大肠菌群总数的测定
菌落总数及大肠菌群
菌落总数及大肠菌群的测定一、菌落总数的测定1.准备工作：1.1先将所有仪器用报纸包好，所需药品配置好，放入121℃灭菌锅灭菌15min分钟1.1微检室提前开好紫外线灯杀菌30分钟以上。
1.2把灭好菌的培养基加热溶解，放置50℃的水浴锅恒温备用2.样品处理：先用酒精对产品外袋消毒，然后打开放入放入研钵中压碎或用剪刀剪碎（注：手部接触的部分要丢弃）3.称取25ɡ样品于225ml生理盐水中，摇匀生理盐水中，摇匀。
各吸1ml至两个培养皿中，倒入培养琼脂，转动平板混匀。
4.待琼脂凝固后放翻转平皿，放入36±1℃无菌培养箱培养48小时。
二、大肠菌群的测定：1.称取25ɡ处理好的样品于225ml生理盐水中，摇匀。
各吸取10ml至3根月桂基硫酸盐胰蛋白（LST）肉汤双料管中，再各吸取1ml至3根月桂基硫酸盐胰蛋白（LST）肉汤单料管和9ml生理盐水中，把试管中样液和生理盐水摇匀，用另一支移液管分别吸取1ml至另外3根单料管中。
2.把试管塞好放入36±1℃无菌培养箱培养24小时，观察导管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48小时，不产气者为阴性，产气者进行复发酵实验。
3.复发酵实验：用接种环从所有48小时内发酵产气的LST肉汤管中分别取1环，移种于煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48小时，观察是否产气，产气者为大肠菌群阳性。
4.大肠菌群最可能（MPN）的报告根据大肠菌群阳性管数，检索MPN表报告每克（或毫升）样品中大肠杆菌的MPN 值。
（1）营养琼脂的配置：称取23.5g于1L蒸馏水中，加热沸腾至完全溶解，分装于500ml锥形瓶中，1瓶大约装350ml，121℃高压灭菌15分钟。
（2）月桂基硫酸盐胰蛋白（LST）肉汤双料管配置：称取17.8g于300ml蒸馏水中，加热沸腾至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15分钟。
（注：单料其他成分不变，水分加倍）（3）煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤配置：称取40g于1L蒸馏水中，热沸腾至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15分钟。
粪便中大肠菌群总数
粪便中大肠菌群总数
摘要：
一、大肠菌群总数的定义
二、大肠菌群总数的检测方法
1.平板计数法
2.免疫磁珠法
三、大肠菌群总数与健康关系
1.与肠道菌群平衡的关系
2.与粪便卫生质量的关系
四、大肠菌群总数的参考值
正文：
大肠菌群总数是指在一定条件下，粪便中所含大肠菌群的数目。
它是一个重要的卫生指标，用于评估人体肠道中菌群平衡状态，以及粪便的卫生质量。
大肠菌群总数的检测方法主要有平板计数法和免疫磁珠法。
平板计数法是测定大肠菌群总数的最常用方法。
它通过将粪便样品均匀涂布在含有抗生素的培养基上，然后在特定条件下培养一定时间后，对菌落进行计数。
免疫磁珠法是一种快速、灵敏的检测方法。
它通过抗体与目标菌结合，然后用磁珠捕获结合的细菌，最后通过计数磁珠的数量来推算大肠菌群总数。
大肠菌群总数与健康关系密切。
正常情况下，肠道内存在大量微生物，形成一个稳定的菌群平衡。
大肠菌群总数的变化可能影响肠道菌群的平衡，进而影响人体健康。
此外，大肠菌群总数还可以反映粪便的卫生质量。
若大肠菌群
总数过高，可能表明粪便中存在较多的致病菌，对人体健康造成潜在威胁。
根据不同国家和地区，大肠菌群总数的参考值可能有所不同。
一般情况下，大肠菌群总数应该小于10^8 CFU/g粪便。
菌落总数测定与大肠菌群计数准备工作
菌落总数测定与大肠菌群计数准备工作1、5个平板培养明（用报纸包封好）一个空白，其他4个就两个稀释度分别做两个平板2、6条1ml吸管（用报纸包封好）吸管多包几条都没问题3、称取3.3g营养琼脂加100ml蒸馏水(加热煮沸制成液)《用500ml凸瓶装，用棉花蜜封瓶口，加报纸包蜜》以上三步就是菌落总数测定的准备工作4、称取0.85g氯化钠加100ml蒸馏水（摇匀制成生理盐水）《用500ml凸瓶装，用棉花蜜封瓶口，加报纸包蜜》5、（装有9ml盐水2支小试管，多放一支预做空白）做样品稀释（装有9ml肉汤9支小试管，多放一支预做空白）做三个稀释度，每个稀释度做三支小试管6、称取?