牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工艺
新生牛血清病毒检测细胞培养法
细胞培养法检测新生牛血清病毒1原理某些病毒在其敏感的宿主细胞内增殖时，可引起细胞病变，即出现细胞变圆、细胞破裂、细胞融合等现象。
细胞培养法的主要特点是：广泛的适用性、操作方法简单、成本较低并且该技术方法成熟。
主要缺点是：特异性差、敏感性较低、检测速度慢。
该方法首先使用无病毒血清对实验用Vero细胞进行培养增值，然后分别制备阴性供试品、阳性供试品以及待测试供试品。
将Vero细胞均匀分为至少3份，分别加入以上供试品。
然后再适宜的温度条件下培养，每日进行观察，最多观察21天并记录细胞病变情况。
2材料和方法2.1材料2.1.1病毒牛腹泻病毒；狂犬病毒；牛腺病毒、牛细小病毒、牛副流感病毒、呼肠孤病毒。
2.1.2细胞Vero细胞(非洲绿猴肾细胞系)：购自中国生物制品检定所2.1.3试剂无病毒污染的新生牛血清：阴性对照品使用；MEM培养基：细胞基础培养基；胰蛋白酶：消化细胞。
2.1.4仪器设备①专门的病毒实验室:生物安全柜(CBK一D201)操作，符合国家生物安全要求；②洁净工作台；③倒置显微镜；④冰箱；⑤离心机；⑥离心管、注射器、吸管。
2.1.5阳性病毒将BVDV等，六种病毒在Vero细胞上连续传代至病毒滴度为5.0lgCCID50/mL以上时进行合并，分为若干批，零下70℃冻存，作为阳性病毒对照液。
2.2方法2.2.1非血吸附病毒检查是指利用传统的细胞培养或利用其他的对不具有动物血细胞吸附性质的病毒进行检测方法的统称。
2.2.2细胞制备以细胞密度为2~3×105/mL的Vero细胞，接种到适宜的细胞培养瓶后置于37℃培养箱培养，每天镜下观察细胞的分裂增殖情况，并记录形成良好单层的时间(镜下观察细胞生长成片率达90%以上为良好单层)。
注意将制备的细胞及时进行编号和标注，以免造成混淆。
2.2.3供试品检测取良好单层细胞培养瓶，弃掉Vero细胞旧营养液，在方瓶中分别加入胰蛋白酶消化液0.8mL，待可见细胞面呈松散状态，弃掉胰蛋白酶消化液，方瓶中分别加入适量生长液将所有细胞都从方瓶壁上吹打下来，再轻轻吹打几次，使细胞尽量分散成单个状态。
禽流感病毒中和实验
禽流感病毒中和实验及其他方法（一）实验材料1、中和反应实验材料(1)病毒：）的滴定。
一般为鸡胚尿囊病毒液，进行中和实验前，需要进行病毒滴度（TCID50(2)血清样品包括待检血清和阳性以及阴性对照血清。
人血清实验前需要56℃ 30分钟灭活，动物血清需RDE处理。
－20℃储存，避免多次反复冻融。
(3)MDCK细胞和细胞培养试剂1)MDCK细胞（狗肾上皮细胞）2)MDCK细胞培养液：DMEM+5%牛血清+抗生素，过滤除菌500毫升 DMEM（修饰的Eagles培养基）5.5毫升 100×抗生素（100单位/毫升青霉素+100微克/毫升链霉素）5.5毫升 100×L－Glutamine（2毫摩尔）25.5毫升 56℃、30分钟加热灭活的牛血清3)胰酶 / EDTA(4)其它1)平底96孔微量培养板2)病毒稀释液：DMEM+1%牛血清白蛋白+抗生素，即配即用。
429毫升 DMEM66毫升 7.5%牛血清白蛋白（BSA）5毫升 100×抗生素3)TPCK－胰酶（使用浓度为2微克/毫升）4)固定液：80%的丙酮，即配即用，4℃保存400毫升丙酮100毫升 PBS，PH 7.22、ELISA实验材料(1)抗体1：鼠抗流感病毒甲型核蛋白克隆抗体(2)抗体2：辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG(3)洗涤液：PBS+0.05%TWEEN－204升 PBS，PH 7.22毫升 TWEEN－20(4)封闭液：PBS+1%牛血清白蛋白+0.05％TWEEN－20867毫升PBS，PH 7.2132毫升牛血清白蛋白1毫升TWEEN－20(5)底物和底物溶液：常用的辣根过氧化物酶（HRP）所用底物为磷苯二胺（OPD）底物溶液为PH5.0磷酸盐－柠檬酸缓冲液（0.05M）底物和底物溶液：10毫克OPD20毫升柠檬酸缓冲液（含0.015%双氧水）即配即用磷酸盐－柠檬酸缓冲液，PH5.058.8克柠檬酸三钠1升蒸馏水用盐酸调节PH为5.0加0.015%双氧水，（临用前加入）* 如果使用磷酸盐－柠檬酸缓冲液胶囊（Sigma）1个胶囊加入100毫升蒸馏水，临用前配制(6)终止反应液：1N硫酸（28毫升浓硫酸+1升蒸馏水）3、其他细胞培养和酶联免役吸附实验的常用设备和仪器（参照英文讲义）备注：A.以上实验材料购自Gibco,，Hyclone，Dynatech，Kirkegaard&Perry和Sigma 公司，材料编号（CAT#）参照英文讲义。
