skov3细胞培养技巧
卵巢癌细胞株SKOV3在人脐带间充质干细胞培养液中的增殖、凋亡和迁移情况观察
Байду номын сангаас
培卵养巢液癌中细的胞增株殖ＳＫ、Ｏ凋Ｖ亡３ 在和人迁脐移带情间况充观质察干细胞
袁晓凤１，袁修凯２，周芳１ （１ 中国人民解放军第９７ 医院，江苏徐州２２１０００；２ 睢宁中医院）
摘要：目的 探讨卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３ 细胞在人脐带间充质干细胞（ｈＵＣＭＳＣｓ）培养液中的增殖、凋亡和迁
的增殖、凋亡和迁移情况。现报告如下。
化后收集细胞备用。将ｈＵＣＭＳＣｓ 细胞以５ × １０５
１ 材料与方法
个细胞密度，接种于培养瓶中，待细胞融合度达到
材料低糖 和高糖 购自 １． １
ＤＭＥＭ
ＤＭＥＭ
Ｇｉｂｃｏ
８０％ 时，更换无血清的ＬＤＭＥＭ 培养液，２４ ｈ 后提
公司；血清购自Ｅｘｃｅｌｌ 公司；小鼠抗大鼠ＧＡＰＤＨ 单 克隆抗体（ｍＡｂ）、小鼠抗大鼠Ｂｃｌ２ ｍＡｂ 和小鼠抗
察２ 组和对照组。观察１、２ 组分别用１０％ 、２０％ 的 ｈＵＣＭＳＣ 培养，对照组用正常培养基培养。 １． ４ 各组ＳＫＯＶ３ 细胞增殖情况观察 ①ＭＴＴ 法。 取对数期生长的ＳＫＯＶ３ 接种于９６ 孔板，每孔２ ０００ 个细胞，然后每孔加入２００ μＬ ＨＤＭＥＭ 营养液，
通信作者：周芳（ ： ） Ｅｍａｉｌ ｚｈｏｕｆａｎｇ９７＠ １６３． ｃｏｍ
溶液，避光振荡 ，酶标仪检测 用 法。用 、 的 μＬ ＤＭＳＯ
１５ ｍｉｎ
４９０
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ
１０％ ２０％ ｈＵＣＭＳＣｓ
ｎｍ 处的吸光度值。每个观察组设４ 个复孔。以未 培养液预处理ＳＫＯＶ３ 细胞２４ ｈ，分别计为观察１
经ｈＵＣＭＳＣｓ 培养液处理的ＳＫＯＶ３ 细胞作为对照 组、观察２ 组。以未经ｈＵＣＭＳＣｓ 培养液处理的ＳＫ
skov3细胞培养技巧
skov3细胞培养技巧介绍Skov3细胞是一种人类癌细胞系，常用于研究肿瘤生物学、治疗和预防。
为了能够有效地培养Skov3细胞，需要掌握一些基本的培养技巧。
本文将详细介绍Skov3细胞培养的方法和技巧。
培养基的准备选择合适的培养基Skov3细胞通常可以在DMEM（Dulbecco’s modified Eagle’s medium）培养基中较好地生长。
DMEM培养基含有必需的氨基酸、维生素、糖和盐，在细胞培养中具有广泛的适应性。
培养基的补充物为了促进Skov3细胞的生长和增殖，可以向DMEM培养基中添加适当的补充物，如胰岛素、转铁蛋白、胱氨酸和谷胱甘肽。
这些补充物能够提供细胞所需的营养物质，有助于维持细胞的正常生长。
培养皿的处理无菌操作的重要性在进行Skov3细胞培养之前，必须非常重视无菌操作。
所有使用的工具、培养皿和培养基都必须经过严格的消毒和无菌处理，以免细菌或真菌的污染对细胞生长产生不良影响。
培养皿的涂层处理Skov3细胞通常需要在有涂层的培养皿上进行培养，以提供细胞生长所需的支持。
常用的涂层物质包括凝血酶、明胶和胶原蛋白。
涂层物质应事先加热处理，并在培养皿内均匀涂敷，以确保细胞能够附着并正常生长。
细胞传代的技巧细胞的定期观察在培养Skov3细胞的过程中，需要定期观察细胞的形态和生长状态。
通过观察细胞的形态变化和增殖情况，可以及时发现问题并采取相应的措施，例如改变培养条件或进行细胞的传代。
细胞的传代比例Skov3细胞一般在80-90%的密度下进行传代。
过高的细胞密度可能会导致细胞死亡和凋亡，而过低的细胞密度则会影响细胞的增殖和形态。
因此，在细胞达到适当密度时进行传代，可以有效地维持细胞的正常生长。
细胞的解离在进行细胞传代之前，需要将细胞从培养皿上解离下来。
常用的细胞解离方法包括使用胰酶或胰酶和EDTA的混合物。
解离后的细胞应该用培养基进行稀释，并按照适当的密度重新接种到新的培养皿中。
