血浆总抗氧化能力和低密度脂蛋白氧化易感性与ACI的关系

血浆总抗氧化能力采用比色法测定，其基本原理ＡＢＴＳ＠（２．２
一ａｇｉｎｏ—ｄｉ一３一ｅｔｈｙｌｂｅｎｚｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ ｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ）和过氧化物及Ｈ２０２
孵育，产生ＡＢＴＳ＠＋离子，产生稳定的蓝绿色，在０００ｎｍ．处有最大
光吸收。血浆中的抗氧化物可抑制上述反应，抑制的程度与ＴＡＳ
含量成正比。采用终点法在７１７０生化自动分析仪上测定ＴＡＳ含
＜ＨＤＬ—Ｃ），ＡｐｏＡ Ｉ，ＡｐｏＢ。
·
７．统计学方法
所有数据以均数±标准差＜ｉ ４－Ｓ）表示，数据处理采用ｔ检验
和相关分析。
结果
Ｌ脑梗死组与对照组ＬＤＬ氧化动力学特性比较。脑梗死组 的延迟时间较对照组明显缩短（５８．８ ｆｌ：８．１朔８１．５壬６．５ｍｉｎ Ｐ＜ ０．０１），而Ｃｎ最大氧化速率及ＣＤ最大生成量显著高于对照组 （ＣＤ最大氧化速率：３．０３±Ｏ．钾、，ｓ １．７０±Ｏ．２５ ｍｍ０１．ｍｉｌｌ＿１ ｇ“
·３·
ＬＤＬ蛋白；ＣＤ最大生成量：３７６．９４±２８．０４ ｖｓ ２３１．１４±３９． ３５ｍｍｏｌ／ｇ ＬＤＬ蛋白，Ｐ＜０．０１）。
２．脑梗死组与对照组血浆总抗氧化能力（ＴＡＳ）及ＮＯ比较。 脑梗死组ＴＡＢ较对照组显著降低（１．１１±０．１２ ＹＳ １．５４ ４－０． ３２ｍｍｏｌＹＬ，ｔ＝８．０１，Ｐ＜０．００１）；脑梗死组ＮＯ较对照组显著降低 （５５．９６±１５．３０１ｘｍｏｌ／Ｌ Ｖｓ ７７．６２±２０．９９Ｉｘｍｏｌ／Ｌ，ｔ＝５．３９，Ｐ＜０． ００１）。；
３．血浆ＴＡＳ与ＬＤＬ体外氧化的延迟时间呈正相关（ｒ＝０．４０
Ｐ＜０．０５）。
４．脑梗死组与对照组血脂及载脂蛋白水平比较。脑梗死组 ＴＧ，ＴＣ，ＬＤＬ—Ｃ及ＡｐｏＢ较对照组明显升高（Ｐ＜０．０１），ＨＤＬ— Ｃ，ＡｐｏＡ Ｉ较对照组明显降低（Ｐ＜０．０１）。
·ｅ，ｍｍ０１．
ｒａｉｎ。１９－ｌＬＤＬ蛋白）通过曲线上升相斜率可求得；（３）ＣＤ最大生
成萤（ＣＤ ｍａｘｉｍａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｍｍｏＬ／ｇ ＬＤＬ蛋白）通过吸光度曲线 最大值计算出峰值ＣＤ生成量与初始ＣＤ量的差。
４．血浆总抗氧化能力（Ｔｏｔａｌ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｓｔａｔｕｓ，ＴＡＳ）测定
ｄａｎｔ ｓｔａＫｍ ＴＡＳ）进行分析，探讨ＡＣＩ组与正常对照组问这二者之 间的关系。
，
／材料和方法
ｔ
一、研究对象 ＡＣＩ组为６４例ＡＣＩ患者，男４５例，女１９例，均为我院２００１ 年１月—２００１年１２月人院患者，符合第四届全国脑血管会议制 定的诊断标准，经头ＣＴ和／或ＭＲＩ诊断证实，排除心、肝、胆、胰、 肾等脏器韵疾病及糖尿病，年龄３ｌ—－７９岁，平均年龄５９．３９±１２．