胎牛血清的详细介绍
胎牛血清的详细介绍胎牛血清是从胎牛体内提取的血浆，主要用于细胞培养和生物制品的生产中。
它是一种质量优良的培养液添加剂，能够提供细胞生长所需的营养物质、蛋白质、激素和生长因子等。
胎牛血清的应用广泛，涵盖了医药、生物技术、食品安全等领域。
首先，胎牛血清具有极高的营养价值，尤其是富含蛋白质。
蛋白质是细胞生长和分裂所必需的营养物质，对细胞生理代谢和功能的正常发挥至关重要。
胎牛血清中的蛋白质不仅含有丰富的氨基酸，而且具有多种生物活性，并可作为细胞培养时的生物信号传导分子，调节细胞功能。
其次，胎牛血清中含有多种生长因子和激素，如胰岛素样生长因子1（IGF-1）、胎牛血清促黄体生成素（bFTC）等。
这些生长因子和激素能够促进细胞生长、增殖和分化，并参与细胞信号传导、细胞外基质合成等生理过程。
它们的存在可以显著提高细胞培养的效率和细胞生长的速度。
此外，胎牛血清还富含多种微量元素和有机物质，如维生素、矿物质等。
这些物质能够提供细胞所需的微量元素和辅酶，在细胞代谢过程中起到催化和调节作用。
此外，胎牛血清还具有抗菌、抗炎和抗氧化等作用，可以保护细胞免受外界环境的损害。
胎牛血清的选择和应用要根据具体的细胞类型和培养需求来确定。
首先，要选择质量好、无致病微生物污染、符合相关标准的胎牛血清。
其次，要注意控制血清的添加量，过高的浓度可能会导致细胞过度生长、突变或凋亡。
此外，还要避免血清批次间的差异，以免影响细胞培养的一致性和稳定性。
胎牛血清广泛应用于细胞培养中，尤其是哺乳动物细胞的培养。
它可以为细胞提供所需的营养物质和生理活性因子，促进细胞的生长和增殖。
在生物技术领域，胎牛血清常用于生物制品的生产，如抗体、疫苗、重组蛋白等。
此外，胎牛血清还可以作为药品安全性测试和病毒灭活等方面的试剂。
然而，胎牛血清也存在一些问题和局限性。
首先，由于血清是从动物体内提取的，存在一定的伦理和动物福利问题。
其次，胎牛血清可能存在微生物污染风险，如病毒、细菌等。
血清-病毒中和试验的标准操作规程
血清-病毒中和试验的标准操作规程（编号：034）
1、目的及使用范围
该SOP以PRRSV为例，测定血清中的病毒中和抗体滴度。
2、主要仪器及试剂
CO2细胞培养箱、普通光学显微镜、超净工作台（生物安全级别）、电动吸引器、移液器、水浴锅、DMEM培养基、胎牛血清、96孔细胞培养板
3、相关器皿的预处理
玻璃制品要高压灭菌
4、操作步骤
4.1按常规细胞培养方法培养Marc-145细胞
4.2胰酶消化Marc-145细胞，均分与96孔板中，100μL/孔，并保证细胞数为（2～8）×105/孔；CO2细胞培养箱培养16～24h；
4.3抗血清56℃水浴锅灭活30min，与含100 TCID50 PRRSV的DMEM（2%FBS）2倍倍比稀释，混匀后，37℃孵育1h；
4.4弃除96孔板中细胞培养基，加入血清-病毒混合物100μL/孔，置于CO2细胞培养箱中，吸附1h；
4.5弃除上清，用无菌PBS洗2次，吸干各孔中的残留液后，加入含2%FBS的DMEM，置于CO2细胞培养箱培养3～5d；
4.6第4天，于光学显微镜下观察细胞病变CPE，记录病变孔数目；
4.7计算中和抗体滴度，按照运用Reed-Muench法计算。
5、问题向导
5.1细胞病变不明显
根据细胞状态或病毒种类的不同，细胞病变时间会相应发生改变，一般而言，第3天就会出现CPE，第4天就可以计算其中和抗体滴度。
5.2 Reed-Muench法计算中和抗体滴度范例，见表1。
68。
牛血清生产工艺流程
牛血清生产工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工艺.pptx
2007年09月
军事医学科学院输血医学研究所
牛血清的重要性与生物药品的病毒安全性 牛的病原与病毒安全性关注的重点 欧盟对牛血清病毒检测的要求 病毒分类与牛的某些病毒 牛血清的病毒安全检测技术 血清的病毒清除/灭活工艺 病毒安全实验室的部分研究工作