细胞培养的注意事项1.细胞培养室应保持干净整洁，定期进行消毒和清洁工作。
雌二醇其受体抑制剂对人卵巢癌SKOV3细胞体外生长影响
雌二醇及其受体抑制剂对人卵巢癌SKOV3细胞体外生长的影响【摘要】目的：观察不同浓度雌二醇及其受体抑制剂ici 182 780对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌skov3细胞体外增殖及凋亡的影响，探讨雌激素及其受体抑制剂在卵巢癌生长中作用及临床意义。
方法：体外培养skov3细胞，加入不同浓度e2及（e2+ici 182 780）：（1）计数1-6天的细胞数量，并描绘细胞增殖曲线；（2）mtt法检测细胞增殖抑制率；（3）流式细胞术测定skov3细胞凋亡率。
观察不同浓度雌二醇及其受体抑制剂ici 182 780对skov3细胞系体外增殖的作用。
结果：（1）细胞培养4天时，与对照组（单纯培养）相比，高浓度e2组（10-7mol/l）的skov3细胞增殖明显受抑制，低浓度e2组（10-11mol/l）细胞则增殖较明显（p0.05），低浓度e2组（10-13-10-11 mol/l）则具有促细胞增殖作用（p0.05）；当（e2+ ici 182 780）浓度为10-9 mol/l时，表现为对skov3细胞增殖的抑制作用，24h及48h抑制率分别达11.7%、7.9%，明显高于同浓度e2组（p0.05）；加入相同浓度ici 182 780后，24h、48h 的凋亡率（11.79%～14.79%，10.90%～13.15%）均明显高于对照组（p2. 药物雌二醇（e2）及其受体抑制剂氟维司群（ici 182 780）：美国sigma公司，分子量分别为272.39、606.77，无水乙醇配成0.001 mol/l原液，e2在4℃保存，ici 182 780常温保存备用。
（三）实验用细胞系卵巢癌细胞株skov3来自人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞，购于南京凯基公司，大连医科大学附属第一医院中心实验室传代培养。
（四）实验用液的制备：pbs液：（0.1m，ph7.2-7.4）：pbs粉置于大烧杯，加三蒸水，玻璃棒搅拌均匀，定容至1000ml。
RRM2基因过表达卵巢癌细胞株SKOV3的构建及对顺铂敏感性观察
RRM2基因过表达卵巢癌细胞株SKOV3的构建及对顺铂敏感性观察王中山;张梦;张冬梅;杨新慧【摘要】目的构建核糖核苷酸还原酶亚基M2(RRM2)基因过表达的卵巢癌细胞株SKOV3,并观察RRM2基因过表达的SKOV3细胞对顺铂的敏感性.方法提取SKOV3细胞总RNA,反转录得到cDNA,以其为模版进行PCR反应,获得RRM2基因.通过酶切(XhoⅠ、BamHⅠ)连接的方法,将RRM2基因插入慢病毒表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1中,得到重组质粒pLVX-IRES-RRM2.利用脂质体将重组质粒转染293FT细胞,包埋病毒.将SKOV3细胞分为实验组和对照组,实验组转染pLVX-IRES-RRM2慢病毒,96 h后测算慢病毒感染效率.对照组不进行转染.采用Western blotting法检测两组细胞中的RRM2蛋白;流式细胞仪检测两组凋亡细胞与死亡细胞,反映细胞对顺铂的敏感性.结果重组质粒pLVX-IRES-RRM2经限制性内切酶XhoⅠ和BamHⅠ双酶切验证,各片段大小符合预期,测序结果显示RRM2基因序列正确.实验组、对照组细胞中RRM2 mRNA相对表达量分别为0.280±0.055、0.102±0.022,RRM2蛋白相对表达量分别为0.582±0.049、0.228±0.032,实验组高于对照组,说明RRM2基因过表达的SKOV3细胞构建成功.实验组、对照组凋亡细胞比例分别为0.39%±0.08%、9.60%±1.20%,死亡细胞比例分别为26.65%±2.20%、44.96%±2.80%,实验组凋亡细胞比例和死亡细胞比例均低于对照组(P均<0.01).