中药药理学实验课教案

实验一附子炮制前后致小鼠中毒死亡的情况比较

实验目的：用小鼠死亡数观察附子炮制前后毒性的不同

实验原理：附子的有毒成份主要是乌头碱。它的性质不稳定，经长时间用水浸泡和加热煎煮炮制，都可使乌头碱水解成毒性较小的苯甲酰乌头胺和乌头胺。生附子中乌头碱含量高，经过炮制后乌头碱含量减少，毒性也降低，引起动物中毒死亡的剂量就比生附子大得多。实验器材：小鼠笼（或罐）、电子天平、注射器（1ml），小鼠灌胃针头。

药品：生附子和熟附子水煎液1g/1ml、苦味酸。

材料：小白鼠。体重18-22g，雌雄不拘。

实验方法

1，取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的生附子和炮制后的附子水煎液灌胃。30min后观察两组小鼠中毒症状和死亡数有无不同。

2，生附子灌服后约20min动物出现腹部收缩，身体摇摆，步态不稳和不安静等现象；30min 左右可能死亡。而炮制附子水煎液灌服后则无此中毒现象。观察结果并记录。

实验结果：

思考题：

1.中药炮制后对临床有何指导意义

2.为预防附子中毒，应如何降低其毒性

延胡索炮制前后镇痛作用的影响

实验目的：通过醋酸扭体法观察延胡索炮制前后镇痛作用的变化

实验原理：延胡索的醇制浸膏、醋制浸膏、散剂等均有明显镇痛作用。延胡索乙素镇痛作用最强，丑素次之，甲素较弱。延胡索乙素为镇痛主要有效成分，其镇痛作用较吗啡弱但优于复方阿司匹林，对钝痛的作用优于锐痛。与吗啡等麻醉性镇痛药相比副作用少而安全，没有成瘾性。镇痛时对呼吸没有明显抑制，也无便秘等副作用。生品中游离生物碱难溶于水，煎液中有效成分低，醋制后生物碱成盐，易溶于水，镇痛作用增强。

左旋四氢巴马汀是一个多巴胺受体阻断剂，其镇痛作用机制可能与阻断脑内多巴胺D1 受体，使纹状体亮氨酸脑啡肽含量增加有关。

实验方法：

取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的生延胡索和炮制后的延胡索水煎液灌胃。45分钟后分别腹腔注射0.7％冰醋酸溶液。15min后观察小鼠们15分钟内扭体的次数。

实验结果：

思考题：

1.炮制后延胡索镇痛作用增强的原因

实验二：生大黄制大黄对小肠运动的影响

实验目的：观察泻下药大黄、制大黄对小白鼠肠蠕动的影响以及它们的药理研究。

实验原理：大黄的主要成分为蒽醌衍生物及二蒽酮类衍生物，大黄为泻下药的代表，临床发现病人大量服用大黄后会产生继发性便秘，在中医治疗中，常以芒硝、厚朴、枳实等配伍应用，以减轻此副作用。现代研究表明，是因为大黄同时含有泻下作用的蒽苷及止泻作用的鞣质所致，蒽苷泻下作用强而作用时间较短，鞣质止泻作用强度较弱而作用时间长，大黄不同炮制品的致泻强度亦不同，生大黄的致泻强度高于熟大黄（九蒸九晒品、热压一次品及热压三次品）和制大黄酒（或醋）炒后泻下效力降低30%左右。有研究表明，大黄煎煮时间越长，致泻作用愈小，以热水浸50℃以下减压浓缩为好。

实验步骤：取体重20±2g相近的小白鼠8只，随机均分为2组，每组4只，用苦味酸做标记。分别用上述3种炭末液0.2ml/10g体重灌胃。给药30min后脱颈椎处死，切开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲肠的肠管，置于托盘上。轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为“小肠总长度”，从幽门至炭末前沿的距离作为“炭末在肠内推进距离”，取各组小鼠平均值，用公式计算炭末推进百分率。

