氨基酸分析仪原理
氨基酸分析仪原理、分类及几种氨基酸分析仪的比较-科邦实验室
氨基酸分析仪原理、分类及几种氨基酸分析仪的比较概述氨基酸分析仪是一种分析仪器，采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法，对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。
工作原理通常细分为两种系统：蛋白水解分析系统（钠盐系统）和游离氨基酸分析系统（锂盐系统），利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。
其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸，速度较快，基线平直度好；锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸，速度较慢，基线一般不如钠盐系统好。
应用全自动氨基酸分析仪主要应用:各种物质中18种氨基酸的定性定量分析。
1.饲料上的应用：质量控制：各种饲料必需氨基酸的含量和它们之间的比例必须恰当，测定原料和产品中的氨基酸含量，以达到保证质量的目的。
真伪鉴别：鱼粉氨基酸组成特点是赖氨酸、蛋氨酸含量高，氨基酸分析结果很容易就可以区别它的真伪。
2.农业、食品、饮料及玉米、大豆、小麦等农作物的氨基酸含量进行检测；对果汁、饮料进行真伪的鉴别；检验测定茶氨酸来鉴别真伪茶叶；对酱油级别的认定。
分类氨基酸分析仪按其分离和检测方法的不同可分为两大类型。
第一类是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生光度法测定的经典方法（IEC）。
此类方法于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。
第二类是所有基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法（HPLC）以及阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法（IC）。
选型指南1、原理。
基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）。
此类方法由Stein和Moore两人1958年发明，并于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。
2、重要指标。
满足分析需要的技术指标如分离度、重复性等要求，而其中的分离度又是更为重要的指标，因为，色谱理论一般以分离度达到1.2作为两峰基本分离的判定前提，只有峰分开了，才有意义去讨论定性和定量的重复性。
广州氨基酸分析仪原理
广州氨基酸分析仪原理氨基酸是生物体重要的构成单位，是组成蛋白质和其他生物大分子的基本元素，广泛存在于细胞、组织和细胞的结构中。
因此，氨基酸分析在营养学、药理学及植物学、生物制剂、化妆品、肥料和其它领域都有重要的应用。
氨基酸分析仪是一种生物分析仪器，可用于快速准确测定氨基酸的种类及量，以及分析它们的比例和相互关系。
广州氨基酸分析仪是根据理论和技术而设计，其主要由液相色谱仪、离子色谱、电感耦合等组成。
1.谱分析光谱分析是氨基酸分析仪的基础，它可以有效地测定一种氨基酸的种类、含量和结构。
可以选择的光谱技术有紫外-可见分光光度计（UV-VIS）、拉曼光谱（Raman）、红外光谱（IR）、全反射X射线衍射（XRD）、核磁共振（NMR）等。
