食品微生物快速检测常用方法-ATP生物发光法测菌落总数.
食品中微生物快速检验技术
第五章 食品中微生物标准检验与分析技术
第一节 3M测试片快速分析技 术
第一节 3M测试片快速分析技术
一、什么是3M测试片？
第六章 食品中微生物快速检验技术
第一节 3M测试片快速分析技术
二、3M测试片的优点
1. 工作效率的极大提高 根据大量数据统计，使用 3M Petrifilm， 可以提高实验室工作效
腺苷一磷酸 荧光
第五节 利用酶促反应定量检测微生物
三、 MTT法检测总菌落数
检测原理为活体微生物线粒体中含有琥珀酸脱氢酶，能 使外源性MTT（噻唑蓝）还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜 (Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
Formazan结晶形成的量与活菌数成正比。用酶联免疫检 测仪在490nm波长处测定其光吸收值， 可间接反映活菌细胞数量。
因此只要先用标准方法对比 做出标准曲线，就可以达到快速 定量检测菌数的目的。
第六章 食品中微生物快速检验技术
第三节 利用电导率快速分析测试技术
一、 电导率快速检测微生物技术原理
样品中微生物数量越多，越快进入对数生长期。培养基电导率 发生跃迁的时间越短。
第六章 食品中微生物快速检验技术
第三节 利用电导率快速分析测试技术
• 3. 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留
其③酶酶的作活用性的。底物（显色剂）
第六章 食品中微生物快速检验技术
酶 酶标记抗体
抗体 抗原
1.将抗体包被在固相载体上。 2.如样品中含有抗原，则结合 为抗原抗体复合物。 3.再加入酶标记抗体，则结合 为抗体-抗原-酶标记抗体复合 物。
4.酶催化底物并显色。
第五节 利用酶促反应定量检测微生物
一、利用葡萄糖醛酸酶定量检测E. Coli
食品中有害微生物快速检测方法概述
(一)、概述食用被微生物污染的食品而导致的疾病，称作食源性疾病。
导致这类疾病的微生物叫食源性致病菌。
随着人们居住和卫生条件的不断改善，以及抗生素的滥用，人类对病菌的抵抗能力却在不断下降，食源性疾病一直呈上升的趋势。
因此，对食品中致病菌的监测和检验也就越显示其重要性，常规的检验大多依靠培养目标微生物的方法来确定食品是否受到此微生物的污染，这些方法需要一定的培养时间，少则2～3天，多至数周，才能确定。
而现行有效的一些快速检测方法不仅可以大大缩短检测时间提高微生物检出率并可用于微生物计数、早期诊断、鉴定等方面，以做到快速、简便、准确。
快速方法包括了微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等领域。
（二）、常见、常用的快速、简便的检测微生物数量的方法如下：1、活细胞计数的改进方法（1）、旋转平皿计数方法（2）、疏水性栅格滤膜法（HGMF）或等格法（isogrid method）（3）、血膜系统（Pertrifilm）（4）、酶底物技术（ColiComplete）（5）、直接外荧光滤过技术（DEFT）（6）、“即用胶”系统（SimPlate）2、用于估计微生物数量的新方法（1）、阻抗法（2）、A TP生物发光技术3、其他方法（1）、微量量热法（2）、接触酶测定仪（3）、放射测定法（三）、食品中沙门氏菌的快速筛检方法1、沙门氏菌显色培养基法2、免疫学方法3、分子生物学方法4、自动传导法（四）、大肠杆菌O157：H7快速检测方法大肠杆菌O157：H7肠出血性大肠杆菌的主要血清型，自1982年在美国被分离并命名以来，陆续发现本菌与轻度腹泻、溶血性尿毒综合症、出血性肠炎、婴儿猝死综合症等多种人类病症密切相关，是食源性疾病的一种重要致病菌。
E.coli O157：H7属于肠杆菌科埃希氏菌属，为革兰氏阴性杆菌，有鞭毛。
近年来作为食品卫生及流行病学的研究热点，E.coli O157：H7的分离和鉴定方法已取得了较大进展。
快速ATP卫生监控系统的使用
快速ATP卫生监控系统的使用一、确立关键检测点（标本点）开始拭抹之前，应确定要检测的关键区域、关键点或标本点，确定好关键区域并定期检测后，关键点的检测将能反映出工作区域整体洁净度的真实状况。
二、收集检测数据并设定限定值您须要汇聚各种参照数据以便成立通过、警戒、不通过的rlu限定值标准，这样您就可以推论您已确定的关键点目前的卫生状况。
保存原始数据以便与以后的检测相比较，也可用来监控卫生状况的改进。
