_纳豆菌脂肽对金黄色葡萄球菌抑菌机理的研究
食品防腐剂的相关研究
食品防腐剂的相关研究添加食品防腐剂作为食品防腐的重要辅助手段，是防止食品腐败变质，延长食品保存期的一种食品添加剂。
可随着经济与社会的发展，食品安全问题越来越突出，尤其是食品防腐剂是引起的食品安全性问题，由此本文阐述食品防腐剂的研究现状、种类及其作用机理、发展前景等问题，使得人们更深入了解食品防腐剂。
关键字: 食品防腐剂；作用机理；食品添加剂；安全性前言食品腐败变质主要是食品本身含有的丰富营养成分易使微生物滋生且大量繁殖，并最终导致食品的腐败变质［1］。
由微生物引起的食品霉变、腐败对人类的生产和生活带来很大影响，造成巨大损失。
为了防止食品腐败变质，人们用了许多方法来保藏食品，如腌渍等，但在一定条件下，配合使用防腐剂作为保藏的辅助手段对防止食品的腐败有显著作用，因此防腐剂在食品工业中广泛应用。
1食品防腐剂的研究现状近年来出现了多起因化学合成防腐剂不规范添加所引起的食品安全事件，引起了国内外学者的广泛重视。
在2010 年据统计我国食品添加剂行业产量在710 万吨左右，权威部门预计，2015 年底我国食品工业年度总产值将突破14 亿吨，照着这般趋势的进行，食品添加剂的使用量是只见增不见减的，由此也再一次说明了食品防腐剂使用的广泛性。
2食品防腐剂的分类及其作用机理防腐剂按组分和来源主要分为化学类食品防腐剂和天然类食品防腐剂。
2.1化学类食品防腐剂。
化学类食品防腐剂一般可分为三大类，分别是酸性防腐剂、酯型防腐剂、无机盐防腐剂。
2.1.1酸性防腐剂及其作用机理。
酸性防腐剂如苯甲酸、山梨酸和丙酸以及它们的盐类。
这类防腐剂的特点是体系酸性越大，其防腐效果越好，而在碱性条件下几乎无效。
2.1.1.1苯甲酸。
苯甲酸又名安息香酸，其抑菌机理是使微生物细胞的呼吸系统发生障碍，使三羧酸循环中乙酸辅酶A→乙酸醋酸及乙酸草酸→柠檬酸之间的循环过程难以进行，并阻碍细胞膜的正常生理作用［2］。
由于其有效成分是未解离的苯甲酸分子，所以在酸性食品中使用效果好，对酵母、霉菌都有效。
解淀粉芽孢杆菌中脂肽的生物合成、抑菌机理及应用的研究进展
罗晓娇，孙静，陆颖健. 解淀粉芽孢杆菌中脂肽的生物合成、抑菌机理及应用的研究进展[J]. 食品工业科技，2022，43（19）：462−470. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2021100259LUO Xiaojiao, SUN Jing, LU Yingjian. Research Progress in the Biosynthesis, Antimicrobial Mechanism, and Application of Lipopeptides in Bacillus amyloliquefaciens [J]. Science and Technology of Food Industry, 2022, 43(19): 462−470. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2021100259· 专题综述 ·解淀粉芽孢杆菌中脂肽的生物合成、抑菌机理及应用的研究进展罗晓娇，孙 静，陆颖健*（南京财经大学食品科学与工程学院，江苏南京 210023）摘 要：解淀粉芽孢杆菌常作为有益菌广泛应用于食品的生物防治，其中主要的抗菌物质为脂肽类。
这些抗菌脂肽具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒等生物活性，同时具有安全、广谱、高效、无毒、在体内易分解等优点。
因此，解淀粉芽孢杆菌及其脂肽类代谢产物可广泛应用于农作物的生物防治、瓜果蔬菜的保鲜防腐以及采后的微生物防治等，具有巨大的开发应用前景。
本文主要从解淀粉芽孢杆菌中脂肽类物质的类型、生物合成、抑菌机制及其应用前景等方面进行论述。
关键词：解淀粉芽孢杆菌，脂肽，生物合成，抑菌机理本文网刊:中图分类号：TS201.3 文献标识码：A 文章编号：1002−0306（2022）19−0462−09DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2021100259Research Progress in the Biosynthesis, Antimicrobial Mechanism, andApplication of Lipopeptides in Bacillus amyloliquefaciensLUO Xiaojiao ，SUN Jing ，LU Yingjian *（College of Food Science and Engineering, Nanjing University of