总大肠菌群数量测定

合集下载

粪便中大肠菌群总数

粪便中大肠菌群总数

粪便中大肠菌群总数
摘要:
一、大肠菌群总数的定义
二、大肠菌群总数的检测方法
1.平板计数法
2.免疫磁珠法
三、大肠菌群总数与健康关系
1.与肠道菌群平衡的关系
2.与粪便卫生质量的关系
四、大肠菌群总数的参考值
正文:
大肠菌群总数是指在一定条件下,粪便中所含大肠菌群的数目。

它是一个重要的卫生指标,用于评估人体肠道中菌群平衡状态,以及粪便的卫生质量。

大肠菌群总数的检测方法主要有平板计数法和免疫磁珠法。

平板计数法是测定大肠菌群总数的最常用方法。

它通过将粪便样品均匀涂布在含有抗生素的培养基上,然后在特定条件下培养一定时间后,对菌落进行计数。

免疫磁珠法是一种快速、灵敏的检测方法。

它通过抗体与目标菌结合,然后用磁珠捕获结合的细菌,最后通过计数磁珠的数量来推算大肠菌群总数。

大肠菌群总数与健康关系密切。

正常情况下,肠道内存在大量微生物,形成一个稳定的菌群平衡。

大肠菌群总数的变化可能影响肠道菌群的平衡,进而影响人体健康。

此外,大肠菌群总数还可以反映粪便的卫生质量。

若大肠菌群
总数过高,可能表明粪便中存在较多的致病菌,对人体健康造成潜在威胁。

根据不同国家和地区,大肠菌群总数的参考值可能有所不同。

一般情况下,大肠菌群总数应该小于10^8 CFU/g粪便。

实验水中总大肠菌群的测定(多管发酵法)

实验水中总大肠菌群的测定(多管发酵法)
备培养基的制备:于2000mL烧杯中,先将20—30g琼脂加到 900mL蒸馏水中,加热溶解,然后加入3.5g磷酸氢二钾及10g蛋白 胨,混匀,使其溶解,再用蒸馏水补充到1000mL,调节溶液pH至 7.2—7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加10g乳糖,混匀,定 量分装于250或500mL锥形瓶内,置于高压灭菌器中,在121℃灭 菌15min,贮存于冷暗处备用。 (2)平皿培养基的制备:将上法制备的贮备培养基加热融化。根 据锥形瓶内培养基的容量,用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱 性品红乙醇溶液,置于灭菌试管中;再按比例称取无水亚硫酸钠, 置于另一灭菌空试管内,加灭菌水少许使其溶解,再置于沸水浴 中煮沸10min(灭菌)。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液, 滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色再退至淡红色为止(不宜加 多)。将此混合液全部加入已融化的贮备培养基内,并充分混匀 (防止产生气泡)。立即将此培养基适量(约15mL)倾入已灭菌的平 皿内,待冷却凝固后,置于冰箱内备用,但保存时间不宜超过两 周。如培养基已由淡红色变成深红色,则不能再用。
①伊红美蓝培养基上:深紫黑色,具有金属光泽的菌落;紫黑色,不带或略带 金属光泽的菌落;淡紫红色,中心色较深的菌落。 ②品红亚硫酸钠培养基上:紫红色,具有金属光泽的菌落;深红色,不带或略 带金属光泽的菌落;淡红色,中心色较深的菌落。(3)取有上述特征的群落进 行革兰氏染色 ③用已培养18—24h的培养物涂片,涂层要薄。 ④将涂片在火焰上加温固定,待冷却后滴加结晶紫溶液,1min后用水洗去。 ⑤滴加助染剂,1min后用水洗去。 ⑥滴加脱色剂,摇动玻片,直至无紫色脱落为止(约20—30s),用水洗去。
三、仪器
1.高压蒸气灭菌器。 2.恒温培养箱、冰箱。 3.生物显微镜、载玻片。 4.酒精灯、镍铬丝接种棒。 5.培养皿(直径100mm)、试管(5×150mm),吸管(1、5、10mL)、烧 杯(200、500、2000mL)、锥形瓶(500、1000mL)、采样瓶。

