头发中乙基葡萄糖醛酸苷分析的研究进展

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乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸二乙酯概述

乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸二乙酯概述

乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸二乙酯概述乙基葡萄糖醛酸苷(Ethyl glucuronide,简称EtG)是一种代谢产物,是乙醇(乙酒精)在体内被酵素代谢后形成的。

EtG可通过尿液和血液检测,常被用于检测个体的乙醇摄入情况,尤其适用于监测酒后驾驶和禁酒令执行等场合。

EtG对乙醇的检测敏感性很高,可以在人体内乙醇摄入后的数小时内侦测到,一般可以检测到过去72小时内的乙醇摄入。

EtG的检测方法有尿液检测和血液检测两种,其中尿液检测是最常用的一种,因为血液抽取相对麻烦和侵入性大。

尿液检测的原理是通过检测个体体液中的EtG浓度来间接判断乙醇的摄入情况。

EtG的半衰期在10~30小时之间,具体取决于个体的代谢能力和摄入乙醇的量。

因此,尿液检测可以判断出最近几天内个体是否摄入过乙醇。

硫酸二乙酯(Diethyl sulfate,简称DES)是一种有机硫化合物,在化学和医学上有着广泛的应用。

DES是无色液体,在常温下有刺激性气味。

它可以通过硫酸和乙醇反应生成,并且易溶于有机溶剂。

DES在化学领域有着广泛的应用,可以用作酯的合成中的醚化试剂,也可用作有机合成中的乙酰化试剂。

此外,DES还可以用来制造铬酸铜、硅酸铝和淀粉乙酸而成的淀粉葡萄糖醛酸酯。

在医学领域,DES曾被用作治疗高血压和中风的药物,但在20世纪50年代后期因为其副作用而被淘汰。

DES可以对人体产生有害影响,如导致肝脏和肾脏损伤以及肺部疾病。

因此,目前DES已经停止使用,且在制药和医疗领域受到严格限制。

综上所述,乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸二乙酯都是化学中的有机化合物。

乙基葡萄糖醛酸苷常被用于乙醇的检测,可以通过尿液检测检测到过去72小时内的乙醇摄入。

而硫酸二乙酯在化学和医学领域也有着重要的应用,但因其副作用而被淘汰,目前已经停止使用。

人体血液中乙醇含量检测的影响因素研究

人体血液中乙醇含量检测的影响因素研究

人体血液中乙醇含量检测的影响因素研究发布时间:2022-11-10T06:10:34.406Z 来源:《中国医学人文》2022年6月6期作者:杨瑾[导读]杨瑾(云南省楚雄锦润司法鉴定中心;云南楚雄675000)摘要:过度饮用酒精性饮料是导致暴力性犯罪、死亡以及交通事故等案件发生的重要原因,当事人在案发的时候血液中乙醇的含量是司法鉴定结果重要证据,在对案件中当事人的处理、处罚和量刑上起到决定性依据。

近年来,我国司法鉴定建设呈规模化发展,同时人们对法律维权的意识逐渐增强,2011年我国新《道路交通安全法》明确规定醉酒驾驶将承担刑事责任后,对人体血液中乙醇含量检测的权威性、科学性以及公正性提出了更严肃更高的要求。