结论成功构建了RRM2基因过表达的SKOV3细胞,RRM2基因过表达的SKOV3细胞对顺铂的敏感性降低.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)039【总页数】4页(P30-33)【关键词】卵巢癌;卵巢癌细胞株;核糖核苷酸还原酶家族成员2;顺铂;药物耐受性;药物敏感性【作者】王中山;张梦;张冬梅;杨新慧【作者单位】徐州医科大学,江苏徐州221004;徐州市中心医院;徐州市中心医院;徐州市中心医院【正文语种】中文【中图分类】R737.31卵巢癌是常见的妇科肿瘤，病死率位居妇科恶性肿瘤之首[1]，多数(85%)为上皮性卵巢癌(EOC)[2]。
紫杉醇耐药细胞株SKOV3TS的建立及多药耐药性比较
紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TS 的建立及多药耐药性比较尹茳平1，2，王琪2，张玮2，黎丹戎2，李力"［摘 要］ 目的 通过两种不同的方法构建紫杉醇(TAX )耐药卵巢癌细胞株SKOV3/TS ,并研究其耐药性和耐药机制。
方法 分别采用二维培养系统和浓度梯度递增法建立SKOV3/TS-1耐药细胞株，采用三维培养系统建立SKOV3/TS-2耐药细胞株。
采用 MTT 法检测SKOV3/TS-1和SKOV3/TS-2细胞对 TAX 、奥沙利铂(L-OHP )、吉西他滨(GCB )、米托蔥醌(MIT )、环磷酰胺(CTX )的耐药性，并计算半数抑制浓度(IC 50 ) o 另外，采用实时荧光定量PCR 检测多药耐药相关基因-多药耐药基因1( MDR1 )、B -微管蛋白皿型(TUBB3 )基因表达变化。
结果 SKOV3 细月包、SKOV3/TS-1 细月包、SKOV3/TS-2 细 胞 对 TAX 的 IC 50 分别为(0. 240 土 0. 078 ) ^g/ml 、(4. 285 土0.538) ^g/ml 、(3.540 土 0.356) ^g/ml ( P <0. 05) , SKOV3/TS-1 细胞和 SKOV3/TS-2 细胞的 RI 分别为17. 85和14. 75 o 同时，SKOV3/TS-1细胞和SKOV3/TS-2细胞对 CTX 、L-OHP 、GCB 、MIT 均有一定的耐药性，且SKOV3/TS-2细胞的耐药性高于SKOV3/TS-1细胞(P <0.05)。
此夕卜,SKOV3/TS-1细胞和SKOV3/TS-2细胞 TUBB3 mRNA 和 MDR1 mRNA 表达量高于SKOV3细胞(P <0. 05)o 结论 三维培养系统构建的SKOV3/TS-2细胞模型较二维培养的SKOV3/TS-1细胞，形态结构和生物学特性都发生了较大差异，更易对多种化疗药物产生交叉耐药性o［关键词］卵巢癌细胞SKOV3 ；三维细胞培养系统；紫杉醇；耐药性；多药耐药Establishment of Taxol-resistant cell line SKOV3/TS and comparison of multidrugresistance YIN Wei-ping 1，2 ,WANG Qi 2, ZHANG Wei 2,LI Dan-rong 2,LI Li 2** (1. Department of Gynecology, Affiliated Hospital of Guilin Medical College , Guilin 541001, China ； 2. Department of Obstetrics and Gynecology , Affi liated Tumor Hospital of Guangxi Medical University and the Key Laboratory of Regional High Incidence Tumor EarlyPrevention Research of Ministry of Education , Nanning 530021, China )收稿日期：2020 -07 -09作者单位：1.