2007年09月
军事医学科学院输血医学研究所
牛的感染性疾病
2007年09月
军事医学科学院输血医学研究所
牛可以感染的病毒
RNA病毒
口蹄疫病毒（FMDV） 牛病毒性腹泻病毒（BVDV）
轮状病毒（Rotavirus） 呼肠孤病毒（Reovirus）
牛白血病病毒（BLV） 牛免疫缺陷病病毒（BIV）
蓝舌病病毒（BTV）
牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）
狂犬病病毒（RV）等
牛血清的重要性与生物药品的病毒安全性 牛的病原与病毒安全性关注的重点 欧盟对牛血清病毒检测的要求 病毒分类与牛的某些病毒 牛血清的病毒安全检测技术 血清的病毒清除/灭活工艺 病毒安全实验室的部分研究工作
2007年09月
军事医学科学院输血医学研究所
脊椎动物病毒的形态－－DNA病毒
三 牛源制品的病毒安全性
2007年09月
军事医学科学院输血医学研究所
重点关注两大类病毒
应该考虑生物安全性的病毒集中在两个方面：
人兽共患病病毒 与致癌、免疫抑制或严重退行疾病有关的病毒
2007年09月
军事医学科学院输血医学研究所
牛血清的重要性与生物药品的病毒安全性 牛的病原与病毒安全性关注的重点 欧盟对牛血清病毒检测的要求 病毒分类与牛的某些病毒 牛血清的病毒安全检测技术 血清的病毒清除/灭活工艺 病毒安全实验室的部分研究工作
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动物血清病毒灭活研究进展
动物血清病毒灭活研究进展石真真;李倬【摘要】本文主要介绍了加热法、有机溶剂/表面活性剂(S/D法)、甲醛灭活法、亚甲蓝光化学(MB)法、β-丙内酯法等五种动物血清病毒灭活技术及目前国内外最新研究进展,旨在进一步寻找出一种更为安全,可靠、省时,效果又好,又可应用到具体生产过程中去的新型灭活方法,从而为动物血清中各种病毒的灭活开辟一务全新的途径.【期刊名称】《甘肃农业》【年(卷),期】2011(000)005【总页数】3页(P9-10,12)【关键词】动物血清;病毒;灭活【作者】石真真;李倬【作者单位】西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃,兰州,730030;西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃,兰州,730030【正文语种】中文动物血清作为医药生物技术产品中重要的原辅材料之一，是细胞培养用培养基的主要成分。
细胞培养在现代生物技术制药尤其在基因工程药物和疫苗研究生产过程中具有特殊的作用和价值，不但生物技术药物很多是通过细胞培养来实现的，而且细胞工程、杂交瘤单克隆抗体、基因治疗、发酵工程和酶工程等同样也依赖于细胞培养的过程来实现。
而在细胞培养的发展过程中，培养基的质量又是其中的关键，直接影响着生物技术药物的质量安全。
随着现代生物技术制药的进步,细胞培养用动物血清的安全性愈来愈受到关注。
目前美国等国家提出用“三重安全网”（tr iple safety net）来保证动物血清等血液制品的安全[1]。
即：加强血源管理；增加必要的检验项目和提高要求；改进工艺，在制造过程中引入去除或灭活病毒的步骤。
其中，对血液制品进行灭活病毒处理被认为是行之有效的措施，也是保证血液制品安全非常重要的环节。
一、动物血清的特性及主要病毒动物血清是一种很复杂的混合物，其具有促细胞贴壁、分裂生长、抑制胰蛋白酶、解毒等功能，人类已知的主要成分有激素类蛋白、α2-巨球蛋白、转铁蛋白、成纤维促细胞生长因子、表皮细胞促细胞生长因子等多肽以及胰岛素、促生长激素等激素和与蛋白相结合状态的微量元素和氨基酸，对培养细胞的生长繁殖发挥着极其重要甚至是难以替代的作用[2]。
牛副流行性感冒诊断与综合防治
Veterinary clinical science | 兽医临床科学92 ·2022.030 引言牛副流行性感冒又称为“运输性肺炎”，是一种影响牛呼吸系统的病毒性疾病，是牛感染牛副流感病毒3型后引发的一种急性传染病，其传播途径广，可通过接触或飞沫感染健康牛，严重威胁牛健康和养殖效益。
该文重点分析牛副流行性感冒诊断和防治方法。
1 病原特点牛副流行性感冒的病原微生物为牛副流感病毒3型，该病毒不仅能独自致病，还可与其他溶血性巴氏杆菌、丝状支原体、牛传染性鼻气管炎病毒或牛腺病毒一起引发宿主感染，加剧病情恶化。
