MTT法检测银杏叶注射液对人脑微血管内皮细胞增殖的影响
银杏叶提取物对血管生成的影响研究
银杏叶提取物对血管生成的影响研究植物提取物作为现代药物研究热点之一，其广泛应用在保健和药学领域。
银杏(Ginkgo biloba)提取物是应用较广泛的一种植物提取物，其树叶中富含红酸类物质和黄酮酸类物质，被广泛应用于治疗心脑血管疾病、眩晕和记忆力下降等症状。
而对于银杏叶提取物对于血管生成的影响研究越来越受到重视。
一、银杏叶提取物对血管生成的影响银杏叶提取物作为一种被广泛应用的中药材，并且首次在中医药学典籍中被提及。
该药材在近年来被应用在心脑血管疾病和记忆力下降的治疗中所获得的成效广受好评。
然而，对于它对血管生成的影响还没有被深入探究。
最近的研究表明，银杏叶提取物可以促进血管生成，这对于维持和修复损伤组织非常重要。
此外，银杏叶提取物的治疗作用也可以被应用在创伤修复以及缺血性疾病的治疗中。
实验结果表明，银杏叶提取物可以促进成纤维细胞和内皮细胞的增殖，同时增强了血管的密度与弹性，使得血液流动更加顺畅，起到了很好的保护作用。
研究表明银杏叶提取物富含的黄酮类物质可以抑制瘢痕组织的形成，还可以减缓内皮细胞和成纤维细胞的衰老速度。
二、银杏叶提取物的应用现状银杏叶提取物是一种富含植物性黄酮类物质的植物提取物，其已经被广泛地应用于药品制剂、健康食品、美容护肤品等领域。
银杏叶提取物不仅具有促进血管生成的功效，还可以帮助改善血管通透性，减缓血管硬化、降低血脂水平、抗氧化、抗炎症等作用，因此被广泛应用于治疗和预防心脑血管疾病和阿尔茨海默病等疾病。
目前，银杏叶提取物已经被广泛的研究和应用，且表现出巨大的发展潜力。
其中，针对不同疾病或领域，人们在应用银杏叶提取物时往往会采用不同的剂量和用药形式，定制个性化方案以获取最好的效果。
例如，心脑血管疾病患者常常使用口服片剂；学习或者工作压力大的人则通常会选用银杏口服液；对于慢性病患者则会选择银杏注射剂进行治疗。
可以预见，随着对银杏叶提取物研究的不断深入，其应用领域也将不断扩大。
三、社会议论和展望银杏叶提取物的应用越来越广泛，但是其中问题也随之而来。
银杏叶提取物对乳腺癌MCF—7细胞增殖、凋亡的影响
银杏叶提取物对乳腺癌MCF—7细胞增殖、凋亡的影响目的：探討银杏叶提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。
方法：MTT法检测细胞增殖，双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。
结果：银杏叶提取物对MCF-7细胞的体外增殖存在抑制作用，与对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0.01）。
经流式细胞仪检测表明，G2～M期和S期逐渐减少，银杏叶提取物能使MCF-7细胞G0～G1期逐渐增加，随着剂量的增加，MCF-7细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）。
结论：银杏叶提取物能诱导MCF-7细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖。
标签：银杏叶提取物；乳腺癌；Caspases-3；增殖；凋亡银杏叶提取物（extract of ginkgo biloba，EGB）治疗心、脑血管疾病广泛应用于临床，为我国传统名贵中药材银杏叶中提取的有效活性成分，现已证明其对肿瘤细胞的增殖有抑制作用，并能增强化疗药物的抑瘤作用[1-2]，但尚未见报道其对乳腺癌的抑制作用及其机制。
本研究通过观察EGB对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响，探讨EGB可能的抗肿瘤作用机制，为其进一步临床应用提供实验依据和理论基础。
1 材料与方法1.1 药物与试剂本研究应用的银杏叶提取物由德国威玛舒培博士药厂生产（EGB761，商品名：金纳多），批号：1710711。
1.2 仪器设备CO2培养箱（NAPCO 8000DH）；生物安全柜（Forma ClassⅡA2）；倒置显微镜（IX-70，Olympus）；流式细胞仪（FACSIO1）；酶标仪（128C-400）。
1.3 方法取MCF-7细胞制成2×107/ml细胞悬液，每孔100 μl培养24 h，于96孔培养板中接种，同时设对照孔和调零孔，然后加入EGB100 μl，使其终浓度分别为0、10、20、40、80、160 mg/L，每组6个复孔，培养48 h后每孔加入20μl MTT 溶液（5 g/L）培养4 h，吸去全部上清液，每孔加入200 μl二甲基亚砜，振荡摇匀使用酶标仪在490 nm处测吸光度（A）值。
复方银杏叶颗粒改善人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用及其机制研究
复方银杏叶颗粒改善人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用及其机制研究该实验于体外使用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与复方银杏叶颗粒（80，160，320，640 mg·L-1）预孵育，合并使用H2O2（1 200 μmol·L-1）建立氧化应激损伤模型。
采用MTT法研究药物对HUVEC细胞增殖情况的影响，检测细胞培养上清中的LDH，MDA，NO含量及SOD活性，判断药物对内皮细胞的保护作用。
通过Casepase-3活性检测以及AnnexinV-FITC/PI流式细胞术，检测药物对细胞凋亡的保护作用。
