菌落总数测定
国标菌落总数检测方法
国标菌落总数检测方法引言：菌落总数是指在一定的培养条件下，菌落形成的数量。
菌落总数检测是食品微生物检验中的一个重要指标，用于评估食品中微生物的污染程度和卫生质量。
本文将介绍国标菌落总数检测方法的步骤和原理。
一、国标菌落总数检测方法的步骤国标菌落总数检测方法主要包括样品制备、平板计数和结果计算三个步骤。
1. 样品制备需要准备好待测样品。
样品通常是食品、水或其他物质，可以是液体或固体。
将样品称取一定的量，然后按照一定的比例与适量的生理盐水进行稀释，以降低样品中菌落的数量，使其适合于后续的菌落计数。
2. 平板计数将制备好的样品溶液均匀地倒入已经凝固的琼脂平板中，然后用无菌铲子或无菌玻璃棒将溶液均匀涂抹在琼脂平板表面。
待琼脂凝固后，将平板倒置放置在恒温培养箱中，以利于菌落的生长。
根据不同的样品特点和需求，可以选择适当的培养温度和时间。
3. 结果计算在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。
在菌落形成后，使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。
计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。
最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。
二、国标菌落总数检测方法的原理国标菌落总数检测方法基于微生物在适宜的培养条件下形成可见的菌落的特性进行。
其原理主要包括稀释平板法和菌落计数法。
1. 稀释平板法稀释平板法是菌落总数检测的一种常用方法。
通过将样品与一定量的生理盐水进行稀释，使菌落的数量适于计数。
然后将稀释好的样品均匀涂抹在琼脂平板上，使菌落在琼脂上生长形成可见的菌落。
根据样品的稀释倍数和计数得到的菌落数量，计算出菌落总数。
2. 菌落计数法菌落计数法是国标菌落总数检测方法的关键步骤。
在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。
然后使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。
计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。
最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。
三、国标菌落总数检测方法的应用国标菌落总数检测方法广泛应用于食品、饮用水、药品、化妆品等领域。
菌落总数测定
食品安全菌落总数测定菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
菌落总数检验工作中会遇到各种实验平板的菌落计数工作，如倾注法平板，螺旋接种平板，3M菌落总数测试纸片，滤膜法平板等。
因此要高效准确的进行各类平板的菌落计数并保存所有实验数据和图片，必须要求采用的自动计数仪器支持各类平板的自动分析。
迅数菌落分析仪器采用了菌落放大图象拍摄，高分辨率的1000万像素CCD数字成像技术和Colonfast 菌落智能识别技术。
在菌落自动计数方面，仪器可以快速完成包含细菌、霉菌、酵母菌等样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、空气沉降法平板、螺旋接种平板、3M纸片的菌落自动计数和浓度计算，这个功能可以促进我们食品卫生检验中“菌落总数”测定项目的自动化；自动计数菌落的速度高于500个菌落/秒，最小可以分辨的菌落直径可达 0.01mm；可构建专用计数模板以适应复杂实验室环境，计数误差控制在10%以内。
“迅数”是采用最多的菌落仪品牌。
食品行业适用标准：GBT 4789.2-2008 食品卫生微生物学检验菌落总数测定需要进行菌落计数的行业有：疾病控制，卫生检验中心检验检疫局质量技术监督局大学：食品科学与工程微生物发酵免疫医学检验公共卫生科学院，研究机构环境监测部门自来水公司制药企业：生物制药，化学制药，抗生素企业化妆品企业食品企业：饮料、饮用水、乳品、保健食品、糕点糖果、膨化食品、食品添加剂、粮食及其制品、酒类、调味品、微生态、保健食品消毒剂、消毒器械：消毒剂；消毒器械；生物指示剂；化学指示剂；灭菌包装物一次性使用医疗用品：输注类；导管类；诊断、治疗器具类；透析器具类；麻醉器具类；手术巾、敷料类；护理器材类卫生用品：卫生巾；尿布；皮肤、粘膜卫生用品；隐形眼睛护理用品；其他的一次性卫生用品●大肠菌群计数传统的大肠菌群最可能数(MPN)法必须经过：初发酵实验，复发酵证实试验。
食品微生物检验技术GB4789.2-2010 菌落总数测定
2. 培养 (1) 待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h。水产品 30 ℃±1 ℃培养 72 h±3 h。 (2) 如果样品中可能含有在琼脂培养基表 面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂 表面覆盖一薄层 琼脂培养基（约 4 mL）， 凝固后翻转平板，按 36 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h（水产品 30 ℃±1 ℃培养 72 h±3 h）条件进行培养。
GB 4789.2-2010 食品安全国家标 准 食品微生物学检验 菌落总数测定
一、设备和材料 二、培养基和试剂 三、检验程序 四、操作步骤 五、结果与报告
一、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和 材料如下： (1) 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 (2) 冰箱：2 ℃～5 ℃。 (3) 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 (4) 天平：感量为 0.1 g。 (5) 均质器。 (6) 振荡器。 (7) 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 (8) 无菌锥形瓶：容量 250 mL、500 mL。 (9) 无菌培养皿：直径 90 mm。 (10) pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 (11) 放大镜或/和菌落计数器。
