2014年博士考试高级动物生物化学试题

2014年攻读博士学位研究生入学考试初试试题答案 ,中英文回答均可）一、名词解释（20分）（每题4分序列的序列。

SD1. Shine-Dalharno sequence SD序列:mRNA中用于结合原核生物核糖体能与细菌嘌呤的碱基序列，上游7-12个核苷酸处，有一段富含在细菌mRNA起始密码子AUG AUG处开始翻译。

16SrRNA3'端识别，帮助从起始：细胞中的某些蛋白质分子可以识别正在合成的多肽或chaperon分子伴侣2、Molecular
这一类从而帮助这些多肽转运、折叠或组装，部分折叠的多肽并与多肽的某些部位相结合，伴侣”分子本身并不参与最终产物的形成，因此称为分子“3、Cori cycle乳酸循环：肌肉收缩通过糖酵解生成乳酸。

在肌肉内无6-P-葡萄糖酶，所以无法催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖。

所以乳酸通过细胞膜弥散进入血液后，再入肝，在肝脏内在乳酸脱氢酶作用下变成丙酮酸，接着通过糖异生生成为葡萄糖。

葡萄糖进入血液形成血糖，后又被肌肉摄取，这就构成了一个循环(肌肉-肝脏-肌肉)，此循环称为乳酸循环。

4.Melting temperature熔解温度：双链DNA熔解彻底变成单链DNA的温度范围的中点温度。

5. Specific activity比活:用于测量酶纯度时，可以是指每毫克酶蛋白所具有的酶活力，一般用单位/mg蛋白来表示
二、简答题（50分）
1、简要说明RNA功能的多样性。

（8分）
1、RNA在遗传信息翻译中起决定作用。

(mRNA起信使和模板的作用，rRNA起着装配作用，tRNA 起转运和信息转换作用)。

2、RNA还具有重要的催化功能。

也就是核酶(酶除了蛋白质还有RNA)的作用。

3、RAN转录后加工和修饰需要各类小RAN和蛋白质复合物。

RNA转录后的信息加工十分复杂，其中包括切割、修剪、修饰、异构、附加、拼接、编辑和再编码等。

这些过程都需要很多特殊的RNA参与才能完成。

比如snoRNA(核仁小RNA)指导rRNA前体的甲基化、假尿苷酸化和切割。

4、RNA对基因表达和细胞功能具有重要调节作用。

反义RNA可通过与靶部位序列互补而与之结合，或直接阻止其功能，或改变靶部位构象而影响其功能。

ＰＡＧＥ的中英文全称，简述它的作用原理？SDS-、写出2．
用作用:聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语: polyacrylamide gelelectrophoresis，简称PAGE)。

寡核苷酸于分离蛋白质和简称一亚甲基双丙烯酰胺(:聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N，N'原理作用下，聚合交联形四甲基乙二胺(TEMED)，N，N，N'，N' Bis)在催化剂过硫酸铵(APS)立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。

成的具有网状 3、简述酮体是怎么形成的？有何作用？（８分））酮体是肌（2 (1)酮体是脂酸在肝内正常的中间代谢产物，是甘输出能源的一种形式；肉尤其是脑的重要能源。

酮体分子小，易溶于水，容易透过血脑屏障。

体内糖供应不足（血糖降低）时，大脑不能氧化脂肪酸，这时酮体是脑的主要能源物质。

鸡蛋清中有一种对生物素亲和力极强的抗生素蛋白，它是含生物素酶的高度专一的抑制、4６分）剂，请考虑它对下列反应有无影响？（（１）葡萄糖生成丙酮酸（２）丙酮酸生成葡萄糖（３）核糖－５－磷酸生成葡萄糖（４）丙酮酸生成草酰乙酸生物素是丙酮酸羧化酶的辅基，该酶可以羧化丙酮酸生成草酰乙酸并进而逐步生成葡萄2糖。

因此，鸡蛋清中对生物素亲和力极高的抗生物素蛋白对反应1和3无影响，对方应和4有影响。

5、基因文库与ｃＤＮＡ文库有何不同？（８分）部分酶切后，将酶限制性内切酶DNA，通过基因测序仪用基因文库:指一个生物体的基因组将包DNA片段的载体分子的集合体，载体切片段插入到DNA分子中，所有这些插入了基因组含这个生物体的整个基因组，称为这个生物体的基因文库 mRNA：是以mRNA为模板，在反转录酶作用下合成的互补DNA，它的顺序可代表序列。

cDNA 文库拷贝组成的文库称为cDNA种类的文库
cDNA:由来自细胞或组织mRNADNA６、Ｈ５Ｎ１禽流感病毒株中的Ｈ代表什么？Ｎ代表什么？（５分），有如病毒的钥匙，用来打开及入侵人类或牲畜的细胞；(H 代表血细胞凝集素) 神经氨酸酶N 代表，是帮助病毒感染其他细菌的酵素。