建议收集下列数据资料：1、清洁前关键点的数据这些数据提供更多了洁净前表面污染程度的有关信息。
首次食物残渣去除或首次冲洗后，随后的几天应付每个关键点采样5次以上。
标本应当源自每次洁净前肉眼看看上很整洁的表面。
2、清洁后关键点的数据当洁净达至正常工作所建议的标准后，检测表面并记录结果。
检测时应使用相同的拭抹技术，在同一个边线挑选五个相同的时间展开检测。
这样就可以表明常规洁净后可以达至的标准。
3、严格清洁后的关键点数据搜集参照数据后，就可以通过图表去同意每个关键点的限定值，见到下表中：关键点123污染洁净严苛洁净第一次524104第二次857153第三次48980第四次763192第五次615101关键点的参照数据汇聚后，可以通过以下运算获得常规检测工作须要的通过、警戒、不通过的rlu标准：1．通过计算清洁或严格清洁一行的rlu平均值，这个值就是您的标准限定值。
比如：洁净＝（10＋15＋8＋19＋10）/5＝12.4≈122．不通过限定值由通过值除以2获得。
例如：不通过＝12.4×2＝24.8≈253．警戒限定值介乎通过和不通过限定值之间。
有些用户挑选不设立警戒值，有些则把不能通过限定值设定为高出通过限定值一档。
设警戒值范例：通过(pass)标准＝12警戒(caution)标准＝13至25不通过(fail)标准＝26三、推荐的限定值设置仪器初次采用时，我们存有一组所推荐的通用型限量数值。
这些限量数值就是根据gb/t4789.2-2021《食品卫生微生物学检测-菌落总数测量》，由sas统计数据软件分析谋出验菌落总数与atp仪器检测rlu值税金重回方程式去确认的。
食品微生物检验中ATP发光法的应用
论著·防保康复CHINESE COMMUNITY DOCTORS 中国社区医师2017年第33卷第24期食品卫生关乎人们的身体健康与生命安全，是人们普遍关注的一个社会问题。
随着人们对食品卫生质量要求的不断提高，食品卫生检验技术也在不断地完善和进步。
微生物检验是确保食品安全卫生的一个重要环节，是对食品质量的重要保障。
但是，在食品微生物检验的过程中，影响检验质量的因素是多方面的，如果不能很好地对这些影响因素进行有效控制，检验结果就可能有很大的偏差，使得食品卫生无法得到保证。
因此，对食品微生物检验的质量控制进行全面的探究是非常重要的。
食品检验中现代生物技术应用的重要性一个较高品质的食品安全方面的检验能够在一定程度上保证食品的安全性。
最近这些年我们国家对于食品安全的问题越来越重视，借助了现代生物理论作为基础，现代生物技术能够应用到的领域也变得越来越广泛了。
除此以外，生物技术在近些年越来越有优势，有更加安全并且环保、能够精准地进行测试和检验等特点，在食品的安全检验当中运用得十分顺手。
要保证食品的安全性，传统的生物以及食品的检验技术是不具有相关的优势的，现代生物技术具有良好的发展前景。
为此，本文以ATP技术为例对其检测方法进行深入探究。
ATP 生物发光法分析ATP 生物发光法是一种较为高效且操作便捷的检测方法，只需几分钟便可得到检测结果[1]。
技术原理为将细菌内的ATP从自由可溶解的状态中释放出来，在有荧光素酶、镁、氧气存在的条件下和虫荧光素发生反应产生荧光，通过对荧光信号的判断对ATP 的含量进行推测和计算，以检测样品中的含菌量。
其反应过程如图1所示。
以往ATP 生物发光仅用于细菌、酵母以及其他真菌的检测工作中。
但其缺陷是灵敏度不高，对于细菌数量也有严格限制，一般在103～104CFU/mL。
相关技术人员以及学者研究开发了ATP 再生系统，提高了此方法的灵敏度，从而有效弥补了传统ATP 发光法的缺陷。
ATP发光技术快速检测细菌总数研究(卫生工程学)
ATP发光技术快速检测细菌总数研究马妮, 赵虹, 张旭（辽宁省疾病预防控制中心，沈阳，110005）[摘要]：目的：ATP发光技术快速检测细菌总数的可行性。
方法：比较ATP生物发光值与平板计数法对细菌总数进行检测。
结果：检测结果相关性研究分析表明两者在一定范围内具有显著相关性。
结论：ATP生物发光法操作简便，应用范围广，可应用于对食品中细菌总数的快速检测。