牛副流感病毒3型耐冷不耐热，在低温条件下可长期存活，但加热到55 ℃，数分钟后可杀灭病毒。
牛副流感病毒3型对紫外线、酸、碱、氧化剂等具有较高的敏感性，0.3%过氧乙酸溶液、2%～5%氢氧化钠溶液、5%～10%漂白粉溶液、3%来苏尔溶液均可杀灭该病毒。
2 流行特点2.1 易感动物牛副流感病毒3型不仅可感染不同年龄、性别、品种的牛，还能感染猪、绵羊、马、小鼠、豚鼠、猴等动物。
2.2 传染源病牛、带毒牛均可作为传染源进行病毒扩散。
2.3 传播途径首先是直接接触感染，病毒可经过自然交配或胎盘感染健康牛或胎儿。
其次是间接接触感染，病牛或带毒牛通过飞沫将病毒传播到空气中，感染健康牛呼吸道引发感染。
2.4 发病特点牛副流行性感冒可因饲养密度较大、长途运输、通风不当、环境卫生差引发感染。
全年均能感染发病，但秋末和冬季发病率高于其他季节。
牛副流行性感冒的传播速度快，容易暴发地方性感染。
3 临床特征病牛感染后出现精神沉郁，食欲减退甚至厌食，大多数病牛无发热症状，部分病牛体温升高，最高达41.5 ℃，还会出现呼吸困难，不同程度咳嗽，睡觉时有明显的呼噜声。
发病初期病牛会有浆液性鼻液流出，一般在3 d 左右病牛口腔流涎，鼻液呈脓性；听诊呈湿性啰音，发病后期无明显肺泡音，可在胸腔听到心音[1]。
部分病作者简介：张松（1981-），女，黑龙江齐齐哈尔人，硕士，高级兽医师，研究方向：动物疫病防疫。
新生犊牛血清生产工艺验证方案
新生犊牛血清生产工艺验证方案文件类别：技术方案制定、批准正文1.目的为了确认新生牛血清生产工艺是否符合质量牛血清标准，特制定本方案以验证目前的生产工艺的可行性和稳定性。
2.范围和责任2.1.范围：适用于牛血清生产工艺的确认。
22 责任1. 2.1. 验证委员会：负责验证方案的审批；验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施；验证数据及结果的审核；负责验证报告的审批；222.生产管理部：负责本验证方案、报告的起草与实施，并做好相应的记录；在验证过程中对验证相关SoP进行确认。
223.质量管理部：负责验证过程中的组织协调，并对验证过程的偏差处理进行审核；224.质量管理部经理：批准验证文件。
3.人员确定确定参与本次验证的人员并要求所有参与人员签名确认。
5.设备/系统描述牛血清生产工艺分为初制血清的生产和精制血清的生产。
初制血清由基地采集出生14小时以下新生牛的血液，经大容量低温离心机300OrPm离心后、分离血清等步骤获得。
初制血清经检验合格后再通过混合、过滤除菌、分装、压塞、帖签包装而获得精制血清。
血清生产过程复杂，环节较多，厂房设施、空调系统、水系统均应符合生产工艺的需要。
过滤系统、高压灭菌设备达到灭菌标准。
所以本验证是在厂房设施验证、空调系统安装运行验证、工艺用水验证、设备验证、设备清洗验证、无菌生产验证已完成的基础上进行。
6.风险因素分析详见《纯化水系统部件关键性评估报告》7.参考文件7.12010版《中国药典7.22010版《药品生产质量管理规范》8.内容8.1文件检查确认8.1.1目的：确认文件资料已经完备，并且是当前最新版本。
8.1.2测试方法：检查最新版本的文件，现场不能出现旧文件。
8.1.3可接受标准：文件资料已经完备，并且是最终批准版本。
8.1.4记录：见附件18∙2培训检查确认8.2.1目的：确认参与验证的人员都经过此方案的培训8.2.2测试方法：检查培训记录8.2.3可接受标准：验证执行前，参与验证的人员已进行此方案的培训。
猪瘟疫苗专用牛血清安全操作及保养规程
猪瘟疫苗专用牛血清安全操作及保养规程
1.安全操作规程
(a)提前做好准备工作，包括消毒操作台和器具，佩戴好口罩、手套等防护用品。
(b)使用前对疫苗专用牛血清进行外观检查，如出现浑浊、色彩变化等异常情况应停止使用。
(c)在操作过程中要轻拿轻放，避免抖动或剧烈摇晃瓶子，以免破坏疫苗的质量。
(d)操作时注意防止交叉感染，使用专用工具或器皿，不得与其他物质混合或共用。
2.保养规程
(a)疫苗专用牛血清的存储温度应符合要求（通常为2-8摄氏度）。
在存储过程中，要定期检查温度，防止温度升高导致牛血清质量下降。
(b)存放疫苗专用牛血清的容器应干净、密封、耐压。
