ

高产碱性蛋白酶低温菌的筛选及发酵

摘要：从123株南极低温细菌中筛选到1株高产低温蛋白酶的菌株，16S rDNA系统发育分析鉴定为Pseudoalteromonas。经生长条件优化，羧甲基纤维素钠和蛋白胨分别为发酵培养的最适碳源和氮源，该菌在初始pH7.0~8.0、10 ℃培养5 d后产酶酶活达0.48 U/mL，约为优化前(0.27 U/mL)的 1.8倍。对粗酶液进行酶学性质初步研究，此酶在pH9.0、30 ℃下活性最高，是一种低温碱性蛋白酶，在工业领域有很大的应用潜力。关键词：南极细菌；碱性蛋白酶；筛选；发酵；酶学性质中图分类号： TS 201.3 文献标志码： A 文章编号：1005-9989(2012)03-0011-05
(1.School of Marine Science and Technology, Harbin Institute of Technology at Weihai, Weihai 264209; 2.Qingzhou Branch of Weifang Tobacco Co., Ltd of Shandong, Weifang 262500)
Abstract: In this study, an effective protease-producing bacterium, named Pseudoalteromonas sp. AN64 by 16S rDNA analysis, was screened from 123 antarctic strains. Growth condition tests showed that strain AN64 cultured at pH7.0~8.0 and 10 ℃ could produce the highest protease activity with carboxymethylcellulose as carbon source and peptone as nitrogen source. After 5 days culture under optimum conditions, the protease activity could reach 0.48 U/mL which was 1.8 times of the initial. Studies on the partial enzyme characters of crude protease showed that the protease had a temperature optimum 30 ℃ and a optimum pH of 9.0, and was a cold-active and alkaline enzyme. Key words: antarctic bacteria; alkaline protease; screening; ferment; enzymatic properties

蛋白酶产生菌的筛选及酶学性质研究

ｔｖｔｈｎｚｍｅｉａｅｔｅｅｙ．
Ｋｅｏｄ：ｐｏｅｌｔｎｙ；ｂｃｌｓｃｕｅｅｚｍｅｐｏｅｔｓｙｗｒｓｒｔｏｙｉｅｚｍｅｃａｉｕ；ｒｄｎｙｒｐｒｉｌｅ
３０ｍＬｆｓ０ａｋ，６ｌ０ｍＬ；ｉｏｕｕｓｚ，２；ｒｓｅｔｅｙＡｎｏｃｕｅｈｒｅｅｔｏｐａｓｔａｒｄｃｄｐｏｅｎｅｎｃｌｍｉｅ％ｅｐｃｉｌ．ｄｗｅｃｎｌｄｄｔｅｅｗｒｗｅｋｔｏｕｅｒｔｉａｖｈｐｓ
Ｎｏ１．Ｏ０ｃ．ｔ
文章编号：１７－６６（０６１— ０７０６９４２０）００６ — ４１
蛋白酶产生菌的筛选及酶学性质研究
于宏伟，栗志丹，郝珊珊，贾英民
（河北农业大学食品科技学院，河北保定０１０）７０１摘要：从养牛厂附近的土壤中分离得到一株产蛋白酶性质优良的菌株，初步鉴定为芽孢杆菌，对其最适产酶条件进行了研究。试验表明，最适碳源为玉米粉，最适氮源为玉米浆，３０ｍ０Ｌ摇瓶最适装液量为６Ｌ，最适接种量为０ｍ２％，起始ｐＨ值为４５和６５时有２个产酶高峰，并对其进行酶学性质的研究。该酶最适温度为６．．５℃ ，最适ｐＨ值为７５．，该酶在５０℃以下保温３ｎ酶活仍较高，在７０ｍｉ０℃以上酶活全部丧失。在ｐＨ值７０９０时比较稳定，而在ｐ．．～Ｈ
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