香豆素分析
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香豆素波谱解析
波谱解析的意义
波谱解析是一种通过分析物质与电磁辐射相互作用的规律，来获取物质结构信息的 方法。
对香豆素进行波谱解析，有助于深入了解其分子结构和性质，为进一步研究其生物 活性、药物作用机制等提供重要依据。
波谱解析还可以用于香豆素的合成、质量控制和鉴别等方面，对于保障药物安全和 促进相关产业的发展具有重要意义。
数据库建设
建立和完善香豆素类化合物波谱数据库，有助于快速检索和比对化 合物结构，促进相关领域的研究和应用。
跨学科合作
加强跨学科合作，将香豆素波谱解析与其他技术手段相结合，拓展 其在不同领域的应用范围。
THANK YOU
01
食品添加剂检测
通过香豆素波谱解析，可以检测食品中 添加的香豆素类化合物，确保食品的安 全性和合规性。
02
03
环境监测
在环境监测中，香豆素波谱解析可用 于检测污染物和有害化学物质，为环 境保护提供技术支持。
香豆素波谱解析的未来发展
新技术应用
随着科技的发展，未来将有更多新的波谱技术应用于香豆素类化合 物的解析，提高解析的准确性和效率。
信号检测
通过检测共振时产生的信号，可以获得与物质内部结构相 关的信息，如化学位移、耦合常数等。
香豆素的核磁共振波谱分析
化学位移
香豆素分子中的氢原子在磁场中的位置不同，会产生不同的化学位 移值，通过分析这些值可以确定香豆素分子中的官能团类型和结构。
自旋耦合
香豆素分子中的氢原子之间会产生自旋耦合现象，通过分析耦合常 数可以进一步解析香豆素分子的结构特征。
紫外光谱法是一种基于物质吸收紫外光的特性进行成分分析的方法。当物质吸收紫外光时，电子从基态跃迁至激发态，从而 产生特定的光谱。
紫外光谱的波长范围通常在190-400nm之间，不同物质在紫外区的吸收波长和强度各不相同，因此可以通过紫外光谱进行物 质的鉴别和含量测定。
香豆素
香豆素的合成一．实验目的(1)了解香豆素的性质和用途；(2)掌握珀金反应原理及其实验方法；(3)巩固水蒸气蒸馏、重结晶等操作技术。
二．实验原理香豆素（coumarin),学名邻羟基桂酸内酯，又称香豆内酯，分子式为C9H602，相对分子质量146.15，其结构式为。
香豆素是一种具有黑香豆浓重香味及巧克力气息的白色晶体或结晶粉末，味苦，能升华。
熔点68〜701，沸点297〜299℃，不溶于冷水，溶于热水、乙醇、乙醚和氯仿。
它是一种重要的香料，常用作定香剂，用于配制紫罗兰、薰衣草、兰花等香精，也用作饮料、食品、香烟、橡胶制品、塑料制品等的增香剂。
在电镀工业中用作光亮剂。
香豆素存在于许多植物中，天然黑香豆中含有1.5%以上，工业上利用珀金反应原理来制备。
芳香醛与脂肪酸酐在碱性催化剂作用下进行缩合，生成α、β-不饱和芳香酸的反应，称为铂金反应(Perkin Reaction ) 。
香豆素是以水杨醛和醋酸酐作原料，在弱碱（如醋酸钠、叔胺等）催化下经铂金反应、酸化及环化脱水而制得：反应中生成少量反式邻经基肉桂酸，不能进行内酯环化，而生成邻乙酰氧基肉桂酸副产物，反应式如下：三．主要试剂和仪器1.试剂水杨醛4.2g（3.8ml，0.034mol）；醋酸酐10.8g（10ml，0.104mol）；三乙胺3.0g(4ml,0.03mol);或无水醋酸钠3.0g（0.036mol）；无水氯化钙、沸石、碳酸氢钠、稀FeCl3溶液、活性炭。
2.仪器50ml圆底烧瓶、回流冷凝管（直行）、干燥管、250ml三口烧瓶、水汽发生装置、抽滤装置、电热套、75°弯管。
接引管、烧杯、250ml锥形瓶。
四．实验步骤1.回流反应在50mL圆底烧瓶中，依次加入1.9mL水杨醛、2mL三乙胺及5mL醋酸酐，投入2粒沸石，配置回流冷凝管，冷凝管上连接氯化钙干燥管，将混合物加热回流2h2.水蒸气蒸馏回流结束后，将反应混合物趁热转入盛有40 mL水的250 mL 三口烧瓶中，用少量热水冲洗反应瓶，以使反应物全部转入三口烧瓶中。
香豆素6结构-概述说明以及解释
香豆素6结构-概述说明以及解释1.引言1.1 概述香豆素6是一种具有特殊结构的有机化合物，属于香豆素类化合物。
香豆素是一类重要的天然产物，在自然界中广泛存在着。
而香豆素6是在香豆素基础上结构发生变化而形成的。
香豆素6具有一个6元环的结构，其化学式为C9H6O2。
在这个环结构中，包含了一个苯环和一个呋喃环，并且两个环之间通过一个双键连接在一起。
作为香豆素类化合物的一种，香豆素6具有独特的物理化学性质。
它可以作为一种强有力的光稳定剂应用于塑料材料中，能够有效地提高塑料材料抗紫外线辐射的能力。
此外，香豆素6还具有抗菌、抗炎和抗氧化等生物活性，因此在药物研究和医学领域也有着广泛的应用前景。
本文将详细介绍香豆素6的结构特点和相关的研究进展，以期能够更全面地了解香豆素6的性质和潜在应用。
在接下来的章节中，我们将通过对香豆素6的结构要点进行分析，并总结相关研究的最新成果。
最后，我们将在结论部分对香豆素6的应用前景进行展望，希望能够为相关领域的研究提供一些启示和参考。
