灭菌与无菌操作
实验室如何灭菌，灭菌方法汇总！
实验室如何灭菌，灭菌方法汇总！实验室如何灭菌，灭菌方法汇总！食品论坛昨天消毒和灭菌是微生物实验技术中最基本的操作技术，因此从事药品生产、检验的人员均应了解消毒和灭菌的基本概念、两者的关系，各自的应用方法及其意义，操作时应严格执行相关的操作规程，一方面确保生产与检验工作的效果，另一方面也是对自身安全的保护。
消毒和灭菌的概念：1、消毒：指对病原微生物的繁殖体的致死作用，但不能杀死芽孢等全部微生物，因此消毒是不彻底的，不能代替灭菌。
凡用于消毒的化学药品称为消毒剂，因此人们也常称消毒剂为化学消毒剂。
2、灭菌：杀灭物体中所有活的微生物（含芽孢）的作用，灭菌是采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。
通常用物理方法来达到灭菌的目的。
二、消毒和灭菌的关系1、共性：杀灭微生物以控制其污染和防止传播。
2、区别：消毒灭菌方法目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。
1.干热灭菌法干热灭菌法是利用恒温干燥箱内120ºC~150ºC的高热，并保持90~120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。
主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。
用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。
酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一。
在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。
2.湿热灭菌法压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。
它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。
适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。
高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一般调整为1.0～1.1kg/cm2，维持20～30min即可达到灭菌效果。
清洁消毒灭菌技术及无菌技术操作
面特性进行针对性清洁。
清洁效果的评估与监测
清洁效果评估
通过观察、触摸、使用试纸等 方法，对清洁后的物体表面进 行检测，评估清洁效果是否达
到标准。
监测频率
医院应定期对清洁效果进行监 测，一般建议每月至少进行一 次监测。
监测范围
监测范围应覆盖医院的所有区 域，包括病房、手术室、治疗 室、卫生间等。
监测标准
物理消毒法
包括热力消毒、紫外线消毒、等离子 体消毒等。
化学消毒法
消毒技巧
根据不同物品和环境选择合适的消毒 方法，注意消毒剂的配制和使用浓度， 控制消毒时间和温度，保持环境通风 等。
利用化学药物杀灭病原微生物的方法， 如含氯消毒剂、酒精等。
消毒效果的评估与监测
消毒效果的评估
通过实验室检测和现场检测等方法，对消毒效果进行评估，确保消毒效果符合 标准要求。
实验室环境
微生物实验室
微生物实验室在进行微生物培养 和实验时，需要保持高度无菌的 环境，对实验器材和操作台面进
行严格的清洁和消毒。
分子生物学实验室
分子生物学实验室在进行基因测 序、PCR等实验时，需要保持无 菌环境，对实验器材和操作台面
进行严格的清洁和消毒。
化学实验室
化学实验室在进行化学实验时， 需要保持通风良好、防止化学品 残留的环境，对实验器材和操作
清洁消毒灭菌技术及 无菌技术操作
目 录