使用Western blot法测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。
研究发现1 200 μmol·L-1H2O2能够诱导内皮细胞产生氧化应激损伤，使细胞存活率降低，且细胞增殖抑制程度与H2O2的作用时间呈正相关。
而80，160，320，640 mg·L-1的复方银杏叶颗粒能够明显减轻该模型下内皮细胞的氧化应激损伤，恢复细胞正常增殖水平，改善细胞状态，抑制细胞凋亡，同时能够上调Bcl-2的表达以及下调Bax的蛋白表达。
该实验证明了复方银杏叶颗粒对H2O2诱导的内皮细胞氧化应激损伤及细胞凋亡具有一定的保护作用，其机制可能与复方银杏叶颗粒抑制了内皮细胞凋亡的线粒体途径有关。
标签：复方银杏叶颗粒；H2O2；HUVEC；内皮细胞损伤；细胞凋亡[Abstract]To reveal the protective and anti-apoptosis effect of compound Ginkgo biloba granules on oxidative stress injury of human umbilical vein endothelial cells （HUVEC）. Negative control group，H2O2 model group and 4 drug pretreatment groups （80，160，320，640 mg· L-1）were established. The cell proliferation，morphological changes in each group after oxidative stress injury was detected by MTT assay and through microscope observation respectively. The content of LDH，MDA，SOD and NO and SOD activity in supernatant were detected to judge the protection effect of the drugs on endothelial cells. The protective effect on HUVEC apoptosis was analyzed by Caspase-3 activity test and Annexin V-FITC/PI staining. Western blot was used to observe the expression of apoptosis-related proteins Bcl-2 and Bax. Results showed that 1 200 μmol· L-1H2O2 can induce oxidative stress injury in endothelial cells and reduce the cell survival rate；cell proliferation inhibition degree is positively correlated with the effect time of H2O2. Besides，80，160，320 640 mg·L-1compound Ginkgo biloba granules can protect HUVEC from oxidative stress injury，recover the normal proliferation level of cells，improve their state，prohibit cell apoptosis，and can up-regulate and down-regulate the expression level of Bcl-2 and Bax respectively. In conclusion，compound G. biloba granules can protect HUVEC from the oxidative stress injury induced by H2O2，its mechanism may be correlated with inhibition of the mitochondrial apoptotic pathway in HUVEC.[Key words]compound Ginkgo biloba granules；H2O2；HUVEC；injury of endothelial cell；apoptosis近20年来，我国四成以上的疾病死亡是由心脑血管疾病引起的，并且其发病率和死亡率仍在不断攀升。
MTT法检测银杏叶注射液对人脑微血管内皮细胞增殖的影响
培养箱 中继续传代培养 ， 细胞呈贴壁生长 ， 待其铺 满瓶壁时以 ０ ． ２ ５ ％ 胰蛋 白酶消化传代 ，取对数生长 期 的细 胞进 行实 验 。
１ ． ２ ． ２ ＭＴ ｒ比色 法 检 测 银 杏 叶 注射 液 对 人 脑 微 血 管 内皮 细 胞 的作 用 将 ８ ０ ％融 合 生 长 的人 脑 微 血 管 内皮 细 胞 以混 合 消 化 液 消 化 ， 收 集 细胞 ， 完 全 培 养基稀释 后以 ２ ｘ １ ０ 个， Ｉ Ｊ 的密度接种 于 ９ ６孔 板 ，
第３ Ｏ卷 第 １ 期 ２ ０ １ １年 ３ 月
天 津 中 医 药 大 学 学 报
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｔ ｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
多 的重 视 。
２ ． ２ 银杏叶注射液对人脑微 血管内皮细胞增殖 的
影响 结果 见表 １ 。