1.2 文章结构文章结构是指文章的组织架构和布局方式。
一个良好的文章结构可以使读者更容易理解和消化文章的内容。
本文主要讨论香豆素6的结构，按照以下三个部分进行组织。
1. 引言：在这一部分，将给出香豆素6结构的概述，并介绍本文的结构和目的。
香豆素6是一种具有重要生物活性的有机化合物，它在医药和农业领域有着广泛的应用。
本文旨在了解香豆素6的结构特征，并探讨其对生物活性的影响。
2. 正文：这一部分将重点讨论香豆素6的结构要点。
因为篇幅有限，本文将聚焦于以下两个结构要点：2.1 香豆素6的结构要点1：首先介绍香豆素6的分子式、分子量和IUPAC命名法命名。
然后详细描述其分子结构，包括它的骨架结构和功能基团的分布情况。
此外，还可以探讨香豆素6的立体构型是否具有手性，并讨论其可能的对映体。
2.2 香豆素6的结构要点2：在这一部分，可以探讨香豆素6的化学性质和反应特点。
香豆素类成分分析.ppt
说明：中药制剂成分复杂，可先用薄层 色谱分离，在紫外灯下荧光定位，找出香 豆素成分，将其吸附层刮下，用适宜溶剂 洗脱，再加入重氮化试剂，进行比色测定。 如健腰丸中补骨脂素、异补骨脂素的测定。 但应同时进行空白试验及净化回收率实验。
荧光光度法
羟基香豆素成分大多能产生强烈荧光， 用荧光光度计进行荧光测定有较高的灵敏 度及选择性。当干扰成分较多时，可先用 色谱法净化。
理化性质
荧光反应
（1）香豆素母核无荧光，呋喃香豆素荧光弱 （2）羟基香豆素成蓝色荧光，7-OH荧光最强 （3）加OH-，羟基香豆素荧光增强 （4）7-OH香豆素，6或8位有取代，荧光减弱 （5）7-OH香豆素醚化、酯化、酰化，荧光减弱
理化性质
光谱特征（紫外）
➢母核上无含氧官能团取代时 274nm——苯环 311nm——α，β-不饱和内酯
香豆素类化合物广泛分布于高等植物中， 特别是伞形科,芸香科等，在生物体内多以 游离形式或苷的形式存在。
香豆素的作用
• 1、消炎 • 2、利胆 • 3、镇咳 • 4、吸收紫外线 • 5、抗辐射
………
➢（一）结构类型 ➢（二）理化性质 ➢（三）鉴别 ➢（四）含量测定
结构类型
简单香豆素 呋喃香豆素 吡喃香豆素 其他香豆素
异香豆素 有取代的香豆素 二聚体和三聚体
结构类型
七叶内酯 （简单香豆素）
结构类型
呋喃香豆素
吡喃香豆素
结构类型
其他香豆素 仙鹤草内酯（异香豆素）
异七叶内酯（二聚体） 双香豆素
理化性质
➢ 一、物理性质 ➢ 二、化学性质 ➢ 三、荧光特征 ➢ 四、光谱特征
物理性质
性状： ➢ 游离香豆素多有完好的结晶、固定的熔
分光光度法
荧光光度法
羟基香豆素成分大多能产生强烈荧光， 用荧光光度计进行荧光测定有较高的灵敏 度及选择性。当干扰成分较多时，可先用 色谱法净化。
理化性质
荧光反应
（1）香豆素母核无荧光，呋喃香豆素荧光弱 （2）羟基香豆素成蓝色荧光，7-OH荧光最强 （3）加OH-，羟基香豆素荧光增强 （4）7-OH香豆素，6或8位有取代，荧光减弱 （5）7-OH香豆素醚化、酯化、酰化，荧光减弱
理化性质
光谱特征（紫外）
➢母核上无含氧官能团取代时 274nm——苯环 311nm——α，β-不饱和内酯
香豆素类化合物广泛分布于高等植物中， 特别是伞形科,芸香科等，在生物体内多以 游离形式或苷的形式存在。
香豆素的作用
• 1、消炎 • 2、利胆 • 3、镇咳 • 4、吸收紫外线 • 5、抗辐射
………
➢（一）结构类型 ➢（二）理化性质 ➢（三）鉴别 ➢（四）含量测定
结构类型
简单香豆素 呋喃香豆素 吡喃香豆素 其他香豆素
异香豆素 有取代的香豆素 二聚体和三聚体
结构类型
七叶内酯 （简单香豆素）
结构类型
呋喃香豆素
吡喃香豆素
结构类型
其他香豆素 仙鹤草内酯（异香豆素）
异七叶内酯（二聚体） 双香豆素
理化性质
➢ 一、物理性质 ➢ 二、化学性质 ➢ 三、荧光特征 ➢ 四、光谱特征
物理性质
性状： ➢ 游离香豆素多有完好的结晶、固定的熔
分光光度法
第二章生药的化学成分及分析方法(九、香豆素)
分布：
主要分布于松科、柏科、马兜铃科、木兰科、樟 科、芸香科、蔷薇科、瑞香科、桃金娘科、伞形科、 唇形科、菊科、姜科等植物中。 存在于腺毛、油室、油细胞或油管中。 理化性质： 无色或淡黄色油状，具特殊香气或辛辣味；溶解 性；均有一定的旋光性和 折光率，易氧化聚会成树 脂状。 功效： 发散解表、芳香开窍、理气止痛、驱风除湿、活 血化瘀、温里祛寒、清热解毒、抗菌消炎、止咳祛痰 作用。
鉴定 1.荧光法：
取生药的乙醇提取液（0.2g+5ml）,置于紫 外灯下观察（365nm），溶液呈蓝～蓝紫色荧光。
2. 异羟肟酸铁反应：
生药粉末用甲醇提取，滤液中加7%盐酸羟胺的 甲醇溶液与10%NaOH的甲醇溶液各数滴，水浴微热， 冷后，用稀盐酸调节pH至3～4，加1%三氯化铁试 液，溶液显红色或紫色。
九 香豆素类 Coumarins
结构特征与分类
香豆素化合物为顺式邻羟基桂皮酸的内 酯，具有芳香气味。
分布与活性
分布：
香豆素类主要分布在伞中。 活性： 抗菌、抗炎、抗肿瘤等。
