小鼠外周血白细胞使用说明
外周血采集白细胞标准
外周血采集白细胞标准近年来，随着生物医学科技的飞速发展，外周血白细胞采集技术在临床研究和治疗中的应用日益广泛。
为了确保采集过程中的安全和效果，制定一套科学、规范的外周血采集白细胞标准至关重要。
一、外周血采集白细胞的基本原则1.尊重供者意愿：在采集外周血白细胞前，应充分了解和尊重供者的意愿，确保采集过程符合伦理要求。
2.选择合适的采集时间：通常选择在早晨，避免在饭后、劳累或身体不适时进行采集。
3.严格无菌操作：采集过程中应遵循无菌操作规程，防止感染的发生。
4.适量采集：根据研究需求和供者身体状况，合理确定采集体积和细胞数量。
二、外周血采集白细胞的方法与步骤1.准备工作：检查并确保采集设备齐全、正常运行，准备好所需试剂、耗材和仪器。
2.供者定位：让供者舒适地坐或平躺，选择合适的穿刺部位，如前臂正中的肘区浅表静脉。
3.穿刺操作：严格遵循穿刺技术规范，避免损伤血管和神经。
4.采集过程：启动血细胞分离机，按照预设程序进行采集。
采集过程中密切观察供者反应，确保采集过程顺利进行。
5.结束采集：达到预期采集量后，妥善处理采集管道和针头，消毒穿刺部位，结束采集。
6.质量控制：对采集到的外周血白细胞进行质量评估，确保细胞质量和数量达到研究要求。
三、外周血采集白细胞的安全性与注意事项1.严格掌握采集适应症和禁忌症，确保供者身体状况符合采集要求。
2.采集过程中密切观察供者反应，如出现不适症状，应及时处理。
3.避免采集过程中过度挤压供者手臂，以免影响细胞质量。
4.注意保暖，避免供者在采集过程中受凉。
5.采集完成后，告知供者注意事项，如避免剧烈运动、保持穿刺部位清洁等。
总之，外周血采集白细胞是一项较为复杂的技术，制定一套规范的操作标准对于确保采集过程的安全、有效至关重要。
在实际操作中，应根据研究需求和供者身体状况，严格遵循无菌操作规程，确保采集到的外周血白细胞质量达到研究要求。
1。
小鼠全血细胞分析仪操作步骤
小鼠全血细胞分析仪操作步骤
注意：实验前先自带超纯水，将烧杯水灌满，用后一定要灌注清洗，否则仪器故障自行维修。
操作步骤：
1、接通血细胞分析仪右侧的管道，确认每种细胞作用液；
2、先开分析仪，再开电脑；
3、分析仪界面显示：NOT RDY（自检中）；
4、选择START/CLEAR，按此按钮，约3分钟后工作；
5、电脑界面双“Hamavet多种血液分析”，输入用户名“admin”，密码同上；
6、分析仪需将分析用的液体灌入仪器内，先后按下9-3-1，等待约3min，按下
两次“0”，返回主菜单；
7、样本检测之前，行空白对照计数，选下“other”，等待电脑界面出现空白计
数时各项在正常范围内：
WBC小于0.2x10^9/L；HB小于0.2
RBC小于0.02x10^12/L；PLT小于50^9/L
8、测样前先混匀样本，先测样后命名，放入仪器下方，按下“2”，待采样器下
降后，移动样本，插入样品中，按下mouse，等待3min出现结果（或者在黑色外盖存在时，可直接按“mouse”，等待结果）；
9、如此循环，样品检测结束后，清洗机器：
10、按下9，选择clear，等待15min；
11、将仪器后方各管道放入烧杯水中，按下9,3,1，等待3min；
12、数据可以用手机直接拍照，或自带白纸打印机打印，也可自行导出；
13、关机
RNA中心。
小鼠白细胞介素2IL2试剂盒利用方式
小鼠白细胞介素2（IL-2）试剂盒利用方式检测范围：96T30 ng/L -1200 ng/L利用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2（IL-2）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素2（IL-2）水平。
用纯化的小鼠白细胞介素2（IL-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2（IL-2），再与HRP标记的白细胞介素2（IL-2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过完全洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2（IL-2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素2（IL-2）浓度。
