中药制剂分析第五章、中药制剂中各类化学成分的分析共136页PPT资料
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第五章各类中药分析
b.生物碱盐在水或乙醇介质中，用强酸溶液 滴定。一般使其溶于90％乙醇溶液中，可用标 准酸乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。
重量分析法
将生物碱从中药制剂中提取，用适宜的方法 使其生成沉淀，干燥后直接称重。
优点：计算简便，不用换算因数，不必考虑生 物碱的分子量。
缺点：挥发性生物碱，蒸发提取溶剂或加热、 干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离时可 发生水解的生物碱不可用此法。取样量大，操 作时易乳化，费时。
§1 生物碱类成分分析
高效液相色谱
端基封口基团
键合相(配体)： C18
残留硅羟基
硅胶基质
§2 黄酮类成分分析
黄酮类化合物 为自然界广泛存在 的一大类化合物， 多具有颜色，在植 物体内大部分与糖 结合成甙，一部份 以游离形式存在。
金丝桃
OH
HO
O
OH
OH O
木犀草素
黄芩
HO
O
HO OH O
黄芩素
§2 黄酮类成分分析
§2 黄酮类成分分析
2.4 含量测定 2.4.1 总黄酮类成分的测定
黄酮类化合物具有特定的紫外吸收Ⅰ带在300～ 400nm,Ⅱ带在240 ～ 285nm，提纯后可直接测定总黄 酮时常用芦丁作对照品。
复杂体系中与金属盐类试剂生成配合物，常用的是 氯盐反应，试剂为三氯化铝和硝酸铝。
§2 黄酮类成分分析
2.4 含量测定 2.4.2 单体黄酮成分的含量测定
薄层色谱法
薄层色谱法是测定中药制剂中单体黄酮类成分的关键是 分离。样品经有机溶剂或水提取后，可用硅胶、纤维素 或聚酰胺进行层析，以达到分离的目的。层析后可TLC比色法测定；也可以用薄层扫描仪直接测定。
§2 黄酮类成分分析
2.4 含量测定
重量分析法
将生物碱从中药制剂中提取，用适宜的方法 使其生成沉淀，干燥后直接称重。
优点：计算简便，不用换算因数，不必考虑生 物碱的分子量。
缺点：挥发性生物碱，蒸发提取溶剂或加热、 干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离时可 发生水解的生物碱不可用此法。取样量大，操 作时易乳化，费时。
§1 生物碱类成分分析
高效液相色谱
端基封口基团
键合相(配体)： C18
残留硅羟基
硅胶基质
§2 黄酮类成分分析
黄酮类化合物 为自然界广泛存在 的一大类化合物， 多具有颜色，在植 物体内大部分与糖 结合成甙，一部份 以游离形式存在。
金丝桃
OH
HO
O
OH
OH O
木犀草素
黄芩
HO
O
HO OH O
黄芩素
§2 黄酮类成分分析
§2 黄酮类成分分析
2.4 含量测定 2.4.1 总黄酮类成分的测定
黄酮类化合物具有特定的紫外吸收Ⅰ带在300～ 400nm,Ⅱ带在240 ～ 285nm，提纯后可直接测定总黄 酮时常用芦丁作对照品。
复杂体系中与金属盐类试剂生成配合物，常用的是 氯盐反应，试剂为三氯化铝和硝酸铝。
§2 黄酮类成分分析
2.4 含量测定 2.4.2 单体黄酮成分的含量测定
薄层色谱法
薄层色谱法是测定中药制剂中单体黄酮类成分的关键是 分离。样品经有机溶剂或水提取后，可用硅胶、纤维素 或聚酰胺进行层析，以达到分离的目的。层析后可TLC比色法测定；也可以用薄层扫描仪直接测定。
§2 黄酮类成分分析
2.4 含量测定
中药制剂分析中药制剂中各类化学成分分析
中药制剂分析中药制剂中各类化学成分分析中药制剂是指由中药原材料制备而成的药物制剂。
中药制剂中的各类化学成分分析是中药质量控制的重要内容，它可以帮助我们了解中药制剂的化学组成及含量，从而确保中药制剂的质量和安全性。
一、中药制剂中的活性成分分析：中药制剂中的活性成分是指具有治疗作用的成分，如有效成分、药效成分等。
这些成分在中药制剂中的含量直接关系到其药效的发挥，因此需要对其进行定量分析。
常用的分析方法包括色谱法（如高效液相色谱、气相色谱等）和光谱法（如紫外分光光度法、红外光谱法等），以及质谱法等。
通过这些分析方法，可以准确地测定中药制剂中活性成分的含量，从而确保中药制剂的疗效。
二、中药制剂中的非活性成分分析：中药制剂中的非活性成分是指除了活性成分外的其他组分，如辅料、填料、稳定剂等。
这些成分对中药制剂的质量和稳定性起着重要作用，因此也需要进行分析。
常用的分析方法包括色谱法、光谱法等。
通过这些分析方法，可以准确地测定中药制剂中非活性成分的含量，从而确保中药制剂的质量和稳定性。
三、中药制剂中的有毒成分分析：中药制剂中有时会存在一些有毒成分，如重金属、农药残留等，这些成分对人体健康有一定的危害作用。
因此，对中药制剂中的有毒成分进行分析，可以及时发现并去除有毒成分，确保中药制剂的安全性。
常用的分析方法包括原子吸收光谱法、气相色谱法等。
通过这些分析方法，可以准确地测定中药制剂中有毒成分的含量，从而确保中药制剂的安全性。