理化性质及鉴定
性质：
无色结晶，有特殊香气，苷溶于水、甲醇、乙 醇、碱液等，苷元溶于有机溶剂及碱液。
HO
COOH
没食子酸
逆没食子酸
没食子酸鞣质
含可水解鞣质的生药：五味子、没食子、大黄、丁香等
2.缩合鞣质 儿茶素或其衍生物棓儿茶素等 黄烷-3醇以碳碳键聚合而成的化合物。 含缩合鞣质的生药：儿茶、茶叶、虎杖、 桂皮、钩藤、金鸡纳皮、棉马贯仲、槟榔 等。
OH OH HO O OH OH
黄烷-3醇
分布
理化性质与鉴别
多为无色结晶，少数能升华。难溶
于水，易溶于有机溶剂。易被酶或 稀酸水解。
第十一讲-香豆素类分析及应用
第十一讲 香豆素类分析
1 香豆素类分布
香应豆届素类毕结业构与生分类 香在豆校素大类理学化生性质 香在应豆校届素大类毕提学业取生与生分离 香应豆届素类毕鉴业别试生验
香豆素类定量分析
香豆素类分析实例
香豆素类化合物
香豆素类化合物最早由豆科植物香豆中分得 ，因具芳香气味而称香豆素。
广泛存在于高等植物及微生物代谢中。目前 得天然产物九百多种。
OMe
O
O
OMe
O
O
当归内酯
蛇床子素
治疗脚癣、湿疹、阴道滴虫
香豆素类化合物结构与分类
香豆素类化合物分类
2.呋喃香豆素类：母核上的异戊烯基C2’位与邻位 羟基环合。
HO
O
O
O
O
O
O
O
O
香豆素类化合物结构与分类
O
O
补骨内酯
抗真菌
OMe
OMe
O
O
茴芹内酯
O
O
O
O
欧前胡内酯
O
OO
O
O
白芷内酯
OMe O
O
O
O
O
生物黄毒曲性霉，素对肝B1脏损伤
香豆素类化合物结构与分类
香豆素类化合物分类
3.吡喃香豆素:母核C6或C8与异戊烯基C3’位羟基环合。
OMe
O
O
美花椒内酯
O
O O
O
O
O OH
前胡豆素内酯
O
MeO
O
O
别美花椒内酯
香豆素类化合物结构与分类
香豆素类化合物分类
4.异香豆素类：母核1位O与2位羰基位置互换。
香豆素类化合物结构与分类
1 香豆素类分布
香应豆届素类毕结业构与生分类 香在豆校素大类理学化生性质 香在应豆校届素大类毕提学业取生与生分离 香应豆届素类毕鉴业别试生验
香豆素类定量分析
香豆素类分析实例
香豆素类化合物
香豆素类化合物最早由豆科植物香豆中分得 ，因具芳香气味而称香豆素。
广泛存在于高等植物及微生物代谢中。目前 得天然产物九百多种。
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当归内酯
蛇床子素
治疗脚癣、湿疹、阴道滴虫
香豆素类化合物结构与分类
香豆素类化合物分类
2.呋喃香豆素类：母核上的异戊烯基C2’位与邻位 羟基环合。
HO
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香豆素类化合物结构与分类
O
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补骨内酯
抗真菌
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茴芹内酯
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白芷内酯
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生物黄毒曲性霉，素对肝B1脏损伤
香豆素类化合物结构与分类
香豆素类化合物分类
3.吡喃香豆素:母核C6或C8与异戊烯基C3’位羟基环合。
OMe
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美花椒内酯
O
O O
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O OH
前胡豆素内酯
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别美花椒内酯
香豆素类化合物结构与分类
香豆素类化合物分类
4.异香豆素类：母核1位O与2位羰基位置互换。
香豆素类化合物结构与分类
第九章香豆素和木脂素类成分的分析-黔南医专
移动相时，分离效果理想。
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黔南民族医学高等专科学 校
常用显色剂：
多数羟基香豆素在紫外光下有强的荧光，所以在薄层 色谱或纸色谱中的显色首选荧光观察，易辨识。 常用的显色剂：氨熏，喷10%KOH醇溶液和 20%SbCl2氯仿液显色。 此外还有：重氮化试剂；碘-碘化钾试剂；Emerson试 剂或Gibbs试剂（用于确定羟基对位有无取代基）；异 羟肟酸铁试剂；三氯化铁试剂等。
生物合成途径：
葡萄糖代谢 莽草酸 桂皮酸途径 香豆素类 木脂素类
新木脂素类
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第一节 香豆素
是一类典型的具有苯并α-吡喃酮母核的内酯类 化合物。基本骨架如下：
