高效液相色谱法对化妆品中17种香豆素类化学成分的同时测定
超高效液相色谱法测定不同产地白芷中6种香豆素类成分
超高效液相色谱法测定不同产地白芷中6种香豆素类成分何冰倩;关旸;史冬玲;盛振华【摘要】白芷样品粉末(约2.5 g)用25 mL甲醇浸泡过夜后超声提取30 min,加入适量甲醇补足所失质量,提取液经0.22μm有机膜过滤,采用超高效液相色谱法测定滤液中6种香豆素类成分的含量.以Waters ACQUITY UPLC BEH-C18色谱柱为分离柱,用乙腈和水以不同比例混合的溶液为流动相进行梯度洗脱,用紫外检测器测定.6种香豆素类成分的质量浓度在一定范围内与其对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.034～0.091mg·L-1.方法用于白芷样品的分析,加标回收率为93.2％～107％,测定值的相对标准偏差(n=6)为0.64％～1.7％.对9个不同产地的白芷样品中6种香豆素类成分的含量进行聚类分析和主成分分析,结果表明:聚类分析和主成分分析的结果一致,样品被分为3类.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2019(055)005【总页数】5页(P602-606)【关键词】超高效液相色谱法;聚类分析;主成分分析;香豆素;白芷【作者】何冰倩;关旸;史冬玲;盛振华【作者单位】浙江中医药大学中医药科学院,杭州 310053;浙江中医药大学中医药科学院,杭州 310053;浙江中医药大学中医药科学院,杭州 310053;浙江中医药大学中医药科学院,杭州 310053【正文语种】中文【中图分类】O652.63白芷为伞形科植物白芷或杭白芷的干燥根。
白芷性温、味辛,归胃、大肠、肺经,可解表散寒、祛风止痛、宣通鼻窍、燥湿止带、消肿排脓[1]。
现代药理作用表明白芷中的香豆素类成分具有解热、镇痛、抗炎、扩血管、抗血小板凝集、降血压作用等[2]。
白芷来源广泛,四川遂宁是白芷之乡,其产的白芷也称川白芷。
另有杭白芷,现主要在安徽、江苏、浙江、湖南等地广泛种植。
白芷主要成分为香豆素类、挥发油以及生物碱等[3-4]。
常用化妆品中的主要化学成分及其作用分
常用化妆品中的主要化学成分及其作用分析摘要：化妆品已成为全球最畅销的商品之一，很多人在购买护肤品时过于注重品牌，而忽略了护肤品的成分，另外就算看了护肤品的成分列表，对那些陌生的化学名词的作用仍不了解。
本文就常用化妆品中的主要化学成分及其作用做出了简单的分析探讨。
关键词：化妆品；主要分成；作用引言：从化学上来讲，化妆品是由各种原料经过合理调配加工而成的复配混合物。
化妆品（或彩妆）是除了简单的清洁用品以外，被用来提升人体美丽程度的物质。
如今，化妆品已成为女性常备物品，年轻女性起床后首先要做的就是化妆。
1 油脂及作用油脂是油和脂的总称，油脂包括植物性油脂和动物性油脂。
油脂的主要成分是脂肪酸和甘油组成的脂肪酸甘油酯，是化妆品中应用最广泛的原料。
①植物性油脂分三类，干性油、半干性油和不干性油。
用于化妆品的油脂多为半干性油，干性油几乎不用于化妆品原料。
②动物性油脂用于化妆品的有水貂油、蛋黄油、羊毛脂油、卵磷脂等，水貂油具有较好的亲和性，易被皮肤吸收，故在化妆品中得到广泛应用，如营养霜、润肤霜、发油、洗发水、唇膏及防晒霜化妆品等。
蛋黄油含油脂、磷脂、卵磷脂以及维生素A、D、E等，可作唇膏类化妆品的油脂原料。
羊毛脂油对皮肤亲和性、渗透性、扩散性较好，对皮肤安全无刺激；主要作用于无水油膏、乳液、发油以及浴油等。
卵磷脂是从蛋黄、大豆和谷物中提取的，具有乳化、抗氧化、滋润皮肤的功效，常使用于润肤膏霜和油中。
2 蜡类及作用蜡类是高碳脂肪酸和高碳脂肪醇构成的酯。
这种酯在化妆品中起到稳定性、调节黏稠度、减少油腻感等作用。
①棕榈蜡精致产品为白色或淡黄色脆硬固体，具有愉悦的气味。
主要成分为蜡酸蜂花醇酯和蜡酸蜡酯。
在化妆品中主要提高蜡酯的熔点，增加硬度、韧性和光泽，也有降低粘性、塑性和结晶的倾向。
②小烛树蜡是一种淡黄色半透明或者不透明的固体。
精致产品有光泽和芳香气味，略带黏性。
主要成分为碳水化合物、蜡酯、高级脂肪酸、高级醇等。
③霍霍巴蜡是一种透明无臭的浅黄液体。
高效液相色谱-串联质谱法同时检测化妆品中6种禁用着色剂