总大肠菌的测定实验作业指导书

总大肠菌的测定实验作业指导书

作业指导书 页码:第 1页,共11页 文件编号:JLQX-03-022 版次:2022版,第0次修订 文件名称:水中总大肠菌群的测定 发布日期:2022 年1 月1 日水中总大肠菌群的测定1、方法依据水质 水中总大肠菌群的测定 多管发酵法2、合用范围总大肠菌群是指那些能在37℃48h之内发酵乳糖产酸气的、需氧及碱性厌氧的革兰式阴性的无芽胞杆菌。

主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。

总大肠菌群的检验方法中,多管发酵法可合用于各种水样(包括底泥),但操作较繁,需要时间较长;滤膜法主要是用于杂质较少的水样,操作简单快速。

如果是使用滤膜法,则总大肠菌群可重新定义为:所有能在含乳糖的远腾氏培养基上,于37℃24h之内生长出带有金属光泽暗色菌落的、需氧的和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

粪便中存在有大量的大肠菌群细菌,在水体中存活的时间和对氯的反抗力等于常道致病菌,如沙门氏菌、志贺氏菌等相似,因此将总大肠菌群作为水体受粪便污染的指示菌是合适的。

但在某些水质条件下,大肠菌群细菌在水中能自行繁殖,这是不利之处。

作业指导书 页码:第2页,共11页 文件编号:JLQX-03-022 版次:2022版,第0次修订 文件名称:水中总大肠菌群的测定 发布日期:2022 年1 月1 日3、测定原理3.1水中总大肠菌群的测定多管发酵是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性、无芽孢、呈杆状等有关特性,通过三个步骤进行检验,以求得水样中的总大肠菌群数。

多管发酵法是以最可能数简称MPN来表示实验结果的。

实际上它是根据统计学理论,估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。

如果从理论上考虑,并且进行大量的重复检定,可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。

无非只决于那些既显示阳性有显示阴性的稀释度试管重复数目增加,这种差异便会减少,对于细菌含量的估计值,大部份取决于那些即显示阳性又显示阴性的稀释度。

水质 总大肠菌群的测定

水质 总大肠菌群的测定

水质总大肠菌群的测定多管发酵法方法学报告起始日期:2018年月日结束日期:2018年月日一、实验目的掌握水中总大肠菌群的测定方法及原理。

二、依据标准文献GB/T 5750.12-2006生活饮用水标准检验方法微生物指标 2 多管发酵法三、适用范围生活饮用水及水源水总大肠菌群的测定。

四、方法原理总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的,在37℃生长时能使乳糖发酵,在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

多管发酵法的原理是根据统计学理论,通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数,估计水体中大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。

试验结果以最可能数,简称MPN 表示。

计算出数量/L。

(most probable number)五、仪器设备(1)立式压力蒸气灭菌器型号:YXQ-LS-50SII 容积:50升(2)恒温培养箱,超净工作台。

(3)酒精灯、镍铬丝接种棒。

(4)培养皿(直径100mm)、试管(5×150mm),吸管(1、5、10mL)、烧杯(5)(200、500、2000mL)、锥形瓶(250、1000mL)、采样瓶。

六、试剂材料培养基:乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基,营养琼脂。

七、实验步骤 1. 试验准备乳糖蛋白胨培养液:按瓶上标志配制好液体培养基后,取10支20毫升试管,5支30毫升试管,内置小导管。

5支30毫升试管加入10 mL 2倍浓度的乳糖蛋白胨培养液,10管加入10 mL 单倍浓度的乳糖蛋白胨培养液,试管加硅胶塞。

伊红美蓝培养基:按瓶上标志配制好300 mL 液体培养基后,倒入锥形瓶500mL 中,加硅胶塞。

营养琼脂:按瓶上标志配制好200mL 液体培养基后,倒入锥形瓶500mL 中,加硅胶塞。

取采样瓶多个,接种棒,培养皿35对,密封包装。

以上物品材料于 121℃高压灭菌器中灭菌 30min 备用。

2. 样品测定取500mL 锥形瓶内的营养琼脂液体培养基,倒入约20mL 灭菌好的培养皿中,超净工作台不同位置各放1对,共10对,操作间不同位置各各放1对,共10对。

地下水总大肠菌群的测定方法

地下水总大肠菌群的测定方法

地下水总大肠菌群的测定方法
地下水中总大肠菌群的测定是非常重要的,因为它可以反映出
水质的卫生状况。

以下是一些常用的测定方法:
1. 膜过滤法,这是一种常用的测定方法,通过将地下水样品通
过0.45微米的膜过滤器,然后将膜放置在含有大肠菌群特异培养基
的琼脂平板上进行培养。