克LST肉汤100ml蒸馏水（摇匀分装下以下9支小试管，每个9ml）9支小试管要倒放小试管（装有9ml LST肉汤1：10 / 1：100 / 1：1000）每个稀释度做三支小试管7、量斗、量杯(以上全部放入高压锅消毒121~126℃约15~30分)8、5g样品菌落总数（以下步骤为已消毒好，要进入已消毒的室内及消毒台操作）5g样品加入45ml 生理盐水配成1：10的样品A试剂↓在其中一支装有9ml生理的小试管中加入1ml A试剂配成1：100的样品B试剂↓↓在其中一支装有9ml生理的小试管中加入1ml B试剂配成1：1000的样品C试剂↓（以下要在洒精灯下操作要在消毒台操作菌落总数我们一般做两个稀释度在A管中抽取2次，每次1ml，分别至于两个已经倒好营养琼脂的培养基中在B管中抽取2次，每次1ml，分别至于两个已经倒好营养琼脂的培养基中倒一个空白营养培养基，做空白对照大肠菌群我们做三个稀释度在A管中抽取三次，每次1ml，分别至于3支已经消毒好的9mlLST肉汤小试管中在B管中抽取三次，每次1ml，分别至于3支已经消毒好的9mlLST肉汤小试管在C管中抽取三次，每次1ml，分别至于3支已经消毒好的9mlLST肉汤小试管中放入培养箱中36℃48小时培养睇结果。
食品中大肠菌群的测定实验报告
食品中大肠菌群的测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在测定食品中的大肠菌群数量，以评估食品的卫生安全水平。
二、实验原理。
食品中的大肠菌群是指能在37℃条件下在Lauryl Tryptose Broth培养基中生长产气的革兰氏阴性杆菌的总数。
大肠杆菌是大肠菌群的代表性菌种，因此其数量可以作为食品卫生安全的指标之一。
三、实验步骤。
1. 取样，从不同来源的食品中取样，如肉类、蔬菜、水果、奶制品等。
2. 样品处理，将取样的食品样品进行处理，如洗涤、研磨等，以获得可检测的样品。
3. 菌落计数，将处理后的样品接种在Lauryl Tryptose Broth培养基中，培养一定时间后，进行菌落计数。
4. 数据分析，根据菌落计数结果，计算出食品中的大肠菌群数量。
四、实验结果。
经过实验测定，不同食品样品中的大肠菌群数量有所不同。
其中，肉类制品中的大肠菌群数量较高，蔬菜水果中次之，奶制品中较低。
这表明食品的卫生安全水平存在一定差异。
五、实验结论。
食品中的大肠菌群数量是评估食品卫生安全水平的重要指标之一。
通过本实验的测定，可以初步评估食品的卫生安全状况，为食品生产和消费提供参考依据。
未来可以结合其他指标和方法，进一步完善食品卫生安全评估体系。
六、实验注意事项。
1. 在取样和处理过程中，要注意避免外源污染，以保证实验结果的准确性。
2. 在菌落计数过程中，要严格按照操作规程进行，避免误差的产生。
3. 实验结束后，要及时清洗和消毒实验器材，以确保实验室的卫生安全。
七、参考文献。
1. 《食品微生物学实验指导》，XXX，XXX出版社，200X年。
2. 《食品卫生与安全》，XXX，XXX出版社，200X年。
以上为食品中大肠菌群的测定实验报告内容，谢谢阅读。
实验 水中细菌总数的测定 水中大肠杆菌的测定
实验2 水中大肠菌群数的测定一、目的要求1．了解大肠菌群数量在引用水中的重要性2．学习掌握多管发酵法和滤膜法测定大肠菌群数二、原理若水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容易死亡与变异，因此数量较少，要从中特别是自来水中分离出病原菌常较困难与费时，这样就要找到一个合适的指示菌，此指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。
若指示菌在水中不存在或数量很少，则大多数情况也保证没有病原菌。
最广泛应用的指示菌是大肠菌群，它的定义是：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖培养基中，经37ºC、24～48h培养能产酸产气，根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得检出；若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，其大肠菌群数平均每升不得超过10000个。
检查大肠菌群的方法有多管发酵法与滤膜法两种。
多管发酵法使用历史较久，又称水的标准分析方法，为我国大多数卫生单位与水厂所采用；滤膜法是一种快速的替代方法，而且结果重复性好，又能测定大体积的水样，目前国内已有很多大城市的水厂采用此法。
三、实验仪器和材料1．锥形瓶（500 ml）、试管（18 mm×180 mm）、大试管（容积150 ml）、移液管1 ml 及10ml、培养皿（直径90 mm）、接种环、试管架1个。
