实验七 维生素B片的含量测定
维生素B片含量测定的方法验证ppt课件
•含量测定 • 2.精密称取维生素B1对照品25mg，置100ml
量瓶中，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度 ，摇匀→ 得到对照品溶液。
• 3.将2份溶液用紫外分光光度计在246nm处分
别测定吸光度，计算即得。
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实验内容与要求
•鉴别试验
•吸收波长选择
•精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算
•目的
•考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值
或参考值接近的程度
•要求
•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制
备三份供试品溶液进行测试，计算回收率
•RSD < 2.0%
18
加样回收试验
98~102%
取含量测定时一半的称样量，0.5g/2
19
撰写方法学验证论文
• 线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 • 精密度试验 • 稳定性试验 根据实验测定数值进行计算 • 重复性试验 • 加样回收试验: • 设计称样量、对照品加入量 • 含量测定：根据实验测定数值进行计算
• RSD < 2.0%
……仪器分析
13
稳定性试验
• 同批、同法
14
重现性试验
•目的
•考察样品溶液制备方法的可靠程度
•要求
•同批样品按相同方法制备样品溶液，至
少6份,浓度与信号值均要在线性范围内
•RSD < 2.0%
……仪器分析
15
重现性试验(示例)
16
精密度试验（示例 ）
17
加样回收率试验
3
重现性试验
4
加样回收试验
5
稳定性试验
9
线性与范围
•精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml量
药物分析维生素B1片的含量测定
差示光谱法举例
六神丸中胆红素的测定 六神丸是家庭常备良药之一，主要由
牛黄、麝香、蟾酥、雄黄、冰片、珍珠六 味药组成，具有清热解毒、消肿止痛等功 效，具易服、高效、速效等特点。
胆红素在453nm下有最大吸收，在可见光照射下易氧化成蓝色产 物，在453nm处吸收度显著降低。胆红素在日光下照射25分钟或在红 外灯下（250W）下照射3.3小时，吸收度即稳定。
有紫外吸收
标准曲线法
吸收度A
0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
0 0
0.03, 0.641 0.025, 0.543 0.02, 0.445 0.015, 0.338 0.01, 0.227
0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 浓度C（mg/ml）
结果处理：
由回归方程算出供品的浓度，再计 算标示量%。
y=20.66x+0.0256 代入y值求x
操作注意事项：
1、先作曲线，再进行样品测定。因瓶不够。 2、曲线绘制由两组同学共同完成。 3、漏斗、滤纸、接滤液小杯（两份）干燥，防止稀释。 4、注意在同一台仪器测定，消除仪器误差。
取
样量Βιβλιοθήκη ＝50mg• 【规格】10mg • 【配伍禁忌】维生素B1在碱性溶液中易分解，与
碱性药物如碳酸氢钠、枸橼酸钠配伍，易引起变 质。
ΔA =AVB1+A背==εVB1CL+A背
246n m
266
（一）差示光谱法 原理 (difference spectrophtometry)简称ΔA法
样品1（AVB1+A背）
实验七维生素B片的含量测定
实验七维生素B片的含量测定CKBOOD was revised in the early morning of December 17, 2020. 实验七维生素B：片的含量测定一、实验目的1、掌握吸收系数法测定药物含量的方法。
2、熟悉紫外-可见分光光度计的原理及操作二、实验原理维生素政结构中的卩密噪环为一芳香杂环，具有紫外吸收。
因此可在其最大吸收波长处测定吸光度，进行含量测定。
三、实验仪器和试剂：1•仪器：紫外-可见分洸光度计、量瓶（lOOmL）、台秤、量筒（100mL）、烧杯、分析天平、漏斗、铁架台、铁圈、滤纸、剪刀等。
2.试剂：维生素5片、盐酸溶液（9->1000）四、实验内容：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素B】25mg）,置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9-1000）约70ml,振摇15分钟，使维生素BN容解,标示量％= xlOO%加盐酸（9-1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml, 置另一100ml 量瓶中，再加盐酸溶液（9->1000）稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在246nm处测定吸光度，按GH；C1NQS・HC1的吸收系数（E\J为421计算,即得。
五. 实验数据记录及处理六、注意事项（一） 仪器的准备1. 开启电源，使仪器预热20分钟。
2. 开机前，先确认仪器样品室是否有东西挡在光路上，以免影响仪器自检。
（二） 仪器的操作步骤1. 设置波长（246nm ）。
2.测定。
3.数据记录与结果处理。