从结构上看，是顺式邻羟基桂皮酸分子内脱水形 成的内酯。
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㈡纸色谱法
简单香豆素：常用水饱和的正丁醇或异戊醇；水饱和
氯仿为展开剂。对有邻二酚羟基或1，2二元醇羟基的香 豆素，滤纸先用0.5%硼砂溶液预处理，再以水饱和的正 丁醇或醋酸乙酯展开， Rf值低于无该结构的香豆素。
呋喃香豆素：多以游离形式存在，亲脂性较简单香豆素
强，故以二甲基甲酰胺为固定相，用己烷-苯（8:2）为
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分光光度法
说明：中药制剂成分复杂，可先用薄层 色谱分离，在紫外灯下荧光定位，找出香豆 素成分，将其吸附层刮下，用适宜溶剂洗脱 ，再加入重氮化试剂，进行比色测定。如健 腰丸中补骨脂素、异补骨脂素的测定。但应 同时进行空白试验及净化回收率实验。
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香豆素类成分分析
成分复杂，可先用薄层 色谱分离，在紫外灯下荧光定位，找出香 豆素成分，将其吸附层刮下，用适宜溶剂 洗脱，再加入重氮化试剂，进行比色测定。 如健腰丸中补骨脂素、异补骨脂素的测定。 但应同时进行空白试验及净化回收率实验。
荧光光度法
羟基香豆素成分大多能产生强烈荧光 大多能产生强烈荧光， 大多能产生强烈荧光 用荧光光度计进行荧光测定有较高的灵敏 度及选择性。当干扰成分较多时，可先用 可先用 色谱法净化。 色谱法净化。
异香豆素 有取代的香豆素 二聚体和三聚体
结构类型
七叶内酯 （简单香豆素）
结构类型
呋喃香豆素
吡喃香豆素
结构类型
其他香豆素
仙鹤草内酯（异香豆素）
异七叶内酯（二聚体）
双香豆素
理化性质
一、物理性质 二、化学性质 三、荧光特征 四、光谱特征
物理性质
性状： 游离香豆素多有完好的结晶、固定的熔 游离香豆素 点、芳香性气味。小分子游离香豆素尚具 有挥发性和升华性，能随水蒸气蒸馏。 香豆素苷类无香味、挥发性和升华性。 香豆素苷
薄层扫描法
样品经薄层分离后，于荧光灯下定位， 利用香豆素类成分具有紫外吸收或能产生 荧光的特性，不经显色，直接进行荧光扫 荧光的特性 描测定。举例：复方制剂中补骨脂素，异 补骨脂素，白瑞香素，欧前胡素等。
高效液相色谱法
• 由于香豆素类成分含有芳香环及其他共轭 芳香环及其他共轭 结构，用高效液相色谱法测定，紫外检测 结构 器检测，有较高灵敏度。 • 常用固定相：十八烷基硅烷键和硅胶 • 常用流动相：不同比例的甲醇-水 • 举例：补骨脂素，欧前胡素，蛇床子素， 白花前胡甲素。
薄层色谱法（首选）
薄层色谱法也是利用香豆素大多具有荧 利用香豆素大多具有荧 光用薄层色谱法进行鉴别。（PS：不具荧 光或荧光强度较弱的香豆素，可用喷显色 剂或喷碱溶液以增强荧光再进行鉴识）
荧光光度法
羟基香豆素成分大多能产生强烈荧光 大多能产生强烈荧光， 大多能产生强烈荧光 用荧光光度计进行荧光测定有较高的灵敏 度及选择性。当干扰成分较多时，可先用 可先用 色谱法净化。 色谱法净化。
异香豆素 有取代的香豆素 二聚体和三聚体
结构类型
七叶内酯 （简单香豆素）
结构类型
呋喃香豆素
吡喃香豆素
结构类型
其他香豆素
仙鹤草内酯（异香豆素）
异七叶内酯（二聚体）
双香豆素
理化性质
一、物理性质 二、化学性质 三、荧光特征 四、光谱特征
物理性质
性状： 游离香豆素多有完好的结晶、固定的熔 游离香豆素 点、芳香性气味。小分子游离香豆素尚具 有挥发性和升华性，能随水蒸气蒸馏。 香豆素苷类无香味、挥发性和升华性。 香豆素苷
薄层扫描法
样品经薄层分离后，于荧光灯下定位， 利用香豆素类成分具有紫外吸收或能产生 荧光的特性，不经显色，直接进行荧光扫 荧光的特性 描测定。举例：复方制剂中补骨脂素，异 补骨脂素，白瑞香素，欧前胡素等。
高效液相色谱法
• 由于香豆素类成分含有芳香环及其他共轭 芳香环及其他共轭 结构，用高效液相色谱法测定，紫外检测 结构 器检测，有较高灵敏度。 • 常用固定相：十八烷基硅烷键和硅胶 • 常用流动相：不同比例的甲醇-水 • 举例：补骨脂素，欧前胡素，蛇床子素， 白花前胡甲素。
薄层色谱法（首选）
薄层色谱法也是利用香豆素大多具有荧 利用香豆素大多具有荧 光用薄层色谱法进行鉴别。（PS：不具荧 光或荧光强度较弱的香豆素，可用喷显色 剂或喷碱溶液以增强荧光再进行鉴识）
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OH COOH
-H2O 7 6 5 4 8 1
O
2 3
Oห้องสมุดไป่ตู้
分子中苯核或α- 吡喃酮环上常有取代基存在， 如羟基、烷氧基、苯基、异戊烯基等
香豆素按结构分为
简单香豆素——只在苯环上有取代基的 呋喃香豆素 —— 线型（6、7～）； 角型（7、8～） 吡喃香豆素——线型（6、7～）； 角型（7、8～） 其他香豆素—— α－吡喃酮环上有取代基的
35
三、高效液相色谱法