通过使用这些光谱技术，可以测定氨基酸的种类及量，以及氨基酸的结构分子信息。
2.子色谱离子色谱是利用色谱仪对氨基酸进行分析的一种技术，它可以将氨基酸分离成不同的离子组合，从而可以得出它们的组成及结构。
离子色谱的分离原理是利用不同的离子的不同的离子质量，再结合仪器的不同流速和分散性，对各种离子进行分离和发射，从而实现离子的分离和识别。
3.相色谱液相色谱是一种成像分析技术，可以用来分析氨基酸组成。
它利用柱内溶剂和分离因子的变化来实现氨基酸的分离和识别。
液相色谱在准确性和灵敏度上比离子色谱要好，因此更适合在低浓度的氨基酸的分析中使用。
4.感耦合电感耦合是一种应用微波电流来检测和分析氨基酸的技术，它可以快速准确地测定氨基酸的含量。
电感耦合的原理是在微波腔中产生高频电磁场，电子受其影响而引起振荡，氨基酸分子也受到其影响而发生振动，这样可以增强电子在电磁场中的变化，从而准确测定氨基酸的种类及量。
以上就是广州氨基酸分析仪原理的简要说明，氨基酸分析仪的原理除了光谱分析、离子色谱、液相色谱、电感耦合等外，还可以根据实际需要采用其他技术进行分析，以获得更准确的测定结果。
广州氨基酸分析仪无疑是一种很好的氨基酸分析仪，它可以满足生物分析领域的多种研究需求，并为氨基酸分析带来了新的发展前景。
氨基酸分析仪实验指导
氨基酸分析仪实验测试中心吕雪娟一、实验目的了解氨基酸分析仪的主要结构及工作原理，掌握氨基酸分析的过程，前处理方法。
二、原理氨基酸分析仪的分析原理是基于各种a一氨基酸的酸碱性、极性及分子大小的差异，用阳离子交换树脂在柱上进行层析分离，用几种不同pH值和离子强度的缓冲溶液依次将它们洗脱，从柱子上分离和洗脱下来的各种氨基酸在反应柱中与茚三酮进行加热反应，反应产物用可见光分光光度计进行检测，根据检测信号的大小计算出各种氨基酸的含量。
氨基酸和茚三酮反应氨基酸分析仪结构示意图二、操作步骤1.准备工作1.1缓冲液和茚三酮溶液的配制及正确放置1.2氮气压力调整1.2.1打开氮气钢瓶阀，调节其压力至50－100KPa（0．5－1.0Kgf／cm2）。
1.2.2顺时针轻轻旋转氮气调节器，使压力读数为34-40KPa（0.35－0.4Kgf ／cm2）。
1.2.3脱气瓶中液体的更换1.3放置自动进样器清洗瓶，向清洗瓶（C-1，1L）中盛上蒸馏水，放置于指定的位置并拧上盖子。
2.开稳压器3.启动L－8800ASM应用程序3.1系统初始化，OK3.2打开Module Operation界面3.3泵1流速设定----缓冲液的清洗，打开泵1的排液阀；清洗完毕，关闭泵1；3.4泵2流速设定—一缓冲液的清洗，打开泵2的排液阀；清洗完毕关闭泵2；3.5自动进样器流路和针头清洗,除气泡，重复此过程三次。
3.6泵的压力归零4.分析程序4.1选择应用程序4.2选择分析方法4.3输入待测样品的信息，编辑样品表，保存；4.4打开数据采集监控画面4.5选择样品表4.6打开泵1和泵24.7按样品表顺序放置样品。
4.8单击监控屏幕下方的Start Series按钮，开始样品测试。
4.9开始结束后，关闭采集监控画面4.10关闭L－8800ASM应用程序4.11关电源三、实验报告要求1.实验原理及分析条件；2.实验结果。
全自动氨基酸分析仪
全自动氨基酸分析仪全自动氨基酸分析仪是一部科学仪器，用于测试各种氨基酸。