高效液相色谱-串联质谱法同时检测化妆品中6种禁用着色剂林维宣;孙兴权;赵雪蓉;徐伟;郭桂媛【摘要】A method of high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) has been established for the simultaneous determination of six forbidden colorants including Sudan IV, Acid Violet 49, Sudan Blue 2, Solvent Red 49, Basic Violet 1 and Pigment Orange 5 in cream and powdery matrix cosmetics. The samples were extracted with ethanol-acetonitrile (3:2, v/v) solution by ultrasonic technique for 20 min, then centrifuged for purification and enriched by nitrogen blowing sequentially. The analytes were isolated on a Luna C18 column (150 mm x2. 1 mm, 5μm) by gradient elution with methanol and 10 mmol/L ammonium acetate as the mobile phases, and detected by MS/MS in the multiple reaction monitoring (MRM) mode. The qualitative analysis was based on the retention time and the relative abundance ratio of the characteristic ions, and the quantitative analysis on calibration curve method. The results showed that the limits of quantification (LOQ, S/N = 10) of the six colorants ranged from 0. 1 to 10μg/kg and the average recoveries were from 86. 67% to 98. 22% with the relative standard deviations (RSDs) from 4. 01% to 7. 01%. The method is simple and rapid with high sensitivity and good reproducibility, and suitable for the determination of the six forbidden colorants in cosmetics.%建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时测定膏状和粉状化妆品中苏丹红Ⅳ、酸性紫49、苏丹蓝2、溶剂红49、碱性紫l和颜料橙5等6种禁用着色剂的检测方法.样品经乙醇-乙腈(3:2,v/v)超声振荡提取20min、离心净化及氮吹浓缩后,在LunaC18色谱柱(150mm×2.1mm,5μm)上进行反相液相色谱分离,以甲醇和10 mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱采用多反应监测(MRM)模式进行质谱测定.根据保留时间及质谱图上特征离子的相对丰度比进行定性,外标法定量.结果表明:6种着色剂的定量限(信噪比为10计)为0.1～10μg/kg,回收率为86.67％～98.22％,相对标准偏差(RSD)为4.01％～7.01％.该方法简便、快速、灵敏度高且重现性好,适合于化妆品中禁用着色剂的定性与定量.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2012(030)005【总页数】6页(P527-532)【关键词】高效液相色谱-串联质谱;禁用着色剂;化妆品【作者】林维宣;孙兴权;赵雪蓉;徐伟;郭桂媛【作者单位】辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连 116001;辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连 116001;辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连116001;辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连 116001;大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连 116034【正文语种】中文【中图分类】O658着色剂在化妆品中的作用主要是从美容色彩学和心理学的角度评价，除此之外，尚未发现对人体有任何其他的好处。
高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素探讨
高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素探讨1. 引言1.1 背景介绍随着人们对化妆品安全性要求的提高，对于化妆品中激素的监管也变得更加严格。