[关键词] ATP；细菌总数；相关性The ATP bioluminescence method for rapid determination oftotal bacteriaMa Ni, Zhao Hong, Zhang Xu( Shenyang, )Abstract Objective Feasibility of ATP bioluminescence method for rapid determination of total bacteria. Methods compared ATP bioluminescence method and plate count for colony total examination. Results The Correlation research indicates that they are remarkable relative in proper range. Conclusion ATP bioluminescence method is simple and wide application. It can be used for the colony total in food rapid detection.Key words: ATP; colony total; relativity菌落总数测定是食品微生物国标检测中的一个重要指标［1］，主要是作为判定食品被细菌污染程度的标志［2］。
ATP生物发光法在快速检测物体表面清洁度中的应用
ATP生物发光法在快速检测物体表面清洁度中的应用刘阳;牟金明【摘要】[目的]建立一种快速、准确检测物体表面清洁度的方法.[方法]以ATP生物发光微生物检测技术为指导,提取重组的萤火虫荧光素酶并配制成荧光反应试剂,测定其与ATP发光反应值的线性关系;根据ATP含量与细菌数量成正比例关系原理,测定物体表面ATP发光强度值,同时用国标平皿计数法测定其菌落总数,两者对比分析.[结果]ATP生物发光法检测的相对荧光值与物体表面的菌落总数存在良好的线性相关性,利用ATP发光法实时检测细菌总数可以很好地弥补国标法的不足.[结论]ATP生物发光法与传统的细菌总数国标平板计数法相比较具有操作简便、快速灵敏、成本低廉、绿色环保等优点,可以快速、准确地检测物体表面清洁程度.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】4页(P125-128)【关键词】ATP生物发光法;菌落总数;物体表面;清洁度【作者】刘阳;牟金明【作者单位】吉林农业大学农学院,吉林长春130000;吉林农业大学农学院,吉林长春130000【正文语种】中文【中图分类】TS207.4细菌总数检测是食品卫生学领域的重要检测指标，主要是用来判断食品等被污染的程度。
对细菌总数进行快速准确地检测一直是该领域内重要的研究课题。
对细菌总数进行检测的国标方法是平板计数法[1]，该方法测试时间长，操作繁琐，不适合现场检测。
检测的时效性在食品等行业尤为重要，在加工过程中实时的监控生产环境更是防患于未然的根本方法，显然这是国标法无法做到的。
ATP生物发光微生物检测技术是一种以生物发光反应为基础的快速检测技术[2]，此技术用生物发光法测定细菌体中ATP的含量，再利用细菌体ATP含量与菌落总数成正比这一原理，推算出菌落总数[3]。
与传统的细菌总数国标平板计数法相比，ATP生物发光微生物检测技术具有操作简便、快速灵敏、成本低廉、绿色环保等优点。
利用ATP发光法实时检测细菌总数可以很好地弥补国标法的不足，两者相互辅助，相得益彰。
ATP发光法在食品微生物检验中的应用
ATP发光法在食品微生物检验中的应用发表时间：2019-06-05T15:27:52.043Z 来源：《中国西部科技》2019年第6期作者：申新[导读] ATP发光法在食品微生物检验中的有效利用，一方面能够为传统食品检测平台提供更高效且精准的微生物识别平台，以便提供更详细的资料，保证食品的安全性；另一方面，凭借ATP发光法的应用，使得生物监测灵敏性得以显著增强，为后续食品检测技术的发展也奠定了扎实基础。
本文基于ATP发光法在食品微生物检验中的应用展开分析，期望凭借生物技术能够为后续食品检验工作提供良好参照。
安达市质量技术监督检验检测中心食品安全问题是决定我国群众生活质量与健康权益落实程度关键要素，若是食品安全存在问题，则群众的生命健康与市场权益便很难得到保障，而随着食品加工技术的不断发展，目前许多食品潜在的问题凭借传统食品检验方法已经难以发觉，因此在监测技术方面也需要给予足够的重视，才能使食品安全检测质量得以保障。
因此，ATP发光法在食品微生物检验中的应用，理应得到食品安全相关部门的关注。
一、食品微生物检验技术应用的必要性食品微生物检验技术是目前食品安全管理工作中较常见的应用措施，在检验过程中，通常需要借助微生物学的理论与方法，检查食品内潜藏的微生物种类、数量与特点，以此分辨是否会对人类身体健康造成损害，并根据相关检测指标判定食品可否进入市场平台。