Finance and Economics, Nanjing 210023, China ）Abstract ：Bacillus amyloliquefaciens (B. amyloliquefaciens ) is widely used as beneficial bacteria for biological control, and the main antimicrobial substances are lipopeptides. These lipopeptides have antimicrobial, anti-tumor, antiviral activities and other biological activities, and they are safe, broad-spectrum, efficient, non-toxic, and easily decomposed in the body.Therefore, B. amyloliquefaciens and its lipopeptide metabolites can be widely used in the biological control of crops,freshness and preservation of fruits and vegetables, as well as post-harvest microbial control, which have great prospects for development and application. This paper focuses on the types and biosynthesis of lipopeptides in B. amyloliquefaciens , the mechanism of microbial inhibition and their application prospects.Key words ：Bacillus amyloliquefaciens ；lipopeptides ；biosynthesis ；antimicrobial mechanism农作物在生长过程中容易受到多种病原菌的侵害，导致其产品品质和产量下降。
几种主要防腐剂抑菌性和肉品保鲜的作用研究
几种主要防腐剂抑菌性和肉品保鲜的作用研究任杰;邱春强;朱伟;林娜;李韧;董婷婷【摘要】我国肉制品发展迅速,但在发展过程中出现了诸如肉类腐败、产品质量安全等问题.本文旨在研究肉制品中应用的防腐剂,实验选取化学合成防腐剂山梨酸钾、双乙酸钠,天然生物防腐剂Nisin、纳他霉素.实验结果显示:山梨酸钾对霉菌、酵母菌和好氧性细菌有抑制作用,对乳酸菌等革兰氏阳性菌没有抗菌效果;双乙酸纳对毛霉菌的抗菌效果好,对革兰氏阳性菌及酵母菌抗菌效果差;Nisin对乳酸菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果突出,对革兰氏阴性菌抗菌效果差,对真菌无作用;纳他霉素对霉菌有良好抗性,对酵母菌的抗菌效果稍差,对细菌类几乎没有抗性.四种防腐剂对肉的保鲜时间顺序为:Nisin(16~17d)、纳他霉素(15d)、双乙酸钠(13d)、山梨酸钾(11d).【期刊名称】《肉类工业》【年(卷),期】2016(000)007【总页数】5页(P52-56)【关键词】肉制品;微生物;防腐剂;抗菌性;保鲜期【作者】任杰;邱春强;朱伟;林娜;李韧;董婷婷【作者单位】天祥(天津)质量技术服务有限公司天津 300384;北京中科本草堂生物科技有限公司北京 100006;天祥(天津)质量技术服务有限公司天津 300384;天祥(天津)质量技术服务有限公司天津 300384;天祥(天津)质量技术服务有限公司天津 300384;天祥(天津)质量技术服务有限公司天津 300384【正文语种】中文肉类工业在国计民生中占有重要地位，对促进畜禽生产、发展农村经济、繁荣稳定城乡市场、满足人民生活需要、保证经济建设与改革的顺利进行发挥着重要作用。
2015年，我国肉类总产量8 625万t，其中猪肉产量5 487万t。
肉类腐败的最主要因素就是微生物污染生长繁殖。
鲜肉中污染的微生物主要有细菌和霉菌，有时还出现酵母菌和致病菌。
芽孢杆菌、假单胞菌及某些酵母菌能使鲜肉发黏和变色；变形杆菌、枯草杆菌及霉菌能使肌肉发霉和腐败。
抗菌肽的提取及其抗菌活性的研究
抗菌肽的提取及其抗菌活性的研究王战勇1，井静1，苏婷婷2(1. 辽宁石油化工大学环境与生物工程学院，辽宁抚顺113001；2. 辽宁石油化工大学化学与材料学院，辽宁抚顺113001)摘要: 采用甲醇提取中国林蛙皮肤中的抗菌肽。
并考察了影响抗菌肽粗提物抑菌率的各个因素：如提取时间、提取温度、料液比和pH值等因素，通过正交试验确定了获取抗菌肽粗提物的最佳条件。