四、中药制剂的质量控制：中药制剂的质量控制是指通过分析中药制剂中的各类化学成分，确保中药制剂的质量和安全性。
常用的质量控制指标包括含量测定、质量比、指纹图谱等。
通过对这些质量控制指标的测定，可以准确地评估中药制剂的质量，从而保证中药制剂的疗效和安全性。
总之，中药制剂中各类化学成分的分析是中药质量控制的重要内容，它可以准确地测定中药制剂中的各类成分的含量，从而保证中药制剂的质量和安全性。
在中药制剂的研究和生产中，需要用到各种先进的分析方法和仪器，以准确地测定中药制剂中的各类化学成分，从而为中药制剂的质量控制提供有力的支持。
中药学-中药制剂中各类化学成分分析PPT教学课件
（）
(二)生物碱的色谱鉴别 1．薄层色谱法 首先用适当的溶剂提取生物碱，提取液经浓缩 后直接或经过必要的净化后，点在薄层板上，层析后喷洒生物碱显 色剂，再根据生物碱的特性，选择特异的颜色反应或荧光，并应用 纯品对照，或标准药材对照，同时须作阴性对照后确定。如用硅胶 为吸附剂时，一般应用碱性系统展开剂较多，或使生物碱的薄层分 离在碱性环境下进行。
2021/01/21测定
(一)经典化学方法 1.重量法 重量法测定中药制剂中生物碱多为测定其总生物碱的 含量。本法可用于混合总碱、未知结构或分子量相差较大的生物碱 的含量测定。缺点是挥发性生物碱不宜用此法，在蒸发提取溶剂或 加热、干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离时可发生水解的生 物碱也不可用此法。本法取样量大，得到的残渣在称量的准确度内 方可应用。应用本法要求定量的将生物碱提取完全，并尽可能除去 杂质，须注意选择合适的提取溶剂。 实例 见P135 苦参片中苦参总碱的测定
(2)两相滴定法： 因边滴边使游离生物碱溶于有机溶剂中，不
致影响终点的观察。更重要的是由于游离生物碱进入有机相，明显
地增大了生物碱盐的电离常数pKa。生物碱盐在两相中的水解为
pKa(D)=pKa - log(1+PC)，即与分配系数有关。一般的测定方法是
称取生物碱盐类溶于水中(加氯化钠少许)，然后加一定量有机溶剂，
(2)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加碘碘化钾试剂数滴，产生棕色或褐色沉淀，
BH+ + I2-K+I- → BI2HI（棕、褐色） + K+
(3)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加碘化 铋钾、碘化汞钾试剂数滴，产生红棕色沉淀、类白色沉淀。
BH+ + BiI3KI → BBiI3HI（红棕色） + K+ 2B02H1/+01/2+1 HgI2KI → BHgI22HI（类白色） + K+ 第一课件网 1
(二)生物碱的色谱鉴别 1．薄层色谱法 首先用适当的溶剂提取生物碱，提取液经浓缩 后直接或经过必要的净化后，点在薄层板上，层析后喷洒生物碱显 色剂，再根据生物碱的特性，选择特异的颜色反应或荧光，并应用 纯品对照，或标准药材对照，同时须作阴性对照后确定。如用硅胶 为吸附剂时，一般应用碱性系统展开剂较多，或使生物碱的薄层分 离在碱性环境下进行。
2021/01/21测定
(一)经典化学方法 1.重量法 重量法测定中药制剂中生物碱多为测定其总生物碱的 含量。本法可用于混合总碱、未知结构或分子量相差较大的生物碱 的含量测定。缺点是挥发性生物碱不宜用此法，在蒸发提取溶剂或 加热、干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离时可发生水解的生 物碱也不可用此法。本法取样量大，得到的残渣在称量的准确度内 方可应用。应用本法要求定量的将生物碱提取完全，并尽可能除去 杂质，须注意选择合适的提取溶剂。 实例 见P135 苦参片中苦参总碱的测定
(2)两相滴定法： 因边滴边使游离生物碱溶于有机溶剂中，不
致影响终点的观察。更重要的是由于游离生物碱进入有机相，明显
地增大了生物碱盐的电离常数pKa。生物碱盐在两相中的水解为
pKa(D)=pKa - log(1+PC)，即与分配系数有关。一般的测定方法是
称取生物碱盐类溶于水中(加氯化钠少许)，然后加一定量有机溶剂，
(2)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加碘碘化钾试剂数滴，产生棕色或褐色沉淀，
BH+ + I2-K+I- → BI2HI（棕、褐色） + K+
(3)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加碘化 铋钾、碘化汞钾试剂数滴，产生红棕色沉淀、类白色沉淀。
BH+ + BiI3KI → BBiI3HI（红棕色） + K+ 2B02H1/+01/2+1 HgI2KI → BHgI22HI（类白色） + K+ 第一课件网 1
中药制剂分析.pptx
优点：提取效率高，所需溶剂少，提取杂质少，操作 简便。
缺点：受热易分解的成分不宜使用。
保和丸（陈皮等）中橙皮苷测定 加甲醇，加热回流至提取液无色为止。
11
（四）超声提取法