站在长远角度来看，食品微生物检验技术是以源头管控为主的检验措施，特别近些年国民对于食品安全的要求越来越高，而生物技术在近些年的发展中也逐渐展露优势，则便使得生物检测技术更贴合了安全与环保的要求，并随着微生物检测设备的应用，更能够精准的判定不同食品中的风险，因此食品微生物技术在食品安全管理系统中十分常见。
而结合以往资料可知，食品微生物检验技术可分为传统与现代两个部分，其中传统微生物的器械操作较为传统，在食品安全性与微生物特性检测方面不具备专业性的优势，因此经由检测的食品仍存有潜在风险。
食品微生物检验中ATP发光法应用
浅析食品微生物检验中ATP发光法的应用摘要：本文就atp生物发光法的检测原理、检测步骤、特点、检测的影响因素及在食品工业中的应用进行了综述，并提出了目前atp生物发光法检测中存在的问题。
关键词：atp 生物发光法；荧光素；提取剂；温度；检验1 atp 的理化性质1.1 atp广泛存在于各种活的生物体中,活的菌体中也含有atp。
细菌死亡后,在细胞内酶的作用下,atp将很快被分解掉。
atp是高能磷酸化合物的典型代表。
atp 是由一分子腺嘌呤、一分子核糖和三个相连的磷酸基团构成的核苷酸，其分子结构式如图1所示。
图1 atp分子结构式1.2 atp有两个高能磷酸键，一个低能磷酸键。
每个高能磷酸键水解时，可产生30．54kj／mol的能量。
atp是细胞内特殊的自由能载体，广泛地存在于细胞内，如细胞核、细胞溶胶、线粒体等。
易水解，且水解时可释放出大量的能量，但水解易受细胞内环境的ph、mg2+浓度等的影响。
2 atp生物发光法检测的原理及一般步骤2.1 atp普遍存在于所有活的生物体中，被用来贮存和传递化学能，称作为“能量货币”。
当生物体死亡后，在细胞内酶的作用下，atp很快被分解掉。
因此，测定样品中的atp浓度，即可推算出活菌数。
atp生物发光技术产生于20世纪70 年代中期。
1983年，moyer 等最早提出细胞内源性atp的含量可以反映细胞的活性和活细胞的数量。
同年gronroos等也证实该技术是一种可靠、灵敏度高的确定细胞活性度的检测方法。
mcelroy[最先引入荧光素酶．atp检测法，其反应机理为：在mg2+存在下，萤火虫荧光素酶以d-荧光素酶、atp、o2为底物，将化学能转化为光d-荧光素+atp+o2 oxy-荧光素+amp+ppi+h2o能，发出光量子，其发光强度(i)与atp浓度(catp)符合下列函数关系。
式中，imax为最大发光强度；km为1×1o-4。
由上式可知，当catp远小于km时，i正比于样品中的catp。
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一
ATP生物发光法检测原理
二
ATP生物发光法检测过程
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食品营养与检光法检测原理
一
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ATP存在于包括微生物在内的一切活细胞内，ATP生 物发光法是利用ATP与荧光素酶系统接触时的发光现象 建立起来一种检测方法。 各生长期的微生物均有较恒定水平的ATP含量，微生 物死亡后，ATP将很快被分解掉。因此，提取细菌的 ATP，利用生物发光法测出ATP含量后，即可推算出样 品中的含菌量，ATP浓度与活细胞数密切相关。
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ATP 生 物 发 光 法 测 菌 落 总 数
操作步骤 指示菌ATP的提取：TCA法和加热煮沸法 ATP的检测： 先用标准ATP试剂作一条标准曲线。测 量得到样品的相对发光值。 测定样品发光值,与标准曲线对比，得到 样品中的ATP含量, ATP含量可以转化为微生 物的浓度。
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ATP生物发光法检测过程
一
1.设备和试剂
2.操作步骤
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ATP 生 物 发 光 法 测 菌 落 总 数
• 设备和试剂 ATP荧光仪：包括样品过滤膜、ATP一生物荧 光反应器、荧光增强及数据处理系统。 试剂：荧光素-荧光酶试剂 、ATP提取液 、标 准ATP试剂