表 １ 不 同浓度银杏叶注射液对人脑微血管
内皮 细 胞 增 殖 的 影 响 （ ｉ ａ ： ｓ ）
本 实验首次采用体外培养人 脑微 血管 内皮细 胞 的方法 ， 观察不 同浓度银杏叶提取物注射 液对人
近 年 来 脑血 管 病 的 发生 呈 逐 年 上 升趋 势 ， 其 中
血管 内皮 功能受损被认 为是血管病变发生 的始 动 环节 ， 并贯穿疾病发生发展过程的始终 。血管 内皮 细胞损伤可致血管 张力及血流动力学改变 、 血小板 和凝血系统激活及血管通透性增加等 ， 从而引起一 系列病理生理改变 。
表示 ， 采 用 单 因素 方 差 分 析 ， 经 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ３ ． ０ ０统 计 软 件处 理 ， ／ ９ ＜ ０ ． ０ ５为差 异有 统计 学意 义 。
银杏注射液的功能主治
银杏注射液的功能主治1. 概述银杏注射液是一种常见的中药注射剂，它是以银杏叶为原料提取的一种药物。
银杏注射液因其特有的化学成分和药理作用，在临床上被广泛应用。
本文将介绍银杏注射液的功能主治及其作用机制。
2. 功能主治2.1 脑血液循环改善•提高脑血流量•增加脑氧供应•改善微循环功能2.2 抗血栓形成•抑制血小板聚集•溶解血栓•预防血栓形成2.3 抗氧化作用•清除自由基•减轻氧化应激•保护细胞膜的完整性2.4 改善记忆和学习能力•提高大脑功能•增强学习和记忆能力•预防老年性认知功能障碍2.5 抗炎作用•抑制过氧化物酶的活性•减轻组织炎症反应•缓解炎症相关疾病症状2.6 提高免疫力•增强免疫细胞活性•提升机体抵抗力•预防感染疾病2.7 促进细胞再生•促进血管内皮细胞生长•促进神经细胞再生•促进组织细胞修复3. 作用机制银杏注射液的功能主治源于其中的活性成分——银杏内酯类物质。
这些物质能够通过多种机制发挥药理作用：1.改善脑血液循环：银杏注射液能够扩张脑血管，增加血流量，改善微循环功能，提高脑细胞的氧供应和营养供应。
2.抗血栓形成：银杏注射液中的活性成分具有抑制血小板聚集和溶解血栓的能力，从而减少血栓的发生和发展。
3.抗氧化作用：银杏注射液能够清除自由基，减轻氧化应激，保护细胞膜的完整性，防止氧化损伤。
4.改善记忆和学习能力：银杏注射液能够提高大脑功能，促进神经元的活化和连接，增强学习和记忆能力，预防老年性认知功能障碍。
5.抗炎作用：银杏注射液能够抑制过氧化物酶的活性，减轻组织炎症反应，缓解炎症相关疾病症状。
6.提高免疫力：银杏注射液能够增强免疫细胞的活性，提升机体抵抗力，增强对感染疾病的免疫力。
7.促进细胞再生：银杏注射液通过促进血管内皮细胞和神经细胞的生长、增殖，以及组织细胞的修复能力，促进细胞再生和组织修复过程。
4. 适应症银杏注射液适用于以下疾病的辅助治疗：•脑血管病•老年性认知功能障碍•脑损伤后遗症•糖尿病相关病变•血液循环障碍•炎症相关疾病5. 注意事项使用银杏注射液时，请注意以下事项：•注射前请先用视觉检查确保药液无悬浮物、无色素沉淀。
银杏叶注射液对急性脑梗死患者治疗前后血小板相关参数的变化
射液治疗前后血小板相关参数的变化。 结果 ： 脑梗死患者Ｍ Ｐ Ｖ 、 Ｐ Ｄ Ｗ、 Ｃ Ｄ ６ ２ Ｐ 、 Ｃ Ｄ ６ ３ 、 Ｐ Ｃ Ｔ 治疗前后有显著差异（ Ｐ ＜ Ｏ ． ０ ５ ） 。 结论： 血 小板
相 关参 数 的检 测 结 果 治疗 前后 在 统计 学上 具有 显 著 差异 ， 提 示银 杏 叶 注射 液 对急 性 脑梗 死 有一 定 的 治 疗价 值 ， 与 急 性 脑梗 死 的预
（ Ｃ Ｄ ６ ２ Ｐ 、 Ｃ Ｄ ６ ３ ） 、 血 小 板 比积 （ Ｐ Ｃ Ｔ ） ， 并银杏叶注射液 ３ ０ ｍ ｌ ／ ｄ ， 加人 的 减 少 表 明其 所 含 的 活 性 物 质 功 能 降 低 ， ＭＰ Ｖ、 Ｐ Ｄ Ｗ 是 反 映 血
生理 盐 水 ２ ５ Ｏ ａ ｒ Ｌ ， １ 次， ｄ静脉 滴 情 况 的重 要指 标 。Ｐ Ｃ Ｔ是 血 小 板 比 容 ， 小 板各 项 参数 相 比较 ， 统 计学 处理 采 用 ｔ 检验 。
通心络胶囊对心肌缺血大鼠血管新生功能的影响
通心络胶囊对心肌缺血大鼠血管新生功能的影响张冰睿【摘要】Objective:To investigate the effects of Tongxinluo capsule on the angiogenesis in rats of myocardial ischemia and its mechanisms. Methods:60 SD rats were divided into normal group,model group,low - dose group of Tongxinluo capsule,high - dose of group of Tongxinluo capsule and bFGF positive control group. We made the rat model of myocardial ischemia by ligate the anterior descending branch of coronary artery and culture the microvascular endothelial cells (CMECs)of myocardial muscles by explant method. We observe the intervention effects of Tongxinluo capsule and the con-trol medicated serums on proliferation,migration,angioblast of CMECs. Real - time PCR was used to detect the expression level of VEGF,bFGF in different groups. Results:After the drug intervention,the tendency of proliferation rate,migration rate and angioblast rate of CMECs from high to low were normal group,bFGF positive control group,high - dose of group of Tongxinluo capsule,low - dose group of Tongxinluo capsule,model group consequently. High - dose of Tongxinluo capsule could facilitate the angiogenesis in different aspects and better than other groups(p < 0. 01). Compared to the bFGF group, there was no statistically significance(P > 0. 05. The levels of VEGF and bFGF were upregulated of CMECs in group of high - dose Tongxinluo capsule. The expression levels of VEGF were higher than the model group and the low - dose Tongx-inluo capsule group(P < 0. 01).Conclusion:Tongxinluo capsule could facilitate the proliferation,migration and angioblast in ischemic CMECs. It might have the effect of vascular bypass which might related to the upregulation of MEGF and bF-GF.%目的：观察通心络胶囊对心肌缺血大鼠血管新生功能的影响并探讨其作用机制。
MTT法检测化痰活血方含药血清对血管内皮细胞增殖的影响
MTT法检测化痰活血方含药血清对血管内皮细胞增殖的影响叶勇1，张雯娟1，雍雪莲2，梅国强3，刘松林3（1.江汉大学医学与生命科学学院，武汉430056;2.江汉大学医院,武汉430056;3.湖北中医学院,武汉430061）摘要：目的：观察化痰活血方对体外培养的牛主动脉内皮细胞增殖的影响．方法：制备化痰活血方含药血清，作用于培养的牛主动脉内皮细胞．通过细胞形态学、MTT法检测化痰活血方含药血清对牛主动脉内皮细胞增殖的影响．结果：不同浓度的化痰活血方含药血清对细胞增殖的影响不同，低浓度（5%、10%、15%含药血清组）的化痰活血方含药血清促进细胞增殖，高浓度（20%含药血清组）的化痰活血方含药血清抑制细胞增殖．结论：化痰活血方可通过促进牛主动脉内皮细胞增殖起到抗动脉粥样硬化、保护血管内皮细胞的作用．关键词：MTT法；化痰活血方；内皮细胞；增殖中图分类号：R285文献标识码：A文章编号：1673-014302-0068-03血管内皮细胞不仅是全身血管内膜的屏障，而且是一个重要的内分泌器官，可以分泌多种血管活性物质，在维持血管壁的完整性，调节血管张力，血小板活化和聚集，血管壁重塑等方面具有重要作用．血管内皮损伤或功能障碍是动脉粥样硬化发生的始动环节．化痰活血方临床应用于高脂血症、冠心病的治疗取得了满意的疗效．为了明确化痰活血方对血管内皮细胞的保护作用，本实验应用血清药理学方法观察化痰活血方含药血清对牛主动脉内皮细胞增殖的影响，进一步明确该方抗动脉粥样硬化和保护血管内皮细胞的作用，并探讨其机制．1材料与方法1.1主要试剂与仪器胎牛血清（FBS）、DMEM培养基、二甲基亚砜(DMSO)、胰蛋白酶（Trypsin）等均购自GIBCO公司；兔抗人von Willebrand因子（Ⅷ因子-相关抗原）抗体、MTT（噻唑蓝）购自Sigma 公司；BH-2型倒置显微镜（日本Olympus公司）；ELX800型酶联免疫检测仪（美国生物技术仪器公司）．1.2牛主动脉内皮细胞的培养及鉴定无菌条件下取出新生牛主动脉，分离主动脉，将其翻转过来，内膜朝外，用灭菌生理盐水冲洗主动脉数次，将其放入0.25%的胰蛋白酶中室温下孵育10~15min，收集消化液，放入离心管中3000r/min离心10min，小心弃去上清，收集内皮细胞．在DMEM（含5mM谷氨酰胺、10%FBS、肝素100g/mL）中，于37℃、95%空气/5%CO2条件下培养，2h和12h后分别换液一次，然后每2~3d换液一次．3~5d后，待细胞生长成均匀单层细胞并达90%以上汇合时，用0.05%胰蛋白酶和0.02% EDTA消化传代．在暗视野显微镜下观察，可见数个甚至成团的内皮细胞呈鹅卵石状贴壁生长，进一步用抗人von Willebrand因子抗体进行免疫荧光染色，证实内皮细胞纯度约在90%以上．1.3药物化痰活血方由法半夏、全栝蒌、黄连、当归、土鳖虫、山楂等组成(均购于武汉市药材公司)，根据各药的有效成分，用不同浓度乙醇浸泡，全部药渣合并煎煮3遍，回收乙醇合并全部药液，浓缩为含生药4g/mL的药液灭菌，4℃贮存备用．