即：提取时间为24h，提取温度为-20℃，提取料液比为1：25，提取液pH值5.0。
此条件下抗菌肽粗提物抑菌率可达75.22%。
抗菌肽粗提物对常见的革兰氏阴性菌和阳性菌以及真菌均有一定抑制效果。
对各测试菌株的最低抑制浓度分别为：金黄色葡萄球菌和链球菌为0.25mg/mL；枯草芽孢杆菌和大肠杆菌为0.5mg/mL；蜡样芽胞杆菌为1.0mg/mL；白色念珠菌、酿酒酵母和毛霉为2.0mg/mL；根霉为4.0mg/mL。
关键词：中国林蛙；抗菌肽；正交试验；抑菌活性中图分类号：Q516 文献标识码: AThe Study on Extraction and Antimicrobial Activity of AntimicrobialPeptides from Skin of Rana chensinensisWANG Zhanyong1, JING Jing1, SU Tingting2(1. School of Environmental and Biological Engineering, Liaoning Shihua University, Fushun 113001, China；2. School of Chimical and Material Sciences, Liaoning Shihua University, Fushun 113001, China)Abstract:Antimicrobial peptides were isolated from Skin of Rana chensinensis by methanol. Some factor of influence on antimicrobial percentage of antimicrobial peptides crude product was reviewed, such as time, temperature, ratio of sample and extraction solvent and pH. The optimum condition was chosen by orthogonal experiment. The optimum conditions are as follows: The ratio of sample and extraction solvent is 1: 25. The extracting solution was disposed for 24h at -20℃. And the pH of extracting solution is 5.0. Under the optimize conditions antimicrobial percentage of antimicrobial peptides can reach 75.22%.Antimicrobial peptides crude product could effectively inhibit the growth of series microorganisms, including Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria and fungus. The MICs of the tested microorganisms were tested as follows: The MIC of Staphylococcus aureus and Streptococcus is 0.25mg/mL, the MIC of Bacillus subtilis and Escherichia coli is 0.5mg/mL,the MIC of Bacillus cereus is 1.0mg/mL, the MIC of Candida albicans, Saccharomyces cerevisia and Mucor is 2.0mg/mL, the MIC of Rhizopu is 4.0mg/mL.Key words: Rana chensinensis, Antimicrobial Peptides Orthogonal experiment, Antimicrobial Activity两栖动物皮肤在自然进化过程中形成了防御病原微生物的三套防御系统，相应地具有与这些防御系统相适应的特定结构。
天然防腐剂的研究和开发利用
天然防腐剂的研究和开发利用摘要：本文主要介绍了防腐剂的作用机理，综述了植物源天然防腐剂、微生物源天然防腐剂以及动物源天然防腐剂的种类以及各自的特性、作用机理和研究开发利用的现状，并对天然防腐剂的应用前景做了展望。