2．革兰氏染色液一套：草酸铵结晶紫、革氏碘液、95％乙醇、蕃红染液3．显微镜4．自来水（或受粪便污染的河、湖水）400ml5．蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、琼脂、无水亚硫酸钠、牛肉膏、氯化钠、1.6％溴甲酚紫乙醇溶液、5％碱性品红乙醇溶液、2％伊红水溶液、0.5％美蓝水溶液。
6．10％NaOH、10％HCl、精密pH试纸6.4～8.4。
大肠杆菌菌落总数检测步骤
大肠杆菌及菌落总数检测方法为了对鸡精产品的微生物指标进行有效的控制，对微生物的检测就显的十分重要。
下面是鸡精产品的大肠杆菌及菌落总数实验检测方法。
一、大肠杆菌：1）培养基准备（以3.5g乳糖胆盐发酵琼脂为例）双料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。
B、用0.1g称量天平秤取7g乳糖。
C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入三根装有小导管的试管中（此三根为双料试管，即双倍原料）。
单料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。
B、用0.1g称量天平秤取3.5g乳糖。
C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入六根装有小导管的试管中（此六根为单料试管，即单倍原料）。
2）将配制好的试管放入灭菌锅进行115℃进行灭菌10min。
3）将灭菌过后的试管放置在无菌室，常温保存一周。
4）若要对生产的样品检测其大肠杆菌，其步骤如下：A、量取灭菌后的蒸馏水225ml加温后及25g样品混合均匀。
（样品需要在无菌室中，有封盖的塑料杯中进行混合）B、取三个玻璃培养皿，分别标上-1、-2、-3标记。
C、取两根新试管取9ml蒸馏水分别标为a、b。
D、用吸管吸取1ml样品液体，注入-1培养皿中，并盖上盖子。
E、用吸管吸取1ml样品液体，注入a试管中，记为-2培养基液。
F、用吸管吸取1ml a试管中的液体，注入到b试管中，记为-3培养基液。
G、用1ml吸管取样品液体分别注入3根单料试管中，用10ml吸管取样品液体分别注入双料试管中H、用1ml吸管取-2培养试管液体，分别注入到单料试管中。
I、装好液体的试管，用试管塞封好，放到36℃±1℃的恒温培养箱中24小时培养。
J、24小时培养后，取出并用肉眼观察试管的颜色及冒气泡情况，若有其中的任意状况，说明有大肠杆菌，需要通过美兰做进一步的检测。
实验八九水中细菌总数与大肠菌群数的测定
例次
不同稀释度的平均菌落数
10-1
10-2
10-3
仅有一个稀释度在此范围： 1365
164
20
菌落数×稀释倍数 有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比<2，取平均值
2760
295
46
有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比>2，选较小值
3890
271
60
所有稀释度均>300 取稀释倍数最大者
入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨 发酵管中。另取10ml原水样 ，注入装有5ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中。混匀，37 ℃培 养24h，24h未产气继续培养至48h。
普通浓度发酵管中参加20%乳糖0.55ml，3倍浓缩发酵管中参 加乳糖0.75ml
实验方法
多管发酵法测定水中总大肠菌群
3.平板别离： 〔1〕制备伊红美蓝平板： 45 ℃，无菌，倾注15ml 〔2〕选产酸产气的发酵管，接种至伊红美蓝平板〔分区划线
无法计数 1650 513
所有稀释度均<30 取稀释倍数最小者
27
11
5
没有任何稀释度在30-300之间 无法计数 305
12
选最接近该范围者
两个稀释度 菌落之比
菌落总பைடு நூலகம் （CFU/ml）
——
1.6×104
1.6
3.8×104
2.2
2.7×104
—— —— ——
5.1×105 2.7×102 3.1×104
实验八-九 水中细菌总数与大肠菌群数 的测定及计数
目的要求
1、学习检测水中细菌总数和大肠菌群数的方法 2、掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数 的方法 3、学习使用大肠菌群检索表
实验五食品中大肠菌群的测定