在存放过程中应避免阳光直射和潮湿环境，以免对疫苗的质量产生影响。
(c)疫苗专用牛血清的过期日期要在使用前核对，严禁使用已过期的产品。
(d)未使用完的疫苗专用牛血清应密封保存，避免污染或受潮。
3.废弃物处理
(a)使用完毕的疫苗专用牛血清容器应作为医疗废弃物分类处理，不能随意丢弃。
(b)废弃物处理应符合相关法律法规，避免对环境造成污染和危害。
4.风险防控
(a)职工在接触疫苗专用牛血清时，应定期接受健康检查，如有不适及时报告，确保自身安全。
(b)职工应接受相关疫苗知识培训，掌握正确的操作方法并遵守安全操作规程，减少操作风险。
(c)如出现意外事故，应立即停止操作，并采取相应的紧急措施，及时寻求医疗救助。
总之，猪瘟疫苗专用牛血清的安全操作及保养规程是确保疫苗质量和保护工作人员健康与安全的重要环节。
在使用过程中，要严格按照规程操作，定期检查和保养，以减少操作风险、保证疫苗质量和维护人员健康。
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牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
值得关注的对象
潜在性感染的病毒： （1）隐性感染而不引起任何疾病的病毒； （2）某些持续性感染的病毒； （3）处于潜伏状态的病毒。 由于机体生理状态（如怀孕）、外界环境的变化，机体抵 抗力下降等因素，这类病毒可能大量增殖或引起疾病的发 生。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
朊病毒
• Prusiner 1982: the plaque protein is the infectious agent (prion)
• The normal, non-infectious Protein (PrPC) is encoded by the host and is mainly expressed on lymphocytes and neurons
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
DNA病毒－－牛多型瘤病毒
BPyV倍受关注，它可能是一种人兽共患病，饲养人员、 兽医的体内有较高水平的抗体，而对大多数人群则缺乏 抵抗力。 可以感染灵长类细胞，包括人的细胞。 影响细胞培养的结果。 检测： 能用细胞感染检测，在猴肾细胞可以产生特异性的病变， 即胞浆、胞核空泡化。 PCR检测，使用特异性的引物扩增、杂交或测序。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
朊病毒
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
朊病毒
PrPC
PrPSc
Refolding model
(template directed)
Seeding model (nucleated crystallization)
PrPC
PrPSc
very slow
rapid
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脊椎动物病毒的形态－－DNA病毒
三 牛源制品的病毒安全性
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
脊椎动物病毒的形态－－RNA病毒
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
DNA病毒－－牛乳头状瘤病毒
牛乳头状瘤病毒（bovine papillomaviruses,BPV）
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血活工 艺
牛血清的重要性与生物药品的病毒安全性 牛的病原与病毒安全性关注的重点 欧盟对牛血清病毒检测的要求 病毒分类与牛的某些病毒 牛血清的病毒安全检测技术 血清的病毒清除/灭活工艺 病毒安全实验室的部分研究工作
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
RNA病毒－－口蹄疫病毒