三、 检验程序
检
样
25g(ml)样品+225ml稀释液，均质
10倍系列稀释
选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液， 各取1ml分别加入无菌培养皿内 每个皿中加入15ml~20ml平板计 数琼脂培养基，混匀 培养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 报告
四、操作步骤
1. 样品的稀释
(1) 固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲 液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min~2min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击 式均 质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。 (2) 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓 冲液或生理盐水的无菌锥形瓶 （瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠） 中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 (3) 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL，沿管 壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的 无菌试管中（注意吸管或吸头尖 端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打 使其混 合均匀，制成 1:100 的样品匀液。
菌落总数测定
菌落总数测定菌落总数测定一、设备和材料250ML 锥形瓶3个 100ML烧杯1个250ML 量筒1个 1000ML烧杯1个15*150mm试管3个 1ML刻度吸管4个培养皿7个玻璃棒1个洗耳球剪刀1把药匙2个均质器天平（感量0.1g ）电炉酒精灯二、实验准备1、平板计数琼脂的配制用天平称取11.75g 培养基于锥形瓶中加入500ML 蒸馏水加热煮沸至完全溶解高温灭菌备用2、生理盐水取4.25g 氯化钠于大烧杯中加入500ML 蒸馏水溶解取225ML 生理盐水于锥形瓶中分别取9ML 生理盐水于3只小试管中将分装好的生理盐水进行高温灭菌3、灭菌：将均质杯、100ML 烧杯、刻度吸管、剪刀、洗耳球高温灭菌备用三、取样在提交的产品中随机抽取三箱，从每箱中随机抽取未打开包装的产品1袋~3袋，抽取不低于250g 的样品作为微生物指标检验试样。
四、检验程序五、操作步骤1、称取25g 样品，放人盛有225m 生理盐水的无菌均质杯内，800or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。
2、用1ml 无菌吸管吸取1:10 样品匀液1ml ，沿管壁缓缓注人9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
3、换一只新的1ml 无菌吸管吸取1:100样品匀液1ml ，沿管壁缓缓注人9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成1:1000 的样品匀液。
4、将三个连续稀释梯度的样品原液在进行10倍递增稀释时，吸取1ml 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时，分别吸取1 ml生理盐水加入两个无菌平皿内作空白对照。
5、及时将15-20 ml冷却至46℃的平析计数琼脂培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
6、待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48±2小时。
菌落总数测定
菌落总数测定菌落总数测定一、茵落总数的概念和测定意义菌落(colony)是指细菌在固体培养基上发育而形成的能被肉眼所识别的生长物，它是由数以万计的相同细菌聚集而成的，故又有细菌集落之称。
菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clni)内，、所含能于某种周体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。
菌落总数主要是作为判定食品被细菌污染程度的标记，也可以应用这一方法观察食一中细菌的性质以及细菌在食品中繁殖的动态．以便对被检样品进行卫生学评价时提供科学依据．二、茵落总数测定的几项说明1．菌落总数的测定。
是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。
由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20％)，因而并不能测出每g或ml检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。
2．鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个，成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units，CFU)报告之。
3．每种细菌都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、PH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。
因此，要得到较全面的细菌菌落总数，应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上，并培养在不同条件下，如温度，氧气供应等。