• 原理：超声波的助溶作用。 • 优点：操作简便，提取速度快。 ※ 需对超声频率、提取时间、提取溶媒等
进行考察。 ※ 超声波可能引起供试品成分的改变。
8
优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少。 缺点：费时（12~24 h）、费溶剂（10~50倍）。
灵宝护心丹（牛黄、麝香等）中胆酸的含量测定 取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶
中，加石油醚（60-90℃）4ml，浸泡1小时，滤过，滤渣及滤 纸挥去溶剂，放回锥形瓶中，精密加入冰醋酸无水乙醇溶液 （1 → 10）15ml，摇匀，密塞，称定重量，浸泡12小时，再 称定重量，用冰醋酸无水乙醇溶液（1 → 10）补足减失的重 量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
15
（二）蒸馏法
利用某些被测成分具有挥发性，可采用蒸馏法，收集馏出 液进行含量测定，或某些成分经蒸馏分解生成挥发性成分，利 用分解产物（要求结构明确）进行测定。
• 适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、小分子 的生物碱、丹皮酚等。
• 最常用水蒸气蒸馏法 –共水蒸馏法(直接加热法) –通水蒸气蒸馏法 –水上蒸馏法
第五章
中药制剂的含量测定
第五章 中药制剂的含量测定
（Content Determination）
★ 含量测定的定义和意义
中药制剂的含量测定系指用化学、物理学或生物学的方 法对中药制剂含有的有关成分进行检测，以评价中药制剂 质量的优劣。
随着现代分析技术的发展和应用，中药定量分析在系统 性、科学性和先进性方面较以前有大幅度提高，在量化指 标方面正在由测定指标成分向测定活性成分转变，由单一 指标成分向有效成分、多指标成分转变。
缺点：受热易分解的成分不宜使用。
保和丸（陈皮等）中橙皮苷测定 加甲醇，加热回流至提取液无色为止。
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（四）超声提取法
• 原理：超声波的助溶作用。 • 优点：操作简便，提取速度快。 ※ 需对超声频率、提取时间、提取溶媒等
进行考察。 ※ 超声波可能引起供试品成分的改变。
8
优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少。 缺点：费时（12~24 h）、费溶剂（10~50倍）。
灵宝护心丹（牛黄、麝香等）中胆酸的含量测定 取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶
中，加石油醚（60-90℃）4ml，浸泡1小时，滤过，滤渣及滤 纸挥去溶剂，放回锥形瓶中，精密加入冰醋酸无水乙醇溶液 （1 → 10）15ml，摇匀，密塞，称定重量，浸泡12小时，再 称定重量，用冰醋酸无水乙醇溶液（1 → 10）补足减失的重 量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
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（二）蒸馏法
利用某些被测成分具有挥发性，可采用蒸馏法，收集馏出 液进行含量测定，或某些成分经蒸馏分解生成挥发性成分，利 用分解产物（要求结构明确）进行测定。
• 适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、小分子 的生物碱、丹皮酚等。
• 最常用水蒸气蒸馏法 –共水蒸馏法(直接加热法) –通水蒸气蒸馏法 –水上蒸馏法
第五章
中药制剂的含量测定
第五章 中药制剂的含量测定
（Content Determination）
★ 含量测定的定义和意义
中药制剂的含量测定系指用化学、物理学或生物学的方 法对中药制剂含有的有关成分进行检测，以评价中药制剂 质量的优劣。
随着现代分析技术的发展和应用，中药定量分析在系统 性、科学性和先进性方面较以前有大幅度提高，在量化指 标方面正在由测定指标成分向测定活性成分转变，由单一 指标成分向有效成分、多指标成分转变。
第5章-中药制剂中各类化学成分分析解剖
2021/6/11
③异羟肟酸铁反应： 特点：含酯键的生物碱在碱性介质中加热，酯键水解后 产生的羧基与羟胺反应生成异羟肟酸，异羟肟酸再与 Fe3+生成紫红色的异羟肟酸铁，在一定浓度符合郎伯比 尔定律，可用分光光度法进行含量测定。 注意事项：适用于含酯键的生物碱的含量测定，但供试 品溶液中不能含有其他酯类或羧酸类成分。
2、生物体内普遍存在的含氮有机化合物，氨基酸、蛋白 质、核酸及某些含氮维生素除外。
3、植物里存在的生物碱的含量差别较大，但生物碱大多 有明显的生理活性，故常用该成分作定性定量依据。在 植物体中，生物碱往往和有机酸结合成盐的形式存在。
4、含生物碱的中药多分布在防己科、罂粟科、毛茛科、 豆科、小檗科等双子叶植物中，具体药材和相应成分见 书P96～97.
