巴氏染色液EA50染色液使用说明书

剂染色
8.
95 % 乙醇（Histanol 95）冲洗
上下跌落 6-8 次
9.
100 %乙醇（Histanol 100）脱水
上下跌落 6-8 次
10.
100 %乙醇（Histanol 100）脱水
3-5 min
11.
二甲苯（BioClear）或其替代物（BioClear New）
上下跌落 6-8 次
上下跌落 6-8 次
13.
100 %乙醇（Histanol 100）脱水
3-5 min
14.
二甲苯（BioClear）或其替代物（BioClear New）
上下跌落 6-8 次
透明处理
15.
二甲苯（BioClear）或其替代物（BioClear New）
3-5 min
透明处理
透明化处理后应立即用合适的封片剂进行封片 。如果使用二甲苯（BioClear ）透明化，对
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EA50 染色液使用说明书 【产品名称】 EA50 染色液
【产品编号】 EA50-OT-100 ，EA50-OT-500 ，EA50-OT-1L，EA50-OT-2.5L
【包装规格】 100 ml 500 ml 1000 ml 2500 mL
【预期用途】细胞质染色试剂，用于 Papanicolaou 染色法细胞学上使用的对比
次
馏水或去离子水冲洗
2.
苏木素 HP，Pap 1A 染色
6 min
3.
蒸馏水或去离子水冲洗
上下跌落 6-8 次
4.
HCL Pap 溶液或 0.1 % HCl 溶液分化处理
5-10s
注：此步骤可去除细胞核和细胞质上过多的苏
木素染液，但分化时间过长会使细胞核发生褪
色。
5.
蒸馏水冲洗
上下跌落 6-8 次
6.
巴氏（Papanicolaou）染色法，退行性染色：
退行性染色法使样本染色后更加容易区分，细胞核结构更加清晰。
染色之前，样本材料应收集并固定于载玻片上。
如样本已经用 CitoSpray 固定并干燥，应放置于 95 % 乙醇（Histanol 95）中
10 min，以去除聚乙二醇；若样本是经 95 % 乙醇（Histanol 95）溶液固定，
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染料
【检验原理】
EA50 染色液, Pap3B 试剂为伊红 Y 和亮绿 SF 酸（加入了磷钨酸，PTA）染液的酒
精溶液。Papanicolaou 染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用 OG-6 试剂和
EA 试剂继续染色。橘黄 G 染料对细胞质染色，并保持在成熟细胞和角质化细胞。
之后的 EA 试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。
3 组，每组上下跌落 6-8 次
80 and Histanol 95）进行脱水
5.
OG-6，Pap 2A 染色
2-3 min
6.
95 % 乙醇（Histanol 95）冲洗
2 次，每次上下跌落 6-8 次
7.
EA 31，Pap 3A 试剂染色 / EA 50，Pap 3B 试 2-3 min
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为防止苏木素 HP 溶液沉淀和表面形成金属光泽漂浮物，使用前过滤处理。
染色时间为非标准化、固定化，需要根据临床和实验经验来调控。
建议的操作方法是根据 KOHYPATH 试剂的特性和长时间的临床和实验经验而整理
的
染色强度根据染色时间而定，实际染色操作需根据具体实验需求确定。
在符合细胞学技术操作的前提下，染色流程可根据个人实验需求改变。
注意事项：
为防止苏木素 HP，Pap 1A 溶液沉淀和表面形成金属光泽漂浮物，标准化、固定化，需要根据临床和实验经验来调控。
建议的操作方法是根据 KOHYPATH 试剂的特性和长时间的临床和实验经验。
染色强度根据染色时间而定，实际染色操作需根据具体实验需求确定。
在符合细胞学技术操作的前提下，染色流程可根据个人实验需求改变。
应使用二甲苯基质的封片剂（BioMount，BioMount High，BioMount M ，BioMount DPX，
BioMount C，或普通 BioMount）；如果是由二甲苯替代物（BioClear New ）透明化，使用
环保封片剂 BioMount New 进行封片。
使用盖玻片覆盖。
注意事项：
阳光直射。产品使用效期为 2 年，具体效期见标签。
【适用仪器】不适用
【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进
行实验。
为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。
根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。 【参考文献】
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1. Papanicolaou, G.N. (1941): Some improved methods for staining vaginal smears. J Lab Clin Med. 2. Papanicolaou, G.N. (1942): A new procedure for staining vaginal smears. Science. 3. Carson, F.L., Hladik C. (2009): Histotechnology: A self-instructional text, 3rd ed. ASCP Press.