人体血液中乙醇含量检测技术与检测结果的质量控制是维护司法公正和处理司法案件公平的保障。

人体血液乙醇含量检测是酒驾、醉驾判断的一项重要依据。

明确掌握影响人体血液乙醇含量检测结果的因素,能够为提升乙醇含量监测结果的准确性提供保障。

本文就对检材、实效性、尸体腐败程度等几项影响因素进行了分析。

关键词:人体血液;乙醇含量;检测;影响因素我国饮酒文化由来已久,目前随着机动车保有量的增加,酒后驾车发生交通事故的概率也在逐年增加。

人体检测到的乙醇含量与检查时间、操作等直接相关。

人体血液中乙醇含量的检测,在追究酒驾、醉驾驾驶员刑事责任过程中,有着非常重要的参考价值。

因此,如何保证其检测结果的准确性,就显得非常重要。

但在实际的检测过程中,会受到多种因素的影响,导致检测结果产生差异[1]。

因此积极地分析影响人体血液中乙醇含量检测结果的因素,有利于在实践中进行更好的规避,对于提升检测结果的准确性和可靠性有重要的意义。

鉴于此,以下就对影响人体血液中乙醇含量检测结果的因素进行了分析。

1.乙醇的毒理机制乙醇在人体中具有麻醉剂效果,当乙醇产生麻醉效果时,人的很多方面都会受到严重影响,例如人体的精神状态、行为方式等,进而制约人体中枢神经系统,这就是乙醇的毒理作用。

乙基葡萄糖醛酸苷的检测及其在法医毒理学中的应用

乙基葡萄糖醛酸苷的检测及其在法医毒理学中的应用

乙基葡萄糖醛酸苷的检测及其在法医毒理学中的应用乙基葡萄糖醛酸苷(Ethyl glucuronide,EtG)是一种酒精代谢产物,是酒精在体内代谢的产物之一。

它可以在尿液、血液和头发中被检测出来,并且可以用作判断个体是否饮酒的指标。

在法医毒理学中,乙基葡萄糖醛酸苷的检测有着重要的应用,可以用来判断个体是否饮酒,并辅助调查交通事故、刑事案件等。

本文将对乙基葡萄糖醛酸苷的检测方法、应用领域以及在法医毒理学中的应用进行详细探讨。

乙基葡萄糖醛酸苷的检测方法乙基葡萄糖醛酸苷在体内的代谢产物不同于酒精本身,在尿液、血液和头发中可以长时间存在,因此可以用作长期饮酒的指标。

目前常用的检测方法包括酶联免疫吸附测定法(ELISA)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、头发毛囊测试法等。

(一)酶联免疫吸附测定法(ELISA)酶联免疫吸附测定法是一种常用的快速检测方法,其原理是利用特异性抗体对乙基葡萄糖醛酸苷进行捕获和检测。

该方法操作简便,快速,适用于大批量样本的检测。

(二)气相色谱-质谱联用法(GC-MS)气相色谱-质谱联用法是一种高灵敏度的分析方法,能够准确测定尿液、血液中的乙基葡萄糖醛酸苷浓度。

该方法灵敏度高,准确性好,是检测乙基葡萄糖醛酸苷的金标准。

(三)液相色谱-质谱联用法(LC-MS)液相色谱-质谱联用法也是一种常用的检测方法,能够对尿液中的乙基葡萄糖醛酸苷进行准确检测。

该方法操作简便,快速,适用于临床实验室中的检测。

(四)头发毛囊测试法头发毛囊测试法通过分析头发中的乙基葡萄糖醛酸苷水平来判断个体的长期饮酒情况。

该方法操作简便,不受尿液或血液样本中的稀释效应影响,因此被认为是一种较为可靠的检测方法。

乙基葡萄糖醛酸苷在法医毒理学中的应用乙基葡萄糖醛酸苷在法医毒理学中有着重要的应用价值,其主要包括以下几个方面:(一)判断个体是否饮酒乙基葡萄糖醛酸苷可以作为判断个体是否饮酒的重要指标。

法医毒物鉴定的发展及其问题

法医毒物鉴定的发展及其问题

法医毒物鉴定的发展及其问题摘要:法医毒物鉴定在于澄清死亡案件的性质,主要作用是对毒物进行分析,可以区分出死者是因病猝死、中毒死亡还是死于交通事故,同时可以详细鉴定出毒物的含量、性质等,为案件提供可靠的科学依据。

