乳酸菌镜检方法及显微镜使用方法
乳酸菌镜检方法及显微镜使用方法
・・…最新资料整理推荐……乳酸菌精简方法及显微镜使用方法第一部分：乳酸菌镜检可以釆用革兰氏染色方法。
第二部分：使用显微镜的油镜进行镜检，下面是具体的染色方法和镜检方法，请参考。
第一部分：乳酸菌革兰氏染色方法1目的在乳酸菌发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的乳酸菌悬液或乳酸菌样品进行检测，观察乳酸菌乳酸菌在显微镜下的形态。
2原理通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
3实验用品准备：灭菌玻片、10-lOOul移液器、10-100U1灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器4操作：1涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。
2干燥:将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。
3固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60°C）,放置待冷后，进行染色。
4初染：在涂片薄膜上滴加草酸鞍结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约Imino5水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
乳酸菌的检验(9-10)
基座
能污染的细菌；也经常应用于食品加工、包装、
橡皮塞
发酵等生产过程中环境空气的除菌，而且本法 也最为经济、效率亦高。
3
乳酸菌的检验操作
• 莫匹罗星锂盐（抗生素）如何灭菌？
漏斗
在实验室，过滤除菌主要用于一些不耐高 温灭菌的物质如血清、酶溶液、维生素、抗生
素及药液的除菌。实验室中用于除菌的微孔滤
滤膜
膜孔径一般为0.22µm或0.45µm。 在食品工业，过滤除菌广泛应用于饮料厂、
多孔玻璃板 糖厂、酒厂，以除去水质、粗糖液、贮酒中可
----干热灭菌160-170℃ 1-2h
平皿可以用牛皮纸或 双层报纸包扎成捆， 或放入金属筒内再灭 菌。
在吸管粗头顶端约 0.5cm处，塞上一 小段棉花，后用45cm宽的报纸将其 包好。
内部框架 带盖外筒
电热恒温干燥箱
3
乳酸菌的检验操作
培养基、生理盐水
-----湿热灭菌121 ℃ 15-30min
乳酸菌的检验
专业名称：食品药品监督管理 课程名称：食品微生物检测技术
3
乳酸菌的检验操作
任务一 仪器试剂准备 • 小组内讨论 根据检验流程，小组确定准备的试剂种类
和量，所需仪器名称及用量。（20min小组内完成） • 小组间讨论确定
任务二 仪器试剂灭菌 实施，仪器试剂准备灭菌
器皿3
乳酸菌的检验操作
乳酸菌鉴定
都要求无菌操作菌种的分离取lmL卤汁以10倍递增稀释方法（一份酸奶，九份无菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份无菌水，依次类推），将其稀释至1/10～10的-10次幂（我打不上去），然后从不同浓度稀释液中分别取lmL倾注在平皿中，再倒入培养基相混合，待培养基凝固后倒置于30~C 恒温下培养48h。
挑取长势良好的单个茵落划线分纯，直至纯化(茵落单个大小一致，革兰氏染色镜检，茵体一致)。
结果分离得到3株不同菌株，分别编号为菌株1、菌株2、菌株3。
再分别转移到试管斜面上进行保存。
分离用培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1 000 mL，琼脂20g，pH7．0—7．2；保存用斜面培养基：酵母膏1％，碳酸钙2％，葡萄糖1％，琼脂2％，pH 7．0。
培养条件将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上，在30℃恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果。