目录工作原理说明概要应用举例工作原理测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同，在阳离子交换柱上将它们分别，采纳不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来，再逐个以另一流路的茚酮试剂混合，然后共同流至螺旋反应管中，于肯定温度下（通常为115～120℃）进行显色反应，形成在570nm有最大汲取的蓝紫色产物。
其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物，其最大汲取在440nm。
这些有色产物对570nm、440nm光的汲取强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度（或含量）之间的关系符合比耳定律，可与标准氨基酸比较作定性和定量测定。
说明概要①显色反应用的茚三酮试剂，随着时间推移发色率会降低，故在较长时间测样过程中应随时采纳已知浓度的氨基酸标准溶液上柱测定以检验其变更情况。
②近年显现的采纳反相色谱原理制造的氨基酸分析仪，可使蛋白质水解出的17种氨基酸在12min 内完成分别，且具有灵敏度高（最小检出量可达1pmol）、重现性好以及一机多用等优点。
应用举例（一）医学上的应用■氨基酸代谢异常角度叙述了氨基酸与肝性脑病的关系■血清中11种游离氨基酸的降低可直接影响人体组织的正常发育、生长■必须氨基酸在创伤愈合中的关系■肿瘤组织氨基酸代谢的变更规律（二）饲料上的应用■质量掌控各种饲料必须氨基酸的含量和它们之间的比例必须恰当，测定原料子和产品中的氨基酸含量，以实现保证质量的目的。
■真伪判别鱼粉氨基酸构成特点是赖氨酸、蛋氨酸含量高，氨基酸分析结果很简单就可以判别真伪。
（三）农业、食品、饮料及其它■对玉米、大豆、小麦等农作物的氨基酸含量进行检测■对果汁、饮料进行真伪的判别■检验测定茶氨酸来判别真伪茶叶■对酱油级别的认定。
氨基酸自动分析仪ppt课件
（2）进样分离系统
组成：进样器、色谱柱
AA最佳分离温度：30~70度， 需恒温，一般柱温升高，出峰时 间缩短。
（3）第检二测系节统氨基性酸能分取决于AA衍生的方式:
茚三酮法，柱后衍生。茚三酮与分离后的 AA混合并在100左右的水浴中反应15min， 最后由紫外检测仪检测。
OPA法，分离柱流出液与NaClO混合，再 与OPA混合，生成荧光衍生物，采用荧光 光度计分析测定。
1.1 离子交换树脂
1.填料：磺酸型强酸阳离子交换树 脂 2.苯乙烯为主体； 3.离子交换的活性基团：磺酸根 （连接在苯乙烯中乙烯基的对位 上）； 4.与二乙烯基苯交联，形成不溶的 高分子骨架，易吸水溶解。 5.交联剂所占比例决定网状结构的 孔径大小（氨基酸：8%~12%的交 联度）。
1.2 氨基酸在色谱
第三十八章 氨基酸自动分析仪
概述
实质：高效液相色谱仪 填料：强酸型阳离子交换树脂 检测器：可见或荧光分光光度计
选择性好、准确度高 分析速度快，灵敏度高
概述
20世纪40年代，开始探求色谱法 分析氨基酸；
提高洗脱流速、改良柱直径、填 料粒度，提高分析速度；
20世纪80年代，键合反相分配色 谱、柱前衍生技术的发展；
离子交换树脂的型号、粒度、 交联度；
柱长、直径、柱温；
洗脱液的阳离子类型、PH值、 离子强度、洗脱梯度、流速及其 中有机溶剂含量。
1、3 衍生及检测
多数氨基酸无生色基团，在紫外可 见光区无吸收（Phe、Trp、Lyr例 外），需要将它们衍生，成为具有 紫外、可见光吸收或能产生荧光的 物质才可以检测。
第二节 氨基酸分析 性能
（3）程序控制系统
（4）数据处理系统及其他辅 助系统
氨基酸分析原理与方法
