北五味子多糖的分离纯化研究
北五味子有效成分提取分离方法的研究进展
第29卷第4期吉林医药学院学报V01．29N o．4—230—2008年08月Jour nal of J il in M e di cal C ol l ege A ug．2008文章编号：1673-2995(2008)04-0230-03北五味子有效成分提取分离方法的研究进展综述T he r esear ch pr ogr es s of e xt r a ct i on and s epar at i on of ef f ect i ve com pone nt s f r om Fr uct us s chi sandr ae chi nens i s李艳艳，张秀荣‘(吉林医药学院，吉林吉林132013)摘要：概述了近年来常用中药北五味子有效成分的提取分离方法，以利于其进一步的研究与开发利用。
关键词：北五味子；有效成分；提取分离中图分类号：R286文献标识码：A北五味子为木兰科植物五味子Sc hi sandr a chi esi s (Tur cz．)B a i l l的干燥成熟果实，主产于我国东北地区，故称北五味子，其以果实和种子入药，有收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效。
北五味子有效成分为木脂素类化合物，木质素类中生理活性研究最多的是对肝脏有作用的成分，现代将有效成分做成各种制剂，临床主要用于治疗慢性肝炎。
但五味子中的主要有效成分五味子乙素存在于种子中…，常与大量树脂状物共存，一般制备过程不易提出，给工业生产造成很大困难，同时也浪费了大量药材。
因此，迫切需要能够降低生产成本、提高制剂质量的提取工艺。
1溶剂提取法溶剂提取法是根据中药中各种成分在溶剂中的溶解性质，选用对有效成分溶解度大，对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。
常用浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流法及连续回流提取法等。
王成梅拉1以五味子乙素含量为指标，用正交设计优选醇提工艺：6倍量80％乙醇提取3次，每次3h。
中药鉴定新技术参考论文
五味子多糖的提取及药理活性的研究进展制药与食品科学系中药学专业2008级王维摘要：通过系统检索相关文献, 从五味子多糖的提取工艺、制备方法、分级纯化等方面，以及多方面药理活性的研究概况进行综述。
为五味子的进一步研究和开发利用提供理论依据。
关键词：五味子多糖；提取；药理活性；研究进展The progress of Schisandra polysaccharideextraction and pharmacological activityMajor of Traditional Chinese MedicineDepartment of Pharmaceutics and Food ScienceGrade 2008 WANG WeiAbstract: Objectives To review the studies on the extraction and pharmacological activity of schisandra polysaccharide.Methods Based on the related literatures, the extraction, preparation and graded purification of schisandra polysaccharide were reviewed respectively. Conclusion This review provides a reference for the further research and development of schisandra chinensis.Key words:Schisandra polysaccharide; Extraction; Pharmacological activity; Progress前言五味子为传统中药材，应用历史悠久, 始载于东汉《神农本草经》，位列上品。
