网织红细胞计数SOP(手工法)
临检--网织红细胞计数(Ret)
网织红细胞计数（Ret）【定义】网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞，属于尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸（RNA），经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。
【分型】根据网织红细胞发育阶段分为4型，分别是：Ⅰ型（丝球型）：红细胞充满网状物，见于骨髓。
Ⅱ型（网型）：红细胞网状物结构松散，见于骨髓。
Ⅲ型（破网型）：红细胞网状物结构稀少，呈不规则枝点状排列，见于外周血。
Ⅳ型（点粒型）：红细胞内为分散的细颗粒、短丝状网状物，见于外周血。
【检测原理】1.普通光学显微镜法2.网织细胞计数仪法和血液分析仪法【操作方法】1.显微镜试管法操作（1）加染液：于试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，再加新鲜血2滴，立即混匀，置37℃下15～20min。
（2）制片：取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。
（3）观察：在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。
（4）计数：在油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。
（5）计算：网织红细胞分数=（计数的网织红细胞数）/1O00，网织红细胞绝对值（×109/L）=红细胞数×1012/L×网织红细胞分数。
2.显微镜法注意事项（1）网织红细胞必须活体染色，WH0推荐使用新亚甲蓝染液，其染色力强且稳定。
煌焦油蓝染液操作简单、费用低廉，但易产生沉淀、工作效率不高、精度差。
染液与血液比例以1:1为宜，严重贫血时，可适量增加血量。
（2）为提高网织红细胞计数精度和速度，ICSH推荐使用Miller窥盘，方法是将Miller 窥盘置于目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位（3）用小方格（A）计数红细胞，大方格（B）计数网织红细胞，按下式计算：（4）注意鉴别网织红细胞与HbH包涵体。
Ret为蓝绿色网状或点粒状物质，分布不均，HbH包涵体为蓝绿色圆形小体，均匀散布于整个红细胞内。
医院实验室网织红细胞显微镜计数法操作规程
XXXX医院
实验室网织红细胞显微镜计数法操作规程
一、目的
用于辅助某些贫血的诊断及疗效观察。
二、试验原理
网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
三、试验试剂
10g/L煌焦油蓝溶液：煌焦油蓝1g，枸橼酸钠0.4g，氯化钠0.85g，溶于双蒸馏水加至100ml,完全溶解后过滤备用。
四、检测方法
1、于小试管中滴加1滴煌焦油蓝染液。
2、加入末梢血2滴于上述试管中，混匀。
3、静置15-20min后，取用1滴制成薄片。
4、油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分比或绝对值报告。
五、参考值
成人：0.005-0.015
新生儿：0.03-0.06
六、临床意义
增加：表示骨髓造血功能旺盛，各型贫血均可增多，溶血性贫血增。
网织红细胞计数法的流程
网织红细胞计数法的流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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(三)网织红细胞计数
三、操作步骤
1.于小试管中加入染液2滴。 2.在已加入染液的小试管中加入新鲜全血2滴，立即混匀，室温下 静置15-20min。
3.制片：去混匀染色血液1滴制成薄血涂片，自然干燥。
4.观察：低倍镜下观察红细胞分布和染色情况，选择红细胞分布 均匀、着色好的部位。
5.计数：在油镜下，在Miller窥盘下计数。
临床应用： • ＞3提示溶血性贫血或急性失血性贫血； • ＜2提示为骨髓增生低下或红细胞系成熟障碍性贫 血。
（2）评价疗效
网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维
生素B12或叶酸治疗2~3d后，网织红细胞计数值开始上升，
7~10d达到最高(10%左右)；两周以后逐渐降至正常水平， 红细胞、血红蛋白开始升高。 骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造血功能，网 织红细胞计数值上升。
思考题
一溶血性贫血患者，红细胞计数2.6x1012/L，血细胞比 容0.29，网织红细胞计数相对值为35%，如何报告网织 红细胞检测结果？
（2）显微成像系统：
图2-21 Miller窥盘结构示意图
试剂器材
1、试剂 新亚甲蓝溶液 2、器材 静脉采血用具、EP管、载玻片、推片、 显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘 或直径约20 mm（较目镜内径稍小）的圆形硬 纸片（正中央开一边长为3mm的菱形或正方形 小孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数）
【方法】
1．普通显微镜法 活体染料的碱性着色基团可与
网织红细胞RNA的磷酸基结合，使RNA胶体间的负电
荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或网状结
构。 2．血液分析仪法 特殊染料与网织红细胞中RNA 结合后进行RNA定量，可精确计数网织红细胞占成熟 红细胞的百分数（Ret%），并可根据RNA含量将网
网织红细胞计数
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3．作为病情观察的指标
溶血性贫血及失血性贫血，治疗过程中 连续观察网织红细胞计数，可作为判断 病情变化的参考指标。 如治疗后网织红细胞逐渐降低，表示溶 血或出血已得到控制。 如网织红细胞持续不减低，甚至更增高， 表示病情未得以控制，甚至加重。
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四、红细胞沉降率测定
红细胞沉降率（ESR），简称血沉率 指红细胞在一定条件下沉降的速率。 正常情况下，红细胞在血浆中具有相对 的悬浮稳定性，沉降极其缓慢。 在病理情况下，血沉率可明显增快。
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临床意义
2．血细胞比容减低 见于各种贫血。 不同类型的贫血，红细胞体积大小不同， 故血细胞比容的减少与红细胞数量减少 并不—定成正比。 因此必须将红细胞数、血红蛋白量和血 细胞比容三者结合起来，计算红细胞各 项平均值才有参考意义。
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(二)红细胞平均值的计算
1．平均红细胞容积(MCV) 指每个红细胞的平均体积，以飞升（ fl ）为单 位。
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参考值
魏氏(Westergoen)法： 成年男性0~15mm/1小时末
成年女性0~20mm/1小时末
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临床意义
(一)生理性变化 12岁以下的儿童血沉略快。 妇女月经期血沉略增快，可能与子宫内膜破损 及出血有关。 妊娠3个月以后至分娩后3周血沉快，与生理性 贫血及纤维蛋白原含量增加等有关。 老年人血浆纤维蛋白原含量增加血沉加快。 高原地区居民红细胞增多，血沉低于平原地区。
网织红细胞计数操作规程
网织红细胞计数操作规程目的：本实验旨在规范网织红细胞计数的标准操作，以确保实验数据的准确性。
原理：网织红细胞是未完全成熟的红细胞，其包体较一般红细胞稍大，胞浆中尚有嗜碱性残留物质，可被煌焦油蓝等染成蓝色颗粒状、线状及网状结构物。
网织红细胞的数量可用百分率或每立方毫米血液中的绝对值数来表示。
材料：煌焦油蓝（灿烂甲酚蓝）、枸橼酸钠、生理盐水、香柏油、载物片（玻璃片）、推片（磨去边的玻璃片）、试管（2ml）、毛细吸管或枪头（200微升）、光学显微镜。
操作规程：染色液配制：将煌焦油蓝0.4g和3.5%枸橼酸钠20ml研磨溶解后加入生理盐水至100ml，过滤备用。
室温下可保存6个月。
血膜片制备：1.染色：取试管一支，用毛细管或枪头于其中加入染液2～5滴，然后再加入新鲜血液1滴轻摇混合，染色10～15min。
2.制片：取载物片一片，用毛细管或枪头吸取血液染色液1小滴于载物片上，并用推片约45度角推制成舌型血膜片，自然干燥备用。
3.观察：用显微镜观察，取血膜片滴入香柏油1滴，将血膜片置于显微镜载物台，用油镜观察网织红细胞。
4.计数：取计数器在油镜下检查计数红细胞，即计数红细胞中网织红细胞的数量，检查计数1000个红细胞中网织红细胞的数量，并得出千分率再除以10即为百分率。
计算公式：百分率=1000个红细胞中网织红细胞的数量/1000注意事项：1.载物片使用前必须经过酸或碱液浸泡脱脂处理后方可使用。
2.血膜片制备需要反复练推片，熟练推制血膜片的技巧。
3.血膜片的厚薄要适中，过厚或过薄均无法进行观察。
4.室温过低时，血液染色时间要适当延长，以确保细胞着色更充分。
5.血膜片需在3天内检查计数，否则其网状结构会褪色，不易观察清晰。
实验六 网织红 血小板计数
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二、血小板计数
（一）原理 将血液用适当的稀释液稀释后，充入计数池中，计数一定 体积内血小板的数目，再换算成每升血液中的血小板数。
（二）试剂与器材
分为破坏红细胞稀释液：如草酸铵溶液
不破坏红细胞稀释液：如红细胞稀释液
血细胞计数板
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（三）操作步骤 1、2ml红细胞稀释液 2、采集10ul末梢血，充分混匀 3、混匀的血小板悬液充池，静置10min，高倍 镜下计数中央大方格的血小板数。 4、计算：N* 10* 200* 106/L
参考范围
（100-300）*109/L
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（四）注意事项
1、针刺应稍深，保证采血顺畅，忌挤压，操作要迅速，无需擦掉第一 滴血，若同时做其他实验时，先做血小板计数。
2、所用器材和稀释液必须清洁，无菌无尘。器材应标准化
3、血小板易聚集，充池前应充分混匀但不能用力太大，会破坏血小板 4、待血小板下沉后再计数，否则结果偏低 5、应在1h内计数完毕，否则结果偏低 6、注意血小板与杂质、结晶等区别。
剂成本较高。