4.提高流动相PH值，氨基酸正电荷减少，吸附力减弱，最后从离子交换柱 上洗脱下来。洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨基酸、碱性氨基 酸。
5.氨基酸标准液中各种氨基酸在氨基酸自动分析仪上被洗脱的顺序有一定; 标准液各种氨基酸的浓度一定，洗脱峰的面积一定;由此可计算出样品中
• 生理体液样品首先要除去样品中的蛋白质，获得游离 氨基酸。除去蛋白质化学方法为：
• 1.苦味酸法 • 2.三氯醋酸法 • 3.磺基水杨酸法 • 4.乙醇沉淀法 • 常用方法为磺基水杨酸法：用4%磺基水杨酸，按1:3比
例与样品混合离心去蛋白，转速2万转以上离心10分钟 或更长一些时间。取上清液用样品稀释液稀释后上机 测定。（建议进样前用C18过滤柱处理一下为好）。
• 山东大学生命科学院发表的《低智儿童与正常儿童中氨 基酸的比较研究》一文着重叙述了血清中11种氨基酸的降 低可直接影响人体组织的正常发育、生长，从而导致儿童 智力发育不全。
• 军事医科院《条件性必需氨基酸在创伤愈合中的作用》 一文中叙述了条件性必需氨基酸在创伤愈合中的关系。
• 北京军区总医院《人胃癌组织及胃正常组织氨基酸的差 异研究》一文中通过对胃癌组织及自身胃正常组织氨基酸 的测定，探讨了肿瘤组织氨基酸代谢的变化规律。
LL--88880000氨氨基基酸酸分分析析仪仪 成成都都交交流流讲讲座座
吕守民 天美科技有限公司
目录
• 一、氨基酸分析仪 • 二、氨基酸 • 三、氨基酸分析仪基本分析原理 • 四、氨基酸分析仪法与HPLC的比较 • 五、样品的制备 • 六、应用
日立L-8800氨基酸分析仪简介
一、氨基酸分析仪： （一）氨基酸分析仪的构成（见图1) （二）氨基酸分析仪的流程图（见图2)
氨基酸分析仪的基本分析原理
氨基酸分析仪的基本分析原理
氨基酸分析仪是一种用于定量分析样品中各种氨基酸的仪器。
其基本分析原理是通过将样品中的氨基酸分离、检测和定量，从而确定样品中各种氨基酸的含量。
首先，样品中的氨基酸需要被分离出来。
一种常用的方法是利用离子交换色谱技术。
离子交换色谱是通过样品中氨基酸的酸性基团和碱性基团与固定在色谱柱上的阴、阳离子交换剂之间的离子交换作用进行分离的。
通过调整溶剂和柱温等条件，可以实现对氨基酸的选择性分离。
其次，分离出的氨基酸需要被检测。
最常用的检测方法是紫外吸收检测。
氨基酸在紫外区域有特定的吸收峰，对应着特定的波长。
通过测量样品在不同波长下的吸光度，可以得到吸收峰的强度。
根据吸光度和吸光度与浓度之间的关系，可以计算出样品中各种氨基酸的浓度。
最后，根据样品中氨基酸的浓度，通过一定的计算公式，可以定量地确定样品中各种氨基酸的含量。
通常，会利用标准曲线法，即利用已知浓度的氨基酸标准溶液制备一系列浓度不同的标准曲线。
将样品中各种氨基酸的吸光度值与标准曲线进行比较，就可以得到各种氨基酸的浓度。
综上所述，氨基酸分析仪通过分离、检测和定量的步骤，可以对样品中的氨基酸进行分析，从而确定样品中各种氨基酸的含量。
氨基酸分析仪原理
氨基酸分析仪基本原理及应用
氨基酸分析仪法与HPLC法比较
近年来常见常用的检测氨基酸的液相方法不少，主 要介绍以下几种常用的方法与氨基酸分析仪法进行比较： （一）OPA法（邻苯二甲醛）（反应机理略） 最大的不足之处是：做全分析时需配以其他技术一起使 用，方可与带有仲氨基团的氨基酸进行反应。赖氨酸及 胱氨酸衍生物荧光较弱，灵敏度低。因为OPA是快速反应 剂，有些氨基酸反应极其不稳定，特别是甘氨酸、赖氨 酸衍生物的信号衰减很快，一天变化很大。从以往我们 做的实验来看此方法的变异系数CV%一般为5％左右，个 别的氨基酸如组氨酸可达9%左右，尤其对带有盐分的饲 料氨基酸类样品特别不适合，因样品中带有的盐分直接 影响衍生（紫外法基线不好）。