口蹄疫病毒（FMDV）：无囊膜，20nm，人兽共患，最重 要。 能用细胞感染检测， 也可用PCR检测。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
RNA病毒－－牛病毒性腹泻病毒
牛腹泻病毒（BVDV）：有囊膜，70nm，牛群中普遍存在， 倍受关注。 能用细胞感染检测，也可用PCR检测。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
RNA病毒－－牛反转录病毒
与生物安全性相关的牛反转录病 毒有两种 牛白血病病毒（BLV） 牛免疫缺陷病病毒（BIV）
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
RNA病毒－－牛白血病病毒
牛白血病病毒（BLV）：有囊膜，100nm，牛群中普遍存 在。 未发现对人的感染性，可用PCR检测。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
重点关注两大类病毒
应该考虑生物安全性的病毒集中在两个方面：
人兽共患病病毒 与致癌、免疫抑制或严重退行疾病有关的病毒
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血清的重要性与生物药品的病毒安全性 牛的病原与病毒安全性关注的重点 欧盟对牛血清病毒检测的要求 病毒分类与牛的某些病毒 牛血清的病毒安全检测技术 血清的病毒清除/灭活工艺 病毒安全实验室的部分研究工作
rapid
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血清的重要性与生物药品的病毒安全性 牛的病原与病毒安全性关注的重点 欧盟对牛血清病毒检测的要求 病毒分类与牛的某些病毒 牛血清的病毒安全检测技术 血清的病毒清除/灭活工艺 病毒安全实验室的部分研究工作
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血清的病毒安全检测技术
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血清的重要性与生物药品的病毒安全性 牛的病原与病毒安全性关注的重点 欧盟对牛血清病毒检测的要求 病毒分类与牛的某些病毒 牛血清的病毒安全检测技术 血清的病毒清除/灭活工艺 病毒安全实验室的部分研究工作
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛的感染性疾病
细菌性疾病：结核杆菌病、布鲁氏杆菌病、沙门氏菌病、
牛血清的病毒安全检测 与病毒灭活工艺
2020/11/22
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血清的重要性与生物药品的病毒安全性 牛的病原与病毒安全性关注的重点 欧盟对牛血清病毒检测的要求 病毒分类与牛的某些病毒 牛血清的病毒安全检测技术 血清的病毒清除/灭活工艺 病毒安全实验室的部分研究工作
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛可以感染的病毒
RNA病毒
口蹄疫病毒（FMDV） 牛病毒性腹泻病毒（BVDV）
轮状病毒（Rotavirus） 呼肠孤病毒（Reovirus）
牛白血病病毒（BLV） 牛免疫缺陷病病毒（BIV）
蓝舌病病毒（BTV）
牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）
狂犬病病毒（RV）等
倍受关注的朊病毒
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
牛血清的重要性与生物药品的病毒安全性
WHO和各国管理当局、行业协会等高度关注医药产品生产 使用细胞基质的安全问题，尤其是潜在病毒污染的问题。 疫苗病毒安全性的可能污染途径：活疫苗种毒的污染，制 备工艺中原、敷料的污染和其他需要考虑的问题。 其中，牛血清的质量控制与病毒安全检测最受关注。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
DNA病毒－－牛腺病毒
牛腺病毒（Adenoviruses） 分类地位：腺病毒科，哺乳动物腺病毒属 形态特征：无囊膜，90nm 理化特性：对酸、碱、有机溶剂有抵抗 分2个主要亚群，10个血清型。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