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比较区别 GB/T4789.38 -- 2019大肠杆菌的计数
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03版 流程
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一、 步骤
取样及稀释方法与菌落总数检验方法 相同，做成1:10的均匀稀释液为检样。
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同一稀释度在做菌落总数测定的同时接 种乳糖胆盐发酵管，并且用大肠埃希氏 菌、产气肠杆菌混合菌种作对照 。
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1、乳糖发酵试验 根据食品卫生要求或对检样污染程
度的估计，选择三个稀释度，每个稀释 度接种三管乳糖胆盐发酵管。
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40
接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐
发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐
发酵管，同时用大肠埃希氏菌和产气肠杆菌
混合菌种混合接种于1支作单料乳糖胆盐发酵
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巴氏杀菌乳（GB5408.1-2019）
细菌菌落总数： ≤30000cfu/ml
大肠菌群：
≤90MPN/100ml
肠道致病菌： 不得检出
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生活饮用水卫生标准（GB5749-2019）
菌落总数cfu/ml： ≤100 总大肠菌群cfu/100ml或MPN/100ml ：不得检出 耐热大肠菌群cfu/100ml或MPN/100ml ：不得检出 大肠埃希氏菌cfu/100ml或MPN/100ml ：不得检出
它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食 品是否有肠道致病菌污染的可能性。
食品中大肠菌群数系以每1g（或mL）检样内大肠 菌群最可能数MPN（the most probable number简称MPN）表示
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4. 复发酵试验：将上述镜检之菌 落同时接种于乳糖发酵管，置 于35 ℃ ～37℃培养24土2h，观察 产气情况。
四、结果报告（按照国标及有关标准）
凡是在乳糖胆盐发酵管产酸、产气，在指示性 培养基上能生长的，革兰氏染色为阴性的无芽抱杆 菌，在复发酵管中产酸、产气的，即说明有大肠菌 群的细菌存在—大肠菌群阳性； 有一项不符的，即说明无大肠菌群的细菌存 在—大肠菌群阴性。 根据有大肠杆菌细菌存在的初发酵管的管数， 查相应的大肠杆菌检索表，报告每100毫升待检样 品中大肠菌群细菌的最近似数。
实 验 八 大肠菌群最近似数的测定
大肠菌群:coliforms
最近似数:most probable number,MPN
概念：大肠菌群系指一群在37℃ 24h能
发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性
厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，
包括肠杆菌科的埃希氏菌属、柠
檬酸细菌属、克雷伯菌属、肠
杆菌属。
单位：MPN/100mL（g）
一、实验目的
1.掌握大肠菌群最近似数检验技术的
要点 2. 学会发酵法检验大肠菌群最近似数
二、实验器材
样品 37℃恒温培养箱、接种环、酒 精灯、试管架、记号笔等 培养基
三、方法 1、样品及其稀释（同细菌总数测定）
2、接种乳糖胆盐发酵管（3×3=9支） 3、鉴别培养（伊红美兰） 4、乳糖复发酵试验
1. 采样:无菌操作
2. 初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发 酵管内，10ml接种量采用双料发酵管，而lml 及lml以下接种量采用单料管。每一接种量接 种3管，置于35～37℃培养24士2h。将产酸、 产气的发酵管按下列程序继续进行检验。
3. 分离培养：将产气的发酵管中的发
酵液在EMB平板上划线分离，置于35 ～37C培养18 ～ 24h