本次综述重点阐述了法医毒物鉴定的发展及其问题。

关键词:法医毒物鉴定;发展趋势;问题目前国家法院毒理协会明确的规划与血液反应有毒物质的相关资料,同时也制定了准确的参考资料[1]。

但是在具体的毒物鉴定过程中如何可以避免法医毒物鉴定的风险,提高鉴定结果的准确性一直是诸多学者探讨课题。

1.法医伦理与法医学概述法医学主要应用于刑事案件的侦查与民事纠纷调解中,利用医学知识为案件提供准确、可靠的依据,推进案件工作的顺利进行。

从本质上看,法医学与其他学科存在有很大的差异性,法医学具有明确的鉴定对象、独特的鉴定方法和鉴定范围。

法医学最主要的目的是为法律提供可靠、准确的依据。

法医伦理学是应用伦理学的进一步拓展,重点研究对象是法医的职业道德与不同人之间的关系[2]。

法医学鉴定通常采取的方式是对检验不同人体的死亡时间和致伤工具,进而判断鉴定对象的损伤程度与死亡原因等等。

但是在鉴定的过程中会接触到鉴定对象以及家属、司法机关、社会公众。

因此法医的语言表达能力与职业道德会直接影响到与家属的合作关系、调查效果。

可看出,为了确保鉴定工作的顺利开展,法医鉴定人应该具备丰富的理论学知识结构。

2.法医毒物鉴定的发展趋势2.1毒物种类明显增加现如今化学毒物的种类呈现逐年上升趋势,上升幅度可高达一万种。

现如今法医毒物鉴定的内容越来越多,如:氰化物、生物碱、毒物、化学药品、杀鼠剂、新型除草剂等。

除此之外,毒物的生物标记物和代谢物在法医检验中具有十分重要的作用。

因此,法医毒物鉴定的工作人员在具体的工作中应该将检测毒物的代谢物以及生物标记物。

比如:在鉴定死者生前饮酒中,法医会将乙基葡萄糖醛酸苷作为判断死者是否饮酒。

2.2生物检材应用比较广泛正常情况下,法医对毒物进行鉴定的过程中通常是从死者的指甲、皮肤、胃中的物质、头发等提取出生物材料标本。

液相色谱-串联质谱法测定血液、尿液中乙基葡萄糖醛酸苷

液相色谱-串联质谱法测定血液、尿液中乙基葡萄糖醛酸苷

液相色谱-串联质谱法测定血液、尿液中乙基葡萄糖醛酸苷赵晖;卓先义;严慧;沈保华【摘要】目的建立血液、尿液中乙基葡萄糖醛酸苷(ethyl glucuronide,EtG)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法.方法血液、尿液用乙腈沉淀蛋白,离心后取上清液用LC-MS/MS检测.结果血液、尿液中EtG的检出限均为0.05 μg/mL,线性范围均为0.10~5.00 μg/mL(r>0.999),检测方法准确度为95%~109%,日间及日内精密度<12%.对送检案例血液中EtG进行检测,效果良好.结论本方法适用于血液、尿液中EtG的检测.【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2010(026)004【总页数】4页(P269-272)【关键词】法医毒理学;血液;尿;液相色谱-串联质谱法;乙基葡萄糖醛酸苷【作者】赵晖;卓先义;严慧;沈保华【作者单位】复旦大学,上海医学院,上海,200032;司法部司法鉴定科学技术研究所,上海市法医学重点实验室,上海,200063;司法部司法鉴定科学技术研究所,上海市法医学重点实验室,上海,200063;司法部司法鉴定科学技术研究所,上海市法医学重点实验室,上海,200063【正文语种】中文【中图分类】DF795.1乙醇进入人体后,少量乙醇(<0.1%)与尿嘧啶核苷-5’-二磷-葡萄糖醛酸结合生成乙基葡萄糖醛酸苷(ethyl glucuronide,EtG)从尿液中排出体外[1-3]。

EtG 是乙醇体内代谢的标志性代谢物,与乙醇相比,EtG在血液或尿液中具有更长的检测时限,是检测乙醇滥用的良好指标,可为解决酒后驾车逃逸后归案时已无法检出乙醇案件的判断提供科学依据。

同时尿液中EtG的检测结果可广泛应用于临床医学、征兵、招工、驾驶能力测试等活动中。

血液中EtG的测定方法主要有液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法和气相色谱-质谱联用(GC-MS)法。