• 清洁技术 • 消毒技术 • 灭菌技术 • 无菌技术操作 • 清洁消毒灭菌及无菌技术操作的应用场景
01
清洁技术
清洁的定义与重要性
清洁的定义
清洁是指去除物体表面污垢、尘 埃、有机物残留的过程，以达到 清洁卫生的目的。
清洁的重要性
无菌操作的定义和注意事项
无菌操作的定义和注意事项1. 无菌操作的定义无菌操作是指在无菌条件下进行的一系列操作，以防止微生物的污染和传播。
它是实验室、医疗机构和生物制药等领域中必不可少的技术，用于保证实验结果的准确性和产品的质量安全。
无菌操作主要包括以下几个方面：1.1 空气质量控制空气中存在大量的微生物，因此在无菌操作中需要对空气进行控制。
通常采用层流洁净工作台、无尘车间或无菌室来提供洁净环境。
这些设备能够过滤空气中的微生物，并保持洁净区域内的正压，防止外界空气进入。
1.2 消毒与灭菌在进行无菌操作之前，需要对实验器具、工作表面和人员手部进行消毒或灭菌处理。
常用的消毒方法包括酒精擦拭、紫外线照射和高温蒸汽灭菌等。
消毒处理能够有效地杀灭细菌、真菌和病毒等微生物。
1.3 无菌操作技术无菌操作技术包括接种、传递和分离微生物等操作。
在进行这些操作时，需要采取一系列的预防措施，以防止微生物的污染。
使用无菌培养皿和试管、穿戴无菌手套、避免开启培养皿或试管的口部接触空气等。
2. 注意事项在进行无菌操作时，需要注意以下几个方面：2.1 个人卫生在进入洁净区域之前，必须进行充分的个人卫生措施。
这包括洗手、穿戴干净的工作服和佩戴无菌手套等。
还应注意避免打喷嚏、咳嗽或触摸脸部等可能导致微生物传播的行为。
2.2 工作区域清洁工作区域应保持干净整洁，并定期进行清洁和消毒处理。
工作表面应经常擦拭，并使用消毒剂进行处理。
还要定期更换工作台面上的纸巾或吸水垫，以避免积累过多的细菌。
2.3 器具消毒在使用实验器具之前，必须进行消毒处理。
常用的方法包括高温蒸汽灭菌、紫外线照射和化学消毒等。
消毒处理后，要确保器具表面干燥，并在无菌环境下存放，以防止再次受到污染。
2.4 避免交叉污染在进行无菌操作时，要避免不同微生物之间的交叉污染。
这可以通过合理安排实验步骤、使用专用工具和设备等方式来实现。
还要定期更换培养基和试剂的批号，以避免批次间的差异导致的结果误差。
2.5 注意操作技巧在进行无菌操作时，要注意正确的操作技巧。
微生物无菌的操作流程
微生物无菌的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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无菌室消毒灭菌操作规程
文件制修订记录1、目的：规范无菌室中检验工作的质量控制，确保检测结果准确可靠。
2、适用范围：无菌室3、操作规范：3.1 无菌室日常消毒灭菌无菌室无固定程序，但按一般操作应遵循如下规程：3.1.1 操作间和缓冲室使用打开紫外线灯，照射杀菌。
3.1.2 穿上工作服及无菌工作帽、鞋，然后用消毒液洗手。
3.1.3每次无菌操作前，均用用75％的酒精棉球擦拭操作台及可能污染的死角，每次实验前应开启净化系统使运转至少1h以上，开启净化台，用紫外灯照射30分钟以上。
3.1.4如有菌液洒在桌上或地上，立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再进行高压蒸汽灭菌。
工作衣帽等受到菌液污染时，立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。
3.1.5每次工作完毕，生物安全柜或超净台内用75%酒精擦拭台面后，开启紫外线灯照射30min。
对用过的污染物品进行高压灭菌。
然后逐一关闭实验室送风和通风设备。