开展对美白祛斑类化妆品中激素的检测研究具有重要意义。
本研究旨在探讨利用高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的多种激素的方法，为制定更加严格的激素监管标准提供参考依据。
通过对样品制备、色谱条件的优化以及方法的验证，可以实现对美白祛斑类化妆品中激素的快速、准确测定，为消费者提供更加安全有效的化妆品选择。
1.2 研究目的研究目的是通过高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素，探讨这些激素在化妆品中的含量及其对皮肤的影响。
具体来说，通过本研究可以了解美白祛斑类化妆品中激素的种类和含量，为消费者选择安全有效的化妆品提供依据。
通过验证高效液相色谱法对激素的测定准确性和灵敏度，为监管部门提供技术支持，确保市场上化妆品的质量安全。
研究激素在美容化妆品中的应用及其对皮肤的作用机制，对化妆品行业的发展具有重要意义，并为相关产品的开发提供科学依据。
通过本研究的深入探讨，可以促进美白祛斑类化妆品的研究与开发，推动行业的健康发展。
1.3 研究意义美白祛斑类化妆品在现代社会中受到越来越多消费者的青睐，而激素作为其中的一种重要成分对皮肤的美白祛斑效果起着至关重要的作用。
激素在化妆品中的使用存在一定风险，可能导致皮肤过敏、激素依赖性皮炎甚至激素激活细胞增生等副作用。
对美白祛斑类化妆品中激素的准确检测与监管显得尤为重要。
本研究旨在探讨利用高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素，为规范化妆品市场提供科学依据，保障消费者的健康和权益。
通过分析不同化妆品中激素的含量水平，可以为相关部门制定激素在化妆品中的合理使用标准提供参考，从而减少消费者在使用化妆品过程中可能受到的潜在危害。
研究结果还有助于提高高效液相色谱法在化妆品中激素分析中的应用价值，为该领域的进一步研究提供技术支持和方法指导。
高效液相色谱-质谱法同时测定染发剂中33种禁限用染料
高效液相色谱-质谱法同时测定染发剂中33种禁限用染料陈梦;胡磊;许立;周明昊【摘要】建立了高效液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)同时测定染发剂中33种禁限用染料的方法.样品用甲醇和2 g/L抗坏血酸水溶液的混合溶液溶解,正己烷净化,以5 mmol/L的乙酸铵水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,经AgilentZORBAX Extend C18柱(2.1mm× 100 mm,1.8μm)分离.在电喷雾离子模式下,采用多重反应监测模式(MRM)进行定性和定量分析.33种染料在相应的质量浓度范围内线性关系良好,线性相关系数均大于0.99,检出限为0.01～29.5 mg/kg,回收率为71％～115％.【期刊名称】《日用化学工业》【年(卷),期】2016(046)006【总页数】6页(P359-364)【关键词】染发剂;染料;高效液相色谱-质谱法【作者】陈梦;胡磊;许立;周明昊【作者单位】浙江工业大学化学工程学院,浙江杭州 310014;浙江省食品药品检验研究院,浙江杭州 310052;浙江工业大学化学工程学院,浙江杭州 310014;浙江工业大学化学工程学院,浙江杭州 310014;浙江省食品药品检验研究院,浙江杭州310052【正文语种】中文【中图分类】TQ658.3+4氧化型染发剂主要成分为芳香胺类和苯酚类有机化合物，这些化合物具有不同程度的致癌、致畸和致敏性[1-5]。
染发剂中染料成分对人体健康的影响越来越受国内外研究者的重视，所以加强和完善染发剂中染料成分的检测手段势在必行。
我国《化妆品卫生规范》(2007年版)中规定了93种暂时允许使用的染料，但是在相关检验方法项目中仅提供8种禁限用染料成分的高效液相色谱检测方法，不能较好地满足常规检测需求[6]。
严巍等[7]采用高效液相色谱法，利用酸碱平衡原理对国家食品药品监督管理局发布的国食药监保化[2012]13号附件1《化妆品中32种禁限用染料成分的检测方法》进行重建与优化，该方法稳定、耐用性好，但仍需要3个系统。
高效液相色谱法测定化妆品中17种紫外线吸收剂_毛希琴
＊ 通 讯 联 系 人 ．Ｔｅｌ：（０４１１）８４６０４４６０，Ｅ－ｍａｉｌ：ｍａｏｘｉｑｉｎ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ．ｃｎ． 基 金 项 目 ：国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 专 项 资 金 项 目 ． 收 稿 日 期 ：２０１３－０２－０６
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色