用GC-MS 分析,样品需衍生化,花费时间长[1,4-6],而用LC-MS/MS法无需衍生化[7-12]。

血液和尿液中酒精代谢指标物乙基葡萄糖醛酸苷的GC-MS检测方法

血液和尿液中酒精代谢指标物乙基葡萄糖醛酸苷的GC-MS检测方法

血液和尿液中酒精代谢指标物乙基葡萄糖醛酸苷的GC-MS检测方法【摘要】目的:探讨血液和尿液中酒精代谢指标物乙基葡萄糖醛酸苷的GC-MS检测方法。

方法:血液和尿液以乙腈沉淀蛋白,离心,取上清液,以0.22 μm滤膜过滤后进样分析。

以保留时间和离子对相对丰度比为定性依据,空白血液中加标制作外标法校准曲线,来定量检测样品中乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)含量。

结果:EtG 在血液样品的回收率范围为 95.86%~101.88%,准确度标准偏差(SD)为1.52~2.91,在尿样的回收率为 98.10%~102.71%。

结论:GC-MS检测方法灵敏度和准确度高,适合血液和尿液中的乙基葡萄糖醛酸苷检测,值得临床进一步推广。

【关键词】血液;尿液;酒精代谢指标物;乙基葡萄糖醛酸苷;GC-MS检测方法多年来,国内外学者们都在致力寻找研究合适的生物学标记物,用以评估酒精滥用情况,其中乙基葡萄糖醛酸酯(EtG)就是近年来被广泛关注的一种重要的酒精滥用判断指标。

EtG含量与乙醇摄入量的相互关系,利用EtG作为乙醇摄入特征性指标推断饮酒时间,利用EtG含量区分是否酗酒以及判断尸体中乙醇来源等具有重要意义[1]。

本研究探析了血液和尿液中酒精代谢指标物乙基葡萄糖醛酸苷的GC-MS检测方法,报道如下。

1资料和方法1.1一般资料血液和尿液以乙腈沉淀蛋白,离心,取上清液,以0.22 μm滤膜过滤后进样分析。

以保留时间和离子对相对丰度比为定性依据,空白血液中加标制作外标法校准曲线,来定量检测样品中乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)含量。

1.2方法1.2.1材料、试剂及仪器试剂:乙醇(色谱级)购自美国Sigma -Aldrich 公司。

仪器:气相色谱质谱联用仪,Agilent6890/5975 。

采用液-液萃取以及新近的固相萃取技术可以分离血清和尿液中的EtG,代谢物可用气相质谱仪(GC-MS)和液相/质谱仪(LC/MS-MS)进行定量,检测限值为0.03mg/L-0.05mg/L。

地骨皮甲醇部位的化学成分及其抗炎活性研究

地骨皮甲醇部位的化学成分及其抗炎活性研究

地骨皮甲醇部位的化学成分及其抗炎活性研究王路路;胡巍;黎浩;许耶;柳航【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2024(46)5【摘要】目的研究地骨皮甲醇部位的化学成分及其抗炎活性。

方法地骨皮70%甲醇部位采用各种现代色谱学方法分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构;建立RAW264.7细胞炎症模型评价化合物的体外抗炎活性。

结果从中分离得到了11个化合物,分别鉴定为汉黄芩素(1)、汉黄芩素7-O-β-D-乙基葡萄糖醛酸苷(2)、汉黄芩素7-O-β-D-甲基葡萄糖醛酸苷(3)、(-)-丁香树脂酚(4)、表松脂素-4′-O-β-D-葡萄糖苷(5)、丁香酸葡萄糖苷(6)、3-(2-羟苯基)-丙酸甲酯(7)、3-(2-羟苯基)-丙酸乙酯(8)、丁香醛(9)、邻苯二酚(10)、(E)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-N-phenethylacrylamide(11)。