（三） 将比色皿洗净装盒，关机（四） 填写仪器使用记录，（五） 维生素乩的紫外吸收峰随溶液pH 的变化而不同，因此要严格控制溶液的pH 值。
七、思考题1. 单色光不纯对于测得的吸收曲线有何影响？2. 利用邻组同学的实验结果，比较同一溶液在相同仪器上测得的吸光度有无不同， 试做解释。
A 1 -——x ——xVxDxW 醞100。
维生素B1片的含量测定以及方法验证2
浓度μg/mL 吸光度
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
如
取供试品用稀盐酸配制成85.91ug/mL的溶液，分 别在-20℃、-4℃、室温放置0min、15min、 30min、45min、60min、75min，然后在 246nm波长测的吸光度。
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约 相当于维生素B115mg），置100mL棕色容量瓶中， 共称9份。其中3份分别加入浓度为70.29ug/mL， 对照液50mL，3份分别加入浓度为101.53ug/mL， 对照液50mL，加盐酸溶液（9到1000）至刻度， 摇匀，精密量取上述溶液5.0mL置100mL量瓶中， 加盐酸溶液（9 → 1000）稀释至刻度，摇匀，在 246nm的波长处测吸光度，计算含量，并求回收 率。
维生素B1
精密称取相当于维生素B1片粉25mg，置于100mL 量瓶中，加盐酸溶液（9 → 1000）约70mL，摇 匀15min使维生素B1溶解，加同种溶剂稀释至刻度， 摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取5mL，置于一 100mL量瓶中，加同种溶剂稀释至刻度，摇匀，用 紫外分光光度法，在246nm波长测定吸收度，计 算含量。
Байду номын сангаас
1、掌握药物含量测定方法验证的指标和方法。
维生素B1是由氨基酸嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连 接而成的季铵类化合物，嘧啶环上季铵及嘧啶环上 氨基，为两个碱性基团，可与酸成盐。维生素B1分 子具有共轭双键结构，在紫外有吸收峰，并且维生 素B1紫外吸收峰随pH变化而不同，pH=2 （0.1mol/L）时，最大吸收波长在246nm处，吸 收系数为421（E1cm1%）,根据最大吸收波长处的吸 光度即可计算含量。
维生素B1片的含量测定的方法验证(精)
维生素B1片的含量测定的方法验证专业：药物制剂班级：姓名：学号：紫外分光光度法测定维生素B1片的含量摘要本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定，对此法进行方法验证，证明了此法具有专属性高，回收率高、精密度高，线性好、测定范围宽的特点，并对数据处理方法进行了比较，发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小，测定结果可信度较高。
关键词维生素B1 紫外分光光度法含量测定方法验证对照品比较法维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法处方分析：组成处方量(g 比例(%维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（）为421计算，即得。
HPLC法测定复合维生素B片中四种成分的含量
ＨＰＬＣ法测定复合维生素Ｂ片中四种成分的含量目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定复合维生素B片中烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2 四种成分的含量。
方法：采用C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.005 mol/L己烷磺酸钠-甲醇-冰醋酸（70∶30∶0.5）；流速为1.0 ml/min；检测波长：278 nm；柱温30℃。
结果：烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2分别在100.92~605.52、21.24~127.44、97.88~587.20，42.13~126.38 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
结论：本方法简便、快速，可用于复合维生素B片的质量控制。
[Abstract]Objective:To establish a HPLC method for contents determination of the four components in Compound Vitamin B Tablets. Methods: The HPLC system consisted of C18 column(150 mm×4.6 mm,5 μm), 0.005 mol/L sodium hexane sulfonate-methanol-glacial acetic acid(70∶30∶0.5) as the mobile phase with the flow rate of 1.0ml/min ,and 278 nm as the detective length.Results:The linear ranges of nicotinamide,vitamin B6,vitamin B1 and vitamin B2 were 100.92~605.52,21.24~127.44,97.88~587.20，42.13~126.38 μg/ml respectively.Conclusion:This method is simple,rapid and it can be used for the qulity control of Compound Vitamin B Tablets.[Key words]HPLC; Compound Vitamin B Tablets; Nicotinamide;Vitamin B6;Vitamin B1; Vitamin B2;Contents复合维生素B片是由烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2四种成分组成的复方制剂。