炭末推进率=炭末在肠内推进距离（cm）÷小肠全长（cm）×100%

实验结果：

思考题：1.大黄泻下的主要成分及机制

2.大黄炮制前后化学成分有何变化

实验三：猪苓泽泻对家兔的利尿作用

实验目的：学校导尿法，观察猪苓泽泻的利尿作用

实验原理：猪苓味甘、淡、性平，归肾、膀胱经，具有利尿渗湿作用,且作用于黄芪、玉米须、木通、淡竹叶等。主治小便不利、水肿、泄泻、淋浊、带下。实验研究表明猪苓的利尿作用与抑制肾小管对水、电解质的重吸收有关,但其利尿特点及分子生物学机制尚不明确。研究发现，其为利尿药，也有降血压的作用，可医治肾性水肿、心脏性水肿、烦热口渴、小便不利、泻痢及其他新陈代谢障碍等。猪苓提取物对肾结石大鼠实验表明: 猪苓具有明显促进肾排泄Na+、k+、cl-,而抑制尿ca+排泄及抑制尿草酸钙结晶的生长与聚集作用，同时其肾脏骨桥蛋白(OPN) mRNA的表达也得到抑制，表现出明显的利尿和抑制尿结石形成作用，并具有明显的肾功能保护作用。研究发现，猪苓含钾量不高(30mg) ，亦不稀释血液，其利尿作用可能是由于抑制了肾小管对电解质和水的重吸收。

泽泻性寒,味甘、淡，归肾、膀胱经。具有利水渗湿、泄热之功效。用于小便不利、水肿胀满、泄泻、尿少、痰饮、眩晕、热淋涩痛等症。泽泻有明显的利尿作用,这与其含有大量的钾盐有关。泽泻可用于小便不利、水肿胀满、泄泻尿少、痰饮眩晕、热淋涩痛、高脂血症、泽泻含三萜类化合物及甾醇、生物碱、苷类、黄酮、有机酸、氨基酸、多糖、挥发油等成分。研究发现，泽泻对人及家兔均有利尿作用，可使健康人尿量增加63%，尿中排钠、尿素量也增加，而泽泻经甲醇、苯和丙酮提取的组分T 10mg/kg给药可使猫和兔的血压下降。实验步骤：取一只家兔称重,固定，耳缘静脉注射生理盐水10ml/kg,固定在手术台上，插导尿管，排空膀胱内尿液，收集5～10min内尿液两次，一只家兔灌胃猪苓泽泻水煎液，另一只灌胃等量的生理盐水，30min后收集30min的尿液。

实验结果：

思考题：

1.影响中药利尿的因素有哪些？

2.猪苓利尿作用机制

3.泽泻利尿作用机制

实验四三七对小鼠出血时间和凝血时间的影响

实验目的：学习玻片法测定出血时间及凝血时间的测定，观察三七缩短出血时间的作用

实验原理：三七具有良好的止血功效，能明显缩短出血和凝血时间。研究表明，三七的止血成分主要为三七素（Dencichine）。三七素能促使血小板聚集、变形，释放ADP、血小板因子Ⅲ和钙离子等物质而达到止血作用。三七中含有的三七皂苷与人参皂苷均对ADP诱导的家兔血小板聚集有明显抑制作用，且表现出剂量——反应模式。在同等剂量下三七总皂苷与人参总皂苷的作用没有明显差异。三七皂苷表现出对血浆凝血因子与血小板聚集性均有抑制作用。且在对血小板聚集的抑制方面，三七皂苷与人参皂苷的作用相当。人参三醇型皂苷具有溶血作用，人参二醇型皂苷的溶血活性很低。因此，三七具有活血化瘀的功效！

实验步骤：取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的三七和等量的生理盐水灌胃。30min后剪去小鼠尾端尾巴3mm左右，每隔30秒用滤纸轻轻吸除尾巴上的血，直至血流自然停止。然后45min左右，眼球取血滴于再玻片上两滴。计时，每隔30秒用针头轻佻，直至有血丝出现，马上挑另一只予以验证。即为凝血时间。

实验结果：

思考题：

1.三七及三七伤药片对凝血时间有何影响，此作用临床意义何在？

2.测定凝血时间有何临床意义？