测定方法菌落总数采用逐级稀释法来计数；pH值用pHS一2C酸度计测定；乳酸定性及含量测定依据食品检验技术1I．2．1乳酸菌的分离与筛选的试验程序自然发酵酸菜汁液一稀释一培养一挑起单菌落染色、镜检一挑选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优良菌株一试管穿刺低温保存。
1．2 1．2 乳酸菌的鉴定用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定。
生理生化特征鉴定：产乳酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应⋯、明胶水解反应、硫化氢反应、乳酸菌发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验。
1．2．I．3 乳酸菌的保存⋯采用定期移植低温保藏法。
培养基配方：葡萄糖1％、蛋白胨0 2％、l(}l2PQ|0．2％、琼脂20％、pH值7 0，分装试管，121。
c灭菌30min。
将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺培养，然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右)，2个月移植1次。
1．2．2 分离乳酸菌的生理特点试验1 2 2．1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照，定期取出接种培养基在721分光光度计上，用最大吸收光波长=6001RIifl测定。
关于乳酸菌检验操作规范培训课件
染色阳性，无芽孢，一般不运动，不产生色素。
2．链球菌属的生物学特点
▪ 化能异养型，同型乳酸发酵产生右旋乳酸； 兼性厌氧型，接触酶反应阴性，厌氧培养 生长良好。
3．链球菌属的代表种
▪ 嗜热链球菌（St.thermophilus） ▪ 细胞形态呈链球状。 ▪ 能利用葡萄糖、果糖、乳糖和蔗糖进行发酵产生乳
生D－型乳酸（有酸涩味，适口性差），不能利 用蔗糖。
▪ 该菌是乳酸菌中产酸能力最强的菌种。 ▪ 蛋白质分解力较弱，发酵乳中可产生香味物质
乙醛。 ▪ 最适生长温度37～45℃，温度高于50℃或低于
20℃不生长。 ▪ 常作为发酵酸奶的生产菌。
3.2嗜酸乳杆菌（L.acidophilus）
▪ 细胞形态比保加利亚乳杆菌小，呈细长杆状，能 利用葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖进行同型乳酸发 酵产生乳酸。
7.0，不耐酸，酸性环境（pH≤5.பைடு நூலகம்）对菌体存活不 利。
3、代表种
▪ 人体肠道中共有8种，其中数量最多的5种为： ▪ 两歧双歧杆菌（B.bifidum） ▪ 婴儿双歧杆菌（B.infantis） ▪ 青春双歧杆菌（B.adolescentis） ▪ 长双歧杆菌（B.longum） ▪ 短双歧杆菌(B.breve)
▪ 最适生长温度37℃，20℃以下不生长，耐热性差。 蛋白质分解力较弱。
▪ 最适生长pH 5.5～6.0，耐酸性强，能在其它乳酸 菌不能生长的酸性环境中生长繁殖。
▪ 嗜酸乳杆菌是能够在人体肠道定殖的少数有益微 生物菌群之一，其代谢产物有机酸和抗菌物质— 乳杆菌素可抑制病原菌和腐败菌的生长。
（二）链球菌属（Streptococcus）
乳酸菌的鉴定
乳酸菌的鉴定
1.革兰氏染色
对分离所得的菌株进行革兰氏染色
（1）制片：将一小滴水滴于载玻片中央，挑取一个菌落于水滴中，涂匀后将载玻片通过火焰2-3次后进行干燥、固定；
（2）初染：干燥、固定后，于载玻片上滴加草酸铵结晶紫，使其完全覆盖菌体，约1-2 min后，水洗载玻片至流出液完全无色；
（3）媒染：于载玻片上滴加碘液覆盖菌体约1 min左右，水洗载玻片至流出液完全无色；
（4）脱色：用滤纸将载玻片上的水吸干后，用95%的酒精滴洗约20-30 s，立即用水冲洗；
（5）复染：用滤纸将载玻片上的水吸干后，用番红复染2 min，水洗后晾干；（6）镜检：用擦镜纸擦拭油镜后，将载玻片置于100倍油镜下，滴加香柏油，观察，红色即为革兰氏阴性菌，紫色即为革兰氏阳性菌。
我们选革兰氏阳性菌。