标本要求1．标本搜集后及早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
假设不能马上进行实验，可将标本放于-20℃保留，但应幸免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可依照以下图表在小试管中进行稀2.加样：别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽可能不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：警惕揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反映（现在蓝色立转黄色）。
小鼠血常规检测实验方法
小鼠血常规检测实验方法小鼠血常规检测实验方法血常规检测是一个常用的生物学实验方法，可以简单、快速地评估实验小鼠的整体健康状态和生物学参数。
小鼠作为一种常见的实验动物，血常规检测在小鼠生物学研究中得到广泛应用。
本文将详细介绍小鼠血常规检测的实验方法。
实验材料：1. 实验小鼠：健康的、同龄同性别的小鼠，最好是在实验室培养的特殊品系小鼠。
2. 消毒器具：如消毒锅。
3. 手术刀、手术剪和显微镊子。
4. 洗涤液、绝对乙醇及其他实验试剂。
5. 血常规检测仪器：如自动血常规分析仪、手动血常规检测仪。
实验步骤：1. 小鼠准备（1）选择小鼠：小鼠的品系应该是经过充分的培育和纯化，以确保同一品系小鼠之间基因和表型的一致性。
通常建议选择与实验主题相关的特殊品系小鼠。
另外，实验室饲养的小鼠应该未曾与其他未知品系小鼠混杂过。
（2）小鼠生长环境：在进行血常规检测之前，小鼠应该处于规范的养殖环境中。
这意味着小鼠应该被保存在清洁、舒适、有固定光照周期和恒温的饲养箱内，同时有充足的食物和水供应。
（3）小鼠体重的确认：小鼠的体重是进行血常规检测的一个基本参数，故在采集小鼠样本之前应该测量小鼠体重，以此决定采集的样本量和采集时间。
2. 小鼠采血（1）准备采血用品：手术刀、手术剪、显微镊子、干净的巴斯德架和无菌温和的洗涤液。
（2）消毒和割切：将实验小鼠固定在巴斯德架上，消毒手术区域。
以手术刀或剪切下颔下面，暴露出颈部皮下血管。
（3）采血：使用显微镊子稳定血管，然后用手术刀或剪剪掉血管，快速而准确地收集小鼠血液。
注意要在不同的实验小鼠之间使用不同的血管切口，以避免交叉感染。
（4）分离红细胞和血浆：收集的小鼠血液应该放置在防凝剂管中，轻轻翻转混合均匀。
然后将血液样品离心5-10分钟，使得红细胞和血浆分离。
（5）储存采样：采集的小鼠血液样本应该被放置在冰箱中，并在24小时内进行检测。
如不能在24小时内检测，应将样本储存在冰箱中，同时避免样本过度摇晃或冷冻保存。
流式细胞仪检测小鼠外周血CD4+和CD8+
流式细胞仪检测小鼠外周血CD4+和CD8+流式细胞仪分别检测小鼠外周血CD4+和CD8+采血【实验】实验鼠16管/天*2，每个样本100ul+30ul肝素钠【空白】【CD4+】【CD8+】正常鼠，第一天实验取300ul+90ul肝素钠步骤1）30ul肝素钠溶液处理100ul全血2）取抗凝血100ul加入到标记好的流式管内，【实验】16管/天，每管加入2ul FITC Rat Anti-Mouse CD4（0.5mg/ml）和5ul PE Rat Anti-Mouse CD8a （0.2mg/ml）除样品管外，第一天需外加三管对照●【空白】（正常鼠全血100ul）●【CD4+】（正常鼠全血100ul+2ul FITC Rat Anti-Mouse CD4（0.5mg/ml））●【CD8+】（正常鼠全血100ul+5μL PE Rat Anti-Mouse CD8a（0.2mg/ml））4）避光放置30min5）加入红细胞裂解液2mL（此处用量至少68ml，两次破红136ml），轻轻吹打混匀，室温避光反应15min，以1500rpm离心5min，弃上清（观察破红效果，建议重复一次）6）加2mL PBS混匀后，1500rpm离心5min，弃上清7）细胞沉淀加入500ul PBS重悬后上机流式细胞仪分别检测小鼠外周血IFN-γ和IL-4（三色）采血【实验】实验鼠，16管/天*2，每个样本100ul+30ul肝素钠【空白】【CD4】【IFN-γ】【IL-4】正常鼠，第一天实验取400ul+120ul肝素钠步骤1.