2021/6/11
7、紫外光谱特征： ①结构中有共轭体系的生物碱均有紫外吸收。 ②结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生 物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的pH值有关。
2021/6/11
三、定性鉴别： （一）一般理化鉴别：主要应用生物碱沉淀反应 (1)生物碱的酸性水溶液或稀醇溶液中，滴加硅钨酸生成淡黄 色或灰白色沉淀。 (2)生物碱的酸性水溶液或稀醇溶液中，滴加碘-碘化钾试剂 数滴，产生棕色或褐色沉淀。
4、气相色谱法：适用于具挥发性且加热不分解的生物碱 的分离和鉴定。
2021/6/11
四、含量测定： （一）总生物碱含量测定： 1、化学反应法：使用此法，要求样品供试液中总生物碱成 分纯度高。常用于处方药味少，内含成分简单的制剂。包括 重量分析法和容量分析法（滴定分析法），其中酸碱滴定法 最常用。 酸碱滴定法：①游离生物碱不溶于水，可先将生物碱溶于过 量标准酸溶液中，再用标准碱溶液回滴。 ②生物碱盐在水或乙醇介质中用强碱溶液滴定。一般使其溶 于90％乙醇溶液中（因在70%～90%乙醇介质中终点比在水中 明显），可用标准碱乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。 ③若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法。
③异羟肟酸铁反应： 特点：含酯键的生物碱在碱性介质中加热，酯键水解后 产生的羧基与羟胺反应生成异羟肟酸，异羟肟酸再与 Fe3+生成紫红色的异羟肟酸铁，在一定浓度符合郎伯比 尔定律，可用分光光度法进行含量测定。 注意事项：适用于含酯键的生物碱的含量测定，但供试 品溶液中不能含有其他酯类或羧酸类成分。
2、生物体内普遍存在的含氮有机化合物，氨基酸、蛋白 质、核酸及某些含氮维生素除外。
3、植物里存在的生物碱的含量差别较大，但生物碱大多 有明显的生理活性，故常用该成分作定性定量依据。在 植物体中，生物碱往往和有机酸结合成盐的形式存在。
4、含生物碱的中药多分布在防己科、罂粟科、毛茛科、 豆科、小檗科等双子叶植物中，具体药材和相应成分见 书P96～97.
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7、紫外光谱特征： ①结构中有共轭体系的生物碱均有紫外吸收。 ②结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生 物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的pH值有关。
2021/6/11
三、定性鉴别： （一）一般理化鉴别：主要应用生物碱沉淀反应 (1)生物碱的酸性水溶液或稀醇溶液中，滴加硅钨酸生成淡黄 色或灰白色沉淀。 (2)生物碱的酸性水溶液或稀醇溶液中，滴加碘-碘化钾试剂 数滴，产生棕色或褐色沉淀。
4、气相色谱法：适用于具挥发性且加热不分解的生物碱 的分离和鉴定。
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四、含量测定： （一）总生物碱含量测定： 1、化学反应法：使用此法，要求样品供试液中总生物碱成 分纯度高。常用于处方药味少，内含成分简单的制剂。包括 重量分析法和容量分析法（滴定分析法），其中酸碱滴定法 最常用。 酸碱滴定法：①游离生物碱不溶于水，可先将生物碱溶于过 量标准酸溶液中，再用标准碱溶液回滴。 ②生物碱盐在水或乙醇介质中用强碱溶液滴定。一般使其溶 于90％乙醇溶液中（因在70%～90%乙醇介质中终点比在水中 明显），可用标准碱乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。 ③若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法。
药物分析《中药制剂的分析》PPT
产过程中质量保证的首要环节。其质量
控制应严格按国家药品标准执行。
（二） 液体制剂 用药材提取物制备的液体制剂 合剂、糖浆剂、酒剂、茶剂、酊剂 滴鼻剂、滴眼剂、露剂、搽剂等 （无植物组织与细胞，故无显微鉴别）
1、
合剂与口服液
合剂系指药材用水或其他溶剂，采用
适宜方法提取，经浓缩制成的内服液体制 剂（单剂量合剂也可称为“口服液”） 。 pH 装量 相对密度 微生物限度
2、散剂 一种或多种药材混合制成的粉末 状制剂，分内服和外用散剂。
