---降解豆粕菌株的筛选及其发酵工艺研究
豆粕发酵适宜菌株筛选及其发酵技术研究
关键 词：豆粕 ；益 生菌； 发 酵 ； 蛋 白肽 ； 蛋 白酶
中 图分 类 号 ：Ｑ ９ ９９ ３ ．
文献标识码 ：Ａ
豆粕 是 目前 饲 料 工业 、 畜牧 养 殖业 使 用 量很 大 的一种 优 质蛋 白源 ．与 棉粕 、 菜粕 、 生粕 相 比， 花 豆粕 具 有 氨 基酸 平 衡 （ 氨酸 含 量 高 、 赖 接近 理 想 氨基 酸 模 式最 近） 消 化 率 高 （５％）适 口性 好等 特 点 ； 动 物源 蛋 、 ８ 、 与 白（ 如鱼 粉 、 肉骨粉 、 浆 蛋 白粉 等） 比， 血 相 豆粕 具 有货 源 充足 、 易被 病 原菌 污染 或氧 化 腐败 ， 毒 害物 质 概 不 含 率低 、 安全系 数 高 等特 点 ． 是 ， 粕 中也 含 有 一些 抗 营养 因子 ， 但 豆 如胰 蛋 白酶抑 制 因子 、 球蛋 白等 ， 这些 抗 营 养 因子对 幼龄 动 物特 别 是 断奶 仔猪 的肠 道 结 构具 有很 大 的破坏 作 用 ， 并带 来仔 猪 腹泻 等疾 病 的 发生 ； 因此 ，
在 断 奶仔猪 配 合饲料 中豆粕 的添 加 比例 一般 认为 不 宜超过 １ ０％，最 多 只 能添加 １ ５％．豆 粕蛋 白质 含 量一 般为 ４ ３％～ ５％， ４ 当添 加 比例 为 １ ５％时 ， 猪 饲料 中的 蛋 白质含 量 也只 有 ６４ 仔 。５％～ ．５％， 仔 猪饲 料 蛋 白 ６７ 而
降解豆粕抗营养因子菌株的筛选、鉴定及其在工业上的应用
土样 采 自武汉 周边 的花坛 、 竹林及 菜园 。提前 两 个月在各 种土壤里 埋上适量 豆粕 ， 到初步 富集 的作 起
用 。采集 土样时按照多 点取样（ 不同地点 、 同土层 深 不
度） 合 的方法 ， 去 表层 土 ， 用 简易 打孔 器 ， 取 混 铲 采 打
中图分类号 ￥ １． ８６ ２ ．
现今配 合饲料 中 ９ ％以上 的蛋 白成 分 为植物 性 １ ． 原料与试剂 ０ ．１ １ 蛋 白饲料 ， 豆粕则 是其 中应 用最为广泛 的植物性 蛋 白 原料 。 然而植 物性饲料如豆 粕 中常常含有一种 或多种 脱脂大豆粕 ： 东海粮油（ 张家港） 有限工业公司出品。 芽 孢 杆 菌 Ｂ ｂ Ｂ ｃｌ ｓｓｂｉｓ： 中农 业 大 学 ３ （ ａｉｕ ｕ ｔｉ 华 ｌ ｌ）
刘萍等： 降解豆粕抗营养因子菌株的筛选 鉴定 甚垄工业上的应用
８ Ｏ０ｍ ｎ Ａ Ｆ 的菌株 。
他菌类 。采用土壤稀 释分 离法 ， 吸取 １ ｌ 的稀释液加 １ ．４ 复筛 ｍ ．３ ２．
入 到含有 ９ｍｌ 的试管 中 ， 荡混匀 ， 水 振 制得 １ 土壤 ０ 采用抗 原蛋 白与 Ｔ 的降解程度 作评 价指标进 行 Ｉ 稀释 液 ； 按照上述 方法 分别 制取 ｌ １ １ 土壤稀 菌株复 筛 ，将 初筛 获得 的 菌株经 斜 面活化 培养 ２ Ｏ 、０ 、 ４ｈ 释液 。分别取 １ １ １ 土壤稀释液 ００ ｌ ０ 、Ｏ 、０ ． ｍ 涂布 后 挑取 一环 接人 ５ ｌ ５ ０ｍ 液体 培养 基 中 ， ３ 在 ７℃ 、８ １０ ／ｎ ｍ ４ｈ 分别 ．ｍ 种 ４ 于 Ｐ Ａ培养基平板 上 。倒置在 ３ Ｄ ７℃的恒 温培养箱 中 ｒ ｉ 条 件下培 养 ２ ， 吸取 ０ １ 子培养 液 ，
高活性发酵豆粕生产菌株筛选及其最佳发酵条件的研究的开题报告
高活性发酵豆粕生产菌株筛选及其最佳发酵条件的研究的开题报告一、选题背景及意义豆粕是大豆加工后的副产物，是常用的饲料原料。
然而，豆粕中所含的蛋白质、脂肪、碳水化合物等营养成分并不易为动物所吸收利用，因此需要进一步的处理，提高其营养价值。
发酵就是一种有效的处理方式，通过微生物的作用，可以降解豆粕中的抗营养物质，提高其蛋白质含量和生物价值，从而提高其饲用价值和经济效益。
目前，市场上存在着各种不同种类和质量的发酵豆粕产品，但是质量参差不齐，很难区分其优劣。
因此，本研究旨在针对发酵豆粕生产中的核心环节——菌株筛选及最佳发酵条件的研究进行探究，以期找到更优质且实用的发酵豆粕生产技术。
二、研究内容及研究方法（一）研究内容1. 分离筛选高活性的发酵豆粕菌株，并对其进行生理生化特性测定，筛选得到最佳实用菌株。