五味子多糖的研究进展
Ａｄｖ ａ ｎ ｃ ｅ ｓ ｉ ｎ Ｒｅ ｓ ｅ ａｒ ｃ ｈ ｏ ｆ Ｐｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｓ ｃ ｈ ｉ ｓ ａ ｎｄ ｒ ａ
Ｘ Ｕ Ｌ ｉ １ ， ＷＡ Ｎ Ｇ Ｘ ｉ ａ ｏ — ｈ ｕ ａ ２ ， Ｚ Ｈ Ａ Ｏ Ｍｅ ｉ － ｊ ｉ ｎ １ ， ＷＥ Ｉ Ｈ ａ ｎ － ｌ ｉ ａ ｎ
五味子多糖的研究进展
许莉 ， 王晓华 ， 赵美瑾 ， 魏汉莲
（ １ ． 辽宁省 中药研究所 ， 辽 宁 沈阳 １ １ ０ １ ６ ３ ； ２ ． 朝 阳市 喀左县结核病 防治所 ， 辽宁 朝 阳 １ ２ ２ ３ ０ ０ ）
摘 要： 从提取分 离、 分级 纯化 、 含量测定、 药理作用等方面对五味子 多糖进行概述 。 五味子 多糖的提取 方法 由一般 的
（ １ ． Ｌ ｉ ａ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｓ ｈ ｅ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ １ １ ０ １ ６ ３ ， Ｌ ｉ ａ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ． Ｌ ｉ ａ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｋａ ｚ ｕ ｏ Ｃ ｏ ｕ ｎ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔ ｈ ｅ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄＴ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｔ ｕ ｂ ｅ ｒ ｃ ｕ ｌ ｏ ｓ ｉ ｓ ， Ｃ ｈ ａ ｏ ｙ ａ ｎ ｇ １ ２ ２ ３ ０ ０ ， Ｌ ｉ ａ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｍｍａ ｉｚ ｒ ｅ ｄ ． Ｔ ｈｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｏ ｆ Ｓ ｃ ｈ ｉ ｓ ａ ｎ ｄ ｒ ａ ｐ ｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ —
中药北五味子抗肿瘤有效部位的化学研究的开题报告
中药北五味子抗肿瘤有效部位的化学研究的开题报告题目：中药北五味子抗肿瘤有效部位的化学研究一、研究背景目前，肿瘤已成为威胁人类健康的重大公共卫生问题。
尽管许多新型化疗药物取得了显著进展，但治愈率仍不高。
因此，寻找新型的抗肿瘤药物是一个重要的研究方向。
中药作为一种重要的天然药物资源，其成分繁多、结构复杂，具有广谱、多靶点、少副作用等优点，在抗肿瘤研究领域具有重要的应用前景。
而北五味子是中药中常用的一种具有抗肿瘤作用的植物，其有效部位的研究成为了目前中草药抗肿瘤研究中的一个重要课题。
二、研究目的本研究旨在分离北五味子中的有效部位，探究其抗肿瘤机制及其组成成分，为临床治疗提供基础研究依据。