L-8900 AAA的分析原理
1、样品中的氨基酸在低PH的条件下都 带有正电荷,在阳离子交换树脂上均被 吸附,但吸附的程度不同,碱性氨基酸结 合力最强其次为中性氨基酸、酸性氨基 酸结合力最弱。 2、按照氨基酸分析仪设定的洗脱程 序，用不同离子强度、PH值的缓冲液依 次将氨基酸按吸附力的不同洗脱下来， 3、分离后的氨基酸与茚三酮试剂在高 温反应器中进行衍生反应，生成可以被 分光光度计检测的有色物质，然后在检 测器中被检测出来。
+ H + H -
R
C H
N H 2
C O O
-
_
-
R
C H + N H 3
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缺点：溶液显黒褐色、与含醛基化合物作用的结果。
提示：盐酸中的重金属，作为接触剂可使氨基酸遭受破 坏，故要求用高纯度的盐酸水解样品。
2、碱水解法：用2.5N氢氧化钠（氢氧化锂）作为水解
剂，色氨酸不被破坏，但有消旋作用，丝氨酸、苏 氨酸、精氨酸、胱氨酸遭到不同程度的破坏。(水解 时20小时）
专用氨基酸分析仪的色谱柱主要是以磺酸型强酸性 阳离子交换树脂为柱填料。强酸型阳离子交换树 脂，它是由苯乙烯和二乙烯苯聚合而成的。该树脂 是由苯乙烯和二乙烯基本聚合后磺化而成，球状树 脂的粒度一般在５～１０μｍ之间，交联度多为８ ％～１２％。
交联度大，树脂的网状结构紧密、孔隙度小，对外 界离子进入树脂有阻碍作用，较大的离子根本不能 进入树脂内部，这样就可以提高树脂对离子的选择 性。交联度大的适合用于分子量较小的氨基酸分 离；交联度小，树脂结构疏松、孔隙度大，适合用 于蛋白质、肽类的分离。
氨基酸在溶液中受溶液pH的影响存在着下列平衡：
R CH COO-
NH2
H+
_ห้องสมุดไป่ตู้
OH -
R CH COO +N H 3
H+
OH- R C H C O O H
+NH3
pH>pI
pH=pI
pH＜pI
偶极离子--净电荷为零--在电场中不移动， 此时溶液的pH值称为等电点（pI）。
氨基酸等电点
丙氨酸 天冬酰胺 半胱氨酸 谷氨酰胺 组氨酸 赖氨酸 苯丙氨酸 丝氨酸 色氨酸 缬氨酸
氨基酸分析仪进入国内市场已有近三十年 的历史，它是专用于测定蛋白质水解液（水解 氨基酸）及生理体液中（游离氨基酸）混合氨 基酸含量的一种专用仪器，现已广泛应用于各 行各业。它与其它分析仪器区别在于只能检测 氨基酸不能作为它用，具有专一性。从仪器的 配置上来讲应配备专用的阳离子树脂氨基酸分 离柱、微量的输液系统、专用的检测器、反应 系统及符合国际、国内、涉外标准的检测方法 （离子交换柱后茚三酮衍生方法）。
L-8900 AAA的分析原理
1、样品中的氨基酸在低PH的条件下都 带有正电荷,在阳离子交换树脂上均被 吸附,但吸附的程度不同,碱性氨基酸结 合力最强其次为中性氨基酸、酸性氨基 酸结合力最弱。 2、按照氨基酸分析仪设定的洗脱程 序，用不同离子强度、PH值的缓冲液依 次将氨基酸按吸附力的不同洗脱下来， 3、分离后的氨基酸与茚三酮试剂在高 温反应器中进行衍生反应，生成可以被 分光光度计检测的有色物质，然后在检 测器中被检测出来。
4.提高流动相PH值，氨基酸正电荷减少，吸附力减弱，最后从离 子交换柱上洗脱下来。洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨 基酸、碱性氨基酸。