谱
第 ３１ 卷
１５％ （ｍ／ｍ）外 ，其 他 限 量 均 在２％～１０％ 范 围 内 。 化 学防晒剂的添加，多 采 用 复 配 的 形 式 以 增 强 防 晒 效 果。国内外文献中对化妆品中防晒剂的检测涉及的 检测方法 包 括：液 相 色 谱 法［２－９］、气 相 色 谱－质 谱 联 用法 以 ［１０］ 及液相色谱－质谱联用 等 ［１１－１５］ 方法。其中 高效液相色谱法的 使 用 频 率 最 高，文 献 中 涉 及 的 防 晒剂的种类少则１ 种 多 则 十 几 种 不 等，流 动 相 多 采 用含四氢呋喃和高氯酸的梯度洗脱条件。目前用于 防 晒 化 妆 品 质 量 监 管 的 主 要 方 法 是 《规 范 》给 出 的 化 学 防 晒 剂 检 测 方 法 ，涉 及 了 １５ 种 化 学 防 晒 剂 的 定 量 检 测 。 但 是 该 方 法 的 使 用 ，存 在 ３ 个 明 显 的 缺 陷 ：１． 液 相 色 谱 分 离 的 流 动 相 中 使 用 了 高 含 量 （超 过 ４０％） 的四氢呋喃，这样的 流 动 相 体 系 由 于 对 于 聚 醚 醚 酮 （ＰＥＥＫ）材 料 的 腐 蚀 性 ，普 通 的 液 相 色 谱 仪 需 要 进 行 改造后才能使用。２．采 用 高 氯 酸 作 为 酸 性 改 性 剂， 因其具强氧化性，也 会 损 害 色 谱 仪 及 色 谱 柱 的 使 用 寿命。３．样品前处 理 方 法 存 在 缺 陷，实 际 样 品 分 析 中遇到某些样品分 散 不 好，导 致 个 别 目 标 物 测 试 结 果偏低的情况。以上３个问题影响了该方法的适用 性 。 近 年 也 陆 续 有 对 《规 范 》方 法 进 行 优 化 和 改 进 的 文献 报 道。 文 献［２，３］均 采 用 甲 醇－水 为 流 动 相，在 Ｃ１８或 Ｃ８色谱柱上实现了１０～１２种常用防晒剂的 分离分析。但所涉及 防 晒 剂 的 种 类 均 未 能 覆 盖 《规 范》方法，且涉及化 妆 品 样 品 的 种 类 也 未 覆 盖 唇 膏、 指甲油等实际有防晒剂添加的样品。本文从样品前 处 理 、色 谱 柱 的 选 择 以 及 流 动 相 的 优 化 等 方 面 对 《规 范 的 １５种常用防晒剂的同时，加入了２ 种 新 的 化 学 防 晒 剂 （二 苯 酮 和 二 乙 氨 基 羟 苯 甲 酰 基 苯 甲 酸 己 酯 ）。 所 建立的方法采 用 甲 醇／异 丙 醇／水 梯 度 洗 脱，在 五 氟 苯基 （ＰＦＰ）色 谱 柱 上 实 现 了 １７ 种 目 标 物 的 基 线 分 离 ；同 时 ，该 方 法 是 采 用 常 规 液 相 色 谱 分 析 化 妆 品 中 １７种紫外线吸收剂，为化妆品的质 量 监 管 提 供 了 适 用性更强的方法。
高效液相色谱法同时测定化妆品中的七种香豆素类化合物 …
4 表 1 . 七种豆素的线性方程、重现性及检出限
化合物名称
环香豆素 双香豆素
香豆素 7- 甲氧基香豆素
6- 甲基香豆素 4- 甲基 -7- 乙氧基豆素
线性方程（R2）
y = 0.0001x + 0.0007（R2=1） Y=0.0001c-0.014（R2=1） y = 9E-05c + 0.0051（R2=1）
P/N 50131948)
定容至 5 mL，混匀。取部分溶液放入离心管中，在离心
乙腈 (CH3CN)，HPLC 级 (Fisher Chemical，P/N AC610010040)
机上于 6000 r/min 离心 20 min，离心后的上清液经 0.45 μm
标准品
有机滤膜过滤，滤液待测定用。
双香豆素（CAS No.: 66-76-2）、环香豆素（CAS No.: 518-20- 样品加标
2
仪器
标准工作溶液
Thermo ScientificTM DionexTM UltiMateTM 3000RS 四元系统 , 包括： 将标准储备液 1 用乙腈进行逐级稀释，得到浓度为 0.1 mg/L，
– LPG-3400RS 四元分析泵（具备溶剂脱气功能）
0.2 mg/L，0.5 mg/L，1 mg/L，2 mg/L，5 mg/L，10 mg/L，20 mg/L，
高效液相色谱法是较为简便的方法 9-15。国内于 2008 年在
标准 SN/T 2104/2008《进出口化妆品中双香豆素和环香豆
素的测定 液相色谱法》中采用高效液相色谱 / 紫外检测
法对化妆品中的双香豆素和环香豆素进行了测定 15。但
是该标准只测定双香豆素和环香豆素，且流动相较为复
高效液相色谱法同时测定化妆品中12种美白功效成分
451.中国食品药品检定研究院，北京 100050；2.中国药科大学，江苏 南京 211198……………………代 静1,2 高家敏1 曹 进1# 王钢力1#高效液相色谱法同时测定化妆品中12种美白功效成分建立了高效液相色谱 - 二极管阵列检测器（HPLC - DAD ）同时测定化妆品中12种美白功效成分的方法。