DNA病毒－－牛腺病毒
尚不清楚是否人兽共患，但可以转化人细胞。 能用细胞感染检测，1群感染牛胚肾细胞并迅速产生细胞 病变，2群感染牛睾丸细胞，有时需要盲传。 也可用PCR检测。
分类地位：乳多空病毒科，乳头状瘤病毒属
形态特征：无囊膜，55nm
理化特性：对酸、碱、有机溶剂有抵抗
A model of the papillomavirus capsid
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
DNA病毒－－牛乳头状瘤病毒
根据交叉杂交试验，可以感染牛的乳瘤病毒分为6个主要 亚群，每一种病毒在牛的皮肤产生特定的病变。 某些亚群可以转化人细胞，这些病毒与牛的消化道、生 殖道和眼部肿瘤等的发展有关。 不能用细胞感染检测，可用PCR检测。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
DNA病毒－－牛痘病毒
牛痘病毒（Poxviruses）：有囊膜，300nm，有2个种病毒 必须考虑。 假牛痘病毒 牛丘疹性口炎病毒
Orf virus
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
DNA病毒－－牛痘病毒
假牛痘病毒: 引起牛乳房和乳头增生性病变、挤奶工皮肤丘疹。 牛丘疹性口炎病毒 引起牛口腔粘膜、鼻镜、鼻孔上皮溃疡，人的手、臂丘疹。 牛源制品应该检测病毒。 能用细胞感染检测，也可用PCR检测。
• The infectious prion protein (PrPSc) has the same amino acid composition, but is resistant to proteases and tends to polymerize
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
朊病毒
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
DNA病毒－－牛多型瘤病毒
牛多型瘤病毒（bovine polyomaviruses,BPyV） 分类地位：乳多空病毒科，多型瘤病毒属 形态特征：无囊膜，45nm 理化特性：对酸、碱、有机溶剂有抵抗 PCR检测，BPyV在胎牛血清中的污染批次达70％，可从某 些批次的血清中分离到病毒。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
DNA病毒－－牛疱疹病毒
牛疱疹病毒（Herpesviruses）：有囊膜，150nm，有4个 种。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
DNA病毒－－牛疱疹病毒
BHV-1:引起牛鼻气管炎，牛源制品应该检测病毒。能用 细胞感染检测，也可用PCR检测。 BHV-2:引起牛溃疡性乳头炎，奶制品的污染。 BHV-3:引起牛恶性卡他热，具有异源宿主感染性。 BHV-5:引起牛脑炎。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
RNA病毒－－牛免疫缺陷病病毒
牛免疫缺陷病病毒（BIV）：有囊膜，120nm，国内牛群 阳性率2.32％，对人和牛的危害不大。用蛋白印迹法检 测，也可用PCR检测。
牛血清的病毒安全检测与病毒灭活工 艺
朊病毒
多种动物和人的亚急性海绵样脑病与羊痒疫因子有关 人的库鲁病(Kuru)、克-雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、 阿耳茨海默病(Alzheimer disease)、格-史氏综合征 (Gerstmann-Straussler syndrome) 羊的痒疫(Scrapie)，水貂传染性脑病(Transmissible mink encephalopathy)，黑尾鹿和糜鹿的慢性消耗病(Chronic wasting disease of mule deer and elk)，牛海绵状脑病(Bovine spongiform encephalpopathy)以及某些公园动物的相关感染 症。