革兰氏阳性菌。
乳酸菌鉴定方法
乳酸菌鉴定方法嘿，你问乳酸菌的鉴定方法哈。
那我们得先从形态学方面入手。
把含有乳酸菌的样本放在显微镜下观察。
乳酸菌的形状有点特别，大多数是杆状或者球状的。
就像一个个小卫士，在微观世界里排着队。
你可以看看它们的大小，一般都比较小，得仔细观察才能看清它们的模样。
有的乳酸菌还会连在一起，像一串串小珠子似的。
再说说菌落特征。
把乳酸菌接种到固体培养基上，让它们生长繁殖。
过一段时间后，你会看到培养基上长出了一个个小菌落。
乳酸菌的菌落通常比较小，而且表面光滑、湿润。
有点像小小的露珠落在培养基上。
颜色一般是白色或者乳白色的，看起来很干净。
接着讲讲生化反应鉴定。
乳酸菌能发酵一些糖类，比如葡萄糖、乳糖等。
我们可以通过检测它们发酵糖类产生的产物来鉴定。
比如检测有没有产生乳酸，因为乳酸菌的名字可不是白叫的，它们可是产乳酸的能手。
可以用一些化学试剂来检测，要是试剂变色了，那就说明产生了乳酸。
还有一个方法是通过分子生物学技术来鉴定。
这就有点像用高科技手段来识别乳酸菌。
提取乳酸菌的DNA，然后用特定的引物进行PCR 扩增。
就像给乳酸菌的DNA 做个标记，这样就能准确地知道是不是乳酸菌了。
我给你讲个事儿哈。
在一家做酸奶的工厂里，他们很关心酸奶里的乳酸菌。
有一次，他们怀疑酸奶里的乳酸菌有点问题，就开始进行鉴定。
先把酸奶样品放在显微镜下看，发现有很多球状的小东西，看着像是乳酸菌。
然后把样品接种到培养基上，长出了好多小菌落，菌落的特征和乳酸菌的很像。
接着他们又做了生化反应测试，发现这些菌确实能发酵乳糖产生乳酸。
最后还不放心，又用分子生物学技术验证了一下，确定就是乳酸菌。
这样他们就放心了，知道自己的酸奶里有足够的、正宗的乳酸菌。
在鉴定乳酸菌的时候，每一个方法都很重要。
就像我们认识一个人，要从不同的方面去了解。
不能只看外表，还得看看他的行为、习惯等。
鉴定乳酸菌也是一样，综合运用这些方法，才能准确地鉴定出乳酸菌。
而且操作过程要仔细，不能马虎，不然就可能得出错误的结论。
显微镜观察乳酸菌实验步骤
显微镜观察乳酸菌实验步骤以显微镜观察乳酸菌实验步骤为标题，本文将介绍通过显微镜观察乳酸菌的实验步骤。
一、实验准备1. 准备所需材料：显微镜、玻璃载片、盖玻片、显微镜玻片夹、无菌培养基、无菌培养皿、无菌的移液管和吸管等。
2. 消毒操作台面和所使用的实验器材，保持无菌状态。
3. 根据实验需要，准备培养基并进行无菌检测。
二、制备乳酸菌样品1. 选择适当的乳酸菌菌株，如Lactobacillus acidophilus。
2. 从培养基中取少量乳酸菌菌液，转移到一个无菌的试管中。
3. 将试管放入低温冰箱中保存，以便后续的实验操作。
三、制备显微镜载片1. 取一张无菌的玻璃载片，将其用火焰消毒或酒精擦拭消毒。
2. 用无菌的移液管吸取少量乳酸菌菌液，滴在玻璃载片上。
3. 用另一张无菌的盖玻片将菌液封闭在载片上，避免空气污染。
四、显微镜观察1. 将制备好的显微镜载片放在显微镜平台上。
2. 调节显微镜的倍率，选择适当的增大倍率，以便更清晰地观察乳酸菌。
3. 通过显微镜镜头转动调节焦距，使乳酸菌图像变得清晰。
4. 用目镜观察显微镜载片，观察乳酸菌的形态特征，如大小、形状、颜色等。
5. 可以调整显微镜的光源，以获得最佳的观察效果。
6. 可以用显微镜配备的相机或手机拍摄乳酸菌的图像，以便后续的研究和分析。
五、实验注意事项1. 所有操作必须在无菌条件下进行，以避免外部细菌的污染。
2. 在观察前，要检查显微镜是否正常工作，并调整好焦距和光源。
3. 操作过程中，要避免在显微镜载片上产生气泡，以免影响观察效果。
4. 操作结束后，及时清洗和消毒所使用的实验器材，以防止细菌的残留。
通过以上实验步骤，我们可以使用显微镜观察乳酸菌的形态特征，了解其大小、形状和颜色等信息。
这对于乳酸菌的研究和应用具有重要意义，可以为相关领域的科研和产品开发提供参考。
同时，本实验也要求严格的无菌操作和实验技巧，以保证实验结果的准确性和可靠性。
通过实验观察，我们可以更好地了解乳酸菌的微观结构和特征，为乳酸菌的应用提供科学依据。
乳酸菌检测方法