桂林医学院附属医院妇科，广西桂林541001；2. 广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科暨区域性高发肿瘤早期防治研 究教育部重点实验室，广西南宁530021基金项目：广西科学研究与技术开发计划课题（桂科攻14124004）* 通信作者DOI ：10. 14053/j. cnki. ppcr. 202011008［Abstract ］ Objective To establish Taxol ( TAX) -resistant ovarian cancer cell line SKOV3/TS by two me thods and to study its drug resistance and the mechanism of it. Methods SKOV3 / TS-1 drug-resistant cell line was es tablished by two-dimensional culture system and concentration gradient increasing method , and SKOV3/TS-2 cell linewas established by three-dimensional culture system. The drug resistance of these two cell models to TAX , Oxaliplatin(L-OHP ) , Gemcitabine ( GCB ) ,Mitoxantrone ( MIT) and Cyclophosphamide ( CTX) was detected by MTT assay , and IC50 was calculated. In addition , real-time quantitative PCR was used to detect the expression of multidrug resist ance-related genes including multidrug resistance 1 ( MDR1 ) and p-tubulin-III ( TUBB3 ) mRNA. Results IC 50 of SKOV3 cell , SKOV3/TS-1 cells , and SKOV3/TS-2 cells to TAX was respectively (0. 240 ±0. 078) ^g/ml, (4. 285 土 0. 538 ) ^g/ml ,(3. 540 土 0. 356) ^g/ml ( P <0.05), while resistance index ( RI) of SKOV3/TS-1 cells and SKOV3/ TS-2 cells was 17. 85 and 14. 75. SKOV3/TS-1 cells and SKOV3/TS-2 cells had some resistance to CTX, L-OHP , GCB and MIT , and the resistance of SKOV3/TS-2 cells was higher than that of SKOV3/TS-1 cells ( P <0.05). Be sides ,the expressions of TUBB3 mRNA and MDR1 mRNA in SKOV3/TS-1 cells and SKOV3/TS-2 cells were both higher than those in SKOV3 cells ( P <0.05). Conclusion SKOV3/TS-2 cell model constructed by