收稿日期：2006－01－11作者简介：叶勇(19622006年第2期叶勇，等：MTT 法检测化痰活血方含药血清对血管内皮细胞增殖的影响691.4含药血清的制备清洁级Wistar 大鼠10只，雄性，体重230g ±20g ，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，合格证号TJLA-2003-177．中药血清组：取大白鼠5只，分为灌服化痰活血方，灌胃量为2mL /200g （为人临床剂量的10倍，相当于原生药8g ），每天2次，连续3d ；空白血清组：取大白鼠5只，灌服等体积的生理盐水（按10mL/kg 灌服）．末次灌药后1h ，腹主动脉取血，分离血清，所取血清经56℃，30min 灭活处理后，用0.4520℃保存备用．1.5形态学观察普通倒置显微镜观察各组不同时期细胞的生长特点及形态．1.6MTT 法测定取培养第3~5代内皮细胞，调整细胞密度至5×104/mL 以每孔200L MTT 溶液（5mg/mL ），37℃继续培养4h ，终止培养，小心吸弃孔内上清液，每孔加入150x ±s )组别OD490值空白血清组16.5±0.55%含药血清组20.8±0.7*10%含药血清组22.3±1.1*15%含药血清组19.6±0.6*20%含药血清组9.80±0.3*注：*与空白组比较P <0.01.3讨论现代医学证明，血管内皮损伤或功能障碍是动脉粥样硬化发生的始动环节．抗动脉粥样硬化的关键就是保护血管内皮细胞免受危险因素的侵害．中医认为高血脂是痰浊形成的物质基础，有脂必多痰.由高脂所化生的痰浊，可导致血液粘稠性增高，红细胞的变形性降低，血小板聚集性增强，血管内皮细胞损伤，形成动脉粥样硬化．因此，痰瘀同治是抗动脉粥样硬化和保护血管内皮细胞的有效而重要的途径．研究表明，中药当归、川芎、山楂、黄连可以保护血管内皮细胞，防治和减轻某些因素导致的内皮细胞损伤．本实验所用的化痰活血方是在《伤寒论》小陷胸汤基础上化裁而来，由法半夏、全瓜蒌、黄连、当归、川芎、山楂等药物组成，具有健脾化痰清热、活血理气止痛之功效．本实验结果显示：该方增强血管内皮细胞活力，促进细胞增殖作用与血药浓度有一定的关系．一定浓度（5%、10%、15%含药血清组）化痰活血方含药血清能70江汉大学学报（自然科学版）总第34卷明显增强血管内皮细胞活力，促进细胞增殖．高浓度（20%含药血清组）则抑制细胞增殖，并不是药物浓度越高，作用效果越好．参考文献：[1]Ruderman N，Chisholm D，PiSunyer X，et al.Endothelialfunction in health and disease:new insights into the genesis of cardiovascular disease[J].Am J Med,1998,105(suppl): 32-39.[2]叶勇.梅国强教授运用化痰活血法治疗高脂血症[J].光明中医,2003,18(6):22.[3]韩学杰.痰瘀同治方对冠心病心绞痛血管内皮细胞损伤保护作用的临床研究[J].中国医药学报,2003,18(1):18-21.[4]王保华,欧阳静萍,涂淑珍,等.当归抗高脂血清致内皮细胞损伤的保护作用[J].中国病理生理杂志,2000,10(16):856.[5]李尚珠,黄平平,刘春华,等.川芎嗪治疗闭塞性动脉硬化症及其对血管内皮细胞作用的临床观察[J].中国中西医结合杂志,2000,20(6):412.[6]王亚红,牛福玲,赵明镜,等.降脂通脉方保护血管内皮细胞的临床与试验研究[J].中医杂志,2000,41(5):287.[7]方素萍,邱全瑛,郝钰.黄连解毒汤含药血清对中性粒细胞与血管内皮细胞黏附的影响[J].中国病理生理杂志,2000,10(16):796.（上接第67页）Study on Effect of Astragalus Injection in TreatingPulmonary Heart Disease on Severe Stage:with73CasesMENG Qing-hua,JI Dong-yuan,LI Cheng-hong(Respiratory Department,Affiliated Hospital,Jianghan University,Wuhan430015,China)Abstract:Objective:To observe the clinical efficacy and side-effects of Astragalus injection(AI)in treating congestive heart failure(CHF)on severe stage.Methods:140 patients of CHF with heart function on2~4grade assessed by NYHA(New York Heart As-sociation)were randomly divided into2groups.The73patients in the treated group were treated with AI40mL(equivalent to80g crude drug)by adding in5%glucose solution250 mL for intravenous driping,once a day and the67patients in the control group were treated by nitrolingual injection15mg by adding in5%glucose solution500mL for intravenous in-jection driping,once a day,The therapeatic course in both groups were10days and the patients were followed-up