关键字：天然防腐剂作用机理植物源天然防腐剂微生物源天然防腐剂动物源天然防腐剂种类展望前言近年来，伴随着我国国民经济的快速发展和人们生活水平的不断提高，食品加工业也得到了很大的发展。
然而，在食品加工业中，各类食品的防腐保鲜，一直是一个亟待解决的重要问题。
据估计，我国每年约有20％～30％的食物因腐败而白白损失。
食品腐败不仅会造成食品营养价值的丧失，甚至还会造成食物中毒。
食品腐败的原因很多，主要有物理、化学、酶及微生物4个方面的因素，其中微生物作用最为严重。
为了延长食品的保质期，在食品加工过程中，人们采用了许多不同的手段来杀死或者抑制微生物，添加防腐剂是其中最方便而有效的一种方法，因而被广泛使用于食品加工行业中。
这使得食品添加剂行业得到了蓬勃发展，但在发展的同时，也出现了不少问题，以至于有部分人认为食品安全最大的问题是食品添加剂。
为了让大家走出这一误区，我们就从食品防腐剂──这个备受争议，也是最敏感的食品添加剂来说起。
食品防腐剂是指为食品防腐和食品加工、储运的需要，加入食品中的化学合成物质或天然物质。
它能防止食品因微生物引起的腐败变质，使食品在一般的自然环境中具有一定的保存期。
食品防腐剂的用途，广义地说，就是减少、避免人类的食品中毒。
狭义地说，就是防止微生物作用而阻止食品腐败的有效措施之一。
目前，食品防腐剂在我国被划定在食品添加剂的有17类28个品种。
防腐剂按来源分，有化学防腐剂和天然防腐剂2大类。
化学防腐剂又分为有机防腐剂与无机防腐剂。
前者主要包括苯甲酸、山梨酸等，后者主要包括亚硫酸盐和亚硝酸盐等。
天然防腐剂，通常是从动物、植物和微生物的代谢产物中提取的，如乳酸链球菌素等[1]。
尽管化学防腐剂具有比较强的防腐能力，但是由于化学防腐剂具有不同程度的安全问题，在消费者越来越追求天然无毒的食品趋势下，从各种动植物中寻找、提取安全无毒的天然防腐剂，就成为了当前食品添加剂研究的热点。
植物提取物在养殖业中的应用研究进展
植物提取物在养殖业中的应用研究进展周璐丽;王定发;何德林;胡海超;周汉林【摘要】植物提取物含有生物碱、酚类、黄酮类、苷类等多种活性成分,具有抗菌、抗氧化、抗炎等多种生物学功能和安全、高效、无残留、不易产生耐药性等优点.本文从植物提取物的主要成分、生物活性和在养殖业中的应用等方面进行了综述,旨在为植物提取物类饲料添加剂的应用开发提供参考.【期刊名称】《热带农业科学》【年(卷),期】2018(038)002【总页数】5页(P102-106)【关键词】植物提取物;养殖业;饲料添加剂【作者】周璐丽;王定发;何德林;胡海超;周汉林【作者单位】中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南儋州571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南儋州571737;中国热带农业科学院试验场海南儋州571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南儋州571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南儋州571737【正文语种】中文【中图分类】S816.7在现代规模化、集约化的养殖业发展中，动物疾病的多发、群发、暴发现象越来越频繁，为了防治疾病和促进生长，抗生素类饲料添加剂被广泛使用。
但其引起的耐药性、免疫抑制、双重感染和肉产品药物残留等问题，导致环境污染，危害人民的身体健康。
随着欧盟于2006年1月1日颁布全面禁止在食品动物中使用抗生素作为饲料添加剂，寻求和开发抗生素替代品迫在眉睫。
当今研发的抗生素替代品主要有微生态制剂、抗菌肽、离子载体、植物提取物等。
植物提取物是指采用适当的溶剂或方法，从植物(植物全部或者某一部分)为原料提取或加工而成的含有多种成分的物质。
植物提取物富含多种活性成分，具有抑菌、抗炎、抗氧化等作用和安全、不易产生耐药性、无残留、无污染等优点，将其开发作为新型绿色饲料添加剂具有广阔的前景。
1 植物提取物的主要成分随着现代科学技术的发展，色谱-质谱联用技术分析法、红外光谱法等先进分析技术被普遍应用于分析鉴定植物提取物中有效成分和控制与评价其质量。
2023金黄色葡萄球菌的抗生素耐药性及其治疗方法
2023金黄色葡萄球菌的抗生素耐药性及其治疗方法感染性疾病是全球人类死亡的第二重要原因；金黄色葡萄球菌(S.aureus)是一种非常常见的人类致病微生物,可引发多种传染病，例如皮肤和软组织感染，心内膜炎，骨髓炎，菌血症和致命性M炎。
此外，根据对抗生素的敏感性，金黄色葡萄球菌可分为对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)和对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSAi近几十年来，由于细菌的进化和抗生素的滥用，金黄色葡萄球菌的耐药性在世界范围内，MRSA的感染已逐渐增加，MRSA的感染率也在增加，并且针对MRSA的临床抗感染治疗变得更加困难。