７、什么是核酸的变性？核酸的变性与降解有什么不同？（５分）维系核酸二级结构的氢键和碱基堆积力受到破坏，在物理和化学因素的作用下，核酸的变性：由双链解旋为单链的过程DNA．
核酸的降解：核酸由各种水解酶催化逐步水解，生成核苷酸、核苷、戊糖和碱基等。

三、论述题（３０分）
1、利用所学生物化学知识论述动物体内ＣＯ、ＨＯ和ATP是怎样生成的？（12分）２２1、水：生物体内水生成主要有以下几个生理过程：A、蛋白质合成（脱水缩合）；B、DNA复制和RNA合成；C、呼吸作用（有氧呼吸第三阶段）；D、糖酵解、三羧酸循环
代谢物上的氢原子被脱氢酶激活脱落后，经过一系列的传递体，最后与激活的氧结合生成水的全部体系，此过程与细胞呼吸有关，所以将此传递链称为呼吸链（respiratory chain）
2、CO2：
呼吸作用（有氧呼吸第二阶段及生成乙醇的无氧呼吸第二阶段）、三羧酸循环
生物氧化中CO2的生成是代谢中有机酸的脱羧反应所致。

有直接脱羧和氧化脱羧两种类型。

按脱羧基的位置又有α-脱羧和β-脱羧之分。

3、ATP
呼吸作用（有氧呼吸第一、二、三阶段）；糖酵解、三羧酸循环
氧化磷酸化（oxidative phosphorylation）是指在生物氧化中伴随着ATP生成的作用。

有代谢物连接的磷酸化和呼吸链连接的磷酸化两种类型。

即ATP生成方式有两种。

一种是代谢物脱氢后，分子内部能量重新分布，使无机磷酸酯化先形成一个高能中间代谢物，促使ADP变成ATP。

这称为底物水平磷酸化。

另一种是在呼吸链电子传递过程中偶联ATP的生成。

生物体内95%的ATP来自这种方式。

2、从组织中提取和分离蛋白质的基本原则是什么？根据这一原则应当注意什么？蛋白质分离纯化常用的方法有哪些？简要说明这些方法依据蛋白质的何种理化性质？（18分）
蛋白质分离提纯的一般原则
1. 前处理
把蛋白质从原来的组织或溶解状态释放出来，保持原来的天然状态，并不丢失生物活性。

常用的方法：匀浆器破碎、超生波破碎、纤维素酶处理以及溶菌酶等。

超声波破碎法：当声波达到一定频率时，使液体产生空穴效应使细胞破碎的技术。

超声波引起的快速振动使液体局部产生低气压，这个低气压使液体转化为气体，即形成很多小气泡。

由于局部压力的转换，压力重新升高，气泡崩溃。

崩溃的气泡产生一个振动波并传送到液体中，形成剪切力使细胞破碎。

粗分级．2
分离可用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。

这些方法的特点是简便、处理量大，3．细分级
样品的进一步纯化。

样品经粗分离以后，一般体积较小，杂蛋白大部分已被除去。

进一步纯化，一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。

必要时还可选择电泳、等电聚焦等作为最后的纯化步骤。

结晶是最后的一步
分离纯化的方法：1．分子大小；
2. 溶解度；
3. 电荷；
4. 吸附性质；
5. 对配体分子的生物亲和力等。

(一)根据分子大小不同的纯化方法
1. 透析利用蛋白质分子不能通过半透膜，使蛋白质和其它小分子物质如无机盐、单糖等分开。

2.密度梯度离心蛋白质颗粒的沉降系数不仅决定于它的大小，而且也取决于它的密度。

3.凝胶过滤利用蛋白质分子大小，因为凝胶过滤所用的介质是凝胶珠，其内部是多孔的网状结构。

当不同的分子大小的蛋白质分子流过凝胶层析柱时，比凝胶珠孔径大的分子进入珠内的网状结构，而被排阻在凝胶珠之外随溶剂在凝胶珠之间的空隙向下移动并最先流出柱外，比网孔小的分子能不同程度底自由出入凝胶珠的内外，由于不同大小的分子所经路径不同而得到分离。

大分子先被洗脱下来。

小分子后被洗脱
(二)利用溶解度差别的纯化方法
1．等电点沉淀和PH的控制蛋白质处于等电点时，其净电荷为零，由于相邻蛋白质分子之间没有静电斥力而聚集沉淀。

因此在其他条件相同时，它的溶解度达到最底点，利用等电点分离蛋白质是一种常用的方法。

2. 蛋白质的盐溶和盐析中性盐可以增加蛋白质的溶解度，这种现象称为盐溶。

盐溶作用是由于蛋白质分子吸附某种盐类离子后，带电层使蛋白质分子彼此排斥，而蛋白质分子与水相互作用加强了，因而溶解度增加
当溶液的离子强度增加到一定数值时，蛋白质的溶解度开始下降。

当离子强度足够高时，。

盐析很多蛋白质可以从水溶液中沉淀出来，这种现象称为
盐析作用的主要原因是大量中性盐的加入使水的活性降低，原来溶液的大部分甚至全部的自由基水转变成盐离子的水化水。