检查项目
均匀度 水分 装量差异 微生物限度
均匀度 取供试品适量臵光滑纸上，平
铺约 5cm 2 ，将其表面压平，在亮处 观察，应呈现均匀的色泽，无花纹、 色斑。 水分 ≤9.0%
3、颗粒剂 药材提取物与适宜辅料或药材细粉 制成的颗粒状制剂，分为可溶性颗粒剂、 混悬性颗粒剂、泡腾性颗粒剂。
成分
常压 浓缩
减压 浓缩 51.6
逆浸透 喷雾 96.8
大黄酸葡萄糖苷 41.1
小檗碱
黄连碱 黄岑苷
34.5
6.3 77.4
37.5
12.0 77.6
94.5
93.7 98.5
2、剂型繁多，辅料干扰大 丸、散、片、锭、合、酒、酊、 膏、露、茶、栓、颗粒、糖浆等 蜡丸 蜂蜡 糊剂 糯米粉、黄米粉 胶剂 豆油、黄酒、冰糖 蜜丸 蜂蜜 曲剂 发酵
长春花 长春新碱（百万分之一）
美登木 美登木碱（千万分之一）
（二）中药制剂原料药材质量的差别 1、 中药市场混乱
同物异名 同名异物
贯众
（30多种，鳞毛蕨科、蹄盖蕨科、
紫萁科、乌毛蕨科）
同名异物现象严重： 重楼为百合科Paris polyphylla
中药制剂分析第五章、中药制剂中各类化学成分的分析 共136页
（2）离子对萃取比色法
原理：
在一定的pH介质中，有机碱与一些 酸性染料或磺酸类、酸类的阴离子，定量 的结合为有色离子对，此离子对可定量的 溶于某些有机溶剂，然后在一定的波长下 测定有机溶剂或经碱化后释放的染料的吸 收度。
1.酸性染料比色法：
BHBH
H InHIn
I nB H B H I n
在恒定的高效液相色谱条件下，各种生 物碱都具有一定的保留时间，可作为定性 鉴别的参数。一般要求取得两个色谱系统 的保留时间，或应用二级管阵列检测器作 出鉴定
四、含量测定 (一)总生物碱含量测定
1.化学分析法 包括重量分析和容量分析 主要使用酸碱滴定法
酸碱滴定法：
a.游离生物碱不溶于水，可先将生物碱溶 于过量标准酸溶液中,再用标准碱溶液回滴
b. 在pH为7的缓冲液中，使生物碱与 苦味酸结合成盐，用氯仿提取此盐，然后 再以pH为11的碱性缓冲液使氯仿中苦味酸 盐解离，并将苦味酸提取到碱性水溶液中 再进行比色。
c.直接在pH为4～5的缓冲溶液中，用 氯仿提取生物碱苦味酸盐，将氯仿提取液 直接进行比色。
3.雷氏盐比色法：
生物碱与雷氏盐生成沉淀后，将沉淀分离， 溶于丙酮，于520～526nm波长处比色测定 吸收度，换算生物碱的含量。
1．硅胶薄层色谱
硅胶分离黄酮成分遵循正相色谱层析 规律，化合物极性越强，所需溶剂的极性 越大。
其Rf值顺序如下： RCH3>RH>ROCH3>R-O-糖>ROH
常用的溶剂系统有： 甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)，分离黄酮甙
元 苯-甲醇(95∶5)，分离黄酮甙元； 苯-甲醇-乙酸(35∶5∶5)，分离黄酮甙； 氯仿-甲醇(8∶2)，分离黄酮甙元及甙；
中药制剂中各类化学成分分析PPT课件
H3C N
N
OH
N ON
H3C N ON
N N
CH3
咖啡因 （pKb14.15）
CH3
茶碱 （弱酸性）
盐酸吗啡（两性）
（3）立体结构与碱性的关系
CH3O
N N H
O
OC
OC
OCH3 OCH3
利血平（pKa 6.07）
OCH3 OCH3
OCH3
6. 紫外吸收特征
max mix A max A1 / A2 E11c%m
供试液
黄连对照药材 硅胶G 展开
盐酸小檗碱对照品
苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨
12 6
33 1
黄色荧光斑点UV365nm
为黄色荧光斑点
例 九分散
延胡索乙素
7. 旋光性 多数具有旋光性
（l） 盐酸麻黄碱、硫酸奎宁、氢溴酸山莨菪碱 （d） 盐酸伪麻黄碱、硫酸奎尼丁 （dl）硫酸阿托品
三、定性鉴别
（一）理化鉴别
生物碱
生物碱沉淀剂H+ 显 色剂 呈 色
制剂中某些干扰成分可有假阳性反应
麻黄碱不能与蛋生白物质碱、沉鞣淀质剂反应→↓
黄 连 小檗碱、药根碱、巴马丁、黄连碱 黄 柏 小檗碱、药根碱、木兰花碱 麻 黄 麻黄碱、伪麻黄碱、去甲麻黄碱、甲基麻黄碱 马钱子 马钱子碱、伪马钱子碱、番木鳖碱（士的宁）
伪番木鳖碱 制川乌 乌头碱、次乌头碱、新乌头碱 延胡索 延胡索乙素、延胡索甲素、原阿片碱、黄连碱 苦 参 苦参碱、槐定碱、槐果碱、氧化苦参碱 山豆根 苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱金雀花碱 防 己 粉防己碱、防己诺林碱、轮环藤酚碱、木兰碱