for1-6months.Results:the clinical heart function improvement rate and the total effective rate in the treated group after1month treatment were26.2%and78.6%,and after6months were34.2%and81.6%respectively,which were superior tothose in the control group significantly(P<0.05or P<0.01).The levels of left ventricular ejection fraction(LVEF),fractional shortening of left ventricular short axis(FS),the ratio of maximum blood flow between the advanced and early atrial systole(E/A),stroke volume (SV),cardiac output(CO),and the cardiac index(CI)were all improved in both groups (P<0.01or P<0.05),but better improvement were shown in the treated group.Followed-up study showed that the incidence of cardiac event were lower in the treated group than that in the control group(P<0.05).Conclusions:AI can be took as one of the important auxiliary drugs treatment of CHF especially in severe case.Key words:Astragalus injection；pulmonary heart disease；heart failure。
银杏叶提取物对颅内血管疾病手术S-100β、PF的影响
银杏叶提取物对颅内血管疾病手术S-100β、PF的影响金文香;黄焕森;阮林【摘要】目的通过观察银杏叶提取物预处理前后S-100β、SjvO2、乳酸、PF、PLT等指标的变化,探讨银杏叶提取物在颅内血管手术围术期脑保护的作用.方法择期行颅内血管手术成年患者40例,随机分为银杏叶治疗组(Y组)和对照组(D组),每组20例.麻醉诱导后,银杏叶治疗组经静脉滴注银杏叶提取物注射液1 mg/kg(用生理盐水250 ml稀释),30 min滴完;对照组同速度输入等量生理盐水.分别于手术前(T0)、手术1 h(T1)、手术2 h(T2)、手术6 h(T3)、手术后12 h(T4)抽取颈静脉球部血测S-100β、SjvO2、乳酸、PF、PLT.结果两组T2、T3、T4的S-100β较T0升高,差异有统计学意义(p<0.05).组间比较Y组T2、T3、T4的S-100β较D 组明显降低(p<0.05).两组T3、T4的SjvO2、乳酸比较有明显差异(p<0.05).两组PF、PLT比较无明显差异(p＞0.05).结论在颅内血管疾病手术中给予银杏叶提取物预处理具有脑保护的作用,且对血小板功能无影响.【期刊名称】《现代医院》【年(卷),期】2013(013)002【总页数】3页(P7-9)【关键词】银杏叶提取物;颅内血管疾病手术;S-100β;SjvO2;乳酸;PF;PLT【作者】金文香;黄焕森;阮林【作者单位】广州医学院第二附属医院,广东广州,510260;广州医学院第二附属医院,广东广州,510260;广州医学院第二附属医院,广东广州,510260【正文语种】中文颅脑血管手术易导致血脑屏障破坏及缺血再灌注损伤，脑缺血再灌注时间无论长短均可引起缺血的脑组织损伤加重。
目前银杏叶提取物对脑保护的影响机制多限于动物实验基础研究，临床文献报道多侧重于银杏叶提取物对脑缺血或脑梗死的后处理，未见银杏叶提取物预处理用于围术期的作用机制及可行性和安全性的相关报道［1］。
MTT法检测香叶木苷对脐静脉内皮细胞增殖抑制的影响
MTT法检测香叶木苷对脐静脉内皮细胞增殖抑制的影响苏秀莉;卢卫红;张浩;赵越【摘要】Objective: To research the determination of dosmin on human umbilical vein endothelial cells in order to optimize the concentration of the optimal dosing and optimal dosing time. Method: 1) Human umbilicus vein endothelial cells were divided into two groups of control group and six experimental groups which had six different concentrations of dosmin. MTT method assay was used to detect the activeness of cells and got the optimal dosing. 