1．白芷中3种香豆素的测定 测定氧化前胡素（oxypeucedanin，Ⅰ）， 欧前胡素（imperatorin，Ⅱ）和异欧前胡素（ isoimperatorin，Ⅲ），其方法是：准确称取Ⅰ 、Ⅱ、Ⅲ标准品各5mg，用乙酸乙酯溶解，定 容至50ml，分别取此溶液0.5、1.0、1.5、2.0、 2.5、3.0ml，均用乙酸乙酯定容至10m1，制得 6 个不同浓度的标准溶液。
OH
紫苜蓿酚
茵陈炔
二、 分布
香豆素类成分广泛分布于植物界，如伞形 科、夹竹桃科、萝藦科、菊科、十字花科、杜 鹃花科、豆科、唇形科、兰科、禾本科、芸香 科、蔷薇科、茄科、无患子科、瑞香科等植物 中均有较多分布。 含有香豆素类化合物的常用中药有白芷、秦 皮、独活、前胡、阿魏、当归、补骨脂、茵陈 蒿、川芎、防风、蛇床子等。
2．紫外光区扫描法测定独活中蛇床子素含量 取独活粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 加乙醇 20ml ，超声处理 30min ，放冷，滤过，滤液 置25ml量瓶中，用少量乙醇分次洗残渣，洗液并入 同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶 液。另取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇 制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。 精密吸取供试品溶液2μl、对照品溶液1μl与2μl， 分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯 （ 30 ： 1 ）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外 光灯（365nm ）下检视定位，照薄层色谱法进行扫 描，λs322nm，λR370nm，测量供试品吸收度积分值 与对照品吸收度积分值，计算，即得。 本品含蛇床子素（C15H16O3）不得少于0.30%。
薄层色谱法
1．应用特点
薄层色谱法可用于含多类成分的中药的鉴别，可用标准 品或标准药材对照，再与上述荧光反应、颜色反应配合， 即可方便、快速鉴别含香豆素类化合物的中药。 因香豆素类成分大都具荧光，含香豆素类中药提取物， 在硅胶板上的色谱指纹图具一定的鉴别意义， 可用化学对照品对照； 可以使用经准确鉴定学名的标准药材做对照品；
33
二．薄层色谱法
1．荧光扫描法测定蛇床子中蛇床子素含量 精密称取在 P2O5 干燥器中减压干燥至恒重的蛇 床子粉末 1g ，置具塞锥形瓶中 ，精密加入乙醇 20ml ，振摇后放置过夜，滤过，取续滤液，作为 供试品溶液。另取蛇床子素对照品适量，精密称 定，加乙醇制1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。 精密吸取上述两种溶液各1μl，分别交叉点于同 一硅胶Ｇ薄层板上，以苯- 乙酸乙酯（30：1）为 展开剂，展开，取出，晾干。 照薄层色谱法进行荧光扫描，激发波长λX365nm ，测量供试品与对照品荧光强度积分值. 本品含蛇床子素（C15H16O3）不得少于1.0％ 。 34
三、理化性质
1 2
通性 与碱的反应
3 4
显色反应
荧光与紫外吸收
1
通性
多具芳香气，能随水蒸气挥发或升华。
不溶于水或难溶于水，可溶于石油醚、苯、 乙醚、氯仿或乙醇等溶剂中；一般含氧取代 基的香豆素衍生物，在石油醚中的溶解度比 较小，冷的情况下更小。 在定量测定时，多用氯仿和乙醇来提取。
硅胶薄层色谱常用的展开系统有：
氯仿； 含1.5%乙醇氯仿； 乙醚- 苯（1：1）； 乙醚- 苯- 10%乙酸（1：1：1）等
29
2、应用实例
白芷的薄层定性分析 取白芷粉末0.5g，加乙醚10ml，浸泡1h，时时振 摇，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml使 溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前 胡素对照品，加醋酸乙酯制成每 1ml 各含 1mg 的混 合溶液，作为对照品溶液。 吸取上述两种溶液各4µl，分别点于同一以羧甲 基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚 （30~60℃）- 乙醚（3：2）为展开剂，在25℃以 下展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检 视。供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位 置上，显相同颜色的斑点。
OCH3 CH3O
OCH3
O
O
O
O O O
O
O
O
异补骨脂内酯 茴芹内酯
异佛手内酯
（三）吡喃香豆素类
基本结构为香豆素母核苯环与吡喃环稠合， 也分为线型和角型。