三、研究方法1. 北五味子提取物制备：使用乙醇提取、水提取、超声波提取等方法, 得到不同成分的提取物；2. 化学分离：使用各种色谱技术进行组分分离纯化；3. 结构鉴定：通过NMR谱、MS谱等仪器对分离得到的化合物进行结构鉴定；4. 细胞实验：通过细胞培养，采用MTT法、细胞周期分析、细胞凋亡等方法，评价化合物的抗癌活性、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等功能；5. 分子机制研究：通过Western blot等技术，探究化合物对细胞内信号通路的影响。
四、预期成果1. 确定北五味子抗肿瘤的有效成分，明确其抗肿瘤机理。
2. 为抗肿瘤药物研究提供新的思路和方法，为中药安全高效地应用提供重要参考。
3. 为基于中药研发抗肿瘤新药提供基本依据。
五、研究意义本研究将有助于深入了解北五味子中抗肿瘤有效成分的化学组成、作用机制以及临床应用，为开展中药抗肿瘤药物的研究提供具有参考价值的思路和技术手段。
五味子多糖的提取及分离
摘 要 ：五味 子 是一种 具有 广 阔开发前 景的传 统 中药材 。 实验 中． 以五味 子 为原料 ． 用水提 醇 沉 利
法 得 到 了五 味 子 粗 多糖 。 在 料 液 质 量 体 积 比 为 １ｇ：３ 浸 提 温 度 ９ Ｃ． 取 时 间 ｈ的 适 宜 ２ ｍＩ， ９ 提
主 要 仪 器 ： Ｃ ０一 Ｐ ２ ２Ｓ型 电 子 分 析 天 平 ， 一２ ＲＥ ５ Ｃ
型 旋 转 蒸 发 仪 ， Ｊ１ Ｉ 一０型 冷 冻 干 燥 机 ，ｗ Ｆ ＵＶ一 Ｇ Ｚ ２０ ６ ２型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ， ＤＨＰ ２ 型 恒 温 摇 １０
准 确 称 取 ２． ０ ０ｍｇ多 糖 粗 品 溶 于 水 ， 容 于 定
的提 取 工 艺条 件 下 。 多糖 的 提 取 率 达 ５ ６ 。 采 用 酶 法 与 Ｓ ｖ ｇ法 联 用 脱 除 粗 多糖 中 蛋 白质 效 粗 ．１ ｅａ
果较 好 。利 用凝 胶 色谱 柱层 析 法对 多糖 半纯 品进行 分 级 分 离， 到 了两种 多糖 Ｉ和 Ⅱ。经 薄层 色 得 谱 分析 ， 步确 定 了两种 多糖的单 糖组 成 ， 初 又通过 红 外 光谱 分 析 ， 明 多糖 Ｉ可能 为 ａ呋 喃糖 ， 证 一 多
第 １期
丛 娟 等 ： 味 子 多糖 的 提 取 及 分 离 五
９ １
有 近 Ｏ种 。 五 昧 子 多 糖 是 从 五 味 子 干 燥 成 熟 果 实 ｌ
五味子水溶性多糖提取纯化及生物活性研究
五味子水溶性多糖提取纯化及生物活性研究目的：对五味子水溶性多糖提取纯化及生物活性进行分析研究。
方法：选取3种溶剂提取五味子多糖，通过超氧自由基和羟自由基抑制实验来确定多糖的抗氧化作用，通过抑菌圈实验测试其抑菌效果。
结果：醇碱提取法提取的五味子多糖的抗氧化效果显著优于水提法和碱水法（P均0.05），无统计学意义。
结论：醇碱法提取的多糖抗氧化效果和抑菌效果较好，是提取五味子多糖的首选方法。
标签：提取纯化；水溶性多糖；生物活性；五味子五味子具有益气强阴等功效[1]，近年来，多项研究证实[2]，活性多糖具有抗病毒、抗肿瘤、增强免疫力等功效，其作用也逐渐受到人们重视。
本文选择3种溶剂提取五味子多糖，通过超氧自由基和羟自由基抑制实验来确定多糖的抗氧化作用，通过抑菌圈实验测试其抑菌效果，对五味子水溶性多糖生物活性进行分析研究，现总结如下。
1资料与方法1.1一般资料五味子果实、青霉素钠（国药准字H20103379瑞阳制药有限公司）、实验菌种包括：枯草杆菌、白色念珠菌、大肠杆菌、肺炎白氏克雷菌、金黄色葡萄球菌，由湖南中医药大学实验室提供。
仪器：F-160别中药粉碎机（青岛德瑞特粉体技术设备有限公司），752犁紫—外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司），MP120—1型电子天枰(上海恒平仪器厂)，DZKW-6别电子恒温水浴锅（杭州大卫科教仪器有限公司），KQ-S1800DY型超声波清洗仪（杭州艾普仪器设备有限公司），ALPHA1-2冻干机（北京博劢行仪器有限公司）。