例 盐酸小檗碱
Ch.P.（2010）
【性状】本品在热水中溶解，在水或乙醇中微
中药制剂分析中药制剂中各类化学成分分析
贮存条件和有效期
温度对中药制剂中化学成…
高温可能加速中药制剂中化学成分的分解和转化 ，导致中药制剂中有效成分含量的降低。
光照对中药制剂中化学成…
光照可能引起中药制剂中化学成分的分解、氧化 等反应，从而影响中药制剂的质量。
湿度对中药制剂中化学成…
高湿度可能导致中药制剂吸湿，引起中药制剂中 化学成分水解或氧化等反应，从而影响中药制剂 的质量。
利用质谱技术对中药制剂中的化 学成分进行定性和定量分析，如 液质联用、气质联用等。
02
中药制剂中化学成分分类
生物碱类成分分析
总结词
生物碱是一类复杂的有机胺类化合物，在自 然界中多以盐的形式存在于植物中。
详细描述
生物碱类成分在中药制剂中广泛存在，具有 重要的药理作用。分析这类成分时，可以采 用薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱
检测中药制剂中的有害物质
中药制剂中的有害物质会对人体产生不良影响，通过分析中药制剂中的化学成分 ，可以检测并控制这些有害物质。
中药材及中药制剂的鉴别
通过分析中药材和中药制剂中的化学成分，可以进行真伪鉴 别和品种鉴定，确认其真实性和质量。
中药材不同产地、采收期和加工方法对中药制剂质量的影响 ：中药材的产地、采收期和加工方法等因素都会影响中药制 剂的质量，分析中药材和中药制剂中的化学成分可以研究这 些因素对中药制剂质量的影响。
03
中药制剂中化学成分检测方法
色谱技术及其应用
高效液相色谱(HPLC)
用于分离和测定中药制剂中各类化合物，如黄酮类、苯丙素类、醌类等。
气相色谱(GC)
用于分析中药制剂中挥发性化合物，如挥发油、脂肪酸、醇等。
质谱技术及其应用
质谱法(MS)
最新中药制剂分析_第五章-中药制剂定量分析技术【医学课件】-药学医学精品资料
第二节 仪器分析法
• 一、HPLC • 二、GC • 三、TLCS • 四、毛细管电泳法 • 五、UV-VIR • 六、AAS
一、HPLC
• （一）基本原理
• 1. 塔板理论 用于计算理论塔板数及理论塔板高度，衡量色谱柱的柱效。在系 统适用性试验中，其理论塔板数不得低于各品种项下规定的最小理论塔板数。
一HPLC
• 反相键合相色谱的流动相常选用下述三种；①部分含水溶 剂：以水为基础溶剂，再加入一定量可与水互溶的有机极 性调节剂(如甲醇、乙脂、四氢呋喃)，有机极性调节剂的 性质及其与水的比例对保留值和分离选择性有影响。适用 于分离中等极性、弱极性药物，常用甲醇－水、乙－水系 统。②非水溶剂：用于分离疏水性物质，尤其在柱填料表 面键合的十八烷基硅量较大时，固定相对疏水化合物有异 常的保留能力，需用有机溶剂，可在乙脂或中加入二氯甲 烷或四氢映哺(称非水反相色谱)。③缓冲溶液：适用于可 溶于水并具可解离特性的化合物，如蛋白质、肽及弱酸、 弱碱类化合物。缓冲液及其pH不同会影响组分的保留值， 常用的缓冲液有三乙胺磷酸盐、磷酸盐、醋酸盐溶液，选 用的pH应使溶质尽可能成为非解离形式，使固定相有较 大保留能力(反相离子抑制色谱)。
80ml，分次洗涤，合并洗液与滤液，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰铵滴定 液(0.1mol/L)，滴定，每1ml硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)相当于10.83mg的氧化 汞(HgO)。本品每含红粉以氧化汞计，应为90～110mg。 • 3. 昆明山海棠片的含量测定 • 取本品60片，除去糖衣，精密称定，研细，取约相当于25片的量，精密称定， 置200ml锥瓶中，加适量硅藻士(每1g中加入硅藻士0.2g)，混匀，加乙醇70ml 加热回流40分钟，放冷，过滤，滤渣加乙醇50ml。加热回流30分钟，放冷滤 过，合并滤液，置水浴上蒸干，残渣加盐酸溶液(1→100)30ml置水浴上搅拌 使溶解，放冷，滤过，残渣加盐酸溶液(1→200)同法提取3次(50ml，15ml， 15ml)，合并滤液于分液漏斗中，加氨试液使溶液呈碱性，用乙醚振摇提取4 次(40ml，30ml，25ml，20ml)，合并乙醚液用水振摇洗涤2次，每次10ml， 乙醚液滤过，滤液置已100℃在干燥恒重的蒸发皿中，在低温水浴上蒸去乙醚， 残渣里加少许无水乙醇，蒸干在，在100℃干燥至恒重，称定重量，计算，即 得。 • 本品每片含总生物碱不得少于1.0mg。