three-dimensionalcell culture system is different from SKOV3 / TS-1 by two-dimensional culture system in morphology and biological characteristics ,and it is more likely to develop cross-resistance to multiple drugs.Key words : Ovarian cancer cell SKOV3 ； Three-dimensional cell culture system ； Taxol ； Drug resistance ； Multidrugresistance0 引言卵巢癌是我国致死率最高的妇科恶性肿瘤,初始治疗以手术联合化疗为主，其中紫杉醇联合 铂类是最常用的一线化疗方案之一［1］。
没食子酸对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用及机制
增加顺铂 对卵巢癌 Ｓ Ｏ ３细胞 的抑制作用 ， 与丁酸钠联合用药仅为单纯相加 作用。随着没食子 酸剂量增加 ， ＫＶ 而 凋
亡细胞数 目增 多。结论 没食子 酸可抑制 Ｓ Ｏ ３细胞 生长 ， Ｋ 其机制为诱导细胞凋亡 ； 没食子 酸与顺铂联用有 协同
作用 。
关键 词 ： 食 子 酸 ； 没 丁酸 钠 ； 铂 ； 巢 癌 细 胞 ； 同作 用 顺 卵 协
观察 了没食 子 酸对 卵巢癌 细胞 的抑 制作用 。现 报告
如下 。
１ 材料 与方 法
０５ ．％胰酶酶解后种植于 ９ Ｌ ６孑 板中， 每孔种植 １ 万 个细胞 ， 分为观察组和对照组 ， 每组 ３个复孑 。２ Ｌ ４ｈ 细胞 贴壁后 观察 组加 入 新 配 制 的没 食 子 酸 溶 液 ， 给 药质 量浓 度 分别 为 ２ ４ ６ ８ １ 、２ ｇｍ ， 细胞 、 、 、 、６ ３ ／ ｌ置 培养箱孵 育 ４ ， ８ｈ 换液后加入 Ｍ Ｔ 终质量浓度 为 Ｔ（
山东医药 ２ １ 年第 ５ ００ ０卷第 １ 期 ５
・
基础 研 究 ・
没食 子 酸对 卵 巢 癌 Ｓ Ｏ ３细 胞 的 ＫＶ 生 长抑 制 作 用 及 机 制
李 文 ， 华新 ， 华慧 ， 侯 吴 秦春 明
（ 广西医科大学药学院， 南宁５０２ ） ３０ １
摘要 ： 目的 探讨没食子 酸对卵巢癌细胞株 Ｓ Ｏ ３的生长抑制作用及 机制 ， ＫＶ 为其 临床应用提供 依据 。方法 采用 ＭＴ 法测定没食子酸单独作用及没食 子酸与顺铂 、 ｒ 丁酸钠联合用药 后卵巢癌 细胞 株 Ｓ Ｏ ３的生 长抑 制率。 ＫＶ
Ａ ｎ￣ｎＶ ＦＴ ｎｅ ．ＩＣ凋 亡试剂盒 于荧光倒置显 微镜 下观察没 食子酸诱 导 Ｓ Ｏ － Ｋ Ｖ３细胞凋 亡情况 。结果 没食子 酸对 ＳＯ － Ｋ Ｖ３细胞株生长有 明显抑制作用 ， 且呈 一定 的浓度依赖性 ； ∞为 ２ ． ｇ ｍ 。没食子 酸与顺铂合 用可 以明显 Ｉ Ｃ ３ ４ｗ ／ ｌ
p53对核仁应激诱导卵巢癌细胞凋亡的影响
p53对核仁应激诱导卵巢癌细胞凋亡的影响*陈松斌1，3， 徐可欣1， 潘炫豪3， 胡锴克3， 高维浩3， 李松岩1， 徐冶1，2△（1吉林医药学院肿瘤靶向治疗与转化医学实验室，吉林 吉林 132013；2吉林医药学院生殖功能损伤中药干预技术重点研究室，吉林 吉林 132013；3吉林医药学院临床医学院，吉林 吉林 132013）［摘要］ 目的：探究p53对核仁应激诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。
方法：体外培养SKOV3细胞，根据实验药物不同分成4个实验组：control 组、BMH -21（核仁应激诱导剂）组、pifithrin -α（PFT -α；p53抑制剂）+BMH -21组和RG7112（抑制p53降解并激活p53通路）+BMH -21组。