染色结果：
蓝色—细胞核
黄色至橙色—角质化细胞
粉色至红色—表皮鳞状细胞，红细胞，核仁，纤毛
绿色—其他细胞胞质（副基底和中层鳞状细胞，柱状细胞，多核细胞白细胞，淋
巴细胞，组织细胞，腺癌细胞及未分化癌细胞）
【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C 和 +25°C
之间。保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接
请忽略此步骤。细胞学样本染色过程中（用 LBC 法），包含低浓度乙醇，因此无
需用降低梯度的乙醇进行水化。后续用苏木素 HP，Pap 1A 染色。
1.
递 减 的 梯 度 浓 度 乙 醇 溶 液 （ Histanol 95,
4 组，每次上下跌落 6-8
Histanol 80 and Histanol 70）水化，并用蒸
透明处理
12.
二甲苯（BioClear）或其替代物（BioClear New）
3-5 min
透明处理
透明化处理后应立即用合适的封片剂进行封片 。如果使用二甲苯（BioClear ） 透明化，对应使用KOHYPATH二甲苯基质的封片剂（BioMount，BioMount High， BioMount M ，BioMount DPX，BioMount C，或普通 BioMount）；如果是由二甲 苯替代物（BioClear New ）透明化，使用BioMount New 封片。 使用盖玻片覆盖。
Scott 溶液或显蓝试剂处理
1 min
注：若没有此试剂，可直接用自来水冲洗
3-5 min
7.
递 增 梯 度 浓 度 乙 醇 溶 液 （ Histanol 70, 3 组，每组上下跌落 6-8
Histanol 80 and Histanol 95）进行脱水
次
8.
OG-6，Pap 2A 染色
3 min
适当的稳定剂，两者浓度和比例不同于其他 EA Pap 试剂。
细胞学涂片染色：
收集和准备细胞学材料的两种方法：
收集细胞学样本后置于载玻片（Vitro Gnost）上，立即喷洒固定液（CitoSpray）
进行固定，干燥后染色备用。样本固定后可放置于 95 % 乙醇（Histanol 95）
中 30 min。
80 and Histanol 70）水化，并用蒸馏水或去离 4 组，每次上下跌落 6-8 次
子水冲洗
2.
苏木素 HP，Pap 1A 染色
2-3 min
3.
Scott 溶液或显蓝试剂处理
1 min
注：若没有此试剂，可直接用自来水冲洗
3-5 min
4.
递增梯度浓度乙醇溶液（Histanol 70, Histanol
测试样本可为妇科细胞样本和非妇科细胞样本，如痰液，尿液，细胞穿刺等。为
获得优质的染色效果，EA 50 Pap 3B 试剂特性与 KOHYPATH 其他用于细胞学涂片
染色试剂（苏木素 HP，Pap 1A 试剂，OG-6，Pap 2A 试剂）相符。
【主要组成成分】含生物染料级别（BSC）的伊红 Y 和亮绿 SF，并添加磷钨酸和
10 min，以去除聚乙二醇；若样本是经 95 % 乙醇（Histanol 95）溶液固定，
请忽略此步骤。细胞学样本染色过程中（用 LBC 法），包含低浓度乙醇，因此无
需用递减梯度的乙醇进行水化。后续用苏木素 HP，Pap 1A 染色。
1.
递减梯度浓度乙醇溶液（Histanol 95, Histanol
上海科汇生物技术有限公司
9. 95 % 乙醇（Histanol 95）冲洗
2 次，每次上下跌落 6-8 次
10.
EA 31，Pap 3A 试剂染色/EA 50，Pap 3B 试剂
3 min
染色
11.
95 % 乙醇（Histanol 95）冲洗
上下跌落 6-8 次
12.
100 %乙醇（Histanol 100）脱水
用液体基质的细胞学方法（LBC），刷子刷下细胞学样本，立即浸入固定液（CitoFix）