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b.生物碱盐在水或乙醇介质中，用强酸溶 液滴定。一般使其溶于90％乙醇溶液中， 可用标准酸乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。
重量分析法： （1）将生物碱从中药制剂中提取，用适
宜的方法使其生成沉淀，干燥后直接称重
优点: 计算简便，不用换算因数，不必考虑生
物碱的分子量。
缺点
挥发性生物碱，蒸发提取溶剂或加热、 干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离 时可发生水解的生物碱不可用此法。
本法测定的关键在于 介质的pH值， 酸性染料的性质， 有机溶剂的性质。
2.苦味酸盐法：
凡是在弱酸或中性溶液中能与苦味酸定量 发生沉淀的生物碱,都可按本方法测定含量。
a.是滤取生物碱-苦味酸盐沉淀，加碱使生 物碱-苦味酸盐解离，然后以有机溶剂提出生 物碱，将苦味酸的碱性水溶液进行比色，再 换成生物碱的含量。
取样量大，操作时易乳化，费时。
（2）加入某些试剂，使生物碱生成不溶性 沉淀，称量沉淀,计算生物碱的含量。
优点： 取样量少，灵敏度高。 缺点 繁琐，影响因素多，干扰多。
2. 分光光度法：
（1）直接测定法
利用生物碱自身的光吸收直接进行比色 测定的方法。
一般用于药味较少，干扰不大的中药制 剂中生物碱的含量测定。
在恒定的高效液相色谱条件下，各种生 物碱都具有一定的保留时间，可作为定性 鉴别的参数。一般要求取得两个色谱系统 的保留时间，或应用二级管阵列检测器作 出鉴定
四、含量测定 (一)总生物碱含量测定
1.化学分析法 包括重量分析和容量分析 主要使用酸碱滴定法
酸碱滴定法：
a.游离生物碱不溶于水，可先将生物碱溶 于过量标准酸溶液中,再用标准碱溶液回滴
二、结构特征与理化性质
（一）结构特征
基本母核为2—苯基色原酮，现泛指 两苯环通过中央三碳链相互联结而成的 一类化合物。
（二）理化性质 1.物理性质：多数为结晶性固体 2.溶解度 3.酸碱性：具有酚羟基，显酸性 4.显色反应：与分子中酚羟基及γ-吡喃
酮环有关。 5.紫外吸收
鼻炎康片中黄芩甙的薄层色谱
取片剂细粉，加50％乙醇于60℃水浴 中热浸30分钟，滤过，取滤液点于聚酰胺 薄膜上，用36％醋酸展开，以黄芩甙为对 照品，展开后于紫外灯下观察（365nm)， 黄芩甙呈紫色斑点，Rf值约为0.30。
3．纤维素薄层色谱 用于分离黄酮甙类较好， 原理与纸色谱相同， 色谱流动相可用纸色谱所有的流动相。
（2）离子对萃取比色法
原理：
在一定的pH介质中，有机碱与一些 酸性染料或磺酸类、酸类的阴离子，定量 的结合为有色离子对，此离子对可定量的 溶于某些有机溶剂，然后在一定的波长下 测定有机溶剂或经碱化后释放的染料的吸 收度。
1.酸性染料比色法：
BHBH
H InHIn
I nB H B H I n
4.呈色反应
+ 酸性染料 一定pH值 有色配合物
5.碱性 生物碱碱性强弱是中药制剂分析时供试 品溶液制备、某些分析方法建立及条件选择 的依据。
三、定性鉴别 （一）一般理化鉴别 沉淀反应是生物碱最常用的鉴别方法。 有些成分也可与试剂生成沉淀而造成假
阳性结果。
(二) 色谱鉴别 1．薄层色谱法
本方法可不需要标准对照品，但需注
意生物碱生成单盐或双盐，并要注意样品
的净化。
(二)单体生物碱含量测定
1．薄层色谱法
薄层色谱技术在生物碱类成分分离和测定 须结合生物碱的通性选择合适的提取溶剂制 成供试品溶液，需要采用化学方法提取和纯 化，常用液-液萃取或液-固萃取，或结合生 物碱的特性进行纯化。常使用碱性展开剂或 在碱性气氛中展开。在薄层直接扫描定量
时，须首先作一工作曲线，目的是考察工 作曲线是否为通过原点的直线，以便决定 采用外标一点法或外标两点法进行定量， 其次需要找出线性范围，以便摸索样品点 样量。采用薄层直接扫描定量还需要随行 对照品进行，同时要考察稳定性，同板、 异板效应和精密度等。
2．高效液相色谱
生物碱类成分进行高效液相色谱分析时， 可采用正相、反相和离子对色谱，其中以 反相高效液相色谱应用较多。
等。
配合作用的条件是黄酮类成分必须具 备下述条件之一者，即5-羟基(a)、3-羟基(b) 或邻二酚羟基(c)，(a)、(b)都是羟基与4位 羰基共同与金属离子形成络合物的。
(三)薄层色谱法
黄酮类成分的薄层定性，一般采用吸附薄 层，常用的吸附剂有硅胶与聚酰胺，也有用 纤维素、硅酸镁、氧化镁。硅胶色谱分离弱 极性化合物较好；聚酰胺色谱分离含游离酚 羟基的黄酮及其甙颇为理想；而纤维素薄层 则适用于分离多糖甙混合物。展开后的显色 反应可采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂 相配合的方法。