全血刺激培养100ul 全血+100ul 含刺激物的RPMI 1640完全培养液，于37℃、5% CO2 中孵育4h，计时器计时，手机计时每小时轻轻颠倒混匀一次2.裂解红细胞将上述液体转移到流式管内（200ul），加入红细胞裂解液2mL （此处用量至少80ml，两次160ml），轻轻吹打混匀，室温避光15min（观察破红效果，建议重复一次）1500rpm离心5min，留沉淀每管中加入2ml 染色缓冲液混合均匀，1500rpm，5min离心，留沉淀3.细胞表面抗原的染色（CD4）●【CD4】【实验】管各加FITC anti-mouse CD4（0.5mg/ml）2 ul+染色缓冲液 98 ul●【IFN-γ】【IL-4】【空白】加入100ul染色缓冲液室温避光15min后，每管中加入2ml染色缓冲液混合均匀，1500rpm，5min离心，弃上清，留沉淀4.固定和透化细胞每管中加入500ul 固定/透化剂（棕瓶），充分混匀，避光20min，1500rpm离心5min，弃上清，留沉淀加2ml 1×BD Perm/wash TM Buffer，避光10min，1500rpm，离心5min，弃上清，留沉淀5.胞内细胞因子的染色（IFN-γand IL-4）●【CD4】【空白】100ul Perm/wash TM Buffer●【IFN-γ】95ul Perm/wash TM Buffer + 5uL PE anti-mouse IFN-γ（0.2mg/ml）●【IL-4】95ul Perm/wash TM Buffer + 5uL PE Rat Anti-Mouse IL-4（0.2mg/ml）●【实验】5ul PE anti-mouse IFN-γ（0.2mg/ml）+ 5ul PE Rat Anti-Mouse IL-4（0.2mg/mL）+90ul Perm/wash TM Buffer30min避光孵育。
小鼠白细胞介素-23IL-23试剂盒使用方法
小鼠白细胞介素-23（IL-23）试剂盒使用方法检测范围：96T2.5pg/ml-80pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-23（IL-23）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素-23（IL-23）水平。
用纯化的小鼠白细胞介素-23（IL-23）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-23（IL-23），再与HRP标记的白细胞介素-23（IL-23）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素-23（IL-23）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素-23（IL-23）浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（160pg/ml）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
80pg/ml 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液40pg/ml 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液20pg/ml 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液10pg/ml 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液5pg/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
小鼠外周血白细胞分离液试剂盒(细胞培养及分子生物学专用
小鼠外周血白细胞分离液试剂盒（细胞培养及分子生物学专用）说明书【产品组成】为方便广大用户使用，试剂内容如下：名称产品编号规格A小鼠外周血白细胞分离液200mlB红细胞裂解液（赠品）NH4CL2009100mlC全血及组织稀释液（赠品）2010C1119200mlD细胞洗涤液（赠品）2010X1118200ml【预期用途】适用于从动物抗凝血液中分离白细胞，无菌条件下所分离的白细胞可用于分子生物学及细胞培养等。