2. 确定发酵豆粕的最佳发酵条件，包括菌种种类、发酵时间、温度、pH值、豆粕初始含水量等因素。
3. 对比分析不同发酵条件下豆粕的营养成分及品质特性，以评估最佳发酵条件的优劣。
（二）研究方法1. 采用平板法、串联PCR、鉴定鉴定等技术手段，从自然环境中筛选优良的发酵豆粕菌株，并对其进行生理生化特性测定。
2. 采用Box-Behnken实验设计，优选出最佳发酵条件，同时通过响应面法对各因素进行分析优选。
3. 通过化学分析、气相色谱分析等方法，对比分析不同发酵条件下豆粕的营养成分及品质特性。
三、预期成果及意义（一）预期成果1. 从自然环境中筛选出一种优良的发酵豆粕菌株，并对其进行生理生化特性测定，得到一种最佳实用菌株。
2. 确定出发酵豆粕的最佳发酵条件，包括菌种种类、发酵时间、温度、pH值、豆粕初始含水量等因素，并通过响应面法对各因素进行分析优选。
3. 对比分析不同发酵条件下豆粕的营养成分及品质特性，评估最佳发酵条件的优劣。
（二）意义1. 本研究筛选得到的菌株和最佳发酵条件，可为发酵豆粕生产提供理论和实践依据，为提高豆粕的饲用价值和经济效益做出贡献。
不同菌种降解豆粕抗原的比较
1豆粕豆粕是大豆提取豆油后得到的一种副产品，是非常优质的畜禽植物蛋白饲料原料，其蛋白质含量43%~46%，而且含有多种矿物质、维生素和必需氨基酸。
豆粕在畜禽日粮中添加比例较大，但是豆粕中含有多种抗营养因子，这些抗营养因子会对饲料的消化、吸收和利用过程中产生不利影响，降低对豆粕营养物质的利用效果，并且当抗营养因子的含量超过动物的耐受范围时还会影响到动物的健康和生产性能，特别是对幼小动物的影响较大。
1.1豆粕中的抗营养因子目前被关注的豆粕中抗营养因子见表1：1.2抗营养因子的处理方法目前，降低豆粕中抗营养因子的方法主要有物理法、化学法、生物法。
1.2.1物理法物理法主要是加热的方式去除抗营养因子。
豆粕中的胰蛋白酶抑制因子、凝集素、脲酶等抗营养因子对热敏感，可以通过加热的方式去除，但低聚糖、大豆球蛋白、植酸等对热不敏感，不能通过加热的方式去除。
另外进行热处理时，必须保证热处理的强度适宜，加热不足则抗营养因子破坏不够；加热过度引发美拉德反应和焦糖化导致氨基酸利用率下降，会降低蛋白质的生物学效率。
1.2.2化学法化学法的主要原理是利用化学试剂与抗营养因子相结合，来改变抗营养因子的分子结构，使其失去活性。
常用的化学试剂有尿素、硫酸钠、硫酸亚铁等。
使用化学法处理过程中会有大量化学物质残留，导致去除困难及成本增加，常不被采用。
1.2.3生物法生物法是利用微生物对豆粕进行发酵，利用微生物在发酵过程中产生的蛋白酶、淀粉酶、植酸酶、糖化酶等多种酶类，来消除豆粕中的抗营养因子；一般筛选具有特殊能力的菌种，如能将淀粉等大分子分解为小分子的微生物，降解大分子蛋白较强的微生物，以及能够产生特殊风味的微生物。
经发酵后抗原性蛋白被水解为氨基酸和肽，低聚糖被水解为单糖，植酸被分解为无机磷酸盐，消除了豆粕的抗营养性，同时产生一些大豆肽、有益微生物代谢产物、细菌素等活性物质。
2不同微生物对豆粕中抗原的降解2.1材料菌种：来源于希普菌种保藏中心，编号为酵母不同菌种降解豆粕抗原的比较王俊青朱帆程林春劳泰财（广东希普生物科技股份有限公司，广东广州510890）[中图分类号]S816.7[文献标识码]A[文章编号]1005-8613（2018）10-0032-04[摘要]本实验选用多种微生物发酵豆粕原料，对降解豆粕抗原能力进行了研究，结果表明枯草杆菌05降解抗原蛋白的性能较强，发酵后的豆粕经SDS-PAGE检测，从球蛋白亚基条带颜色深浅的变化，判断该发酵豆粕的β-球蛋白和大豆球蛋白被完全降解，小分子肽含量明显升高。
发酵豆粕发酵工艺的研究
研 究 了含水量 、装载量 、金属 离子、 变温 时间、发 酵时间对发酵豆粕水解度的影响 ；并通过 正交 实验研究 了３ 种
菌种接种量对发酵豆粕水解度的影响。结果表明，最佳发酵工艺为发 酵瓶装载量为豆粕 １０ｇ （０ Ｌ 一 ０ ・３ ０ｍ ），水 ７ Ｌ ０ｍ ， ＦＳ ．ｇ ｅ Ｏ Ｏ１ ，枯草 芽孢杆 菌的接种量 为３ ％，酵母 茵的接种量为 ｌ ％，乳酸 茵的接种量为 ２ ％，３ 发酵 ３ 后 再于 ７℃ ２ｈ ４ ℃ 发酵４ 。在此发酵工 艺下 ，发酵豆粕的水解度 为９３ ％。 ３ ４ｈ ． ２