3.2无菌室定期消毒灭菌3.2.1每两周用经过0.1%新洁尔灭或84消毒液（1:50）浸泡的纱布擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面等，两种消毒剂相互交替使用，然后用5%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后用紫外灯杀菌半小时。
3.2.2如果无菌室长期不用，再使用前需用乳酸熏蒸1～2小时消毒，最后紫外灯杀菌半小时。
3.3无菌室的消毒灭菌，可采取以下几种方法：3. 3.1用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸：一般每平方米需40％甲醛10毫升、高锰酸钾8毫升，进行熏蒸。
使用时，先密闭门窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高锰酸钾，人员随之离开无菌室，关紧房门，熏蒸20—30分钟即可。
3. 3.2 乳酸熏蒸：乳酸4～5ml加等量水，使用酒精灯加热蒸发，密闭2～3h。
消毒时最适相对湿度60～80%，低于60%效果下降。
3.3.3 0.1％升汞水消毒：用0.1％升汞水浸过的纱布或海绵进行擦拭，或用喷雾器喷雾灭菌，使箱内的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起来。
灭菌方法与无菌操作
4.影响湿热灭菌的因素
药物与介质的性质 饱和蒸气 湿饱和蒸气 过热蒸气 不饱和蒸气 蒸气的性质 湿热灭菌 灭菌时间 微生物的种类和数量
第三节 灭菌方法与无菌操作
二、物理灭菌法
（三）紫外线灭菌法
紫外线的穿透能力弱，但能穿透清洁的空气和纯净的水，因而广泛
用于空气灭菌与表面灭菌。
F值：是为了比较不同灭菌温度的灭菌效果而
设计的一个指标。在一定灭菌温度T，给定Z
值所产生的灭菌效果，与设计的参比温度To 给定Z值所产生的灭菌效果相同时所相当的时 间，单位为min。 F 0 值：是将被灭菌物品在灭菌过程中不同的 受热温度与时间折算到与热压121℃灭菌时热 效力相当的灭菌时间。
蒸气灭菌
六、无菌检查法（自学）
1.无菌检查法 2.中成药的微生物学检查与活螨检查
二、物理灭菌法
（五）辐射灭菌法
辐射灭菌法的原理 射线可直接破坏细菌
DNA，导致微生物死亡。 辐射灭菌法的特点 不升高灭菌产品的温度，穿透性强，适合于维生素、抗
生素、激素、医疗器械、高分子材料等的灭菌。 辐射灭菌法的缺点 设备费用高，有些药物灭菌后疗效可能降低，对液体药
剂的稳定性也有影响，同时还要注意安全防护问题。
灭菌指示剂
第三节 灭菌方法与无菌操作
四、化学灭菌法
理想的化学灭菌剂应具备下列条件：
①杀菌谱广；
②有效杀菌浓度低；
③作用速度快； ④性质稳定，不易受有机物、酸、碱及其他物理、化学因素的影响；
第三节 灭菌方法与无菌操作
四、化学灭菌法
理想的化学灭菌剂应具备下列条件：
⑤易溶于水，可在低温下使用； ⑥毒性低，对物品无腐蚀性，不易燃烧爆炸； ⑦无色，无味，无臭，灭菌后易于从被灭菌物品上除去，无残留； ⑧价格低廉，来源丰富，便于运输。
无菌实验室操作规程
无菌实验室操作规程引言概述：无菌实验室是进行微生物学研究和实验的重要场所，其操作规程对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将详细介绍无菌实验室操作规程的五个部分。
一、实验室准备1.1 清洁与消毒：无菌实验室应定期进行清洁和消毒，确保实验环境的无菌状态。
清洁应使用无菌纱布和无菌溶液，消毒则应选择适当的消毒剂，如酒精或过氧化氢。
1.2 实验器材准备：在进行实验前，必须确保实验器材的无菌状态。
实验器材应经过高温高压灭菌或使用无菌过滤器过滤，确保无菌操作的可靠性。
1.3 个人防护：进入无菌实验室前，实验人员应穿戴适当的个人防护装备，包括无菌手套、口罩和实验服。
这些装备能有效减少外界微生物的污染，保证实验的无菌性。