维生素B1片的含量测定的方法验证(精)
维生素B1片的含量测定的方法验证专业：药物制剂班级：姓名：学号：紫外分光光度法测定维生素B1片的含量摘要本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定，对此法进行方法验证，证明了此法具有专属性高，回收率高、精密度高，线性好、测定范围宽的特点，并对数据处理方法进行了比较，发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小，测定结果可信度较高。
关键词维生素B1 紫外分光光度法含量测定方法验证对照品比较法维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法处方分析：组成处方量(g 比例(%维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（）为421计算，即得。
HPLC法测定维生素B族片中3种组分的含量
HPLC法测定维生素B族片中3种组分的含量摘要：目的获取维生素B片中B1、B2、B6的含量，测量方法是运用高效液相色谱法对三种成分同时进行测量。
方法运用C18柱，流动相以1.0ml/min流动，流质为0.005mol/L的庚烷磺酸钠溶液（0.05%三乙胺0.5%冰醋酸）-甲醇。
紫外检测波长为280nm。
结果本实验中维生素B1,B2,B6线性范围分别为2.964～74.1 mg·ml-1，2.934～73.35 mg·ml-1，2.996～74.9 mg·ml-1 ,三种成分的方法回收率依次是97.5%，99.7%，100.5% ，RSD依次是1.21%，1.5%，0.9%。
结论该方法分离质量佳，高效快捷，能够很好的控制多维片中维生素B1 、B2、B6的质量。
关键词：HPLC法，维生素B族片；维生素B1 ，维生素B2 ，维生素B6 B族维生素由于其水溶性特点在人体新陈代谢中扮演着重要的角色。
维生素B 族片在临床上主要用于防治因缺乏多种B族维生素所致的各种疾病,同时也常作为营养及能量补充剂。
对B族维生素分析检测目前有些报导采用分光光度法[1]电化学法[2]、荧光法，微生物法等，操作繁琐费时。
本文用HPLC法在对含有多种维生素的片剂中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量测定时同时进行测定，得到满意结果，该方法简便、准确、快速、重现性好，可用于对维生素B1 ，维生素B2，维生素B6的质量控制。
1.实验仪器与试药1.1 仪器Agilent 1200高效液相色谱仪1.2 试剂产自国药集团的冰醋酸和三乙胺均为分析纯；而自东京化成工业株式会社进口的庚烷磺酸钠是色谱纯；甲醇（TEDIA COMPANY ,LOT 001917）为色谱纯。
试验过程中的水一律采用蒸馏水；三种成分的对照品全是中国药品生物制品检定所提供，其中维生素B1 对照品的批号是100390-200301；B2 对照品的含量98.7%、批号是100369-200502，维生素B6 对照品的批号是100116-200502）。
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实验七维生素B1片的含量测定
一、实验目的
1、掌握吸收系数法测定药物含量的方法。
2、熟悉紫外-可见分光光度计的原理及操作
二、实验原理
维生素B1结构中的嘧啶环为一芳香杂环，具有紫外吸收。
因此可在其最大吸收波长处测定吸光度，进行含量测定。
三、实验仪器和试剂：
1.仪器：
紫外-可见分光光度计、量瓶(100mL)、台秤、量筒(100mL)、烧杯、分析天平、漏斗、铁架台、铁圈、滤纸、剪刀等。
2. 试剂：
维生素B1片、盐酸溶液（9—>1000）
四、实验内容：
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15分钟，使维生素B1溶解，加盐酸（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在246nm处测定吸光度，按C12H17ClN4OS·HCl的吸收系数（E1%1cm）为421计算，即得。
五、实验数据记录及处理
标示量%%100100
1%
11⨯⨯⨯⨯⨯⨯=-
S
m W D V E A cm
六、注意事项
（一） 仪器的准备
1. 开启电源，使仪器预热20分钟。
2. 开机前，先确认仪器样品室是否有东西挡在光路上，以免影响仪器自检。
（二）仪器的操作步骤 1. 设置波长（246nm ）。
2. 测定。
3. 数据记录与结果处理。
（三）将比色皿洗净装盒，关机 （四）填写仪器使用记录，
（五）维生素B 1的紫外吸收峰随溶液pH 的变化而不同，因此要严格控制溶液的pH 值。
七、思考题
1.单色光不纯对于测得的吸收曲线有何影响？
2.利用邻组同学的实验结果，比较同一溶液在相同仪器上测得的吸光度有无不同，试做解释。
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