5.氨基酸标准液中各种氨基酸在氨基酸自动分析仪上被洗脱的顺 序一定;标准液各种氨基酸的浓度一定，洗脱峰的面积一定;由此 可计算出样品中各种氨基酸的含量。
离子交换树脂
氨基酸分析仪洗脱过程
1.氨基酸在PH2.2的条件下都带正电荷，在阳离子交换树脂上均 被吸附,但结合强度各不相同。
2.随着缓冲液在离子交换柱上流动，氨基酸不断地吸附、解吸附。 由于氨基酸性质的差异（酸碱性、极性、分子大小）,吸附强度 有差异。
3.不同氨基酸与离子交换树脂的亲和力不同：碱性氨基酸> 芳香 族氨基酸>中性氨基酸>酸性氨基酸及羟基氨基酸。
L-8900 AAA的流程图
L-8900 AAA的性能指标
以蛋白水解液标准分析方法为例： 净分析时间：30分钟 检出限：3 pmol(信噪比=2，天门冬氨酸） 保留时间重现性：CV 0.3% （精氨酸） 峰面积重现性：CV 1.0% (甘氨酸、组氨酸）
氨基酸分析仪最大的特点：
（二）PITC法（异硫氰酸苯脂） （反应机理略） 此方法的重现性明显低于茚三酮法，最大
的缺点是：一个组分衍生后可生成2个以上的 衍生物，而且和其它组分峰重叠，灵敏度比较 低。由于有残留的衍生剂，柱效与柱寿命降低 很快（做200左右样品），变异系数在4%左 右，也偏大，个别氨基酸如组氨酸可达8%，某 些氨基酸在24小时内即降解。
参数 6种（试剂与清洗液） 4.6mm id x 60mm， 阳离子树脂填充（标配) 0.001-0.999ml/min, 0-20MPa, 2 1500µl; 200vial (200 cooler) ; 0.1-100µl 20-85℃（1℃）, 电子加热/制冷的温控装置。 50℃ --140℃,电子加热的温控系统 可见分光光度计（570，440nm） EZChrom Elite 分析软件 CPU: 32bits OS, Windows xp
微波消解技术：与传统的水解方法相比，有明显的优势。其原理是能量的 传递是通过分子的极化，而不是分子间的碰撞完成的，依赖水分子的高效 极化作用，样品可以快速吸收微波辐射的能量，微波技术还有一个重要的 特性，即能穿透一些介质，直接把能量辐射作用到反应物上，使之极性分 子每秒产生25亿次以上的分子旋转，迅速提高反应物的温度和反应速度， 从而得到样品快速的水解。
Ｒ ｜ Ｈ-Ｃ－ＣＯＯＨ ｜ ＮＨ２
组成蛋白质的20种氨基酸除甘氨酸外，都有一个不对称碳原子，即 а-碳原子。 а-碳原子有四个不同取代基：羧基、 氨基、氢原子和R基团，不同 氨基酸的R基团不同。 每种氨基酸有D-构型和L-构型，天然蛋白质中的氨基酸都是L-构型。 广泛存在于食品、药品、水产品、饲料和体液（血液、尿样等）。
10.76 2.98 3.22 5.97 5.98 5.75 6.30 6.53 5.65 6.02
（二）氨基酸的分类
按氨基酸具有的酸性和碱性基团的多少分类： 中性氨基酸：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、 苏氨酸、丝氨酸（以上七种又称脂肪族氨基酸）、苯丙氨酸、 酪氨酸、色氨酸（这三种又称芳香族氨基酸）、蛋氨酸、胱 氨酸、半胱氨酸（含硫氨基酸）、脯氨酸、羟脯氨酸（属亚 氨基酸类） 酸性氨基酸：天门冬氨酸、谷氨酸 碱性氨基酸：赖氨酸、羟赖氨酸、组氨酸、精氨酸
（一）OPA法（邻苯二甲醛）（反应机理略）