ａ ｄ ｕ ｄ ｒ ｈ ｂ ｖ ｏ ｉ ｒ ｎ ａ ｉ ｎｃ ｎ ｉ ｏ ｅｄ ｇ ｅ ｆ ｙ ｒ ｌ ｓｓ ｆ ｏ ｂ ａ ｒ ｔｉ ｏ ｌ ｅ ｃ ． ２ ． ｎ ｎ ｅ ｅａ ｏ ｅｓ ｌ ｆ ｍｅ ｔ ｔ ｏ ｄ ｔ ｎ ｔ ｅ ｒ ｅｏ ｄ ｏ ｙ ｉ ｏ ｙ ｅ ｎ ｐ ｏ ｅｎ ｃ ｕ ｄｒ ａ ｈ９ ３ ％ ｔ ｄ ｅ ｏ ｉ ｈ ｈ ｓ
关键词 ：发酵豆粕 ；水解度；混茵发 酵 中图分类号 ：Ｔ ２ １１ ；Ｔ ２ １ 文献标志码 ：Ａ 文章编号 ：１０ — ０ ４ ２ １ ）７ ０ ０ － ４ Ｓ６．６ Ｓ６．３ ４ ０ １０ ８ （０ １０ － ０ １ ０
ｏｎ Ｓｔ ｄ ｈ ｒ ｅ ｔ ｔ ｏ ｅｓ ｕ ｙｏｎｔ ｅ Ｆｅ ｍ ｎ ａ ｉ Ｐｒ ｃ ｓ
ｆｃ ｏ ｓｏ ｈ ｅ ｒ ｅ ｏ ｄ ｏ ｙ ｉ ｆｓ ｙ ａ ｏ ｅｎ，ｉ ｃ ｕ ｉ ｈ ｔ ｒｃ ｎｔｎ ，ｆｌｉ ｇ ｑｕ ｎｔ ｙ ａ ｔ ｒ ｆｔ ｅ ｄ ｇ ｅ ｆｈｙ ｒ ｌ ｓｓ ｏ ｏ ｂｅ ｎ ｐｒ ｔｉ ｎ ｌ ｄ ｎｇ ｔ ｅ ｗａ ｅ ｏ ｅ ｔ ｉ ｌｎ ａ ｉ ，ｍｅ ａ ｏ ，ｔ ｅ ｔ ｔｌｉ ｎ ｈ
豆粕的微生物发酵降解
·３０８·
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｖｏｌ．２４ Ｎｏ． １ ２００８ Ｊａｎｕａｒｙ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｓｂ．ｏｒｇ．ｃｎ
土壤肥料科学
大豆肽与具有相同氨基酸组成的大豆蛋白质相比，具 有许多生化特性优势，其应用前景广阔：
目前，大豆多肽生产主要是通过直接酶解法，物理 化学处理工艺和发酵法。直接酶解法由于使用高价格 的酶，成本太高限制了其在饲料行业的应用；膨化工艺 对大豆蛋白造成的物理损伤和乙醇浸提造成的化学性 损伤均会造成大豆蛋白质不同程度的变性；而利用微 生物发酵大豆蛋白生产大豆多肽，由于把蛋白酶的发 酵生产和大豆肽的酶解生产结合在一起，降低了大豆 多肽的生产成本，与物理化学处理工艺相比，微生物发 酵工艺明显降低高温高压的膨化工艺和乙醇浸提工艺 对蛋白质的影响，其应用前景较好［１￣４］。
随着饲料工业的迅速发展和生产的高度集约化， 对优质蛋白原料的需求日趋增大。水产养殖饲料中， 优质蛋白原料的主要来源是鱼粉，而作为一种稀缺资 源，世界鱼粉的产量受多种因素影响正逐年下降，一方 面需求在膨胀而另一方面来源在快速减少，因而寻求 鱼粉替代品的研究己成为国内外水产养殖界的一个重
要课题。 大豆是一种优良的植物蛋白资源，经过加工制成
茚三酮显色法测不同样品中游离 －ＮＨ２ 含量［８，９］： 将不同处理发酵液稀释 １００ 倍后取 １．００ｍｌ 加入 １．００ｍｌ 水，再加人 １．００ｍｌ 显色剂，混匀后沸水浴中加 热 １５ｍｉｎ，然后冷水冷却，加人 ５．００ｍｌ 第 ２４ 卷 第 １ 期 ２００８ 年 １ 月 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｓｂ．ｏｒｇ．ｃｎ
的豆粕必需氨基酸丰富，是动物日粮中常用的植物蛋 白质原料。由于大豆蛋白质分子结构复杂，分子量较 大（８０％大豆蛋白质分子量超过 １００ＫＤａ），存在着消化 率和生物学效价不及鱼粉等动物性蛋白质的问题。但
降解大豆抗原蛋白菌株的的筛选及发酵条件探究的方案设计
降解大豆抗原蛋白菌株的的筛选及发酵条件探究的方案设计摘要：大豆抗原蛋白既是大豆的主要营养成分，又是大豆抗营养因子之一，是限制大豆及其制品在人类营养和动物饲料中利用的主要因素。
本文根据相关文献，进行总结对降解大豆抗原蛋白菌株的的筛选及发酵条件进行试验的设计。
关键词：大豆抗原蛋白细菌筛选发酵条件大豆粕蛋白质含量高达40％～55％，含有人体所必需的8 种氨基酸，为全价蛋白源，在动物饲料及人的高蛋白营养保健品中常作为优质原材料。
但生大豆中含有多种抗营养因子，且所含的主要蛋白质7S 伴球蛋白及11S 球蛋白均为大分子蛋白质，有很强的抗原性，能激起特异的免疫应答，食用后不仅会导致血清中抗大豆免疫球蛋白IgG 滴度的升高，而且会造成小肠局部发生器质性的损伤。
这些大分子蛋白质被统称为大豆抗原蛋白。
大豆抗原蛋白的抗营养作用主要有: ①降低饲料蛋白质的利用率; ②由于活化免疫系统而提高了维持需要; ③增加内源蛋白质的分泌,导致粪氮增加; ④有些敏感动物会出现过敏反应,导致腹泻、生产性能下降甚至死亡。