1．6,7-吡喃香豆素（线型）
C6、C7位与吡喃环稠合（6位异戊烯 基与7位羟基环合）的衍生物。
O OCH3 O O
O
O
O
花椒内酯
美花椒内酯
OH O O
-
OH OCOO
-
-
COOO-
H+
顺式邻羟基桂皮酸
反式邻羟基桂皮酸
3
显色反应
（1）异羟基肟酸铁反应： 因香豆素具有内酯环，所以能与异羟基肟酸铁 反应，产生紫红色，可被用来鉴别和比色测定， 其反应如下：
NH2OH O O NaOH NH ONa O OH Fe
3+
,H
+
NH ONa O O Fe 1 3
一．荧光分光光度法
1、应用概况
香豆素类化合物在紫外光的照射下显蓝色荧光， 可用荧光分光光度法测定。如 7- 羟基香豆素和香 豆素混合物的测定，前者用370nm激发，在450nm 测定，浓度为 1~10µg／ ml 时荧光与浓度成线性失 系。后者用361nm激发，在491nm测荧光。 如果香豆素7位上有乙氧基（代谢产物）可使其变 为7- 羟基香豆素用390nm激发，440nm测定。
2．7,8-吡喃香豆素（角型）
C7、C8位与吡喃环稠合（8位异戊烯基与 7位羟基环合）的衍生物。
OCH3 O
O
O
O
O
O
O
O
邪蒿内酯
黄曲霉素B1
（四）其他香豆素类
具有抗凝血作用的紫苜蓿酚 (sativol) 属双 香豆素类；茵陈炔 (capillone) 属异香豆素 类。
O O O O
O O
OH
（2）酚类试剂反应： 因该类化合物多具酚羟基，能和常规酚类试剂 反应，如三氯化铁、硝酸银的氨溶液、三氯化铁 铁氰化钾。 如果香豆素化合物的C6位上（即酚羟基的对位） 没有取代基，则能和 Emerson试剂反应现橙~红色； 与Gibbs试剂反应现蓝色。 Emerson反应是将香豆素类化合物溶于碱性溶液 中，加入2% 4- 氨基安替比林溶液数滴及8%铁氰化 钾溶液2~3滴即可显色，其反应如下：
1．6,7-呋喃香豆素（线型）
C6、C7位与呋喃环稠合（6位异戊烯基 与7位羟基环合，降解失去三个碳原子） 的衍生物，称为线型。
O O O
O OCH3 O O
H3C HO CH3
O
O
O
补骨脂内酯
花椒毒内酯
紫花前胡内酯
2．7,8-呋喃香豆素（角型）
C7、C8位与呋喃环稠合（8位异戊烯基 与7位羟基环合）的衍生物，称为角型。
30
第三节 香豆素定量分析
含香豆素成分的中药定量测定方法有比色法、荧 光法、极谱法、紫外分光光度法、薄层色谱法、高 效液相色谱法、气相色谱法等。 每种方法都有其特点，有的简单，有的操作麻烦， 有的则需要一定的仪器设备。 相比之下，因该类成分多具有较强的荧光，故可 荧光分光光度法进行定量分析；薄层扫描法测其紫 外吸收或荧光的方法较简便快速，兼有分离功能， 应用日趋普遍；近年来又有了分离效率较高的高效 液相色谱技术，对复杂的中药样品更为合适。
32
2．应用实例
（1）佛手油中的香豆素分析 可用硅胶GF254薄层分离，以己烷- 醋酸乙酯 （3：1）展开，分出4个荧光点即：柠美内酯（ Citropten）Ⅰ；5- 牻牛儿氧基-7-甲氧基香豆素（5geranyloxy-7-methydroxycoumarin）Ⅱ；佛手内酯Ⅲ 和佛手柑亭（bergamottin）Ⅳ，可直接在薄层上进 行荧光测定，对于Ⅰ和Ⅱ用330nm激发，424nm测 定荧光，Ⅲ和Ⅳ用272nm激发，520nm测定。
按下述条件进行HPLC分析：以µ-Bondapak C18柱为色谱 分离柱，加预柱以防样品污染分析柱，流动相为甲醇- 水 （70：30），流速1.0ml／min，UV 254nm检测各组分峰， 进样 10µl，以峰面积为纵坐标，各成分浓度为横坐标， 得3条通过原点的直线，线性范围0.005 ~ 0.05mg／ml，其 回归方程如下： 氧化前胡素 Y = 1521X + 25.40， r = 0.999 欧前胡素 Y = 1953X + 76.53， r = 1.000 异欧前胡素 Y = 1930X + 53.73， r = 0.999 精密称取白芷粉（40目）2g，置索氏提取器中，用乙 醚提取9h，回收乙醚，真空干燥，残渣溶于乙酸乙酯并 定容成25ml，经Millipore样品过滤器过滤，同上色谱条件 测定。标准品与样品分离情况（见图 13-1）较好。
*
（2）羟基香豆素在紫外光下有强的荧光，不难辨 认；呋喃香豆素较弱，但也能在紫外光下显示蓝、 紫、棕、绿、黄等色。必要时可喷10% KOH醇液， 或20% SbCl3氯仿液以显色。 （3）香豆素类化合物羟基和芳环形成的共轭体系 具较强的紫外特征吸收，不同的香豆素化合物在 不同pH条件下表现不同的光谱特性，对该类成分 的分析具重要意义。
2
-H2O 7 6 5 4 8 1
O
2 3
Oห้องสมุดไป่ตู้
分子中苯核或α- 吡喃酮环上常有取代基存在， 如羟基、烷氧基、苯基、异戊烯基等
香豆素按结构分为
简单香豆素——只在苯环上有取代基的 呋喃香豆素 —— 线型（6、7～）； 角型（7、8～） 吡喃香豆素——线型（6、7～）； 角型（7、8～） 其他香豆素—— α－吡喃酮环上有取代基的