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临床应用
网织红细胞计数是反映骨髓红细胞造血功能的重要指标 网织红细胞计数增多 ①溶血性贫血 ②放疗化疗后，造血恢复 ③贫血治疗有效时 ④脾功能亢进 ⑤红细胞生成素治疗后 ⑥骨髓移植功能良好的指标 网织红细胞计数降低 ①再生障碍性贫血
②慢性病性贫血，如恶性肿瘤、慢性肾衰、内分泌疾病等
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（2） 血小板增多：数量超过400×109/L。原因：
慢性粒细胞白血病；
②急性大出血、急性溶血； ③脾切除后； ④感染及炎症性疾病：如骨髓炎、结核病、急性风湿热、类风关 ⑤肿瘤；不明原因的血小板增高标本中，约50％来自恶性疾病患者 ⑥其他：外科手术或创伤后、肾上腺皮质醇增多症、肾病综合征
红细胞计数SOP(手工法)
红细胞计数SOP（手工法）文件编号: xxxx医院 XXXX临床检验实验室版序:xxxx页码:第1 页，共2 页红细胞计数(RBC)[检测原理]用等渗稀释液将血液稀释并充入计数池后，于显微镜下计数。
[试剂与器械]1，试剂: 赫姆(Hayem)液:氯化钠 1.0g结晶硫酸钠(Na2SO4.10H2O) 5.0g(或无水硫酸钠 2.5g)氯化高汞 0.5g蒸馏水加至 200ml溶解后加20g/L伊红水溶液1滴，过滤后用。
2，器械:(1) 微量计数板(2) 显微镜(3) 微量吸管(MC)[标本的收集与处理]1，用EDTA-K2 0 .2ul抗凝静脉血1ml，轻轻摇动抗凝。
凝集，溶血，血量小于0.5 ML或抽血时间超过四小时为不合格标本，拒收。
2，直接采集未稍血液。
[操作步骤]1.取小试管1支，加红细胞稀释液2.0 ml 。
2.用清洁干燥微量吸管取末梢血10ul 。
3.擦去管尖内外部余血，轻轻吹入红细胞稀释液底部，再轻吸上层清液嗽洗吸管2--3次，然后立即混匀。
4.充池后待2--3 min，用高倍镜依此计数中央大方格内四角和正中5个中方格内的红细胞。
按数上不数下，数左不数右的原则进行目视计数。
[结果计算]红细胞/L=5个中方格内红细胞数 , 5 , 10 , 201 , 10E6(或红细胞数/L=5个中方格内红细胞 /100 , 10E12 )文件编号: xxxx医院 XXXX临床检验实验室版序:xxxx页码:第2 页，共2 页红细胞计数(RBC)[质量控制]1，如无上述稀释液是，也可用新鲜配制的等渗盐水代用。
2，正常数值范围内，两次红细胞计数相差不得超过 5% 。
3，其他注意点见白细胞计数。
4，光电比浊法在我国曾盛行一时，该法缺点太多，诸如红细胞体积太小，血红蛋白含量多少，红细胞冷凝，自凝，光电比色计性能，电压高低等都会影响结果，今后不能使用。
5，不允许以血红蛋白浓度来折算红细胞数。
6，所用微量吸管和计数板必须为校正品。
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1，于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。
2，加入末梢血2滴于上述试管中，混匀。
3，静置15--20min后，取用1滴制成薄片。
4，油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。
（三）质量控制：
1，活体染色时间不能过短，室温低时，放37 C温箱。
2，最好制片2张，每张计数500个红细胞，避免分布不均匀引起的误差。涂片要薄而均匀，不使红细胞重叠。
2，直接采集未稍血液。
[操作步骤]
一，百分计数；
（一）试剂：
1，10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液：煌焦油蓝1g，枸橼酸钠0.4g，氯化钠0.85g溶于双蒸馏水100ml中，过滤后备用；
2，10g/L煌焦油蓝ACD溶液：取ACD保养液（血库用）20ml，用1mol/L NaOH调至PH 7.5左右，加入研细的煌焦油蓝200mg，溶解后过滤备用。
新生儿：0.03--0.06 ( 3%--6% )
xxxx医院
临床检验实验室
文件编号：
XXXX
网织红细胞计数（Ret）
版序：xxxx
页码：第2页，共2页
二，网织红细胞绝对值计数
网织红细胞% X红细胞/ul
网织红细胞/ul=------------------------------
100
参考值：
（24--84）＊ 10E9/L（2.4--8.4万/ul）
xxxx医院
临床检验实验室
文件编号：
XXXX
网织红细胞计数（Ret）
版序：xxxx
页码：第1页，共2页
[检测原理]
网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
[标本的收集与处理]
1，用EDTA-K2 0 .2ul抗凝静脉血1ml，轻轻摇动抗凝。凝集，溶血，血量小于0.5 ML或抽血时间超过四小时为不合格标本，拒收。
[临床意义]
1，增加：表示骨髓造血功能旺盛，各型贫血均可增多，溶血性贫血增加尤为显著，恶性贫血或缺铁性贫血应用维生素B12或供铁质后显著增多，表示有疗效。
2，减少：再生障碍性贫血。
3，为计数方便，可于目镜中放一中间有孔之硬纸片，缩小视野，便于计数。
4，试剂定期重配，以免变质沉淀。
5，用瑞氏--姬姆萨染液复染后可使网织红细胞计数结果减少。
6，因操作误差大，不宜用波片直接染色法。
7，网织红细胞也可用荧光染色或流式细胞仪计数。
8，抗凝血标本应尽可能快地制片。
（四）参考范围：
成人：0.005