越来越多的证据表明，金黄色葡萄球菌的耐药机制非常复杂,尤其是对于对多种抗生素具有耐药性的MRSA o因此,及时了解MRSA的耐药性并从分子水平阐明其耐药机制对于金黄色葡萄球菌感染的治疗具有重要意义。
大量研究人员认为，对金黄色葡萄球菌的分子特征进行分析，可以为设计有效的预防和治疗措施引起的医院感染提供基础。
金黄色葡萄球菌进一步演变金黄色葡萄球菌。
本文综述了MSSA和MRSA的研究现状，内在抗药性和获得性抗药性的详细机制，抗MRSA 抗生素的先进研究以及新型的MRSA治疗策略。
金黄色葡萄球菌(S.aureus谩医院和社区感染的主要病原体之一,可引起许多传染病,例如轻度皮肤和软组织感染，感染性心内膜炎，骨髓炎，菌血症和致命性肺炎。
金黄色葡萄球菌于1880年由外科医生亚历山大•奥格斯顿(A1exanderOgston)从溃疡疮患者中首次发现。
金黄色葡萄球菌属于金黄色葡萄球菌类。
革兰氏染色阳性，直径约0.8μm,需氧或厌氧显微镜下排列在〃一串葡萄〃中；并在37℃和pH7.4下最佳生长。
血琼脂平板上的菌落厚而有光泽，呈圆形,直径为1〜2mm o它们大多数是溶血的，在血琼脂平板上的菌落周围形成透明的溶血环。
此外，金黄色葡萄球菌不形成泡子或鞭毛,但具有胶囊,可以产生金黄色颜料并分解甘露醇。
4种复配防腐剂的研究：利用协同效应增强抑菌效果
4种复配防腐剂的研究：利用协同效应增强抑菌效果防腐保鲜剂种类繁多，其抑菌机理和抑菌谱不同，单一食品保鲜剂通常只能针对某一特定的腐败菌发挥杀灭或抑制效果，而对其他菌无抑制作用或作用较弱，同时也易使微生物产生适应性。
基于栅栏技术，不同种类的保鲜剂复合使用，其协同效应不仅可以增强抑菌效果，而且能够降低单一保鲜剂使用量。
本文列举了4种复配防腐剂在食品生产中的应用研究。
1、纳他霉素和乳酸链球菌素的复配研究纳他霉素和乳酸链球菌素的复配可以同时抑制真菌和细菌的生长，延长食品的货架期，在食品工业中具有很高的研究价值。
纳他霉素，简称Natamycin，主要是由纳塔尔链霉菌和褐黄孢链霉菌等链霉菌发酵得到的一种多烯大环内酯类抗菌剂；通常以烯醇式结构存在，是一种无臭无味的结晶粉末。
纳他霉素能够有效抑制和杀死酵母菌和霉菌，抑制食品腐败以及真菌毒素给人体带来的损害。
纳他霉素是一种两性物质，分子中有1个酸性基团和1个碱性基团，几乎不溶于水和大部分有机溶剂，较易溶于冰醋酸和二甲基亚砜等稀酸稀碱溶液。
由于环状的分子结构，纳他霉素的稳定性受光照、温度、重金属、PH等因素影响。
在使用时应保持PH在4～7范围内，同时避免高温和光照。
纳他霉素是一种专一且高效的抗真菌剂，几乎对所有的酵母菌、霉菌都有很好的抑制效果。
纳他霉素的抑菌机理是其与细胞膜上的麦角固醇结合，形成复合体从而改变细胞膜结构和渗透性，引起胞内电解质、氨基酸等物质泄漏，进一步使细胞死亡。
李东等研究表明，纳他霉素对曲霉菌的最小抑制浓度为0.63mg/kg，对黑曲霉菌的最小抑制浓度为1.80mg/kg，对岛状青霉菌的最小抑制浓度为1.10mg/kg。
张旋等研究表明，纳他霉素对真菌具有显著的抑制能力，最小抑菌浓度大致为1mg/L。
乳酸链球菌素，简称Nisin，是由乳酸链球菌在代谢过程中产生的具有杀菌作用的多肽物质，其由34个氨基酸残基组成，是一种高效且无毒副作用的天然防腐剂。
乳酸链球菌素的抗菌谱较窄，只能够有效抑制由细菌引起的食品腐败。
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纳豆菌是日本传统发酵食品—纳豆的生产菌，在日本已被使用了2000多年。
该菌可以产生一系列抗菌肽类物质（通常有surfactin 、iturin 、fengycin 等）[1-2]，国内学者将其应用于食品防腐显示了很好的效果[3-4]。
本研究组前期的研究已从纳豆中分离筛选出了一株纳豆芽孢菌杆菌NT-6菌株，该菌可以产生surfactin 、iturin 、fengycin 三类脂肽类物质[3]，并证实其在食品中应用是安全的[5]。
纳豆菌脂肽具有广谱的抗菌活性，对革兰氏阴性（G －）菌、革兰氏阳性（G +）菌、酵母菌和霉菌皆有抗菌作用[3-4]。
它克服了目前广泛应用的乳酸链球菌素（Nisin ）只能用于酸性条件下G +菌控制，而对食品中副溶血弧菌、大肠杆菌O157和沙门氏菌等G －致病菌无抑制作用的局限性，在食品工业中有收稿日期：2011－09－01*通讯联系人作者简介：刘唤明（1978-），男，硕士，讲师，研究方向：水产品安全与质量控制。
基金项目：国家自然科学基金（30972287）。