一、乳酸菌检测方法植物乳杆菌的检验1原理植物乳杆菌能在相应的厌氧培养条件下，于MRS培养基表面生长成白色、细密、圆形光滑突起的菌落，根据长出的菌落数和稀释倍数，计算出活菌数。
2仪器与试药2.1 仪器超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温干燥箱、电冰箱、恒温培养箱（60℃±1℃）、恒温水浴锅、显微镜（10x—100x）、架盘天平（0—500g，精确至0.5g）、250ml锥形瓶、250ml 盐水瓶、灭菌吸管：1ml(具0.01ml刻度）、10ml(具0.1ml刻度）、灭菌平皿（直径90mm）、灭菌试管（15mm×160mm）、灭菌L型玻璃棒等。
2.2 试药酪蛋白胨、牛肉浸膏、酵母提取物、琼脂等均为生化试剂；无水乙酸钠、柠檬酸三胺、硫酸镁、硫酸锰、葡萄糖、磷酸氢二钾、碳酸钙、吐温-80、氯化钠等均为分析纯；水为双蒸馏水，其他化学试剂均为分析纯。
2.3 MRS琼脂培养基的组成与制备2.3.1培养基的组成酪蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母提取物5g、葡萄糖20g、无水乙酸钠5g、柠檬酸三胺3g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.2g、磷酸氢二钾2.0g、碳酸钙20g、吐温-801ml、琼脂15g、蒸馏水1000ml。
2.3.2培养基制备将上述的各组分在80～90℃加热使溶解，校正pH6.2，加蒸馏水至1000ml中，摇匀，分装于盐水瓶，每瓶100ml。
在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。
2.4营养琼脂平板的制备取冷至45℃左右的MCA琼脂培养基，在无菌的条件下倒入无菌的培养皿中，每平皿各约15ml，待冷却凝固后，备用。
2.5无菌生理盐水的制备称取氯化钠9.0g，用蒸馏水溶解并定容于1000ml量瓶中，摇匀，分装于250ml三角瓶中，每瓶装90ml. 在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。
3供试品溶液的制备以无菌操作法取检品10.0g，加入盛有90ml无菌生理盐的三角瓶中，充分振荡10分钟，制成1﹕10样品悬液。
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乳酸菌精简方法及显微镜使用方法
第一部分：乳酸菌镜检可以釆用革兰氏染色方法。
第二部分：使用显微镜的油镜进行镜检，
下面是具体的染色方法和镜检方法，请参考。
第一部分：乳酸菌革兰氏染色方法
1目的
在乳酸菌发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的乳酸菌悬液或乳酸菌样品进行检测，观察乳酸菌乳酸菌在
显微镜下的形态。
2原理
通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
3实验用品准备：
灭菌玻片、10-lOOul移液器、10-100U1灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打
火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、
擦镜纸、计时器
4操作：
1涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布
成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。
2干燥:将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间
过长，以防标本烤枯而变形。
3固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时
以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过
60°C）,放置待冷后，进行染色。
4初染：在涂片薄膜上滴加草酸鞍结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂
片，染色约Imino
5水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
6媒染：用100-1000U1移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上, 使染色液覆盖涂片，染色约Imino
7水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
8脱色：斜置载玻片，滴加95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时20-30S,随即水洗。
9复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约Imino
10水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
11干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后滴一滴浸油在玻片上，用油
镜观察细菌的形态及颜色，紫色的是革兰氏阳性菌，红
色的是革兰氏阴性菌。
5清场
实验结束后，将显微镜油镜上的残留的香柏油用擦镜纸轻轻擦去，将载物台移至最底处，将灯光调到最暗并将其关闭电源，拔下电源插头，罩上防尘罩
第二部分显微镜使用方法
以XSZ-3G型号的生物显微镜为例介绍显微镜操作规程及注意事项，乳酸菌形态观察要用油镜。
XSZ-3G生物显微镜操作规程及注意事项
1操作规程1.1安放
右手握住镜臂，左手托住镜座，使镜体保持直立。
桌面要清洁、平稳，要选择临窗或光线充足的地方，距离桌边3~4厘米处。
1.2清洁
检查显微镜是否清洁，镜身机械部分可用干净软布擦拭。
透镜要用擦镜纸擦拭，如有胶或粘污，可用少量二甲苯清洁之。
1.3对光
镜筒升至距载物台广2厘米处，低倍镜对准通光孔。
调节光亮度的旋钮。
1.4安装标本
将玻片放在载物台上，注意有盖玻片的一面一定朝上。
用弹簧夹将玻片固定，转动平台移动器的旋钮，使要观察的材料对准通光孔中央。
1.5调焦
调焦时，先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒，并从侧面仔细观察, 直到物镜贴近玻片标本，然后左眼自目镜观察，左手旋转粗调焦旋钮抬升镜筒，直到看清标本物像时停止，再用细调焦旋钮回调清晰。
1.6观察
镜检时应将标本按一定方向移动视野，直至整个标本观察完毕, 以便不漏检，不重复。
低倍镜观察：观察任何标本时，都必须先使用低倍镜，因为其视
野大，易发现目标和确定要观察的部位。
高倍镜观察：从低倍镜转至高倍时，只需略微调动细调焦旋钮, 即可使物像清晰。
使用高倍镜时切勿使用粗调焦旋钮，否则易压碎盖玻片并损伤镜头。
油镜的观察：先用低倍镜及高倍镜将被检物体移至视野中央后，
再换油镜观察。
油镜观察前，应将显微镜亮度调整至最亮，光圈完全打开。
使用油镜时，先在盖玻片上滴加一滴香柏油（镜油），然后降低镜筒并从侧面仔细观察，直到油镜浸入香柏油并贴近玻片标本，然后用目镜观察，并用细调焦旋钮抬升镜筒，直到看清标本的焦段时停止并调节清晰。
香柏油滴加要适量。
油镜使用完毕后一定要用擦镜纸沾取二甲苯擦去香柏油，并再用干的擦镜纸擦去多余二甲苯。
1.7结束操作
观察完毕，移去样品，扭转转换器，使镜头V字型偏于两旁，擦抹干净，将光亮度调至最暗，再关闭电源按钮，以防止下次开机时瞬间过强电流烧坏光源灯，并套上镜套。
2注意事项
2.1光强的调节：一般情况下，染色标本光线宜强，无色或未染色标本光线宜弱；低倍镜观察光线宜弱，高倍镜观察光线宜强。
2.2不应在高倍镜下直接调焦；镜筒下降时，应从侧面观察镜筒和标本间的间距；要了解物距的临界值。
2. 3在进行高倍镜头的切换的时候,一定要从低倍到高倍顺序, 否则容易打坏镜头,还会污染低倍物镜。
2.4转换物镜时要用手转物镜转盘,不能直接扳动物镜。
2.5显微镜的任何光学部件都不可以干擦，必须用好的擦镜纸或者棉签沾清洗液擦洗。
特别注意擦之前一定要用吹气球先吹掉大的灰尘颗粒。
2.6不要随意把目镜拿下来，这样容易污染目镜，严重的会因此而长°。