相较于模型组,化合物1~3和11给药后,NO生成量降低(P<0.05,P<0.01)。

结论化合物2~5、7~8和11为首次从枸杞属植物中分离得到。

化合物1~3和11具有显著抗炎活性,化合物2的抗炎活性最好。

【总页数】6页(P1540-1545)【作者】王路路;胡巍;黎浩;许耶;柳航【作者单位】南京大学医学院附属鼓楼医院药学部【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.糙叶五加果实乙酸乙酯萃取部位化学成分及抗炎活性研究2.丁香茄叶乙酸乙酯部位化学成分及抗炎活性研究3.岩黄连乙酸乙酯部位化学成分及其抗炎活性研究4.华泽兰根茎石油醚部位化学成分的抗炎活性研究5.蛇含委陵菜抗炎活性部位的筛选及化学成分研究因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

法医毒理学的结果解释(上)

法医毒理学的结果解释(上)

法医毒理学的结果解释(上)向平;沈敏【摘要】法医毒理学的主要任务是从生物检材中分析毒(药)物,并且推断毒(药)物浓度对死亡或行为能力的作用程度,结果解释是法医毒理学的最终目的.现代法医毒理学主要包括死后法医毒理学、滥用药物筛查和行为能力影响三个方面,由此探讨在进行结果解释时的诸多影响因素.进行法医毒理学的结果解释时应非常慎重,充分了解案情和调查结果,充分考虑毒(药)物的毒性、生物检材、药代动力学、体内再分布、药物交叉反应等多种因素,才能对案件作出较为准确的结果解释.【期刊名称】《中国司法鉴定》【年(卷),期】2011(000)001【总页数】5页(P44-48)【关键词】结果解释;法医毒理学;影响因素;毒(药)物;药代动力学;体内再分布【作者】向平;沈敏【作者单位】司法部司法鉴定科学技术研究所上海市法医学重点实验室,上海200063;司法部司法鉴定科学技术研究所上海市法医学重点实验室,上海200063【正文语种】中文【中图分类】DF794.1Abstract:Forensic toxicology concerns the analysis of biological specimens for the presence of drugs and poisons to determine what role the detected substances play in death or impairment of humanperformance.The interpretation of the results is the ultimate purpose of forensic toxicology.Modern forensic toxicology consists of three major areas:post-mortem forensic toxicology,forensic urine drug testing,human-performance forensic toxicology.This article discusses various factors that enter into the interpretation process in each area.The results must be interpreted with caution.Apart from the measured concentrations,many affecting factors like data from autopsy and investigation,drug toxicity,types of biosamples,pharmacokinetics,redistribution,and drug interactions should be taken into full consideration so that accurate result interpretations could be achived in cases.Key words:interpretation of results;forensic toxicology;factor;drug and poison;pharmacokinetics;redistribution法医毒理学是运用分析化学、药物化学和毒理学等相关学科的理论和技术,研究毒(药)物的毒性、作用、分布、代谢、分离、分析等问题,提供与法律有关的死亡、中毒和药物滥用的法医学证据的学科。

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头发中乙基葡萄糖醛酸苷分析的研究进展施妍1,2,向平1,沈保华1,沈敏1(1.司法部司法鉴定科学技术研究所上海市法医学重点实验室,上海200063;2.复旦大学上海医学院法医系,上海200032)摘要:乙基葡萄糖醛酸酐(ethyl glucuronide ,EtG )为乙醇的体内代谢物,摄入的乙醇大约0.02%~0.06%以EtG 的形式排出,其消除时间较乙醇缓慢,即使当乙醇在体内完全消除后,EtG 仍可作为酒精滥用的生物学标志。