2) Human umbilicus vein endothelial cells were divided into three groups of A(24h) ,B(48h) ,C (72h) and every group set control group. After adding dosmin to center hours, MTT method assay was used to detect the activeness of cells and got the optimal dosing time. Conclusion; The optimal dosing is 20μg/mL,the optimal dosing time is 48h and the IC50 is 254. 8μg/mL.%目的:测定香叶木苷对脐静脉内皮细胞的影响,优化出最佳加药浓度和最优加药时间.方法:1)将细胞分为对照组和实验组(终浓度10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL、60μg/mL),MTT法检测细胞活性,根据抑制率和抑制率曲线确定了最佳加药浓度.2)将细胞分为A组(24h)、B组(48h)、C组(72h),每组设置对照,加药(20μg/mL)后分别按照各组时间用MTT法检测细胞活性,根据抑制率和抑制率曲线确定了最优加药时间.结论:经实验选择出的最佳加药浓度为20μg/mL,最优加药时间为48h,其IC50为254.8μg/mL.【期刊名称】《中医药信息》【年(卷),期】2012(029)006【总页数】4页(P101-104)【关键词】香叶木苷;脐静脉内皮细胞;MTT比色法【作者】苏秀莉;卢卫红;张浩;赵越【作者单位】哈尔滨工业大学,黑龙江哈尔滨150001;哈尔滨工业大学,黑龙江哈尔滨150001;哈尔滨工业大学,黑龙江哈尔滨150001;哈尔滨工业大学,黑龙江哈尔滨150001【正文语种】中文【中图分类】R283.5香叶木苷(dosmin，3'，5，7 －三羟基 4'－甲氧基黄酮－7－芸香糖)是从茜草科药用植物蓬子菜(Galium verum L．)中提取出的含量丰富黄酮苷类化合物［1］，蓬子菜是中国东北的一种野生植物，这种植物以维生素的优良的食物来源而著称，它还包含绿原酸，水杨酸和黄酮类等物质，在东北民间药用历史悠久，具有清热祛湿、活血止痒的功效，近10余年来，临床应用不同剂型治疗下肢静脉炎疗效显著。
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血管内皮细胞的损伤是脑血管病发生的始动环节[1]。
血管内皮细胞通过释放和合成多种血管活性因子，在血管自稳态的调节中发挥着重要作用。
损伤后的内皮其合成与分泌的血管活性物质和细胞因子间的平衡遭到破坏，导致内皮功能发生障碍，促使单核细胞与血管内皮细胞黏附增强，这些改变对脑血管病的发生起着始动作用。
银杏叶提取物为银杏科植物银杏干燥叶的提取物，主要成分为银杏总黄酮，主要用于急慢性脑功能不全及其后遗症的治疗，具有扩张脑血管，改善脑缺血产生的症状和记忆功能。
本研究以体外培养人脑微血管内皮细胞（HBMEC
）的方法，观察银杏叶提取物注射液对人脑微血管内皮细胞增殖的影响，进一步明确银杏叶提取物对脑微血管内皮细胞的保护作用。
1材料与方法
1.1实验试剂与仪器银杏叶注射液（山西银湖制药有限责任公司，批号：09090831）；人脑微血管内皮细胞株（美国ATCC 公司）；胰酶、D MEM 低糖培养粉、优级胎牛血清（美国Gibco 公司）；四甲基偶氮唑蓝（MTT ）、二甲亚砜（美国Sigma 公司）；酶标仪（奥地利S unrise ）。
1.2实验方法
1.2.1
人脑微血管内皮细胞复苏
人脑微血管内
皮细胞株，将其用含10%胎牛血清的DMEM 培养基
转移至细胞培养瓶中，置37℃，5%二氧化碳（CO 2）培养箱中继续传代培养，细胞呈贴壁生长，待其铺满瓶壁时以0.25%胰蛋白酶消化传代，取对数生长期的细胞进行实验。
1.2.2MTT 比色法检测银杏叶注射液对人脑微血管内皮细胞的作用将80%融合生长的人脑微血管内皮细胞以混合消化液消化，收集细胞，完全培养基稀释后以2×104个/L 的密度接种于96孔板，每孔100μL 。
正常培养12h 后，使细胞贴壁。
每组各加入银杏叶注射液（原浓度3500mg/L ）2、4、6、8、10μL ，使银杏叶注射液的终浓度依次为：70mg/L （1组）、140mg/L （2组）、210mg/L （3组）、280mg/L （4组）、350mg/L （5组），共设5个浓度，每组12个复孔，并设对照组（含5％胎牛血清的培养基及细胞）及空白孔（5％胎牛血清培养基）。
培养48h 后，移出培养液，换入p H 7．2~7．4磷酸盐缓冲溶液（PBS ）100μL/孔，清洗2遍，移出PBS 液，并于每孔加入MT T （5g/L ）20μL 。
继续培养4h 后，吸弃原培养液，每孔中加入二甲基亚砜（DMSO ）150μL ，置摇床上低速振荡10min ，使结晶物充分溶解，并于酶联免疫检测仪570nm 波长处检测光密度值（OD 值）。
1.3统计学分析所有数据以均数±标准差（x±s ）表示，采用单因素方差分析，经SPSS 13.00统计软件处理，P <0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1内皮细胞的生长及形态学改变倒置显微镜下动态观察可见，对照组细胞为小三角形，呈铺路
*基金项目：国家自然科学基金项目（30873467）。
作者单位：300193天津中医药大学
作者简介：孟庆楠(1984-)，女，硕士研究生，主要从事中药干预
心血管疾病研究及磁生物学效应研究工作。
通讯作者：王益民。
MTT 法检测银杏叶注射液对人脑微血管内皮细胞增殖的影响*
孟庆楠，张皓楠，王益民
摘要：[目的]观察银杏叶注射液对体外培养的人脑微血管内皮细胞增殖的影响。
[方法]体外培养人脑微血管内皮细胞（HBMEC ），采用四甲基偶氮唑蓝（MTT ）法测定不同浓度银杏叶注射液对HBMEC 增殖的影响。