培养后,通过计数形成的菌落来确定水样
中大肠菌群的数量。

2. 荧光素基因定量PCR法,这是一种分子生物学方法,通过提
取地下水中的DNA,使用荧光素基因特异引物进行PCR扩增,然后
使用荧光素探针进行定量检测。

这种方法可以快速准确地测定大肠
菌群的数量。

3. 色素培养基法,使用含有某种特定底物的琼脂平板进行培养,通过大肠菌群对底物的特异反应产生的颜色变化来测定其数量。

4. 流式细胞术,这是一种高通量的测定方法,通过将水样中的
微生物染色标记,然后通过流式细胞仪进行快速准确地测定大肠菌
群的数量。

总的来说,测定地下水中总大肠菌群的方法有多种,可以从不同的角度对水质进行评估。

在实际应用中,可以根据实际情况选择合适的方法进行测定。

实验九水中总大肠菌群的测定报告

实验九水中总大肠菌群的测定报告

菌群数。
每组: 三倍浓缩乳糖蛋白胨(5 ml)15管 普通浓度乳糖蛋白胨(10 ml)15管 伊红美兰培养基 150 ml (5个平板) 三角瓶1个(装27mL蒸馏水灭菌)、 10ml吸管 2支、1ml吸管2支包扎灭菌
Байду номын сангаас
表2 最可能数(MPN)表
(接种5份10mL 水样、5份1mL水 样、5份0.1mL水 样时,不同阳性 及阴 性情况下 100mL水样中细 菌数的最可能数 和95%可信限值)
(2)水源水
在装有5ml 3倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基的试管中加入10ml水样品;于各装有 10mL乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管),分别加入1mL水样;再于各 装有10mL乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管),分别加入1mL 1:10 稀释的水样。共计15管,三个稀释度。将各管充分混匀,置于37℃恒温箱内培养 48h。 (可以根据水的污染程度选择3个稀释度)
(3) 伊红美培养基:按照说明称取适量培养基,置于三角瓶中,加蒸馏
水溶解, 115℃高压灭菌15min,待冷却至45℃—50℃ ,倒平板待用。
培养基配制操作图示:
用漏斗分装培养基及摆斜面
培养基的分装:一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装 3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫 米的试管约装12~15毫升。每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的
实验九
水中总大肠菌群的测定
实验八 水中总大肠菌群的测定
一 实验器材 1 培养基
乳糖蛋白胨发酵管(内有倒置小套管)培养基、伊红美兰琼脂平板
2 溶液和试剂 革兰氏染色液
3 仪器和其他用品
高压湿热灭菌器、显微镜、载玻片、灭菌培养皿、灭菌吸管、试管、三角 瓶、接种环

总大肠菌群的测定


任务三 水中总大肠菌群的测定
一、测定意义
作为水体受粪便污染的指标。
二、总大肠菌群的特征
❖在37℃ 下培养24h可使乳糖发酵,并产酸产气 ❖是革兰氏阴性无芽孢杆菌 ❖在特殊培养基上能够长出具有典型特征的菌落
(一)资金的习性
不变资金是指在一定的产销量范围内,不受产销 量变动的影响而保持固定不变的那部分资金。
(2) 水源水:将水样作1:10稀释
水样
各 10mL
1mL
各1mL
9mL无菌水
10-1
各1mL
37℃ 24h
双料乳糖蛋白胨各10mL
乳糖蛋白胨各10mL
任务三 水中总大肠菌群的测定
(1)计算敏感项目占销售收入百分比。
资产 货币资金 应收账款净额 存货 00 7 000 9 000 2 000 23 000
销售百分比 7.50% 5.00% 17.50%
非敏感项目 非敏感项目
30.00%
负债及所有者权益 应付账款 应付票据 长期借款 实收资本 留存收益 负债及所有者权益
西北公司20×0年销售收入为40 000万元,当年 营业净利率为8%,股利支付率为60%。预计下一 年度20×1年销售收入将增长20%,超过现有生 产能力,需新增固定资产投资1 000万元。20×0 年12月31日资产负债表如表5-1所示:
要求:预计20×1年资金需要量,以及需要外部 融资的资金需求。
它一般包括厂房、机器设备等固定资产占用的资金、原 材料、产成品最低必要的储备资金等。
变动资金是指随产销量的变动而成同比例变动的 那部分资金。
它一般包括直接构成产品实体的原材料、外购半成品等 占用的资金。
半变动资金是指虽然受产销量变化的影响,但不 成同比例变动的资金,如一些辅助材料占用的资 金。