测定头发中的EtG 可延长检测时限,获取饮酒史的信息,在法庭科学和临床医学领域已成为研究热点。

头发中EtG 的检测主要采用以串联质谱为主的高灵敏的分析方法,且注重头发采样、去污、水解、提取、分析等各环节的质量控制,避免出现假阳性结果。

头发中EtG 的研究结果可广泛应用于法庭科学、临床医学、征兵、招工、驾驶能力测试等领域。

关键词:EtG ;头发分析;串联质谱;酒精滥用中图分类号:DF795.1文献标志码:A 文章编号:1671-2072-(2009)03-0024-07Review of Ethyl Glucuronide in Hair AnalysisSHI Yan 1,2,XIANG Ping 1,SHEN Bao-hua 1,SHEN Min 1(1.Shanghai Key Laboratory of Forensic Medicine,Institute of Forensic Science,Ministry of Justice,Shanghai 200063,China ;2.Shanghai Medical College of Fudan University,Shanghai 200032,China)Abstract:Ethyl glucuronide (EtG)is a minor metabolite of ethanol,which only represents 0.02%-0.06%of the total ethanol intake.Following alcohol intake,EtG is reported to be detectable for an extended period of time after the complete elimination of ethanol from the body,so it can be used as a marker of alcohol abuse.Its detection in hair has become a hot subject of re -search in both clinical and forensic context for the purpose of alcohol abuse monitoring.The hair analysis of EtG requires more sensitive methods for its low concentration,which needs to be carried out by LC -MS/MS or GC -MS/MS.Special attentions should be paid in the decontamination procedures of hair sampling,washing and extracting to avoid a false positive result.Moreover,EtG concentration in hair may help to estimate the daily alcohol intake and can confirm abstinence,so it can be widely used in forensic science,treatment programs,workplaces,schools,troops as well as driving ability test to provide legal proof of drinking.Key words :ethyl glucuronide (EtG);hair analysis;tandem mass-spectrum (MS/MS);alcohol abuse收稿日期:2009-01-09基金项目:国家科技部公益基金资助项目(2007GY0701),正谊学者项目(JYE101001)。

作者简介:施妍(1984-),女,博士研究生。

E -mail:ydeedyx@.通信作者:沈敏(1955-),女,研究员,博士生导师。

酒精滥用是众多国家存在的社会问题之一。

多年来,国内外学者们都在致力寻找并研究合适的生物学标记物,用以评估酒精滥用情况,其中乙基葡萄糖醛酸苷(ethyl glucuronide ,EtG )就是近年来被广泛关注的一种重要的酒精滥用判断指标[1]。

EtG 是乙醇的体内代谢物之一,在体内可以进入头发,并在头发中累积。

由于头发样品易采集、易保存,根据头发长度还可以检测数月乃至数年内的酒精滥用情况,提供长程信息,因此头发中EtG 的分析弥补了血液和尿液分析的不足。

检测头发中的EtG 可以反映被测者的酒精滥用史状况,区分日常饮酒与酗酒,因而成为近年来法庭科学和临床医学领域的研究热点,其研究成果不仅适用于法医学领域,还可用于临床医学,职业卫生学等方面[2]。

但是,头发中EtG 的质量分数极低,要求分析方法有极高的灵敏度和可靠性。

近年来的研究,从头发采样、去污、水解、提取到串联质谱分析,各环节条件不断优化,方法灵敏度逐渐提高,最低检测限(limit ofdetection,LOD )从最初的2ng/mg [3]已达0.7pg/mg [4],大大拓展了方法的应用范围。

本综述旨在对1993年以来建立的头发中EtG 的分析方法作一比较分析,并阐述该研究成果的应用价值和应用状况。

1EtG 的生物学特性及体内代谢EtG 是不挥发的、水溶性的、非氧化性的乙醇代谢物,相对分子质量为222,分子式为C 8H 14O 7,结构式如图1,其沸点约为150℃。

乙醇进入体内后大约90%~95%在肝中被氧化成乙醛,而仅有约0.02%~0.06%以EtG 的形式消除[5]。

鉴定科学Research PaperEtG 是乙醇的第二相代谢物,其在肝中发生生物转化,在尿苷-5'-二磷酸葡萄糖醛酸转移酶的作用下,由葡萄糖醛酸活化而来[6]。

饮酒后,EtG 存在于血液、尿液、头发以及其它组织和体液中,其半衰期长于原体乙醇。

由于摄入乙醇量的不同,机体代谢的差异,乙醇在体内消除后,6~18h 内仍可在血液中检测到EtG ,80h 内可在尿液中检测到EtG [7]。

然而,对于区分长期饮酒和偶尔饮酒而言,血液和尿液中EtG 分析的检测时限还是很短的,不能反映长程的酒精滥用情况。

此外,血液腐败能导致EtG 的降解,出现假阴性结果[8],尿路感染者因细菌(大肠埃希菌、肠球菌、B 群溶血性链球菌等)的作用可出现假阳性结果[9-11]。

因此,头发EtG 分析具有独特的应用价值而成为研究热点。

2头发的采集与清洗2.1头发的采集头发采集部位和采集方法应最大限度地反映其生长情况,由于头顶后部的头发有着较为稳定的生长速度而成为首选的头发采集部位,一般用剪刀贴着头皮剪取即可[12-13]。