1.2方法1.2.1样品提取：①纯水提取：采用温度为100℃实验室蒸馏水，料液比为1:25，按提取工艺提取2次[3]，每次2小时；②碱水提取：采用pH值为8的Na2CO3蒸馏水溶液，料液比1:30，提取温度100℃，按提取工艺提取2次，每次1.5小时；③醇碱提取：采用乙醇与Na2CO3的混合溶液，溶剂pH值为8、乙醇浓度为5%，料液比为1:25，提取温度为100℃，按提取工艺提取2次，每次1.5小时。
五味子多糖的提取工艺研究进展
五味子多糖的提取工艺研究进展五味子（Schisandra chinensis）是一种中药材，具有多种保健和药用作用。
其中，五味子多糖是一种重要的生物活性成分，具有抗氧化、免疫增强、调节血脂、降血糖、抗肝损伤、抗肿瘤等多种生理活性。
因此，研究五味子多糖的提取工艺对于开发和利用五味子具有重要意义。
本文综述了五味子多糖的提取工艺研究进展。
1. 离子液体提取法离子液体提取法是一种新型的绿色提取技术。
近年来，有研究对五味子多糖的提取进行了初步研究。
以1-丁基-3-甲基咪唑氯化物和乙腈为混合溶剂，以五味子粉末为原料，采用响应曲面法研究了提取时间、提取温度、料液比等因素对五味子多糖提取率的影响。
结果表明，最佳提取条件为提取时间40 min，提取温度为75 ℃，料液比为1:25，此时提取率可达到10.05%。
2. 超声波提取法微波辅助提取法是一种常用的非常规物理提取方法。
其主要原理是利用微波电子场使母液发生快速温升和剧烈搅拌，加速细胞壁破碎，从而加速物质的扩散和转移。
目前，有研究利用微波辅助提取法进行五味子多糖的提取。
在一些研究中，采用纯水作为溶剂，以五味子为原料，考察了微波功率、提取时间、液固比等因素对提取率的影响。
结果表明，在微波功率为360 W，提取时间为3 min，液固比为30:1的条件下，五味子多糖的提取率可达到7.93%。
4. 酶解提取法酶解提取法是一种常用的生物技术提取方法。
目前，有研究利用酶解提取法对五味子多糖进行了提取。
在一些研究中，采用3%的纤维素酶和5%的淀粉酶分别进行预处理和提取。
结果表明，用酶解法提取五味子多糖的提取率远高于传统热水法和超声波提取法，提取率可达到25.92%。
总之，不同的提取方法对五味子多糖的提取率和产品性质均有不同的影响。
因此，在五味子多糖的提取工艺研究中，需要综合考虑原料性质、提取条件等多种因素，进一步优化提取技术，以提高五味子多糖的提取效率和活性成分的含量。
五北味子果实中多糖的提取与纯化研究
病， 还能治疗风湿病之类 的自身疾病 ， 有的多糖还能诱导干扰素的产生． 总之， 多糖具有 明显的增强机体
免疫能力和抑制肿瘤的作用． 内外诸多文献对植物 中多糖的分离纯化与结 构分析进行 了大量 的研 国 究… ， 目前多 糖 的分离分 析 依然是 比较 活跃 的研究 领域 ．
北 五味子 是 生 长 于东 北及 河北 等 地 区的 术 兰科植 物五 味子 （ ｃｉ ｎ ｒ ｈｎｎｉ ｒ Ｓｈｓ ｄａＣ ｉｅｓ ａ ｓ（ ）Ｂ ｉ ） ａｌ １ 的干燥成熟果实 ， 在我国传统 医学中作为补益强壮剂 已有悠 久历史 ， 它具有补 肾、 益气 、 生津 、 止泻等作 用＿ ， ２ 临床已证明五味子对病毒性肝炎或化学中毒性肝损伤有降低转氨酶和改善症状的作用 ， 中枢 ｌ 对
ｔｎ ｉ ｏ
多糖是由几个单 糖基通过糖苷键连接而成的化合 物， 作为药物始 于 １４ ９３年 ， 而作 为广谱 的免疫促 进剂而引起人们的极大兴趣是在 ６ 年代 以后． Ｏ 越来越多的研究证明， 多糖不但能治疗机体的免疫系统 受到严重损伤的癌症 ， 还能治疗多种免疫缺损疾病 ． 如慢性病毒性肝炎和某些细菌和病毒引起的慢性疾