但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定，都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的，因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。
菌落总数的测定标准
菌落总数的测定标准一、采样方案1.1 采样对象：本标准适用于各类食品、药品、化妆品等产品。
1.2 采样量：根据产品类型及实际需要，一般采样量为10-50g（mL）。
1.3 采样方法：用无菌采样器随机取样，然后将样品混匀，制成1:10的稀释液。
二、培养基2.1 选择培养基：使用国家规定的标准培养基，如营养琼脂、孟加拉红培养基等。
2.2 培养基配制：按照培养基说明书进行配制，加入适量添加剂以满足实验要求。
三、培养温度3.1 培养温度：菌落总数培养温度为36℃±1℃。
3.2 恒温培养：培养过程中需保持恒温，不得超过±2℃。
四、培养时间4.1 培养时间：菌落总数培养时间为48小时±2小时。
4.2 时间记录：记录每个平皿的培养时间，以获得准确的菌落计数。
五、结果报告5.1 计数方法：使用菌落计数器对各稀释度平皿进行计数，并记录每个稀释度的平均菌落数。
5.2 结果报告：根据平均菌落数计算出每克（mL）样品中的菌落总数，并按照规定格式填写结果报告。
六、精度要求6.1 重复精度：同一稀释度同一平皿的菌落数偏差不得超过10%。
6.2 仪器精度：菌落计数器的精度应符合国家相关标准要求。
七、空白对照7.1 空白培养基：取适量空白培养基放入恒温培养箱中，观察其是否受到污染。
7.2 空白样品：取适量空白样品（如无菌水）进行实验，观察其是否受到污染。
八、重复试验8.1 重复次数：同一批次样品至少进行两次独立实验，以验证实验结果的可靠性。
8.2 异常情况处理：如出现异常数据或不符合要求的数据，应重新进行实验或采用备用样品进行实验。
菌落总数测定
如果平板上菌落太多，不能计数时，不能 用多不可计作报告。应在最高稀释度平板 上任意选取2个1cm2的面积，计算菌落数， 除2求出每cm2面积内平均菌落数，乘以 63.6(皿底面积cm2数)。
关于均质器使用效果和对检测结果的影响， 有不同的报道： 不同食品样品采用不同的均质方法，测试 结果不同 。 不同的均质方式对金黄色葡萄球菌和大肠 杆菌的检测的影响也不同。
菌落总数的检验程序图
检样 10倍系列稀释 选择2~3个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养平皿内
每皿内加入适量培养基 (PCA)
对照试验：
检样的稀释液中往往带有食品颗粒，在这 种情况下，为避免与细菌菌落混淆，可作 一检样对照，不经培养，置4℃环境放置， 在计数时用于对照。
或可选用TTC营养琼脂作培养基。
菌落计数：
如果高稀释度平板上的菌落数比低稀释度 平板上的菌落数高，则说明检验过程中可 能出现差错或样品中含抑菌物质，这样的 结果不 可用于结果报告。
菌落总数测定
菌落的概念：
菌落（colony）是指细菌在固体培养基上经 培养后生长繁殖而形成的能被肉眼所识别的 生长物集落，它是由数以万计的相同细菌集 聚而成的。
菌落总数的定义：
样品经过处理，在一定条件下培养后(如培 养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质 等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。 所得结果包括一群在方法规定的条件下生长 的嗜中温的需氧和兼性厌氧菌。
缺点：
某些有红色颗粒的，需要注意；粘稠的液 体样品，不易分散开；表面活性比较大， 易流出；泡沫比较丰富的样品等
菌落总数测定
菌落总数测定菌落总数测定⼀、茵落总数的概念和测定意义菌落(colony)是指细菌在固体培养基上发育⽽形成的能被⾁眼所识别的⽣长物，它是由数以万计的相同细菌聚集⽽成的，故⼜有细菌集落之称。
菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表⾯积(clni)内，、所含能于某种周体培养基上，在⼀定条件下培养后所⽣成的细菌集落的总数。
菌落总数主要是作为判定⾷品被细菌污染程度的标记，也可以应⽤这⼀⽅法观察⾷⼀中细菌的性质以及细菌在⾷品中繁殖的动态．以便对被检样品进⾏卫⽣学评价时提供科学依据．⼆、茵落总数测定的⼏项说明1．菌落总数的测定。
是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成⼀个可见的单独菌落的假定为基础的。
由于检验中采⽤37℃于有氧条件下培养(空⽓中含氧约20％)，因⽽并不能测出每g或ml检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不⽣长，有特殊营养要求的⼀些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括⼀群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。
2．鉴于⾷品检样中的细菌细胞是以单个，成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因⽽在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数，⽽应以单位重量、容量或表⾯积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units，CFU)报告之。
3．每种细菌都有它⼀定的⽣理特性，培养时，应⽤不同的营养条件及其他⽣理条件(如温度、培养时间、PH、需氧性质等)去满⾜其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。
因此，要得到较全⾯的细菌菌落总数，应将检样接种到⼏种不同的⾮选择性培养基上，并培养在不同条件下，如温度，氧⽓供应等。
但国家颁发的⾷品卫⽣标准对不同⾷品的菌落总数的规定，都是根据⽤普通营养琼脂进⾏需氧培养所得的结果确定的，因此在⾷品的⼀般卫⽣学评价中并不要⽤⼏种不同的⾮选择性培养基培养。