本品仅供科研使用。
【检验原理】本分离液为FICOLL、羟乙基淀粉550与泛影酸葡甲胺的混合液。
抗凝血液可在分离液中分层。
离心时，在FICOLL、羟乙基淀粉的作用下红细胞与粒细胞聚集并迅速沉降；此时，白细胞仍处于分离液上层及分离液层，红细胞污染可通过红细胞裂解液裂解红细胞去除。
大部分血小板可在细胞清洗低速离心过程中去除。
其他人及动物多种比重细胞分离液，因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。
【必备但不提供的仪器及耗材】可提供400g离心力的水平转子离心机、15ml玻璃离心管、吸管等。
【注意事项】1.使用前，本分离液需复温至18-22℃。
为获得最佳的实验结果，最好在取血后2小时内进行实验，血液提取后存放时间越长细胞活性越低。
2.实验过程中，如需稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集大大降低细胞得率及纯度。
本公司生产的全血及组织稀释液和细胞洗涤液不含Ca、Mg离子、低内毒素水平且含细胞和保护成分，推荐使用。
3.最优抗凝剂选择：EDTA、枸橼酸、肝素，其他抗凝剂也可使用，但会影响细胞活性。
应注意在血液稀释过程中去除抗凝剂体积。
4.当血液样本粘度过高或血液样本大于等于3ml时，最优稀释方法：将血液于18-22℃以250g离心10分钟，弃去血浆，补充添加全血及组织稀释液（产品编号：2010C1119），添加量为所弃去血浆体积的 1.5-2倍，混匀备用。
小鼠外周血白细胞使用说明
小鼠外周血白细胞使用说明一、引言小鼠外周血白细胞是研究小鼠免疫系统和疾病发展过程中不可或缺的重要细胞类型。
本文将介绍小鼠外周血白细胞的获取、储存和使用方法，以便研究人员能够准确高效地运用这些细胞进行实验和分析。
二、获取小鼠外周血白细胞1. 实验材料准备- 小鼠（按照实验需求选择合适的小鼠品系）- 抗凝剂（例如肝素、EDTA）2. 预处理步骤- 在实验前，确保所有实验仪器和材料已进行彻底的消毒和灭菌。
- 按照动物实验伦理要求，为小鼠提供舒适的生活环境和适当的饮食。
3. 外周血白细胞提取- 使用适当的方法（例如针刺心室或颈静脉抽血法）从小鼠体内提取血液样品。
- 立即将血液样品转移到含有抗凝剂的血液收集管中，确保血液不会凝结。
4. 外周血白细胞分离- 通过离心将血液样品离心管中的血浆和红细胞分离。
- 采用合适的方法（例如密度梯度离心法），将白细胞从红细胞中分离出来。
三、外周血白细胞储存1. 白细胞培养基准备- 根据实验需求，选择适当的培养基（例如RPMI-1640）。
- 添加合适的补充剂（例如胎牛血清、抗生素）到培养基中。
2. 白细胞保存- 将分离的外周血白细胞转移到预先配制好的白细胞培养基中。
- 将白细胞培养物分装到培养皿或冻存管中。
- 根据实验要求，添加适当的保存液（例如10% DMSO）。
- 快速冷冻白细胞样品，并储存在低温条件下（通常为-80°C）。
四、小鼠外周血白细胞使用1. 白细胞复苏- 从冷冻状态中迅速复苏白细胞样品。
- 将冷冻样品迅速解冻，并将其转移到预先预热的培养基中。
- 避免频繁离心，以免对细胞造成进一步损伤。
2. 细胞培养和实验- 在合适的细胞培养条件下培养白细胞（例如37°C，5% CO2的培养箱）。
- 根据实验需要，添加适当的激活剂（例如LPS、抗体等）。
- 在培养期间，定期观察和记录细胞的生长状态和表型特征。
3. 细胞分析和检测- 可以使用流式细胞术、荧光显微镜等技术对白细胞进行定性和定量分析。
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小鼠外周血白细胞
小鼠外周血白细胞产品说明：
为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠外周血白细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠外周血白细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠外周血白细胞注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
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