ｔｎａｄｃｌｍｎｃｒｍ ｔ ｒｐ ｙｂ Ｅ Ｅ ｃｌ ｌ ｅ ｕｎ ｆ ａｏ ｅｕ ｆｐｌｓｅｈｒ ｅｉ ｉ ｎ ｏ ｈｏ ａ ｇａｈ ｙＤ Ａ ｅｌｏ ．Ｑ ａｔ ｃｔｎｒｓｌｏ ｏ ａｅａｉ ｎ ｏ ｕ ｏ ｕｓ ｉ ｉ ｉ ｔ ｙ ｄ
Ｓｈｓｎ ｒ ｈｎ ｎｉ（ ｕｃ ） ａｌＦｕｔ ｈ ｗｔａ ｃ ｄ ｏ ｓｅｈ ｄ ｅｃｎｅｔ ｅｃｎａｅｉ ｉｉ ｃｉ ｄａＣ ｉｅ ｓ Ｔ ｒ Ｂ ｉ ｒｉｓｏ ｔ ｒ ｅｐｌ ａｃａ ｄ ｏｔｎ ｒｅｔ ａ ｓ ｚ ｌ ｈ ｕ ｙ ｐ ｇ ｎ ｔｓ
０ ％． ６１
五味子多糖的研究进展
五味子多糖的研究进展何嘉凝;单提昆;吴文君;赵秀芳【摘要】通过查阅数据库从五味子多糖的提取、纯化分级到五味子多糖的药理作用进行整理总结,了解五味子多糖的研究进展以及发展方向.五味子多糖的药理作用广泛,在保肝、抗疲劳、抗氧化衰老、增强免疫、镇静催眠、镇痛、降血脂、抗突变、抗肿瘤等方面都有一定的疗效.但五味子多糖的提取、纯化效率还不高,结构与构效关系不明,有待进一步的研究.【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2012(033)001【总页数】5页(P38-42)【关键词】五味子多糖;提取;药理作用【作者】何嘉凝;单提昆;吴文君;赵秀芳【作者单位】吉林医药学院药学院,2008级医学检验本科班,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,2008级医学检验输血本科班,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,2008级医学检验输血本科班,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,2008级医学检验本科班,吉林吉林132013【正文语种】中文【中图分类】R282.7五味子Schisandra chinensis(Turcz)Ball.为木兰科植物五味子的干燥成熟果实，有南北五味子之分，通常说的为“北五味子”，是著名的滋补性中药，具有多种功效，中医认为其可保护人体五脏——心、肝、脾、肾、肺。
化学研究表明，五味子的化学成分主要有挥发油、木脂素、有机酸、多糖、脂肪油、氨基酸、色素、鞣质等［1］。
目前研究较多的为木脂素、其次为多糖。
本文就五味子多糖(the coarse poly saccharide from Schisandra chinensis，CPSC)的研究进行概述。
多糖是由20个以上的单糖由糖苷键连接形成的含醛基或酮基的多羟基聚合物及其衍生物，广泛分布于动植物及微生物的细胞壁中。
多糖具有广泛的生物学功能，它不仅可以作为体内的供能物质及某些物质的基本组分，还参与细胞间的识别、机体免疫功能的识别、细胞间的物质运输、细胞间的转化、肿瘤细胞的凋亡等过程。
五味子的提取分离流程
五味子的提取分离流程五味子是一种常见的中药材，具有多种药理活性和药用价值。
为了从五味子中提取和分离有效成分，需要进行一系列的提取和分离工作。
下面将介绍五味子的提取分离流程。
一、五味子的制备需要对五味子进行制备工作。
将采集的五味子晒干，去除杂质，并研磨成细粉末，以便后续的提取工作。
二、五味子的浸提将制备好的五味子粉末与适量的溶剂（如乙醇、水、乙醚等）混合，进行浸提。
溶剂的选择应根据所需提取的成分来确定，不同成分对不同溶剂的溶解度有所差异。
浸提的条件包括温度、浸提时间和溶剂与原料比例等。
三、五味子的过滤经过浸提后，需要对提取液进行过滤以去除固体残渣。
可以使用滤纸、滤布或者其他过滤器进行过滤，使得提取液变得清澈透明。
四、五味子的浓缩过滤后的提取液通常含有大量的溶剂，需要进行浓缩处理。
常用的浓缩方法有真空浓缩、低温浓缩等。
通过控制温度和压力，将溶剂蒸发掉，使得提取液中的有效成分得到浓缩。
五、五味子的分离浓缩后的提取液中存在多种有效成分，需要进行分离和纯化。