因此，消除大豆抗原蛋白对动物饲养有着极其重要的意义。
产酶菌的水解作用是降低大豆蛋白抗原性的有效方法，但其作用程度受交菌株种类极大的的影响。
所以筛选具有高效率的降解大豆抗原蛋白菌株显得尤为重要。
根据石慧等的研究发现在众多的降解大豆抗原蛋白菌株中，枯草芽孢杆菌效果极好。
因此本设计方法在枯草芽孢杆菌的基础上进行。
一、降解大豆抗原枯草芽孢杆菌的筛选1、试验菌种的准备：根据培养枯草芽孢杆菌的培养条件培养枯草芽孢杆菌，留置备用。
2、豆粕发酵试验：称量适量豆粕，将枯草芽孢杆菌以不同浓度梯度的接种量分别接入生豆粕中，加水混合均匀。
将以上混合物装入阔口罐头瓶，并用塑料薄膜封好，于恒温箱中静置发酵。
将不同的枯草芽孢杆菌菌株记为P1~P1O，设置表格记录数据：3、测定抗原蛋白的残留率：抗原蛋白的残留率是评价发酵工艺是否优异，发酵饲料是否达到标准要求的一个重要指标，目前为止，还没有严格的标准来测定发酵豆粕饲料中抗原蛋白的含量。
几株益生菌发酵豆粕及其产物分析
２２ 自然 ｐ ．％， Ｈ值 。③ 米 曲霉 培养基 ： 麸皮 １０ 水适 ０％、
量， 自然 ｐ Ｈ值 。 以上培养基均在 １ １℃下放置 ２ ｎ ２ ０ｍｉ， 冷 却备用 。 １ 发酵培养 ． ４ 使 用饲 用 的纯 豆粕进行 发酵试 验 ， 调节 培养基料 水 比为 １： ， １ 接种量 为 ０ ％。每个 三角瓶 （５ １装 ． ５ ２ ０ｍ ）
关键词 豆粕 ； 发酵 ； 白肽 ； 白酶 ； 蛋 蛋 益生茵
Ｔ ９０ Ｑ ２． ６ 中图分类号
豆粕 是 目前 畜牧 养殖 业使 用 量很 大 的一 种优 质 蛋 白源。与棉粕 、 菜粕 、 花生粕相 比， 豆粕 的赖 氨酸含 量 高（ 近理 想氨 基 酸模式 ）消化 率 高（５ 、 １ 接 、 ８ ％）适 ３性
Ｌ Ｚ ＿ Ｏ立式普通压力 灭菌锅 、 Ｈ １ １ ＤＸ ４ Ｌ ４ ３ Ｌ大容 量
些抗 营养 因子 ， 胰蛋 白酶 抑制 因子 等 ， 如 这些 抗 营
养 因子对幼 龄 动物特 别是 断奶 仔 猪 的肠道 结 构具 有
很 大 的破 坏作 用 ， 带来仔 猪腹泻等 疾病 的发生 。因 质 （ ｒｅ） 自中国科学 院上海 生物化 学研究 所 ： 并 Ｍａｋｒ购 电
（ 如大豆球蛋 白、 一 １ 聚球蛋 白、胰 蛋 白酶抑 制 因子 、 ３ 糜 牌一 ２ ２ １Ｌ冰箱 。
蛋 白酶抑 制 因子 、 稳定 大豆 寡糖 等 ） 热 的有 效 方法 之 １３ 液体培养基 ． 而且 发酵产品 中含有蛋 白酶 、 生菌 、 机酸及 小 益 有 ①嗜酸乳杆菌培养基 ：西红柿汁 １％、酵母膏 ０
了对 比． 以期 为更参考依 据。
１ 材 料 和 方 法
． 好； 与动 物源蛋 白（ 如鱼粉 、 肉骨粉 、 血浆蛋 白粉等 ） 相 １１ 菌种及试验 材料 比， 豆粕 货 源 充 足 ， 易被 病 原 菌 污染 、 易 氧化 腐 不 不 豆粕为市场采购 ； 微生物菌株ｆ 嗜酸乳杆 菌 １ ６ ４ ２２、
复合微生物降解豆粕固态发酵条件的探讨
大豆是一年生草本植物，世界上许多国家的比较重要的豆类，根据大豆的种子和种皮可以分为饲料豆、青大豆、黄大豆、黑大豆和其他大豆[1]。
大豆中富含许多优质蛋白，含有丰富的人体必需氨基酸[2]，同样也是许多动物饲料中的植物蛋白原料。
但大豆蛋白的分子量相当大，分子结构复杂，所以在动物胃肠道里面经过消化酶作用后，主要以肽的形式被吸收。
大豆蛋白不但为生物体提供生长、发育所需的营养，还能提高其身体免疫力，促进其新陈代谢[3]。
豆粕是大豆提取豆油后得到的一种副产物，豆粕是制作动物饲料的主要原料，还可以用来制作糕点食品、以及化妆品和抗菌素原料。
以豆粕为原料，经过微生物发酵分解生成许多小分子物质如多肽类等。
大豆肽是生物活性肽，在代谢调控方面具有非常重要的作用，其中一些多肽的理化性质比大豆蛋白好，溶解性比较好，吸水性比较稳定，基本不受PH影响，具有较好的低黏性和较高的流动性，此外，降解豆粕小分子物质的相对分子量较小（1000KD)，容易消化吸收，其致敏性也比较低，适合食品、动物饲料、鱼粉等的生产加工。
降解豆粕在工业生产中主要以酶水解法和微生物发酵法为主[4][5]，微生物水解法又包括固态发酵法和液态发酵法，酶水解法制备的产品会产生不利于产品的味道，使产品口感差[6]。