MTT 法检测细胞活力；免疫荧光染色检测细胞中p53蛋白定位和表达水平，以及BMH -21诱导的核仁应激的发生；Western blot 法检测蛋白表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡率。
结果：MTT 结果显示，BMH -21组细胞活力比control 组显著下降（P <0.01），PFT -α+BMH -21组细胞活力与BMH -21组相比无显著变化（P >0.05），而RG7112+BMH -21组比BMH -21组显著下降（P <0.01）；荧光显微镜观察发现，BMH -21组p53蛋白表达水平比control 组显著升高，PFT -α+BMH -21组p53蛋白表达水平比BMH -21组显著降低，而RG7112+BMH -21组比BMH -21组显著升高，且大部分入核堆积；Western blot 结果显示，BMH -21组p53蛋白及线粒体途径凋亡相关蛋白表达水平比control 组显著升高（P <0.01），PFT -α+BMH -21组p53蛋白表及线粒体途径凋亡相关蛋白表达水平比BMH -21组显著降低（P <0.05），而RG7112+BMH -21组比BMH -21组显著升高（P <0.01）；流式细胞术结果显示，BMH -21组细胞凋亡率比control 组显著升高（P <0.01），PFT -α+BMH -21组细胞凋亡率与BMH -21组相比无显著变化（P >0.05），而RG7112+BMH -21组比BMH -21组显著升高（P <0.01）。
卵巢癌SKOV3细胞系培养上清液处理巨噬细胞不同时间后对巨噬细胞分化的影响
卵巢癌SKOV3细胞系培养上清液处理巨噬细胞不同时间后对巨噬细胞分化的影响宋玉霞;赵涛;张玮璨;郭清;王宏卫;孟桐羽【摘要】目的探讨卵巢癌SKOV3细胞系培养上清液处理巨噬细胞不同时间后,巨噬细胞分化亚型的改变.方法 Ficoll密度梯度法分离健康成人外周血单个核细胞,GM-CSF诱导为巨噬细胞(M0)后,用对数生长期的SKOV3细胞培养上清液处理为实验组,用1640培养基处理为对照组,分别于培养第7天和第14天光学显微镜下观察巨噬细胞形态变化;流式细胞术检测实验组和对照组在不同时间后巨噬细胞表面细胞因子(CD64、CD163)表达情况.结果培养第7天时,实验组巨噬细胞形态改变明显,细胞突起增加,细胞变细长,对照组细胞形态无明显变化,实验组CD64-M1型巨噬细胞所占比例高于对照组,CD163-M2型巨噬细胞所占比例低于对照组(P＜0.05);培养第14天时,实验组巨噬细胞形态逐渐恢复,对照组细胞形态仍无明显变化,实验组CD64-M1型巨噬细胞所占比例低于对照组,CD163-M2型巨噬细胞所占比例高于对照组(P＜0.05).实验组CD64-M1型巨噬细胞在第7天时M1/M0水平高于第14天,CD163-M2型巨噬细胞在第7天时M2/M0低于在第14天,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 SKOV3细胞培养上清液可改变巨噬细胞形态,激活巨噬细胞免疫反应,随着时间的推移,细胞形态恢复,发生免疫抑制;同时,也可促进巨噬细胞分化,随着时间的推移,亚型也有不同,主要由CD64-M1型巨噬细胞向CD163-M2型巨噬细胞转变.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2016(038)010【总页数】5页(P1498-1501,1504)【关键词】卵巢肿瘤;SKOV3;巨噬细胞;细胞分化【作者】宋玉霞;赵涛;张玮璨;郭清;王宏卫;孟桐羽【作者单位】050011 河北省石家庄市第一医院妇产科;050011 河北省石家庄市第一医院妇产科;河北医科大学;050011 河北省石家庄市第一医院妇产科;050011 河北省石家庄市第一医院妇产科;050011 河北省石家庄市第一医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R737.31上皮性卵巢癌(简称卵巢癌)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤。