纳豆菌脂肽对金黄色葡萄球菌抑菌机理的研究刘唤明1，孙力军1，*，王雅玲1，徐德峰1，刘阳2，陈宏2，唐晓山3（1.广东海洋大学食品科技学院，广东湛江524088；2.国家海产品质量监督检验中心（湛江），广东湛江524025；3.湛江师范学院电镜室，广东湛江524048）摘要：【目的】研究纳豆菌脂肽对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。
【方法】通过对金黄色葡萄球菌生长曲线、细胞膜通透性、细胞蛋白的合成、细胞超微结构、细胞代谢的影响等方面的研究，探讨纳豆菌脂肽对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。
【结果】脂肽可以使金黄色葡萄球菌的细胞膜通透性增加，使得具有紫外吸收的大分子物质发生泄漏；可以导致金黄色葡萄球菌细胞壁形成孔洞甚至使细胞断裂；脂肽对金黄色葡萄球菌蛋白表达未见有明显影响，但可抑制部分蛋白质的合成；对金黄色葡萄球菌代谢活力有较强的抑制作用。
【结论】纳豆菌脂肽可使金黄色葡萄球菌细胞膜通透性增加，或细胞膜形成孔洞导致细胞内物质泄漏，使细胞生长受到抑制，进而导致死亡。
关键词：纳豆菌，脂肽，金黄色葡萄球菌，抑菌机理Study on antibacterial mechanism of lipopeptide from Bacillus nattoagainst Staphyloccocus aureusLIU Huan-ming 1，SUN Li-jun 1，*，WANG Ya-ling 1，XU De-feng 1，LIU Yang 2，CHEN Hong 2，TANG Xiao-shan 3（1.School of Food Science and Technology of Guang Dong Ocean University ，Zhanjiang 524088，China ；2.National Seafood Quality Supervision Inspection Center ，Zhanjiang 524025，China ；3.Department of Scanning Electron Microscopy ，Zhanjiang Normal College ，Zhanjiang 524048，China ）Abstract ：[Objective]The antibacterial mechanism of lipopeptide from Bacillus natto against Staphyloccocusaureus was studied.[Method]The antibacterial mechanism of lipopeptide from Bacillus natto against Staphyloccocus aureus was studied according to the effect of lipopeptide on the growth curves ，membrane permeability ，protein synthesis ，the structure under scanning electron microscope ，and respiratory metabolism.[Result]The lipopeptide could increase membrane permeability of Staphyloccocus aureus ，which led the macromolecules with ultraviolet absorption in cell to leak out of the cell.Observation under scanning electron microscope revealed the holes were formed in the cell wall of Staphyloccocus aureus ，and even the cell was ruptured by lipopeptide.SDS -PAGE analysis suggested that the lipopeptide had not apparent effects on proteins expression ，but had some effects on synthesized quantities of some proteins.The respiratory metabolism of Staphyloccocus aureus was inhibited by lipopeptide.