所以本试验采用微生物发酵法中的固态发酵法，改善降解豆粕产生的大豆肽的品质，提高大豆肽的产量，消除抗营养因子[7]，对发酵条件进行优化，完善好豆粕发酵的工艺，来提高降解豆粕的效率，为大豆肽以及动物饲料的后续研究试验及工业化生产与应用提供基础。
1材料和设备1.1试验菌种枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌、酵母菌、根霉G、根霉F、白腐及里氏木霉为实验室提供菌种。
1.2试验材料大豆粕（粉碎过筛）、麸皮（均为市场购买）；牛血清蛋白（标准品）；葡萄糖、磷酸二氢钾、磷酸段为旦12,冷伟芳3,刘谢缘1，4,冷桂华1,习小文1，廖金贤1（1.宜春学院化学与生物工程学院，江西宜春336000；2.上海海洋大学食品学院，上海201306；3.抚州市农业技术推广中心，抚州344000；4.集美大学海洋食品与生物工程学院，福建厦门361021）摘要：以枯草芽孢杆菌、酵母菌、根霉F、根霉G、里氏木霉、乳酸杆菌及白腐为菌种固态发酵降解豆粕为目的，通过采用对比试验法筛选降解豆粕的较佳菌液接种量、发酵时间、是否密封、菌液配比。
几株益生菌发酵豆粕及其产物分析(1)
３５
试验研究
周伏忠等： 几株益生菌发酵豆粕及其产物分析
发酵结束后， 取发酵豆粕和未发酵豆粕各 ５ ｇ，冷 冻干燥机干燥 ２４ ｈ。然后用凯氏定氮法［４］进行粗蛋白的 测定。按发酵豆粕与蒸馏水之比 １： ８（ｍ／ｖ）的比例稀释， 用小型高速粉碎机粉碎 ３０ ｓ，４ ０００ ｒ／ｍｉｎ 离心 ５ ｍｉｎ，轻 轻摇动离心管， 倒出上清液， 进行下列项目的测定。
的多肽。理论上可产生 ８ 种磷酸肽， 其中最为典型的 有以下 ４ 种。
ｓｅｑｕｅｎｃｅ １ ［β－ ＣＮ（１－ ２５）］： Ａｒｇ１－ Ｇｌｕ－ Ｌｅｕ－ Ｇｌｕ－ Ｇｌｕ－ Ｌｅｕ－ Ａｓｎ－ Ｖａｌ－ Ｐｒｏ－ Ｇｌｙ－ Ｇｌｕ－ Ｉｌｅ－ Ｖａｌ－ Ｇｌｕ－ Ｓｅｒ（ Ｐ） － Ｌｅｕ－ Ｓｅｒ（ Ｐ） ３－ Ｇｌｕ２－ Ｓｅｒ－ Ｉｌｅ－ Ｔｈｒ－ Ａｒｇ２５。 ｓｅｑｕｅｎｃｅ ２ ［αｓ１－ ＣＮ（５９－ ７９）］： Ｇｌｎ５９－ Ｍｅｔ－ Ｇｌｕ－ Ａｌａ－ Ｇｌｕ－ Ｓｅｒ（Ｐ）－ Ｉｌｅ－ Ｓｅｒ（Ｐ）３－ Ｇｌｕ２－ Ｉｌｅ－ Ｖａｌ－ Ｐｒｏ－ Ａｓｎ－ Ｓｅｒ（Ｐ）－ Ｖａｌ－ Ｇｌｕ－ Ｇｌｎ－ Ｌｙｓ７９。 ｓｅｑｕｅｎｃｅ ３ ［αｓ２－ ＣＮ（４６－ ７０）］： Ａｓｎ４６－ Ａｌａ － Ａｓｎ － Ｇｌｕ － Ｇｌｕ － Ｇｌｕ － Ｔｙｒ － Ｓｅｒ － Ｉｌｅ － Ｇｌｙ－ Ｓｅｒ（Ｐ）３－ Ｇｌｕ２－ Ｓｅｒ（Ｐ）－ Ａｌａ－ Ｇｌｕ－ Ｖａｌ－ Ａｌａ－ Ｔｈｒ－ Ｇｌｕ－ Ｇｌｕ－ Ｖａｌ－ Ｌｙｓ７０。 ｓｅｑｕｅｎｃｅ ４ ［αｓ２－ ＣＮ（１－ ２１）］： Ｌｙｓ１－ Ａｓｎ－ Ｔｈｒ－ Ｍｅｔ－ Ｇｌｕ－ Ｈｉｓ－ Ｖａｌ－ Ｓｅｒ（Ｐ）３－ Ｇｌｕ２－ Ｓｅｒ－ Ｉｌｅ－ Ｉｌｅ－ Ｓｅｒ（Ｐ）－ Ｇｌｎ－ Ｇｌｕ － Ｔｈｒ－ Ｔｙｒ－ Ｌｙｓ２１。 其结 构特 点 含有 共 同 的 核 心 部 位 是 ＳｅｒＰ－ ＳｅｒＰ－
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Ｆｉｇ．６ Ｐｅｃｔｉｎ∞ｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｌｎｍ ０ｆ Ａ．，ｉ／ｇ．ｒ ＥｌＭ一４
３讨论
目前，酸性果胶酶主要用于水果榨汁和果汁澄清，而碱性
果胶酶的应用领域十分广泛，包括纺织、造纸、环境和食品等
领域旧“２１。黑曲霉作为ＧＲＡＳ菌株，其发酵产生的果胶酶在食
品工业更具有广泛的应用前景。目前，固体发酵产果胶酶活
实验号
Ｘｌ
ｘ２
）（３
Ｘ４
Ａｃｔｉｖｉｔｙ（Ｕ／ｍＬ）
１
５０
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ｌ
５
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２
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６０
３