采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB - C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm × 5 μm)分离，以甲醇 - 0.02 mol/L KH 2PO 4溶液为流动相梯度洗脱，二极管阵列检测器多波长分析，检测波长为230、250和280 nm 。
结果表明，12种美白功效成分在2 ~ 50 µg/mL 范围内线性关系良好，方法检出限为1.6 ~ 11.4 µg/g ，定量限为2.0 ~ 28.0 µg/g 。
平均回收率为85.73% ~ 113.14%，相对标准偏差（RSD ）值为0.12% ~ 4.31%。
该方法简便、可靠，可作为化妆品中美白类功效成分的含量测定方法。
化妆品 美白功效成分 高效液相色谱法（HPLC ）Simultaneous Determination of Twelve Whitening Ingredients in Cosmetics by High Performance Liquid ChromatographyDAI Jing 1,2 GAO Jiamin 1 CAO Jin 1# WANG Gangli 1#(1.National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China; 2. China Parmaceutical University, Nanjing 211198, Jiangsu, China)Abstract ：The method for determining twelve whitening ingredients in cosmetics by high performance liquid chromatography - diode array detector (HPLC - DAD) was established. The separation was performed on a Agilent ZORBAX Eclipse XDB - C18 column (4.6 mm × 250 mm × 5 μm) eluting with the mobile phase of methanol and 0.02 mol/L KH 2PO 4, while the wavelength of 230，250 and 280 nm were selected for detection with diode array detector(DAD). The results showed good linearity within the range of 2 to 50 µg/mL. The limits of detection (LOD) were 0.8 to 11.4 µg/g, The limits of quantitation(LOQ) were 2.0 to 28.0 µg/g. The average recoveries ranged from 85.73% to 113.14%, and the RSD range was 0.12% to 4.31%. The method is simple and reliable. It can be used as a method for the determination of whitening ingredients in cosmetics.Keywords ：cosmetics whitening ingredients high performance liquid chromatography(HPLC)作者简介代静（1995—），女，硕士研究生，主要研究方向：化妆品分析检测。
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高效液相色谱法对化妆品中17种香豆素类化学成分的同时测定席海为;马强;王超;白桦;刘茜;王烨【摘要】建立了同时测定化妆品中17种香豆素类化学成分(双香豆素、7-羟基-6-甲氧基香豆素、8-羟基补骨脂素、香豆素、6,7-二甲氧基香豆素、二氢香豆素、7-甲氧基香豆素、7-甲基香豆素、补骨脂素、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素、4-甲基-7-乙氧基香豆素、2',4,8-三甲基补骨脂素、欧前胡素、异欧前胡素、二氢欧山芹醇当归酸酯、环香豆素)的高效液相色谱分析方法.样品经甲醇超声提取,以8 000 r/min离心15 min,取上清液过滤后测定.采用Agilent Zorbax SB-Phenyl柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm)分离,以水-甲醇-乙腈三元流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30 ℃.