大肠菌群的测定实验报告

大肠菌群的测定实验报告
《大肠菌群的测定实验报告》
实验目的:通过实验测定大肠菌群的数量,了解其在肠道中的分布情况,并探讨其与健康的关系。

实验方法:我们采集了一组健康人群的粪便样本,并使用培养基和平板计数法对大肠菌群进行测定。

首先,我们将粪便样本均匀涂抹在培养基上,然后将培养皿放入恒温箱中进行培养。

培养后,我们对培养皿上的菌落进行计数,并根据计数结果得出大肠菌群的数量。

实验结果:经过实验测定,我们发现健康人群的大肠菌群数量在正常范围内,平均值约为10^8 CFU/g。

同时,我们还发现不同个体之间的大肠菌群数量存在一定的差异,但总体上呈现出稳定的分布情况。

实验分析:大肠菌群在肠道中起着重要的作用,它能够帮助人体消化食物、产生维生素等。

同时,大肠菌群的数量与肠道健康密切相关,过多或过少都可能导致肠道问题。

因此,通过测定大肠菌群的数量,可以帮助我们了解肠道健康状况,及时采取相应的调节措施。

结论:通过本次实验测定,我们得出了健康人群大肠菌群数量的正常范围,并认识到了大肠菌群在肠道健康中的重要作用。

希望通过这一实验结果,能够为人们提供更多关于肠道健康的参考信息,促进人们更加关注和重视肠道健康。

水中总大肠菌群的测定法(多管发酵法)

1适用范围本标准适用于天然水和生活水中总大肠菌群的测定。

2方法概要总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的,在37C 生长时能使乳糖发酵,在 24h 内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

总大肠菌群数系指每升水样中所含有的总大肠菌群的数目。

总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。

本标准参照GB 5750-85制订。

3试剂和材料 3.1乳糖蛋白胨培养液:外购商品培养基或按下列方法自行配制。

3.1.1 组分蛋白胨 10.0g 牛肉膏 3.0g乳糖 氯化钠1.6 %溴甲酚紫乙醇溶液蒸馏水3.1.2 配制将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于 节pH为7.2〜7.4,再加入1ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液,充分混匀,分装于装有倒管的试管中,置于高 压蒸汽灭菌器中,以 115C 灭菌20分钟,贮存于冷暗处备用。

3.2 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液: 按上述乳糖蛋白胨培养液( 3.1 )各组分的称量增加三倍配制。

3.3 品红亚硫酸钠培养基(供多吕发酵法用) :外购商品培养基或按卜列万法自行配制。

3.3.1组分蛋白胨 10.0g乳糖10.0g磷酸氢二钾3.5g琼脂10〜30g蒸馏水1000ml无水亚硫酸钠5g 左右 5.0g 5.0g 1.0ml 1000ml1000ml 蒸馏水中加热溶解,用 1mol/L 的NaOH 或HCI 调332 贮备培养基的配制先将琼脂加至900ml蒸馏水中,加热溶解,然后加入磷酸氢二钾和蛋白胨,混匀使之溶解,再以蒸馏水补足至1000ml,用1mol/L的NaOH或HCI调节pH为7.2〜7.4,趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加入乳糖,混匀后定量分装于烧瓶内,置于高压蒸汽灭菌器中,以115C灭菌20分钟,贮存于冷暗处备用。

3.3.3平皿培养基的配制将上法制备的贮备培养基加热融化,根据烧瓶内培养基的容量,用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液,置于灭菌空试管中。

再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内,加灭菌水少许使其溶解后,置于沸水浴中煮沸10分钟以灭菌。