这可以通过多种技术来实现，如色谱法、萃取法、结晶法等。
根据目标成分的性质和溶解度，选择合适的分离方法进行分离。
六、五味子的纯化分离得到的目标成分通常还存在杂质，需要进行进一步的纯化。
纯化的方法包括再结晶、凝胶过滤、渗透分离等。
通过优化纯化条件，可以获得高纯度的目标成分。
七、五味子的干燥纯化后的目标成分通常为湿状或含有溶剂，需要进行干燥处理。
干燥的方法有自然晾干、气流干燥、真空干燥等。
通过控制温度和湿度，去除残余的溶剂，使得目标成分得到干燥。
八、五味子的包装和储存经过提取和分离后的五味子成分需要进行包装和储存。
一般采用密封的容器进行包装，避免光照和湿气的影响。
同时，应将其储存在干燥、阴凉的地方，以保持其药效和质量。
通过以上的提取分离流程，可以从五味子中获得纯化的有效成分，为后续的药物研究和应用提供基础。
同时，该流程还可以根据需要进行调整和优化，以提高提取和分离的效率和纯度。
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FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食品科技2008年第33卷第11期提取物与应用Study on extraction and purification of polysaccharide fromSchisandra chinensis (Turcz.)Bail1MENG Xian-jun 1,NA Guang-ning 1,GAO Xiao-xu 1,2,LI Ji-hai 2,QIN Qin 1(1.Department of Food Science,Shenyang Agricultural University,Shenyang 110161;2.BeiHua University,Jilin 132013)Abstract:A polysaccharide was obtained from Schisandra chinensis(Turcz.)Baill by method of water extrac －tion and ethanol precipitation and eliminate protein;After DEAE-cellulose 52SCP-B,SCP-B Ⅱand SCP-B Ⅲwas obtained;The result indicate that SCP-B Ⅰ,SCP-B Ⅱand SCP-B Ⅲwas homogeneous molecular weight assayed by UV scanning pattern and Sephadex S-300column chromatography.Key words ：Schisandra chinensis (Turcz.)Bail1polysaccharide;extraction;purification 收稿日期：2008-05-22基金项目：吉林省科技厅资助项目(20060901-01)。
作者简介：孟宪军(1962—)，男，教授，主要从事植物活性成分的研究工作。
北五味子是木兰科植物五味子(Schisandra Chi －nensis(Turcz.)Baill)的干燥成熟果实，因其果实甘、酸、辛、苦、咸五味俱全，故名五味子，又名五梅子、玄及、会及、山花椒等，因主产于我国东北各地，也称为北五味子和辽五味子。
北五味子是著名的滋补性中药，始载于《神农本草经》，列为上品[1]。
五味子含多糖、木脂素、挥发油、戈米辛A 、B 等成分，具有明显的医疗保健作用和极高的营养价值[2]。
目前国内外对北五味子多糖研究多集中在粗多糖的提取及功能方面，而对其纯化以及单一多糖组分研究还很少[3]。
本文对北五味子果实中多糖进行系统的研究。