[Conclusion]The lipopeptide acted on the cell membrane of Staphyloccocus aureus ，which induced membrane permeability of Staphyloccocus aureus increased ，or holes were formed in the cell membrane ，thus the materials in the cell to leak out of it ，resulted in inhibiting the growth of cell ，and killing the cell.Key words ：Bacillus natto ；lipopeptide ；Staphyloccocus aureus ；antibacterial mechanism 中图分类号：TS201.3文献标识码：A 文章编号：1002-0306（2012）11-0109-04着良好的应用前景。
抗菌肽类抗菌物质的抑菌机理报道较多，一般认为膜攻击是抗菌肽的最主要作用途径，也有抑制细胞呼吸[6]、抑制蛋白质合成[7-8]等方面的报道。
杨丽莉等发现了枯草芽孢杆菌脂肽可改变嗜水气单孢菌细胞膜通透性、还可造成细胞壁缺失[9]。
而关于脂肽是否存在直接作用代谢过程、蛋白质合成等方面则鲜见报道，本实验拟从金黄色葡萄球菌菌体细胞超微结构、膜通透性、蛋白质合成等方面探讨纳豆菌脂肽抑制金黄色葡萄球菌的机理，以期为纳豆菌脂肽的合理应用提供理论依据。
1材料与方法1.1材料与仪器金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）购于广东省微生物研究所；纳豆芽孢菌杆菌（Bacillus natto NT-6）由广东海洋大学食品科技学院水产品食源性病原微生物及毒素绿色控制研究室提供；2.5%戊二醛固定液；氯化碘硝基四唑紫国产分析纯；LB液体培养基（%）牛肉膏0.5，蛋白胨1，NaCl0.5，pH7.2；改良Landy培养基的组成为（/L）葡萄糖10.0g，谷氨酸钠5.0g，MgSO40.5g，KCl0.78g，KH2PO41.0g，FeSO4 0.05mg，CuSO40.16mg，MnSO45.0mg。
HZQ-F160振荡培养箱哈尔滨市东联电子技术开发有限公司；LS-BSO立式压力蒸汽灭菌器上海博讯实业有限公司医疗设备厂；FDU-1100真空冷冻干燥机东京理化；UV-2550紫外分光光度计日本岛津制作所；DYY-6C型稳压稳流电泳仪北京六一仪器厂；UVPGDS-8000凝胶成像系统美国UVP 公司；SEM XL-30型扫描电子显微镜美国PHILIPS 公司。
1.2实验方法1.2.1纳豆菌脂肽的制备取斜面保存的Bacillus natto NT-6菌株，接种于LB液体培养基中，于37℃、150r/min条件下，恒温摇床振摇培养24h作为种子液。
按照5％接种量接种于改良的Landy培养基，于33℃、180r/min培养38h。
5000r/min离心15min除去菌体，上清液调pH至2.0，低温过夜，5000r/min离心15min取沉淀用甲醇溶解，调节pH至7.0，于磁力搅拌器上低温搅拌5h，10000r/min离心20min后得到的上清液即为含脂肽的甲醇溶液，然后利用低温冷冻干燥除去甲醇。
1.2.2最小抑菌浓度（MIC）测定液体倍比稀释法：用LB液体培养基将脂肽倍比稀释共稀释7次；同时设空白对照和阴性对照。
取对数生长期的金黄色葡萄球菌培养液稀释使其菌体浓度为105CFU/mL，分别加入上述稀释后含不同浓度脂肽的LB液体培养基中，于37℃、150r/min培养18～20h后观察金黄色葡萄球菌的生长情况，以金黄色葡萄球菌不生长的最小稀释度的脂肽浓度即为最小抑菌浓度。
1.2.3对生长曲线的影响取活化后的金黄色葡萄球菌菌种按1%接种量分别接种于5个100mL LB培养基中，于37℃、150r/min培养，分别于培养的不同时间点取样测OD540nm值，绘制生长曲线。
分组如下：a组为对照组，于培养的同时加入1mL无菌水；b组和c组分别为培养0、6h后加入终浓度为0.8MIC的脂肽；d组和e 组分别为培养12h后加入终浓度为1、3MIC的脂肽。
1.2.4对细胞显微特征的影响将培养至对数生长期的金黄色葡萄球菌于5000r/min离心10min，然后用灭菌生理盐水洗涤，重复操作三次然后用生理盐水调节菌体浓度为108CFU/mL，即为金黄色葡萄球菌细胞菌悬液。
取制备的金黄色葡萄球菌细胞菌悬液，加入脂肽并且使其终浓度分别为1MIC和3MIC，然后将其于37℃孵育1h。
将对照组和实验组培养的金黄色葡萄球菌液离心收集菌体，用2.5%戊二醛固定2h后涂片，将样品自然风干，干燥后的标本放入高真空蒸发器中，喷金镀膜，扫描电镜下观察，拍照。