[结果]与对照组相比较，
银杏叶注射液浓度为70mg/L 时，对血管内皮细胞无促增殖作用；浓度为140、210、280、350mg/L 时均具有促进血管内皮细胞增殖的作用，但各组之间相比较无统计学意义。
[结论]银杏叶注射液具有促进人脑微血管内皮细胞增殖的作用。
关键词：银杏叶注射液；人脑微血管内皮细胞；四甲基偶氮唑盐法
中图分类号：R 285.5
文献标识码：A
文章编号：1673－9043（2011）01－0036-02
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MTT assay measured impact of Ginkgo Biloba Injection on proliferation of microvascular
endothelial cell in human brain
MENG Qing -nan,ZHANG Hao -nan,WANG Yi -min （Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China ）
Abstract:[Objective]To explore the impact of ginkgo biloba injection on the proliferation of in vitro -cultured microvascular endothelial cells(HBMEC)in human brain.[Methods]HBMEC was cultured in vitro.MTT assay was applied to detect the impacts of ginkgo biloba injection at different concentrations on HBMEC.[Results]When concentration of ginkgo biloba injection was 70mg/L it could not influence the proliferation;when was 140mg/L,210mg/L,280mg/L and 350mg/L,all they could promote the proliferation of microvascular endothelial cells significantly,but there was no statistically difference between any two groups.[Conclusion]Ginkgo biloba injection can promote the proliferation of HBMEC.
Key words:Ginkgo biloba injection;HBMEC;MTT assay
石样。
银杏叶注射液组细胞间隙较对照组缩小，细胞生长较快，细胞量较多。
2.2银杏叶注射液对人脑微血管内皮细胞增殖的影响结果见表1。
由表1可见，银杏叶注射液各浓度组作用48h 与对照组相比，OD 值逐渐增加。
与对照组相比较，浓度为70mg/L 时，差异无统计学意义；浓度为140~350mg/L 时，与对照组相比较，差异有统计学意义
（P ＜0．05，P ＜0．01），对体外培养的人脑微血管内皮细胞具有促增殖作用，但各组之间相比较无统计学差异。
3讨论
近年来脑血管病的发生呈逐年上升趋势，其中血管内皮功能受损被认为是血管病变发生的始动环节，并贯穿疾病发生发展过程的始终。
血管内皮细胞损伤可致血管张力及血流动力学改变、血小板和凝血系统激活及血管通透性增加等，从而引起一系列病理生理改变。
大量的实验研究和临床研究资料表明，银杏叶提取物能改善心脑血液循环，扩张心脑血管，改善血液流变学，清除自由基，对心血管系统疾病、神经系统疾病具有较好的疗效。
且银杏叶注射液作为脑血管疾病的主要用药在临床上受到越来越多的重视。
本实验首次采用体外培养人脑微血管内皮细胞的方法，观察不同浓度银杏叶提取物注射液对人脑微血管内皮细胞增殖的影响，所用的银杏叶提取物注射液主要成分为银杏总黄酮。
研究发现，人脑微血管内皮细胞在不同浓度的银杏叶注射液作用48h 后，测定光密度，当药物浓度为70mg/L ，OD 值虽有所增加，但与对照组相比较差异并无统计学意义，当药物浓度为140、210、280、350mg/L 时，与对照组相比较均有统计学意义，说明银杏叶注射液在上述浓度范围内对人脑微血管内皮细胞具有促增殖作用，但本实验尚不能说明其是否具有浓度和时间依赖性，因为内皮细胞为贴壁生长的细胞，在生长过程中具有接触抑制的特性。
当细胞长满96孔板的1个孔时将不再增殖生长。
且96孔板每孔仅能容纳200μL 培养液，用药量有限。
参考文献：
[1]Poredos P.Endothelial dysfunction in the pathogensis of atherosclerosis[J].IntAngro l,2002，21(2)：109-110.
[2]
徐巧玲，蔡小兵.银杏叶提取物药理研究进展[J].人民军医，2004，47(10)：609-610.
（收稿日期：2010-10-12）
表1
不同浓度银杏叶注射液对人脑微血管内皮细胞增殖的影响（x±s ）
注：与对照组比较，*P <0.05，**P <0.01。
组别对照组1组2组3组4组5组
银杏叶注射液浓度（mg/L ）
070140210280350
OD 值0.120±0.0190.134±0.0430.156±0.055*0.275±0.125**0.276±0.052**0.300±0.092**
n 121212121212
37。