1材料与方法1.1材料与仪器1.1.1材料与试剂北五味子：采自沈阳农业大学沃林中草药研究所北五味子种植基地，干燥，清洗，烘干备用；无水乙醇、葡萄糖、乙醚、苯酚、浓硫酸、三氯甲烷、正丁醇、三氯甲烷、木瓜蛋白酶等：分析纯；DEAE-52纤维素Whatman 公司；SephadexS-300：瑞典Pharmacia 公司。
1.1.2仪器与设备7200型可见分光光度计：尤尼柯(上海)有限公司；RE-52型旋转蒸发仪：上海博通经贸有限公司；SHZ-IIIB 型循环水真空泵：北五味子多糖的分离纯化研究孟宪军1，那广宁1，高晓旭1,2，李继海2，秦琴1(1.沈阳农业大学食品学院，沈阳110161；2.北华大学，吉林132013)摘要：应用水提醇沉以及除蛋白等方法，从北五味子果实中获得多糖；多糖经DEAE-cellu －lose52后得到SCP-B Ⅰ、SCP-B Ⅱ、SCP-B Ⅲ；经SephadexS-300柱层析和紫外吸收光谱分析证明：3种多糖均为均一多糖。
关键词：北五味子多糖；分离；纯化中图分类号：TS 201.2文献标志码：A文章编号：1005-9989(2008)11-0197-03·197·FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食品科技2008年第33卷第11期图3SCP-B ⅠSephadex S-300洗脱曲线管数A 4900.80.70.60.50.40.30.20.102814202632图2北味子多糖的DEAE-cellulose-52洗脱曲线1.61.41.210.80.60.40.201917253341495765Elution tubes三氯乙酸法sevsge 法E+SE+三氯乙酸A 4900.140.120.10.080.060.040.021234567图1不同方法对脱蛋白的影响上海华琦科学仪器有限公司；TDL-5000B 型冷冻离心机：上海安亭科学仪器厂；上海市检测技术所上立检测仪器厂；UV-1100紫外可见分光光度计：上海分析仪器厂；透析袋(分子截流量为1000u)：美国产；BSZ-100自动部分收集器：上海沪西分析仪器厂；HL-2恒流泵：上海沪西分析仪器厂；TDL-5000B 型离心机：上海安亭仪器厂；Sar －trius 分析天平：西德产。
1.2实验方法1.2.1粗多糖的制备将处理好的北五味子在大烧杯中用蒸馏水浸泡24h ，取50g 试材，按照L 9(3)3进行水提正交实验，滤液用压滤器过滤，然后旋转浓缩到一定体积，5倍乙醇沉淀，静置过夜，6000r/min 离心20min ，60℃干燥后称质量。
多糖含量的测定采用苯酚－硫酸法[4]。
根据公式计算多糖得率：多糖得率(%)=多糖质量／试材质量×l001.2.2粗多糖脱蛋白处理分别选用sevage 法，三氯乙酸法，以及酶法与上述方法的结合进行脱蛋白处理，直至中间层无变性蛋白为止，蛋白含量测定采用考马斯亮蓝法。
最后将多糖用蒸馏水透析48h ，浓缩、醇沉后得微黄色多糖纯化物[5]。
1.2.3北五味子均一多糖制备及纯度鉴定DEAE-cellulose52柱层析[6]：将处理好的填充料浸泡在pH6.8的蒸馏水中，装柱(30cm ×1cm)后缓冲液平衡一夜[8]，上样：50mg 蒸馏水溶解的多糖浓缩液6mL ，然后依次用蒸馏水：0.1mol/L NaCl 、0.2mol/L NaCl 、0.3mol/L NaCl 溶液洗脱，每5min 收集一管，5mL/管。
硫酸-酚法跟踪检测，收集相同峰位，透析、浓缩、冻干。
多糖的Sephadex S-300柱层析[6]：将溶胀好的填充料用0.1mol/L 的NaCl 溶液平衡一夜，上样后用相同离子浓度的NaCl 溶液洗脱，收集相同峰位后，透析，浓缩，冻干。
将多糖配成1mg/mL 的水溶液在紫外分光光度计200~400nm 波长上扫描。
2结果与讨论2.1不同方法对蛋白脱除的结果与讨论不同方法对蛋白脱除的结果见图1。