二、无菌技术操作2.1 消毒操作：在进行无菌实验前，必须进行适当的消毒操作。
这包括用酒精或火焰对实验台面、实验器材和手术刀进行消毒处理，以杀灭表面的微生物。
2.2 灭菌操作：在进行培养基、培养皿等实验材料的制备时，必须进行灭菌操作。
常见的灭菌方法包括高温高压灭菌、紫外线辐射灭菌等，确保实验材料的无菌性。
2.3 采样操作：在进行微生物采样时，必须采取严格的无菌操作。
这包括用无菌棉签或无菌吸管进行采样，避免外界微生物的污染。
三、培养基制备与使用3.1 培养基配制：在制备培养基时，必须按照一定比例将培养基粉末与无菌蒸馏水混合，并进行高温高压灭菌，以确保培养基的无菌性。
3.2 培养基使用：使用培养基时，必须采取无菌技术进行操作。
这包括使用无菌吸管或无菌移液器取出适量的培养基，并将其均匀涂布在培养皿上。
3.3 培养基保存：未使用完的培养基应保存在冰箱或低温冷藏室中，避免细菌的生长和污染。
同时，应定期检查培养基的无菌性，确保其质量。
四、细胞培养操作4.1 细胞传代：在进行细胞培养时，必须进行细胞传代操作。
这包括将细胞从旧培养皿中取出，用无菌吸管或无菌移液器转移到新的培养皿中，以保持细胞的健康和纯度。
4.2 细胞培养液更换：细胞培养液应定期更换，以保持培养液的无菌性和营养成分的充足。
消毒灭菌和无菌技术操作原则
1.2 化学消毒法
⑦碘伏：它是碘与表面活性剂的不定型 结合物，在溶液中逐渐释放，能较长时间杀 菌。适用于施术者手、病员皮肤和器具消毒。 浸泡物常用浓度3~10%，1~2小时。使用碘 伏时应注意颜色的变化，当颜色褪到无色或 微黄时，杀菌力显著下降。
1.1 物理消毒法
②压力蒸气灭菌法：是利用水和水蒸汽传 导的热能，在高压、高温、温度大、穿透力 强的作用下杀灭一切细菌和芽胞。适用于耐 湿、耐高温的物品。
压力蒸气灭菌法以3M指示胶带和嗜热脂 肪杆菌芽胞化学指示片和生物指示菌片为生 物指示剂。
1.1 物理消毒法
③辐射消毒：钴一60*射线，它干扰微生 物代谢，破坏细胞膜，引起酶系统紊乱。适 用于一次性包装物品，如口罩、帽子、纱布、 纱垫等。以短小杆菌芽胞E601(ATCC27142) 为生物指示剂。
1.1 物理消毒法
⑤微波消毒：利用热效应。适用于包装厚 或导热差的物品，如药品消毒，微波内外同 时加热，杀灭策生物速度较快。
手术室常用消毒灭菌术
1.2 化学消毒法 ①戊二醛：能与细菌体内酶的氨基起反应， 阻碍细菌的新陈代谢。常用于医疗器械消毒。 2%中性戊二醛消毒内窥镜需10~30分钟，肝 炎病毒需1小时，各种物品灭菌时间隔需10 小时。经戊醛溶液浸泡的物品取出时需用无 菌水冲净。
手术室常用消毒灭菌术
2. 室内消毒 ⑴通风：打开门窗，使空气流通。 ⑵福尔马林薰蒸法：详见上述。 ⑶乳酸薰蒸法：12ml/m3加热蒸气封闭30分钟。 ⑷紫外线消毒法：1W/m3消毒1小时 ⑸生物洁净法：主要采用空气净化技术，除掉 空气中的微粒尘埃。达到空气洁净的目的。初级过 滤用泡沫海绵，过滤率在50%以下，中级过滤用无 纺布，过滤率50~90%之间，高效过滤用超细下班 滤纸，过滤率99.95%左右。
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教研室：药剂教研室 教 师：罗国平 2012.09
第九章 灭菌法
▪ 灭菌法：（Sterilization）指杀死或除去所有微生物 的方法。微生物包括：细菌、真菌、病毒等。细菌 的芽胞具有较强的抗热能力，因此灭菌效果，常以 杀灭芽胞为准。
▪ 消毒（Disinfection）：是指用物理和化学方法将病 原微生物杀死。
▪ 特点：温度低，时间短，可靠，最常用。 ▪ 蒸气性质：饱和蒸气>湿饱和蒸气、过热蒸气、不饱
和蒸气
▪ （2）使用热压灭菌器注意事项 ▪ ①必须采用饱和蒸气，在灭菌前加入足量的水，
以防产生过热蒸气； ▪ ②必须将灭菌器内的空气排尽； ▪ ③灭菌时间必须从全部内容物均已达到规定温度