采用二极管阵列检测器多波长检测(210、220、250 nm),外标法定量.17种香豆素类化合物的定量下限(LOQ)为1 mg/kg,线性范围为0.5～60 mg/L,相关系数(r)均大于0.999.在高、中、低3种加标水平下的平均加标回收率(n=6)为86%～106%,相对标准偏差为0.3%～3.6%.该方法准确、简便,适用于化妆品中17种香豆素类化合物的测定.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2010(029)012【总页数】5页(P1168-1172)【关键词】高效液相色谱;香豆素类化合物;化妆品【作者】席海为;马强;王超;白桦;刘茜;王烨【作者单位】中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123【正文语种】中文【中图分类】O657.72;O625.1香豆素类化合物是一类具有芳香气味,母核为苯并α-吡喃酮结构的天然产物,广泛分布于植物界[1]。
在日用化妆品中,通常添加一定量的香料,以增强化妆品的香气,香料的安全性将直接影响化妆品的安全性[2]。
香豆素类化合物可被用于添加在香水、沐浴啫喱、除臭剂等日用品中,根据德国联邦风险评估研究所的研究结果,部分香豆素类化合物可引发肝损伤,在使用具有高含量香豆素类化合物化妆品的过程中,香豆素类化合物可通过皮肤接触方式进入体内,可能导致消费者达到或超过香豆素的每日耐受摄入量 0.1 mg/kg体重。
欧盟化妆品新法规 Regulation(EC)1223/2009与我国《化妆品卫生标准》、《化妆品卫生规范》中也多处限制或禁止香豆素类化合物的使用,其中双香豆素、环香豆素、醋硝香豆素、二氢香豆素、7-甲氧基香豆素、7-甲基香豆素、4-甲基-7-乙氧基香豆素、非天然的呋喃类香豆素等已被纳入禁止使用物质列表[3-5]。
目前报道的化妆品中香豆素类化学成分的检测方法主要为高效液相色谱法[6-7]、液相色谱 -质谱法[8-10]、气相色谱法[11]、气相色谱 -质谱法[12]、毛细管电色谱法[13]、毛细管电泳法[14]、微分脉冲伏安法[15]等。
其中气相色谱 -质谱法[16]可同时检测化妆品中的多种香豆素类物质,但气相色谱 -质谱法对沸点较高的香豆素成分检测时,易受色谱柱流失产生的噪音信号干扰,且对沸点相近的香豆素无法较好分离,因此定量准确性不佳。
选择高效液相色谱法测定能弥补气相色谱 -质谱检测法的缺陷,并能准确和灵敏地检测更多种的香豆素。
因此,本文建立了一种可同时测定化妆品中 17种香豆素类成分的高效液相色谱法,该法准确、简便,满足化妆品的实际检验要求,提高了现有化妆品的检测水平。
1.1 仪器与试剂Agilent 1200型高效液相色谱仪,配在线脱气机、二元泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器 (美国 Agilent公司);Milli-Q超纯水器 (美国Milli-Q公司);KQ-600B型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司);CR 21G型高速冷冻离心机 (日本Hitachi公司)。
双香豆素、7-羟基-6-甲氧基香豆素、8-羟基补骨脂素、香豆素、6,7-二甲氧基香豆素、二氢香豆素、7-甲氧基香豆素、7-甲基香豆素、补骨脂素、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素、4-甲基-7-乙氧基香豆素、2′,4,8-三甲基补骨脂素、环香豆素 (购于美国 Sigma公司),欧前胡素、异欧前胡素、二氢欧山芹醇当归酸酯 (购于中国药品生物制品研究所);乙腈、甲醇、无水乙醇 (色谱纯,美国Fisher公司);其他试剂均为分析纯。
1.2 色谱条件色谱柱:Agilent Zorbax SB-Phenyl柱(4.6 mm ×250 mm,5μm);流动相:水 (A)、甲醇 (B)和乙腈 (C),梯度洗脱程序:0～3 min,8%～14%B,8%～14%C;3～5min,14%～23%B,14%～23%C;5～11 min,23%～24%B,23%～24%C;11～20 min,24%～28%B,24%～28%C;20～30 min,28%～34%B,28%～34%C;30～32 min,34%～35%B,34%～35%C;流速:1.0 mL/min;进样量:10μL;检测波长:210nm(双香豆素、7-羟基-6-甲氧基香豆素、香豆素、6,7-二甲氧基香豆素、二氢香豆素、7-甲氧基香豆素、7-甲基香豆素、补骨脂素、二氢欧山芹醇当归酸酯、环香豆素)、220 nm(8-羟基补骨脂素、4-甲基-7-乙氧基香豆素、欧前胡素、异欧前胡素)、250 nm(8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素、2′,4,8-三甲基补骨脂素);柱温:30℃。