35
三、高效液相色谱法
1．白芷中3种香豆素的测定 测定氧化前胡素（oxypeucedanin，Ⅰ）， 欧前胡素（imperatorin，Ⅱ）和异欧前胡素（ isoimperatorin，Ⅲ），其方法是：准确称取Ⅰ 、Ⅱ、Ⅲ标准品各5mg，用乙酸乙酯溶解，定 容至50ml，分别取此溶液0.5、1.0、1.5、2.0、 2.5、3.0ml，均用乙酸乙酯定容至10m1，制得 6 个不同浓度的标准溶液。
OH
紫苜蓿酚
茵陈炔
二、 分布
香豆素类成分广泛分布于植物界，如伞形 科、夹竹桃科、萝藦科、菊科、十字花科、杜 鹃花科、豆科、唇形科、兰科、禾本科、芸香 科、蔷薇科、茄科、无患子科、瑞香科等植物 中均有较多分布。 含有香豆素类化合物的常用中药有白芷、秦 皮、独活、前胡、阿魏、当归、补骨脂、茵陈 蒿、川芎、防风、蛇床子等。
2．紫外光区扫描法测定独活中蛇床子素含量 取独活粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 加乙醇 20ml ，超声处理 30min ，放冷，滤过，滤液 置25ml量瓶中，用少量乙醇分次洗残渣，洗液并入 同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶 液。另取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇 制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。 精密吸取供试品溶液2μl、对照品溶液1μl与2μl， 分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯 （ 30 ： 1 ）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外 光灯（365nm ）下检视定位，照薄层色谱法进行扫 描，λs322nm，λR370nm，测量供试品吸收度积分值 与对照品吸收度积分值，计算，即得。 本品含蛇床子素（C15H16O3）不得少于0.30%。
薄层色谱法
1．应用特点
薄层色谱法可用于含多类成分的中药的鉴别，可用标准 品或标准药材对照，再与上述荧光反应、颜色反应配合， 即可方便、快速鉴别含香豆素类化合物的中药。 因香豆素类成分大都具荧光，含香豆素类中药提取物， 在硅胶板上的色谱指纹图具一定的鉴别意义， 可用化学对照品对照； 可以使用经准确鉴定学名的标准药材做对照品；
33
二．薄层色谱法
1．荧光扫描法测定蛇床子中蛇床子素含量 精密称取在 P2O5 干燥器中减压干燥至恒重的蛇 床子粉末 1g ，置具塞锥形瓶中 ，精密加入乙醇 20ml ，振摇后放置过夜，滤过，取续滤液，作为 供试品溶液。另取蛇床子素对照品适量，精密称 定，加乙醇制1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。 精密吸取上述两种溶液各1μl，分别交叉点于同 一硅胶Ｇ薄层板上，以苯- 乙酸乙酯（30：1）为 展开剂，展开，取出，晾干。 照薄层色谱法进行荧光扫描，激发波长λX365nm ，测量供试品与对照品荧光强度积分值. 本品含蛇床子素（C15H16O3）不得少于1.0％ 。 34
三、理化性质
1 2
通性 与碱的反应
3 4
显色反应
荧光与紫外吸收
1
通性
多具芳香气，能随水蒸气挥发或升华。
不溶于水或难溶于水，可溶于石油醚、苯、 乙醚、氯仿或乙醇等溶剂中；一般含氧取代 基的香豆素衍生物，在石油醚中的溶解度比 较小，冷的情况下更小。 在定量测定时，多用氯仿和乙醇来提取。
硅胶薄层色谱常用的展开系统有：
氯仿； 含1.5%乙醇氯仿； 乙醚- 苯（1：1）； 乙醚- 苯- 10%乙酸（1：1：1）等
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2、应用实例
白芷的薄层定性分析 取白芷粉末0.5g，加乙醚10ml，浸泡1h，时时振 摇，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml使 溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前 胡素对照品，加醋酸乙酯制成每 1ml 各含 1mg 的混 合溶液，作为对照品溶液。 吸取上述两种溶液各4µl，分别点于同一以羧甲 基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚 （30~60℃）- 乙醚（3：2）为展开剂，在25℃以 下展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检 视。供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位 置上，显相同颜色的斑点。
OCH3 CH3O
OCH3
O
O
O
O O O