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▪ 如果平板上菌落太多，不能计数时，不能 用多不可计作报告。应在最高稀释度平板 上任意选取2个1cm2的面积，计算菌落数， 除2求出每cm2面积内平均菌落数，乘以 63.6(皿底面积cm2数)。
▪ 按上述操作制备10倍系列稀释样品匀液。每 递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
▪ 根据对样品污染状况的估计，选择2～3个适 宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原 液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度 分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同 时分别取1mL稀释液加入2个无菌平皿作空白 对照。
▪ 及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼 脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中 保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
▪ 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫 生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖 一薄层琼脂培养基（约4mL）。
培养
▪ 琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养 48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。
▪ 如果检样是微生物类制剂（酸牛奶、酵母 制酸性饮料等），在进行菌落计数时应将 有关微生物（乳酸菌、酵母菌）排除，不 可并入检样的菌落总数内作报告。
▪ 在进行菌落计数时，检样中的霉菌和酵母 菌也不应计数。
第二法 PetrifilmTM 细菌总数试片法
PetrifilmTM 细菌总数试片法
▪ 原理：细菌具有脱氢酶能使相应的底物脱氢 而释放出氢离子，培养基中的TTC作为氢离 子的受体，在接受氢离子后被还原为红色非 溶解性产物，从而使细菌着色，达到易观察、 便计数的效果。
谢谢!
谢谢
平板接种与培养：
▪ 根据食品卫生标准要求和对样品污染情况 的估计，选择2~3个稀释度。加入样品时要 注意外来的污染。
▪ 培养基倾注的温度与厚度是实验正确与否 的关键。（倾注的温度：一般35~45℃，温 度过高会造成已受损伤的菌细胞死亡。厚 度：直径9cm的平皿一般要求15~20mL培养 基，若培养基太薄，在培养过程中可能因 水分蒸发而影响细菌的生长）。
关于均质器使用效果和对检测结果的影响， 有不同的报道： 不同食品样品采用不同的均质方法，测试 结果不同 。 不同的均质方式对金黄色葡萄球菌和大肠 杆菌的检测的影响也不同。
菌落总数的检验程序图
检样 10倍系列稀释 选择2~3个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养平皿内
每皿内加入适量培养基 (PCA)
▪ 按菌落总数平板计数法的样品制备方法进行。
▪ 样品匀液的pH值应在6.5～7.2之间，pH值过低 或过高时分别用1M NaOH或1M HCl予以调节。
▪ 合理稀释度的选择，每稀释度接种2张测试片。
▪ 接种时避免气泡产生。
▪ 培养基未凝固时勿挪动。
▪ 将测试片的透明面朝上置于培养箱内，堆叠片 数不超过20片。
▪ 缺点：
▪ 某些有红色颗粒的，需要注意；粘稠的液 体样品，不易分散开；表面活性比较大， 易流出；泡沫比较丰富的样品等
▪ 颜色特别重的，如桔黄色，掩盖了菌落；
▪ 抑菌剂浓度比较高时；辣根及辣根粉、大 蒜及洋葱制品；
▪ 某些微生物会液化凝胶，造成局部扩散或 菌落模糊的现象，大部分是芽胞杆菌。
操作要点
▪ 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300， 则对稀释度最高的平板进行计数，其他平 板可记录为多不可计，结果按平均菌落数 乘以最高稀释倍数计算。
▪ 若所有稀释度的平板上菌落数均小于30， 则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释 倍数计算。
▪ 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无 菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计 算。
36±１℃ 48±2h
菌落计数
报告
样品的稀释
▪ 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均 质杯内，8000r/min～10000 r/min均质1min～ 2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质 袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制 成1:10的样品匀液。
第一法 平板计数法
培养基改变情况
平板计数琼脂 （PCA)
胰蛋白胨 酵母浸膏 葡萄糖 琼脂 蒸馏水
5.0g 2.5g 1.0g 15.0g 1000mL
营养琼脂（NA)
蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 琼脂 蒸馏水
10.0g 3.0g 5.0g 15.0g 1000mL
样品处理添加了拍打式均质器 或等效的设备
计算公式
▪ 公式使用的前提：有两个连续稀释度在适宜 计数范围内（30～300个菌落数）
N = ∑C / [n1 + (0.1 × n2) ] × (d) N ： 样品中菌落数 ∑C ：平板菌落数之和 n1：个适数宜范围菌落数的第一稀释度（低）平板 n2：个适数宜范围菌落数的第二稀释度（高）平板 d： 第一稀释度（低）
培养温度: 每种不同样品中的细菌都有一定的生理特