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skov3细胞培养技巧
Skov3细胞是一种人类卵巢癌细胞系，具有高度的恶性程度。
在研究卵巢癌的发病机制和治疗方案中，Skov3细胞被广泛应用。
本文将介绍Skov3细胞的培养技巧，包括培养基配制、传代方法、冻存和解冻技巧等方面。
一、培养基配制
1.1 基础培养基
Skov3细胞最常用的培养基为DMEM/F12（1:1）+10% FBS（fetal bovine serum），其中DMEM/F12为无血清培养基，适合于无血清培养实验。
FBS含有丰富的生长因子和营养成分，可以促进Skov3细胞的生长和增殖。
1.2 基础培养基添加物
除了FBS外，还可以向基础培养基中添加其他生长因子和营养成分，如EGF（表皮生长因子）、bFGF（碱性成纤维细胞生长因子）、L-谷氨酰胺、钠丙酸等。
这些添加物可以提高Skov3细胞的增殖速度和细胞活性。
1.3 基础培养基调节pH值
Skov3细胞的最适生长pH值为7.4，因此在培养过程中需要注意调节培养基的pH值。
如果pH值偏高或偏低，会影响细胞的生长和增殖。
二、传代方法
2.1 细胞收获
当Skov3细胞生长到80%~90%的密度时，可以进行传代。
首先将培养基倒掉，用PBS（磷酸盐缓冲液）洗涤细胞2~3次，使细胞表面没有残留培养基。
2.2 细胞消化
接下来使用0.25% Trypsin/EDTA溶液将细胞消化下来。
加入足够的溶液覆盖细胞表面，放置5~10分钟左右，观察细胞是否开始分离。
如果分离不完全，可以轻轻拍打培养瓶或离心加速分离。
2.3 细胞计数
将消化后的细胞转移到新的15ml离心管中，并用PBS洗涤1~2次。
使用显微镜和计数板对细胞数进行计数，并计算出相应的传代倍数。
2.4 细胞接种
将细胞重新接种到新的培养瓶中，加入适量的新鲜培养基。
注意不要让细胞密度过高，否则会影响细胞的生长和增殖。
三、冻存技巧
3.1 冻存液配制
Skov3细胞冻存液配制方法为DMEM/F12+10% DMSO（二甲基亚砜）+10% FBS。
DMSO可以保护细胞膜完整性，防止细胞在低温下受到冷冻伤害。
FBS可以提供足够的营养成分和生长因子，保证细胞在冷冻过程中仍然能够生存。
3.2 细胞收获
将Skov3细胞用PBS洗涤1~2次，使细胞表面没有残留培养基。
使用0.25% Trypsin/EDTA溶液将细胞消化下来，并用PBS洗涤1~2次。
3.3 冷冻管装填
将洗涤后的Skov3细胞转移到新的离心管中，并加入足够的冻存液。
注意不要让细胞密度过高，否则会影响细胞的冷冻和解冻。
3.4 冷冻过程
将装有Skov3细胞和冻存液的离心管放入-80℃的冰箱中，等待至少2小时以上。
之后可以将离心管转移到液氮罐中进行长期保存。
四、解冻技巧
4.1 解冻液配制
Skov3细胞解冻液配制方法为DMEM/F12+10% FBS。
FBS可以提供足够的营养成分和生长因子，保证细胞在解冻过程中能够快速恢复生长状态。
4.2 解冻过程
将装有Skov3细胞的离心管从液氮罐中取出，迅速放入37℃的水浴中解冻。
当离心管中没有任何结晶时，立即取出离心管，并加入足够的解冻液。
4.3 细胞接种
将解冻后的Skov3细胞转移到新的培养瓶中，并加入适量的新鲜培养基。
注意不要让细胞密度过高，否则会影响细胞的生长和增殖。
总结：
通过本文介绍，我们了解到了Skov3细胞培养的基本技巧，包括培养
基配制、传代方法、冻存和解冻技巧等方面。
这些技巧不仅适用于Skov3细胞，也可以应用于其他细胞系的培养和处理。
在进行实验前，我们必须了解细胞的特性和生长条件，并严格按照操作规程进行操作，以保证实验结果的准确性和可靠性。