O
O
O
异补骨脂内酯 茴芹内酯
异佛手内酯
（三）吡喃香豆素类
基本结构为香豆素母核苯环与吡喃环稠合， 也分为线型和角型。
1．6,7-吡喃香豆素（线型）
C6、C7位与吡喃环稠合（6位异戊烯 基与7位羟基环合）的衍生物。
O OCH3 O O
O
O
O
花椒内酯
美花椒内酯
OH O O
-
OH OCOO
-
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COOO-
H+
顺式邻羟基桂皮酸
反式邻羟基桂皮酸
3
显色反应
（1）异羟基肟酸铁反应： 因香豆素具有内酯环，所以能与异羟基肟酸铁 反应，产生紫红色，可被用来鉴别和比色测定， 其反应如下：
NH2OH O O NaOH NH ONa O OH Fe
3+
,H
+
NH ONa O O Fe 1 3
一．荧光分光光度法
1、应用概况
香豆素类化合物在紫外光的照射下显蓝色荧光， 可用荧光分光光度法测定。如 7- 羟基香豆素和香 豆素混合物的测定，前者用370nm激发，在450nm 测定，浓度为 1~10µg／ ml 时荧光与浓度成线性失 系。后者用361nm激发，在491nm测荧光。 如果香豆素7位上有乙氧基（代谢产物）可使其变 为7- 羟基香豆素用390nm激发，440nm测定。
2．7,8-吡喃香豆素（角型）
C7、C8位与吡喃环稠合（8位异戊烯基与 7位羟基环合）的衍生物。
OCH3 O
O
O
O
O
O
O
O
邪蒿内酯
黄曲霉素B1
（四）其他香豆素类
具有抗凝血作用的紫苜蓿酚 (sativol) 属双 香豆素类；茵陈炔 (capillone) 属异香豆素 类。
O O O O
O O
OH
（2）酚类试剂反应： 因该类化合物多具酚羟基，能和常规酚类试剂 反应，如三氯化铁、硝酸银的氨溶液、三氯化铁 铁氰化钾。 如果香豆素化合物的C6位上（即酚羟基的对位） 没有取代基，则能和 Emerson试剂反应现橙~红色； 与Gibbs试剂反应现蓝色。 Emerson反应是将香豆素类化合物溶于碱性溶液 中，加入2% 4- 氨基安替比林溶液数滴及8%铁氰化 钾溶液2~3滴即可显色，其反应如下：
1．6,7-呋喃香豆素（线型）
C6、C7位与呋喃环稠合（6位异戊烯基 与7位羟基环合，降解失去三个碳原子） 的衍生物，称为线型。
O O O
O OCH3 O O
H3C HO CH3
O
O
O
补骨脂内酯
花椒毒内酯
紫花前胡内酯
2．7,8-呋喃香豆素（角型）
C7、C8位与呋喃环稠合（8位异戊烯基 与7位羟基环合）的衍生物，称为角型。
30
第三节 香豆素定量分析
含香豆素成分的中药定量测定方法有比色法、荧 光法、极谱法、紫外分光光度法、薄层色谱法、高 效液相色谱法、气相色谱法等。 每种方法都有其特点，有的简单，有的操作麻烦， 有的则需要一定的仪器设备。 相比之下，因该类成分多具有较强的荧光，故可 荧光分光光度法进行定量分析；薄层扫描法测其紫 外吸收或荧光的方法较简便快速，兼有分离功能， 应用日趋普遍；近年来又有了分离效率较高的高效 液相色谱技术，对复杂的中药样品更为合适。
32
2．应用实例
（1）佛手油中的香豆素分析 可用硅胶GF254薄层分离，以己烷- 醋酸乙酯 （3：1）展开，分出4个荧光点即：柠美内酯（ Citropten）Ⅰ；5- 牻牛儿氧基-7-甲氧基香豆素（5geranyloxy-7-methydroxycoumarin）Ⅱ；佛手内酯Ⅲ 和佛手柑亭（bergamottin）Ⅳ，可直接在薄层上进 行荧光测定，对于Ⅰ和Ⅱ用330nm激发，424nm测 定荧光，Ⅲ和Ⅳ用272nm激发，520nm测定。
按下述条件进行HPLC分析：以µ-Bondapak C18柱为色谱 分离柱，加预柱以防样品污染分析柱，流动相为甲醇- 水 （70：30），流速1.0ml／min，UV 254nm检测各组分峰， 进样 10µl，以峰面积为纵坐标，各成分浓度为横坐标， 得3条通过原点的直线，线性范围0.005 ~ 0.05mg／ml，其 回归方程如下： 氧化前胡素 Y = 1521X + 25.40， r = 0.999 欧前胡素 Y = 1953X + 76.53， r = 1.000 异欧前胡素 Y = 1930X + 53.73， r = 0.999 精密称取白芷粉（40目）2g，置索氏提取器中，用乙 醚提取9h，回收乙醚，真空干燥，残渣溶于乙酸乙酯并 定容成25ml，经Millipore样品过滤器过滤，同上色谱条件 测定。标准品与样品分离情况（见图 13-1）较好。
*
（2）羟基香豆素在紫外光下有强的荧光，不难辨 认；呋喃香豆素较弱，但也能在紫外光下显示蓝、 紫、棕、绿、黄等色。必要时可喷10% KOH醇液， 或20% SbCl3氯仿液以显色。 （3）香豆素类化合物羟基和芳环形成的共轭体系 具较强的紫外特征吸收，不同的香豆素化合物在 不同pH条件下表现不同的光谱特性，对该类成分 的分析具重要意义。
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