最大的不足之处是：做全分析时需配以其他技术一起使 用，方可与带有仲氨基团的氨基酸进行反应。赖氨酸及 胱氨酸衍生物荧光较弱，灵敏度低。因为OPA是快速反应 剂，有些氨基酸反应极其不稳定，特别是甘氨酸、赖氨 酸衍生物的信号衰减很快，一天变化很大。从以往我们 做的实验来看此方法的变异系数CV%一般为5％左右，个 别的氨基酸如组氨酸可达9%左右，尤其对带有盐分的饲 料氨基酸类样品特别不适合，因样品中带有的盐分直接 影响衍生（紫外法基线不好）。
氨基酸分析仪基本分析原理
各种蛋白质都是由20种氨基酸首尾相连，并以一定的 顺序组成肽链。用水解的方法将肽链打开，形成单一的氨 基酸进行分析。所有的氨基酸在低PH值的条件下都带有正 电荷，在阳离子交换树脂上均被吸附，但吸附的程度不 同，碱性氨基酸结合力最强、其次为芳香族氨基酸、中性 氨基酸、酸性氨基酸结合力最弱。按照氨基酸分析仪设定 的洗脱程序，用不同离子强度、PH值的缓冲液依次将氨基 酸按吸附力的不同洗脱下来（先酸性氨基酸再中性氨基酸 最后碱性氨基酸），被洗脱下来的氨基酸与茚三酮反应液 在加热的条件下反应（135度），生成可在分光光度计中 570nm和440nm检测到的蓝紫色物质（仲氨生成浅黄色物质 440nm检测)，外标法定量。
缺点：水解时间长、而且不易水解完全。
提示：作为氨基酸全分析不可采用此法。
目前日本、欧洲和我国植物蛋白水解生产上采用的工艺 均为酸水解法。
4、微波消解法：微波消解技术，近年来在化学领域尤其是在氨基酸样品前 处理方面显示出了良好的应用前景。
常规的水解方法：需要在一定条件下水解22—24小时，该法存在水解时间 长、耗时耗电、不利于快速检测大量样品前处理工作。
（三）D-CL法（丹酰氯） （反应机理略）
反应比较简单以5个mol/L比例，在室温、避光条件下几时 分钟即可完成反应。
缺点不足之处是：衍生物对紫外比较敏感，反应必需要在 避光下进行，赖氨酸、组氨酸和胱氨酸均生成二级衍生物 影响准确测量。
（四）2、4-二硝基氟苯法（反应机理略）
此方法是比较常见的液相测定方法，最大的缺点是衍生剂 峰比较大，对柱子危害比较厉害。组氨酸分离不好、组氨 酸的二级衍生物与丝氨酸重叠，另一个峰柱效降低时完全 溶入到前面苯丙峰中，直接影响定量，日间变化比较大。
茚三酮反应
（四）氨基酸的分离分析
特殊沉淀法 离子交换法 萃取法 毛细电渗析
离子交换法分离分析氨基酸的原理
根据氨基酸是两性电解质这一特性， 以及目的氨基酸与杂质氨基酸pK、pI值 的差异，利用离子交换树脂对各种氨基 酸吸附能力的不同进行分离纯化。
二、氨基酸分析仪
氨基酸分析仪的定义：
日立L-8900全自动氨基酸分析仪
日立氨基酸分析仪的历史
KLA-5
四十多年的历史，拥有2000多用户
835
L-8800
L-8900
Sold KLA in 1962
L-8500
L-8900 AAA的内部结构
L-8900 AAA的组成
组件名称 缓冲液 色谱柱 泵 自动进样器 柱温箱 反应单元 检测单元 控制系统
氨基酸分析仪与HPLC常规比较
三、样品的制备
（一）蛋白质的水解 （二）游离氨基酸样品的制备
（一）蛋白质的水解
用于全氨基酸测定的样品，凡是以蛋白质形式存在 的都要进行水解处理，水解方法有三种： 1.酸水解法：标准水解法，是普遍采用的水解方法，在水 解过程中采用6N的盐酸作为水解剂，此方法的特点是水 解彻底，水解后的氨基酸全部以L-型形式存在，但色氨 酸遭破坏。（6NHCL、110℃真空水解24小时）
1 灵敏、快速、提供数据准确可靠：分辨 率高、操作简单，分析周期短（水解30分 钟、体液110分钟）。 2 保留时间、峰面积、重现性好，检出限 可达3pmol。 3 不存在液相方法生成二级衍生物的问题。 4 峰形显高斯分布，体系稳定快（半小时 即可）。