２．低密度脂蛋白（ＬＤＬ）的分离 采用密度梯度超速离心法分离血浆ＬＤＬ。取０．９ｍｌ血浆置于 聚碳酸酯纤维离心管中，用溴化钾（ＩＣＢｒ）调整其密度为１．４００Ｋ＃ Ｌ，在其上加入１．１００Ｋｇ／Ｌ的ＫＢｒ溶液１．８ｍｌ，再加入１．００６ｋｇ／Ｌ 的盐水（含０．０１％ＥＤＴＡ）９．３ｍｌ。天平配平后，放入ＲＰ８３Ｔ固定 角转子中，在日立ｓｃＶ ８５Ｈ型超速离心机离心，１５℃，ＡＶＧ ２７８９４０ ×ｇ（６５０００ｒｐｍ），超速离心５．５ｈ。超速离心后，在管子中下部可 见一条密集的淡黄色的条带，即为要分离的ＬＤＬ。用１０ｍｌ一次性 注射器轻轻插在淡黄色条带下缘，缓缓吸出ＬＤＬ约２ｍｌ，放人做好 标记的离心管中。分离好的ＬＤＬ置于３Ｌ ＰＨ为７．４的０．０１Ｍ磷 酸盐缓冲液＜ＰＢＳ）（含０．１６ｔｏｏｌ ＮａＣＩ，１０ｐ，ｍｏｌ ＥＤＴＡ）中，４℃避光 透析２４ｈ，浓缩ＬＤＬ。所分离的ＬＤＬ经琼脂糖凝胶电泳证实为一 条带。 ３．ＬＤＬ氧化易感性的测定 采用体外Ｃｕ２＋诱导ＬＤＬ检测２３４ｎｍ生成共轭二烯（ｃｏｎｊｕｇａ． ｔｅｄ ｄｉｏｎｅｓ ＣＤ）的量间接反应ＬＤＬ氧化易感性。将稀释好的ＬＤＬ 溶液（ＬＤＬ蛋白浓度为０．０５９／Ｌ）加入比色杯中，再加入ＣｕＣｌ：· ２Ｈ：Ｏ新鲜配制的溶液，使其终浓度达１０ｐ，ｍｏｌ／Ｌ，置入带恒温装置 的ｕＶ一１６０紫外一可见分光光度计中，３７℃恒温监测２３４１１ｍ处的 光吸光度变化．每隔２ｍｉｎ仪器自动记录一次吸光度值，记录３ｈ。 然后绘制时间一吸光度变化曲线，曲线可分为三个连续相＜１）延 迟相，（２）上升相，＜３）下降相。用以下三个指标描述ＬＤＬ的氧化 易感性（１）延迟时间（ｈｇ ｔｉｍｅ，ＩＩｌｉｎ），上升相斜率与初始阶段水平
０８岁。对照组为健康体检者４２例，男２７例，女１５例，年龄柏一
７７岁，平均年龄５１．６６ ４－９．４３岁，以上两组三个月内均未服用抗 氧化药物及降脂类药物，且都无烟、酒嗜好。
、
二、实验方法
·】·
１．标本的采集和制备
所有受试对象空腹１２ｈ晨起后，静脉采血８ｍｌ，５ｍｌ注入含有
４００ｕｌ ＥＤＴＡ·Ｎａ２（１．０９／Ｌ）的抗凝管中，４０Ｃ，２０００ Ｘ ｇ，离心 １０ｒａｉｎ，分离血浆，一８０℃保存待测，另３ｍ１分离血清，置一８０℃待 测ＮＯ及脂类。
中文摘要
前言
动脉粥样硬化性脑梗死（ＡＣＩ）与动脉粥样硬化（Ａｓ）有着密 切的关系，氧化低密度脂蛋自＜ＯＸ—ＬＤＬ）在Ａｓ发生发展中扮演着 关键角色。低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化修饰促进了ＬＤＬ累积于巨 噬细胞并促进其转化为泡沫细胞一这是Ａｓ初始步骤，ＯＸ—ＬＤＬ抑 制内皮细胞的一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ），减少一氧化氮的合成。／由于 血浆中有强大的抗氧化能力，ＬＤＬ氧化主要发生在动脉血管内膜 下。体外采用Ｃｕ２：诱导ＬＤＬ检测２３４ｎｍ生成共轭二烯（ｃｏ．ｊｕｇａ— ｔｅｄ ｄｉｅｎｅｓ ＣＤ）韵量间接反应ＬＤＬ氧化易感性。一些学者还对冠
量。
５．一氧化氮（Ｎｉｔｒｉ ｏｘｉｄｅ，ＮＯ）测定
本文采用硝酸还原酶法测定ＮＯ。硝酸还原酶法特异地将
ＮＯ；还原成Ｎｏ；，与显色剂反应生成有色化合物，颜色韵深浅与
ＮＯ浓度高低成正比。
６．血脂及载脂蛋白的测定 ．
采用商品化的试剂盒测定血清总胆固醇（ＴＣ），甘油三酯
（ＴＧ），低密度脂蛋白胆固醇＜ＬＤＬ—ｃ），高密度脂蛋白胆固醇