性，培养时应用不同的营养条件及生理条件 可能得出不同的结果，因而应根据检测标准 的要求选择适当的培养温度和培养时间。
▪ 食品：36±１℃， 48±2h 。 ▪ 饮用水：36±１℃， 48h 。 ▪ 水产品：30±１℃， 72±3h。 (36℃培养和
30℃培养结果差别较大，同样水产品48h结果 和72h也有差别。)
菌落计数
▪ 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数 器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落 计数以菌落形成单位（colony-forming units， cfu）表示。
▪ 选取菌落数在30cfu～300cfu之间、无蔓延菌 落生长的平板计数菌落总数。低于30cfu的平 板记录具体菌落数，大于300cfu的可记录为 多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个 平板的平均数。
▪ 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌 落蔓延。
▪ 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
▪ 称重取样以cfu/g为单位报告，体积取样以cfu/mL 为单位报告。
菌落总数计算公式的改变
▪ 统计学依据： • 平板菌落数越多，结果越具有代表性； （不考虑稀释倍数和培养基的营养状况等） • 取样量越大，结果越具有代表性； （同等取样条件、排除其他方面的干扰因素）
▪ 若所有稀释度的平板菌落数均不在30~300 之间，其中一部分大于300或小于30时，则 以最接近30或平均菌落数乘以稀释倍 数计算。
菌落总数的报告
▪ 菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约。
▪ 大于或等于100时，第3位数字采用“四舍五入” 原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数来 表示结果；也可以用10的指数形式来表示，此时 也按“四舍五入”原则修约采用两位有效数字。
结果的表述-菌落总数的计算方法
▪ 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜 计数范围内，计算两个平板菌落数的平均 值再将平均值乘以相应的稀释倍数，作为 每g(ml)中的菌落总数结果。
▪ 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜 计数范围内时，按下列公式计算： N = ∑C / [n1 + (0.1 × n2) ] × (d)
▪ 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则 不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板 作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到 平板的一半，而其余一半中菌落分布又很 均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表 一个平板菌落数。
▪ 平板内如有链状菌落生长时(菌落之间无 明显界线)，则应将每条链（不同来源） 作为一个菌落计。
▪ 优点：
▪ 培养基具有良好的生产质量；
▪ 菌落计数特别方便（容易判读），红色菌落， 易于食品颗粒分开，无菌落重叠现象；
▪ 方格设计，便于计数；
▪ 菌落分布特别均匀；
▪ 平行平板菌落结果一致性比较好，这与避 免了培养基对细菌热损伤有关；
▪ 菌落蔓延或半透明菌膜现象很少发生；
▪ 安全方面：不像玻璃平皿易碎、对人员造 成潜在的伤害，另外密封比较好，不容易 直接接触。
▪ 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛 有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无 菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠) 中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
▪ 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品 匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液 的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触 及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸 管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品 匀液。
计算范例
稀释度 菌落数
1:100（第一稀释度） 232，244
1:1000（第二稀释度） 33，35
N
C (n10.1n2)d
[2 2 3 (0 2 .1 2 4 2 )3 ] 4 1 3 3 2 0 52 .2 5 14 2 0 424 7 22 57 0
检样稀释：
▪ 检样稀释时，应以无菌操作称取或量取有 代表性在样品25g（25mL）置225mL灭菌稀 释液中。固体样品应剪碎，以拍打式样品 处理器做成样品悬液（1：10）。
对照试验：
▪ 检样的稀释液中往往带有食品颗粒，在这 种情况下，为避免与细菌菌落混淆，可作 一检样对照，不经培养，置4℃环境放置， 在计数时用于对照。
▪ 或可选用TTC营养琼脂作培养基。
菌落计数：
▪ 如果高稀释度平板上的菌落数比低稀释度 平板上的菌落数高，则说明检验过程中可 能出现差错或样品中含抑菌物质，这样的 结果不 可用于结果报告。
▪ 为防止细菌增殖及产生片状菌落，在加入样 液后，应在20min内倾注培养基。检样与培 养基混匀时，可先向一个方向旋转，然后再 向相反方向旋转。旋转中应防止混合物溅到 皿边的上方。
▪ 培养基凝固后，应尽快将平皿翻转培养，保 持琼脂表面干燥，尽量避免菌落蔓延生长， 影响计数。