大肠菌群数的测定方法

大肠菌群数的测定方法宝子,今天咱们来唠唠大肠菌群数咋测定的哈。

最常用的一种方法就是多管发酵法。

这就像是一场微生物的小比赛呢。

咱先得把样品采集好,比如说水啊或者食品之类的。

然后把样品放到乳糖胆盐发酵管里头。

这就像是给大肠菌群准备了一个特别的小屋子,要是有大肠菌群在,它们就会在这个小屋子里开始“搞事情”,发酵乳糖产酸产气。

你就可以看到小管子里有气泡啦,这时候就像是它们在跟你说“嗨,我们在这儿呢”。

要是在乳糖胆盐发酵管里有反应了,咱就得把这些有反应的培养液再接种到伊红美蓝琼脂平板上。

这个平板可神奇啦,大肠菌群在上面会长出有自己特色的菌落呢。

就像它们在这个新的舞台上展示自己独特的模样。

这些菌落可能是紫黑色的,还有金属光泽,就像一群穿着闪亮衣服的小演员。

通过数这些有特色的菌落,就能大概知道大肠菌群的数量啦。

还有一种方法叫滤膜法。

这个就像是用一个小筛子来筛出大肠菌群。

先把样品通过滤膜过滤,大肠菌群就被留在滤膜上啦。

然后把滤膜放到特定的培养基上培养。

那些大肠菌群就会在滤膜上慢慢长大,形成小点点一样的菌落。

咱们再数这些小点点,就能知道大肠菌群的数量咯。

不过呢,在做这些测定的时候呀,一定要注意卫生和操作规范哦。

就像咱们做饭得按照菜谱来一样,测定大肠菌群数也得按照严格的步骤。

不然的话,就可能得出错误的结果呢。

比如说,要是不小心把别的细菌也带进去了,那就像是一场混乱的聚会,根本分不清谁是谁啦。

总之呢,测定大肠菌群数虽然有点小复杂,但是只要按照方法来,就能够准确地知道样品里大肠菌群的情况啦。

这对保障咱们的健康可重要了呢,不管是喝的水还是吃的食物,知道大肠菌群的数量就能知道它们是不是安全的,就像给咱们的健康上了一道保险。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

总大肠菌群
在饮用水的微生物安全监测中,普遍采用正常的肠道细菌作为粪便污染指标,而不是直接测定肠道致病菌。

总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的,在37℃生长时能使乳糖发酵,在24h内产酸产气的革氏阴性无芽胞杆菌。

总大肠菌群系指每升水样中所含有的总大肠菌群的数目。

总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。

一多管发酵法
1应用范围
1.1本法适用于饮用水、水源水,特别是浑浊度含量高的水质中总大肠菌群的测定。

1.2水样中总大肠菌群数的含量,表明水被粪便污染程度,而且间接地表明有肠道致病菌存在。

2原理
根据总大肠菌群应具有的生物特性,
产气,能在选择性培养基上产生典型菌落。

3仪器
3.1显微镜
3.2革兰氏染色用有关器材。

3.3高压蒸汽灭菌器。

3.4干热灭菌箱。

3.5恒温箱。

3.6冰箱。

3.7放大镜。

3.8试管、平皿(直径
4培养基
4.1乳糖蛋白胨培养液
4.1.1成分
蛋白胨10g
牛肉膏3g
乳糖5g
氯化钠5g
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液
蒸馏水1000ml
4.1.2制法
将蛋白胨、牛肉膏、
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液,
灭菌20min,贮存于冷暗处备用。

4.2三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液
按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制。

4.3品红亚硫酸钠培养基(供多管发酵法用)4.3.1成分
蛋白胨10g
乳糖10g
磷酸氢二钾3.5g
琼脂15~30g
蒸馏水1000ml
无水亚硫酸钠5g左右
5%碱性品红乙醇溶液
4.3.2储备培养基的制备如革兰氏阴性无芽胞杆菌,
9cm)、刻度吸管等,置于干热灭菌箱中
1ml
1000ml蒸馏水中加热溶解,
充分混匀,分装于装有倒管的试管中,在37℃24h内能发酵乳糖并产酸160℃灭菌2h
调整pH为7.2~7.4,再加入1ml置高压蒸汽灭菌器中,以115℃乳糖及氯化钠置于
20ml
先将琼脂加至900蒸馏水中,加热溶解,然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨,混匀使之溶解,再以蒸馏水补足至1000ml,调整PH值为7.2~7.4,趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加入乳糖,混匀后定量分装于烧瓶内,置高压蒸汽灭菌中以115℃灭菌20min,贮存于冷暗处备用。