由图1可以看出，三氯乙酸法脱蛋白效果明显好于sevage 法，而且其脱蛋白程度较大。
将酶法与上述方法相结合可以看出，酶法与三氯乙酸-正丁醇法结合脱蛋白效果较好。
即酶解处理后，再经三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白，重复处理5次即可，此时蛋白质含量为0.91mg/g ；而酶法与Sevag 法结合时，酶解处理后，再经7次Sevag 法处理，蛋白质含量仍为1.633mg/g ，脱除效率仍然较低。
2.2北味子多糖组分分离结果与讨论用DEAE-cellulose52层析柱将五味子多糖不同组分分离：多糖上样后，分别用水0.1、0.2、0.3mol/L 的NaCl 洗脱至硫酸一苯酚显阴性，结果出现一个水洗峰A ，及B 1、B 2、B 3，3个盐洗峰(见图2)，分别出现在0.1mol/L 、0.2mol/L 、0.3mol/L 盐洗脱100mL 后。
从多糖的洗脱曲线可知，水洗峰A 含量极微，而SCP-B Ⅰ、SCP-B Ⅱ、SCP-B Ⅲ含量相对较高。
其中水洗多糖组分为透明液体，盐洗脱组分SCP-B Ⅰ、SCP-B Ⅱ、SCP-B Ⅲ呈现不同程度的黄色。
2.3北味子多糖组纯化结果与讨论北味子多糖组纯化结果见图3~图5；北五味次数A 490提取物与应用·198·FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食品科技2008年第33卷第11期管数图8SCP-B Ⅲ的紫外吸收光谱图SCP-B Ⅲ2.5002.0001.5001.0000.5000.000200.0225.0250.0275.0300.0325.0350.0375.0400.0图7SCP-B Ⅱ的紫外吸收光谱图SCP-B Ⅱ2.5002.0001.5001.0000.5000.000图4SCP-B ⅡSephadex S-300洗脱曲线A 4901.210.80.60.40.20121824303642图5SCP-B ⅢSephadex S-300洗脱曲线28142026A 4900.60.50.40.30.20.10图6SCP-B Ⅰ的紫外吸收光谱图2002252502753003253503754002.5002.0001.5001.0000.5000.000SCP-B Ⅰ子多糖紫外吸收光谱结果见图6~图8。
由图3~图5可知，将SCP-B Ⅰ、SCP-B Ⅱ、SCP-B Ⅲ等多糖经凝胶柱层析后，洗脱曲线为对称而且单一峰，由图6、图7、图8紫外光谱图可见，SCP-B Ⅰ、SCP-B Ⅱ、SCP-B Ⅲ在280、260nm 处无吸收，表明它不含蛋白、多肽及核酸。
结合SCP-B Ⅰ、SCP-B Ⅱ、SCP-B Ⅲ等多糖经凝胶柱洗脱曲线为对称而且单一峰，因此可证明它们均为均一组分。
3结论多糖脱蛋白的过程中，酶法与三氯乙酸-正丁醇法结合脱蛋白效果最佳。
酶解处理后，再经三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白重复处理5次即可，此时蛋白质含量为0.91mg/g ，明显好于其他方法。
而酶法与Sevag 法结合时，酶解处理后，再经7次Sevag 法处理，蛋白质含量仍为1.633mg/g ，脱除效率仍然较低。
通过DEAE-cellulose 52层析柱吸附解析，将多糖分离成3种多糖组分SCP-B Ⅰ、SCP-B Ⅱ、SCP-B Ⅲ；经Sephadex S-300凝胶柱层析后，均为对称而且单一峰；由紫外光谱分析，SCP-B Ⅰ、SCP-B Ⅱ、SCP-B Ⅲ在280、260nm 处无吸收，表明它不含蛋白、多肽及核酸。
因此可以更进一步证明SCP-B Ⅰ、SCP-B Ⅱ、SCP-B Ⅲ多糖为均一组分。
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