2.2头发的清洗头发样品在分析前必须进行清洗,以去除外源性污染(环境污染,粉尘吸附等)和内源性污染(汗液、皮脂腺分泌等)。

从上世纪90年代始至今,对于EtG 头发样品的清洗尚无统一的操作规范,各文献报道的清洗步骤和有机溶剂不完全相同。

清洗溶剂主要有甲醇/丙酮[2]、乙醚/丙酮[3]、正己烷[10]、水/丙酮[14]、水/丙酮/甲醇[15]、二氯甲烷/甲醇[16]、甲醇/水[17]、Tween80/水[18]等。

要注意的是由于EtG 具有亲水性,其与头发结合的主要途径很可能是通过汗液,因而不稳定;另由于EtG 的强极性,与头发的角化基质结合不牢固。

因此,常规的洗涤和头发处理可能会损失EtG 的含量,清洗不当甚至会导致EtG 完全被洗掉[10]。

Morini 等[16]对毛发清洗进行深入研究后发现,用甲醇和二氯甲烷清洗,EtG 的损失率分别为(2.332±0.224)%和(0.219%±0.001)%,损失几乎可以忽略不计。

3头发中EtG 的提取处理为了能在头发中提取最大量的目标物,通常需要先对清洗和干燥后的头发进行前处理,将其剪成约1mm 长的小段,或用球磨机粉碎,使结合在头发中的EtG 尽量地释放出来。

头发用量各实验室有所不同,从10~100mg 头发不等[2,17]。

3.1样品前处理常用的水解方法有酸水解、碱水解、酶解以及甲醇超声、缓冲液浸泡法。

头发水解后,可直接用液-液提取(LLE )或固相萃取(SPE )来提取头发中的EtG 。

Jurado 等[14]在2004年曾对提取EtG 的以下4种萃取液进行了比较:(a)甲醇;(b )甲醇∶水(1∶1);(c )水;(d )甲醇∶三氟醋酸(TFA )(9∶1),结果显示用(b )和(c )溶液提取可得到较高的回收率和较低的变异系数(图2)。

但用(c )提取时,基质效应更小,信噪比更高,因而可以达到较低的LOD 和LOQ 。

综合考虑,液-液法提取EtG 时用水作萃取液较好。

液-液法提取耗时较长,需要样本的量较大,处理时易造成样本的损失,而采用固相萃取(SPE )法可以减少损失,提高目标物的回收率。

固相微萃取(SPME )、顶空固相微萃取(HS-SPME),微波辅助提取(MAE )等。

对于提取EtG 而言,具体采用哪种方法要根据实验室的具体条件而定。

本文将详细介绍固相萃取法和微波辅助提取法。

3.1.1固相萃取(SPE )固相萃取法与液-液提取相比,大大地缩短了样本制备时间,所需样品量少,避免了乳化现象,而且便于自动化操作,是生物样品处理中具有发展优势的技术之一。

Janda 等[19]用氨丙基柱固相萃取水相中EtG 。

首先分别用3mL 甲醇,3mL 水,3mL 乙腈活化SPE 柱,图2从头发中提取EtG 的四种萃取液的比较(由于样品量少,样品3只比较了3种提取液)确保活化过程中柱子不干。

然后将经过清洗和前处理离心后的含有目标物的上清液上样,再用3mL正己烷淋洗小柱。

为了去除残余液体,需在强真空下吹15min。

最后用1.8mL V(水)∶V(25%氨水)=98∶2溶液洗脱目标物。

洗脱液在30℃水浴下用氮气吹干,溶于100μL0.1%的甲酸中。

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