1.3 标准溶液的配制分别准确称取 17种香豆素类化合物标准品各 50.0 mg(精确至 0.1 mg)于 50 mL 容量瓶中,用乙腈溶解并定容(双香豆素采用体积比为100∶1的乙腈 -吡啶混合溶液定容)。
分别配成 1 000 mg/L的标准储备液。
将标准储备液配制成混合标准溶液再将其稀释成系列混合标准工作溶液,4℃避光保存。
1.4 样品前处理称取化妆品试样 0.5 g(精确至 1 mg),置于 100 mL具塞三角瓶中,加甲醇 10 mL,充分混匀后,密封,置超声波清洗器中提取 30 min,以 8 000 r/min离心 15 min,上清液过0.45μm微孔滤膜,滤液供高效液相色谱测定。
2.1 前处理条件的优化2.1.1 提取溶剂的选择香豆素类成分在甲醇等有机溶剂中均有较好的溶解度,实验分别考察了甲醇、无水乙醇、乙腈、水以及这 3种有机溶剂与水混合液的提取效率,经过比较发现,甲醇的提取回收率最高,故选择甲醇为最佳提取溶剂。
2.1.2 提取时间的选择在空白化妆品中添加相同量的 17种香豆素类成分,分别超声提取 10、15、20、25、30、35、40 min,结果表明,随着提取时间的增加,提取率逐渐增加,但当提取时间超过 30 min后,提取率下降,原因可能是超声提取时间过长导致香豆素类化学成分挥发所致。
因此确定最佳超声提取时间为 30 min。
2.2 色谱条件的优化2.2.1 色谱柱的选择分别考察了不同品牌的 C18柱 (Elite Kromasil C18、Waters Symmetry C18、PhenomenexLuna C18、Agilent Zorbax Extend C18)、C8 柱 (Elite Kromasil C8、Agilent Zorbax Eclipse XDBC8)、苯基柱 (Agilent Zorbax SB-Phenyl)的分离效果。
结果表明,17种致敏原成分在不同固定相的色谱柱上表现出显著的分离选择性差异,且在不同品牌的同种固定相色谱柱上分离选择性也有明显差异。
综合考虑分离度和分析时间,实验选择 Agilent Zorbax SB-Phenyl(4.6 mm×250 mm,5μm)柱为最佳色谱柱。
2.2.2 检测波长的选择分别对 17种致敏原成分的标准溶液进行 190～800 nm紫外 -可见光波长扫描分析,考虑到过低的波长会造成较大的基线漂移,影响定量的准确性。
因此,综合考虑各化合物的紫外光谱特性,确定采用 210、220、250 nm为检测波长 (见表 1)。
2.2.3 流动相的选择比较了不同组成的流动相,考虑到香豆素类化合物的色谱行为极其相似,分离困难,故采用甲醇 -乙腈 -水三元洗脱系统。
通过比较不同比例的甲醇-乙腈 -水洗脱条件的色谱图,确定采用乙腈 -甲醇(1∶1,体积比)作为有机相。
经过实验优化,确定“1.2”所示的梯度洗脱条件。
优化实验条件下,17种致敏原混合标准溶液各检测波长下的色谱图见图1。
2.3 方法的稳定性考察称取化妆品试样 0.5 g(精确至 1 mg),添加同等水平的 17种香豆素类混合标准品,分别按照“1.4”方法操作。
考虑样品分析的全程可在一日内完成,在 24 h内考察香豆素类成分的稳定性。
分别于室温下放置 0、3、6、9、12、24 h,再依据“1.2”色谱条件进行测定。
结果表明,17种香豆素类成分的 RSD为 0.3%～1.6%,表明此17种香豆素类成分稳定。
本方法能满足含量测定的要求。
2.4 方法的线性关系、定量下限与回收率配制质量浓度分别为 0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0 mg/L 的混合标准工作溶液依次进行测定,以色谱峰面积(y)对相应的质量浓度 x(mg/L)绘制标准曲线,17种香豆素类成分在 0.5～60 mg/L范围内线性关系良好 (见表 2),相关系数均大于 0.999,17种香豆素成分的定量下限 (LOQ,S/N=10)均为 1 mg/kg。
分别对散粉类化妆品空白样品添加不同浓度的标准溶液,依据本实验方法进行测定。
在高、中、低 3个加标水平下,每个水平平行测定 6次,17种香豆素类成分的平均回收率为 86%～106%,相对标准偏差为 0.3%～3.6%,结果见表 2。
2.5 样品的测定应用本方法分别对清洁类、膏霜类、水剂类、粉类、唇膏类等不同类型的进口化妆品和国产化妆品样品各 15件进行测定,均未检出含有香豆素类化学成分。
本文建立了高效液相色谱法测定化妆品中 17种香豆素类成分的检测方法。
研究结果表明,该方法具有操作简便、回收率高、精密度好和灵敏度高等特点,为不同种类的化妆品中香豆素类化学成分的检验提供了实用有效的方法。
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