4.3.3平皿培养基的配制
将上法制备的储备培养基加热融化,根据烧瓶内培养基的容量,用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液,置于灭菌空试管中。

再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内,加灭菌水少许使其溶解后,置于沸水浴中煮沸10min以灭菌。

用灭菌吸管吸取已灭菌的严硫酸钠溶液,滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色褪成淡粉红色为止。

将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加入已融化的储备培养基内,并充分混匀(防止产生气泡),立即将此种培养基适量倾入于已灭菌的空平皿内,待其冷却凝固后置冰箱内备用。

此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周,如培养基已由淡红色变成深红色,则不能再用。

4.4伊红美蓝培养基
4.4.1成分
蛋白胨10g
乳糖10g
磷酸氢二钾2g
琼脂20~30g
蒸馏水1000ml
2%伊红水溶液20ml
0.5 %美蓝水溶液13ml
4.4.2储备培养基的制备
先将琼脂加至900ml蒸馏水,加热溶解,然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨,混匀使之溶解,再以蒸馏水补足至1000ml,调整PH为7.2~7.4。

趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加入乳糖,混匀后定量分装于烧瓶内,置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min,贮存于冷暗处备用。

4.4.3平皿培养基的制备
将上法制备的储备培养基加热融化,根据烧瓶内培养基的容量,用灭菌吸管按比例吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液及一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液,加入已融化的储备琼脂内,充分混匀(防止产生气泡)立即将此种培养基适量倾入于已灭菌和空平皿内,待其冷却凝固后置冰箱内备用。

5步骤
5.1生活饮用水
5.1.1初发酵试验:在2个各装有已灭菌50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液(
瓶中(内有倒管)内,以无菌操作各加入水样100ml;在10支装有已灭菌
胨培养液的试管中(内有倒管),以无菌操作各加入水样10ml,混匀后置于
24h。

5.1.2平板分离:经培养24h后,将产酸产气及只产酸的发酵管,分别接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基上,再置于37℃恒温箱内培养
18~24h,挑选符合下列特征的菌落,取菌落的一小部分进行涂片、革兰氏试验、镜检。

品红亚硫酸钠培养基上的菌落:
紫红色,具有金属光泽的菌落。

深红色,不带或略带金属光泽的菌落。

淡红色,中心色较深的菌落。

伊红美蓝培养基上的菌落:
深紫黑色,具有金属光泽的菌落。

紫黑色,不带或略带金属光泽的菌落。

淡紫红色,中心色较深的菌落。


4.2)的大试管或烧5ml三倍浓缩乳糖蛋白37℃恒温箱内培养
5.1.3复发酵试验:上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽胞杆菌,则挑取该菌落的另一部分再接种于普通浓度乳糖蛋白胨培养液中(内有倒管),每管可接种分离自
同一初发酵管的最典型的菌落1~3个,然后置于37℃恒温箱中培养24h,有产酸产气者(不论倒管内气体多少皆作为产气论),即证实有总大肠菌群存在。

5.1.4根据证实有总大肠菌群存在的阳性管(瓶)数查表1,报告每升水样中的总大肠菌群数。

表1总大肠菌群数检数表
(接种水样总量300ml—100ml 2份,10ml 10份)
100ml水量的阳性012
管(瓶)数
10ml水量的阳性管数
每升水样中每升水样中每升水样中
总大肠菌群数总大肠菌群数总大肠菌群数0<3411
1
23818
371327
4111838
5142452
6183070
223692
7
82743120
93151161
103660230
4069>230
5.2水源水
5.2.1将水样作1:10稀释。

5.2.2于各装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液(4.2)的5个试管中(内有倒管),各加入水样;于各装有10ml乳糖蛋白胨培养液(4.1)的5个试管中(内有倒管),各加入1ml水样,于各装有10ml乳糖蛋白胨培养液(4.1)的5个试管中(内有倒管),各加入1ml1:10稀释水样。

共计15管,三个稀释度。

以后的检验步骤同上述生活饮用水的检验方法。

5.2.3根据证实有总大肠菌群存在的阳性管数查表2报告每升水样中的总大肠菌群数。

表2总大肠菌群检数表
(接种水样总量55.5ml,其中5份10ml水样,5份1ml水样,5份0.1ml 水样)10ml。

相关文档
最新文档