时开始计算；
▪ ④避免压力骤然下降或遇冷，防止容器炸裂；如： 放气时不能过快；放完气后先将锅门打开10cm， 使冷空气逐渐进入冷却，再逐渐开大；灭菌后喷 淋冷却水快速降温也会有危险；
▪ 此法适用于耐高温的玻璃制品、金属制品以及不 允许湿气穿透的油脂类和耐高温的粉末化学药品 等。粉针剂用无菌瓶的干燥就采用干热灭菌法。
▪ 缺点：穿透力弱，温度不易均匀，而且灭菌温度 较高，灭菌时间较长，不适于橡胶、塑料及大部 分药品。
▪ （二）湿热灭菌法——是在饱和蒸气或沸水或流通 蒸气中进行灭菌的方法。由于蒸气潜热大，穿透力 强，容易使蛋白质变性或凝固，所以灭菌效率比干 热灭菌法高。
▪ 防腐（Antisepsis）：是指低温或化学药品防止和抑 制微生物生长繁殖。
▪ 一、物理灭菌法 ▪ （一）干热灭菌法 ▪ 1、火焰灭菌法——火焰上加热20秒以上。 ▪ 灼烧是最迅速、可靠、简便的灭菌方法，适用耐
火焰材质的物品、金属制品（药刀）、玻璃器皿 （玻璃棒）以及瓷器等用具的灭菌。
▪ 2、干热空气灭菌——在高温干热空气中灭菌的 方法。
▪ ⑤压力表和温度表应灵敏、准确，两表数值应相 互对应；不同海拔高度，不应使用同一表压；
▪ ⑥及时清扫异物，防止疏水器和排水管堵塞。
▪ 3、流通蒸气灭菌常压100℃流通蒸气，加热3060min。
▪ 缺点：不能保证杀灭所有的芽胞。 ▪ 适用情况：消毒及不耐高热的制剂的灭菌。 ▪ 4、煮沸灭菌法：100℃沸水，加热30-60min。本
➢三、无菌操作法：整个制备过程控制在无 菌条件下进行的一种操作方法。
▪ 无菌检查：参照《中国药典》，对所有注射剂均要 做此项目
▪ 方法： ▪ 1、直接接种法：取一定量供试品，以无菌操作将
该供试品分别接种于需气菌、厌气菌培养基培养数 日，在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。
▪ 2、薄膜滤过接种法：将药液用0.45μm的微孔滤膜 过滤器过滤，然后加入需气菌、厌气菌培养基培养 数日，在培养期间应逐日观察并记录是否பைடு நூலகம்菌生长。
等）、气体、水等的灭菌。
▪ （五）辐射灭菌 ▪ γ射线（60Co）——不升温，穿透性强，特别适
于已经包装好的产品。缺点：设备费用高，对某 些药品可能产生药效降低、产生毒性物质或发热 物质，同时还要注意安全防护。 ▪ 中药材以及中成药中的应用。 ▪ （六）微波灭菌，高速热风灭菌
▪ 二、化学灭菌法 ▪ （一）气体灭菌法 ▪ 1、环氧乙烷 ▪ 机理：为烷化剂 ，与菌体蛋白质中的 -COOH，-
▪ 适用于：室内空气或表面灭菌。 ▪ 注：紫外线对人体照射过久，能产生结合膜炎、红
斑及皮肤灼伤等。所以应对工作者的皮肤及眼睛作 适当防护。
▪ （四）滤过除菌法：用滤过的方法除去活的或死 的微生物的方法，是一种机械除菌的方法。
▪ 除菌滤过器：微孔滤膜0.22-0.45μm（0.22，0.3） ▪ 适用于：不耐热药液（如：生物制品，抗生素
NH2，-SH，-OH基结合，使之产生不可逆性破坏。 ▪ 适用于：一次性注射器、输液器、注射针头、敷料，
对热敏感固体药物等。
▪ 2、臭氧：空间清毒，原水消毒。 ▪ 3、甲醛、丙二醇、乳酸熏蒸——室内空间的灭菌。
▪ （二）化学杀菌剂——物体表面灭菌。 ▪ 1、0.1%-0.2%新洁尔灭 ▪ 2、2%苯酚或甲酚皂溶液 ▪ 3、75%乙醇 ▪ 4、2%碱性戊二醛
法灭菌效果差，常用于注射器、注射针等器皿的 消毒。必要时加入适当的抑菌剂，可杀死芽胞细 菌。
▪ 5、低温间歇灭菌法 ▪ 80℃加热1小时→20-25℃保持24小时（让芽胞变
为增殖体）→再加热，放置，反复三次，直至消 灭芽胞为止。 ▪ 本法适用于不耐高温的制剂的灭菌。
➢ （ 三 ） 紫 外 线 灭 菌 法 ——254nm 灭 菌 力 最 强 （200-300nm）