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３
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３０
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５
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２
２
１ ７２４ １３ ２８０ ６ ９００ １０ ５７１
Ｘｌ：ｏｒａｎｇｅ ｐｅｅｌ眇ｍ（ｇ，Ｌ）；勉：∞ｙｂｃａｎ ｎ叫（∥Ｌ）；】（３：（Ｎｌｉ．）Ｓ０４（ｇ，Ｌ）； ｘ４：ｃａｃ０３（ｇ，Ｌ）。
ｓｅａｒｃｈｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ，ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｄｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ∞ｆｏｌｌｏｗｅｄ：ｔｈｅ ｓｕｃｒ０６ｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ２％ａｎｄ ｔｈｅ∞ｖｂｅ锄ｍｅａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｄｅ盼ｏｆ ｄｒ＿ｏ崎ｓ ０ｆ ｌｌ％，ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ３％ｆｒｏｍ ｔｈｅ ａｇｅ ｏｆ２１ｈ ｏｆＫｑｕｉｄ ｓｅｅｄ ｍｅｄｉｕｍ，ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｐｅｒｉｏｄ ｏｆ４８ｈ。ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｔｌｒｅ ｏｆ４０℃ａｎｄ ｔｈｅ ｒｏｔａｔｅ
［７］杨月梅，江贤章，黄建忠．扩展青霉ＰＰ８９８基因组ＤＮＡ提取方法的
比 ［８较］黄［Ｊ建］．忠福，建江师贤范大章学．学ＤＨ报Ａ：高自产然菌科ｓ学ｃ㈣版廊．即２００．７，１＝２’３（Ｊ２）Ｉ：Ｊ一８１５—１２８４的．分离及
其１８Ｓ ｒｌＬＮＡ基因序列比较分析［Ｊ］．应用与环境生物学报．２００５，儿
（２）：２０２—２０７．
０ｆ １２０ｒ／ｍｉｎ，ｔｈｅ
ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ ５８％，ｗｈｉｃｈ ｗ砸８８％ｎｌｏｌｒｅ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｄｅｃｒｅｅ ０ｆ ｈｙ
ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｅｏｎｄｉ．
ｔｉｏｍ ｂｅｆｏｒｅ ｏｐｔｍｚｅｄ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ；ｓｃｒｅｅ．ｉｒ唱ｓｌｒａｉｎ；ＤＨ（ｄｔ溜【℃ｅ ＧＩ＂ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）；ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｅｏｎｄｉｄｏｍ
力可达４０万Ｕ，一１３１而液体深层发酵最高酶活力只达１８．５９万 Ｕ／－越…，虽然固体发酵生产果胶酶的酶活力较高，但是由于固
体发酵产生较多的杂蛋白，分离纯化成本很高，回收率较低
（３０％。５０％左右），产品质量产量均很难达到食品行业的使用
要求ｂ】。因此，寻找适合于液体深层发酵生产果胶酶的高产
黑曲霉菌株已经成为工业果胶酶制剂的研究热点。
Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ＣＨＥＮ Ｊｉ—ｅｈｅｎ，Ｃｌ＿Ⅱ￡Ｎ Ｍｉｎｇ—ｈｏｌａｇ，Ｉ。ＪＮ Ｘｉｎ—ｊｉａｎ‘
Ａｂ删：Ｄｅｆａｔｔｅｄ ＸＯ训ｔｕｎｄ （Ｔｈｅ Ｓｏｉｌ ａｎｄ ＦｅｒｔｉｌｉＴｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ。Ｆｕｊｉａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ
ｍＬｏ
采用优化后的培养基重新发酵，其它条件不变，试验重复 ３次，每次３个平行样。所测酶活１５ １５９．８２Ｕ／ｍＬ（图６），比理 论预测值低．但比未优化前提高了３６％。
１８
１６
１４万方数据
１２
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圈６幽旧础Ⅱ，电Ｆ ＥＩＭ一４产生的果胶酶活力曲线
［４］蛐ｓ．Ｎ．，Ｃ，ｄ —２２７．
Ｔ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｉ．ｈｅｒｏｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｄｅｓ ０ｆ ｍｉｅｍｂ／ａｌ
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ａ１．Ｐｄｙ圳∞咖ｐｒｏ－ ［５］Ｂｌ“ｌｉｎｏ Ａ．．１ｑｌⅢｌｓｙａｈ Ｔ．，Ｐａｎｄｉｅｌｌａ ｓ．Ｓ．．ｅｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅ８，Ｆｕｎｈｏｕ ３５００１３．ＣｌｌｉｒⅢ）
ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ＷａＳ ｕｓｅｄ鹊ｓｕｂ６ｔｒａｔｅ ａｎｄ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｙｉｅｌｄ ｍｏｒｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉＩＩ
７２
生物技术
２００６年１８（５）
Ｙ＝２２１２５．４１０６５—６７８９．１３４５１４Ｘ，一１．］７２０２８８９９４Ｘ２＊Ｘ２＋
５６３．７６９６７７９Ｘ，＊）（．４－６．１１３７６６７４１ｘ２＊Ｘ
衰１均匀设计方案及结果
ｅｘ耐ｍｅｎｔａｌ Ｔａｂｌｅ １ Ｕｎｉｆｏｒｍ
ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｐｅｅｔｉ．ａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ
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究［Ｊ］．生物学杂志，２００８，２５（１）：２８—３０。４６．
降解豆粕菌株的筛选及其发酵工艺研究
陈济琛，陈名洪，林新坚’ （福建省农业科学院土壤肥料研究所，福建福州３５００１３）
摘要：以脱脂豆粕粉为原料，接入产蛋白酶能力较强的菌株进行发酵，通过菌株所产蛋白酶作用于豆粕粉中的大豆蛋白将其 水解为大豆多肽。以蛋白酶活力及水解度为指标逐步筛选降解豆粕的菌株，获得菌株ＣＨＤｌ６；以水解度作为指标．对菌株ＣｔｔＤｌ６ 发酵降解豆粕的条件进行了优化。通过液体发酵探讨菌株ＣＨＩ）１６适宜的培养基组成、接种时间、接种量与发酵时间。结果表 明：在豆粕含量１１％，蔗糖含量２％的液体发酵培养基中接种３％的菌龄为２１ｈ的液体种子。于温度４０＇Ｅ、转速１２０ｒ／ｒａｉｎ条件下发
ｄｕｅｔｉ∞ｂｙ细啪Ⅱｔｏａ／７１０ｔ／Ｏｎ ｗｈｅａＩ ｉｎ ８１）ｌｉｄ一８ｔａｌｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏ．［Ｊ Ｊ．ＡＩ，ｐＩ
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２００６年１８（５）
生物技术
７３
酵４８ｈ，豆粕蛋白的水解度可达５８％，比条件优化前的水解度提高了８８％。 关键词：发酵豆粕；菌株筛选；水解度；发酵条件优化
中图分类号：Ｑ９３９．９；Ⅱ１９３６．１＋６
文献标识码：Ａ
文章编号：１００４—３１１Ｘ（Ｚ００８）０５一００７２—０４
Ｔｈｅ Ｓｔｒａｉｎ Ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｆｏｒ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｏｙ Ｂｅａｎ Ｍｅａｌ ｂｖ
ｄｅｆａｔｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ＷａＳ ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ ｉｎｔｏ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｂｙ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｔｌ＇ａｉｎ．Ｔｈｅ ｉｎｄｅｘｅｓ ｓｕｃｈ ｏ，ｓ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ．
ＣＨＤｌ６恤ｙｉｅｌｄ． ａｌＢｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅ乎ｅｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ（ＤＨ％）Ｗｅｉｌｅ Ｉｌｓｅｄ ｔｏ ｓｃＴｅｅｎ ｓｔｒａｉｎ ｆｏｒ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｙ ｂｅａｎ ｍｅａｌ ｓｔｅｐ ｂｙ ｓｔｅｐ，ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｔｔａｉｌｌ ｅｄ．‰ｉｎｄｅｘ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ＷａＳ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｅｏｎｄｉｔｉｏｒｌｓ缸ｓｕａｉｎ ＣＨＤｌ６ ｄｅ．ｇｒａｄａｔｉｎｇ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅｓｄ ｂｙ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｔｈｒｏｕｇｈ ｌｉｑｕｉｄ
方法研究［Ｊ］．食品工业科技。２００７，２８（５）：２２７—２２９．
（１２］ＳＩｌａｒｍａ Ｄ．ｃ．，ｓ日印日Ｍｍｙｍａ Ｔ．Ａ ｍａｒｋｅｄ ｍｈｎｃ∞ｍｔ ｉｎ ｔ｝Ｉｃ ｐｔ：ＤｄＩｌｃｔ／ｏｎ ０ｆ ａ ｈｉｉ圳ｙ ａｌｋａｌｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｅｒｒｒｍｔａｂｌｅ ｐｅ舐ｎｄ∞ｂｙ勘础“肚利ｍ ｄｃｓｒｌ ｉｎ
ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｈｅ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｉｎｅｄｉｌ．，ｉｍ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｉｎｏｃｕｌａｕｏｎ ｔｉｍｅ，ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ａｍｏｕｎｔ ａｎｄ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ＷＩ：Ｉ＇Ｅ ｒｅ．ａｒｃｈｅｄ．
ｎ姒ｌ曲ｔｉｑｕｉａ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｈｅ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｉｒｌｅｄｉｕｍ ｃｏｍｌ懈ｉｔｉｏｎ，ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ，ｉｎｏｅＩ】ｌａｔｉｏｎ ｑｕａｍｉｔｙ，ｆｅｒｍｅｍａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ｗｅｒｅ ｒｅ．
张浩森等ｍ１筛选得到一株曲霉并优化其发酵条件，果胶
酶活力可达１３ ９６８ Ｕ／ｍＬ。而佘秋生等哺１通过在５００Ｌ发酵罐
进行深层液体发酵中试，将果胶酶活力从摇瓶发酵的３０１６． ７Ｕ／ｍＬ提高到３７ ２６２Ｕ／ｍＬ。作者根据１８Ｓ ｒＤＮＡ基因序列同源