键和反应结束后，用三甲基硅氯烷等 进行后续处理，尽量减少参与羟基，增加 单体覆盖度。
第二节黄酮类制剂的分析
（一）概述 黄酮类化合物为自然界广泛存在的一大
类化合物，多具有颜色，在植物体内大部分 与糖结合成甙，一部份以游离形式存在。
芦丁(rutin)
黄芩苷(baicalin)
槲皮素(quercetin)
展开剂中大多含醇,酸,水,或二者兼有。
常用的溶剂系统有：
甲醇-水(8∶2), 分离黄酮甙元及甙，
乙醇-水-乙酰丙酮(2∶4∶1),水-乙醇-丁酮乙 酰 丙 酮 (13∶3∶3∶1), 苯 - 丁 酮 - 甲 醇 (6∶2∶2), 分离黄酮甙元；
甲 酸 - 甲 醇 - 乙酸乙 酯 (1∶21∶8), 乙 酸 - 水 (1∶2), 分离黄酮甙。
苯-乙酸乙酯(7.5∶2.5)或苯-丙酮(9∶1)，分 离黄酮甙元衍生物如甲醚或乙酸酯中性成 分；
甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)，分离双黄酮 成分。
溶剂系统中各组分的配比可根据薄层色谱 的需要加以调整。
例 淫羊藿的鉴别
供试液制备
取本品粉末0.5g,加50％乙醇30ml置水 浴上回流30分钟,放冷,滤过,滤液蒸干乙醇后, 加水少量溶解,加至聚酰胺小柱上,先后用水, 乙醇各l00ml洗脱,收集乙醇洗脱液,蒸干,残 渣用乙醇溶解,使成1ml,作为供试品溶液。
显相同的黄色荧光斑点。 注意事项 温度在25℃以上；控制湿度在18-47％
范围内色谱效果较好.
1
2
3
4
5
6
ห้องสมุดไป่ตู้
样品：
1.淫羊藿甙
2.淫羊藿 3.箭叶淫羊藿
4.朝鲜淫羊藿 5.柔毛淫羊藿 6.巫山淫羊藿
2．聚酰胺薄层色谱
聚酰胺薄层色谱用于分离含游离酚羟基 的黄酮甙与甙元较好。由于各种黄酮类成 分取代基团的性质、多少和位置的不同， 与聚酰胺形成氢键的能力有所差异而得到 分离。
二、结构特性和理化性质 （一）结构特性
大多含有C，H，N，O组成 结构复杂，结构类型较多 氮原子有多种形式 有羧基,酚羟基等酸性官能团及酯键取代
(二)理化性质
1. 物理性质
多为结晶型固体，少数为液体
一般生物碱为白色或无色，但结构中具 有较长共轭体系，并有助色团的可显不 同颜色
为了克服游离硅醇基的影响 :
(1)流动相方面的改进：
a.加入硅醇基抑制剂，最常用的硅醇基 抑制剂是三乙胺;
b.在流动相中加入离子对试剂;
c.在流动相中加入季铵盐试剂，例如在 水-甲醇流动相中加入0.01mol／L的溴化四 甲基胺。
(2)固定相方面的改进：
封尾技术可以使填料的检核更彻底。
b. 在pH为7的缓冲液中，使生物碱与 苦味酸结合成盐，用氯仿提取此盐，然后 再以pH为11的碱性缓冲液使氯仿中苦味酸 盐解离，并将苦味酸提取到碱性水溶液中 再进行比色。
c.直接在pH为4～5的缓冲溶液中，用 氯仿提取生物碱苦味酸盐，将氯仿提取液 直接进行比色。
3.雷氏盐比色法：
生物碱与雷氏盐生成沉淀后，将沉淀分离， 溶于丙酮，于520～526nm波长处比色测定 吸收度，换算生物碱的含量。
操作：
取样品液5～10mL，加入数滴盐酸，然 后加入少许镁粉，如果有黄酮、黄酮醇或 其二氢化合物存在，数分钟后则可产生橙 色或红色。必要时，需作空白试验。
2．与金属盐类试剂的配合反应
黄 酮 类 成 分 能 与 金 属 离 子 如 Al3+ ，
Zr4+等产生络合作用，产生荧光或颜色加深
生物碱的雷氏盐沉淀的丙酮溶液所呈现的 吸收特征，是由于分子结构中的硫代氰酸铬 铵部分，而不是结合的生物碱部分，其吸收 值与样品或溶剂无关。
硫代氰酸铬铵在丙酮中的克分子吸收 系数为106.5(单盐)或213.0(双盐)。故可 根据其吸收值A按下式直接测得样品重
W =（ A/ε）×M×V/1000
黄酮、黄酮醇
I带 330～350
Ⅱ带/nm 250～270
双氢黄酮 310～330(弱) 275～290
异黄酮
无I带吸收
250～270
查耳酮
360～390 240～260(较弱)
一、定性鉴别 定性分析方法主要有 化学显色反应
薄层色谱
(一)化学显色反应
1.还原反应
盐酸-镁粉反应显色反应的机理是黄酮类 成分经还原反应后生成花色甙元及其二聚 物。
第五章、中药制剂中各类化 学成分的分析
内蒙古医学院药物分析教研室
第一节 生物碱类成分分析
一、概述 生物碱是生物界除生物体必须合成的
含氮化合物之外的所有含氮的有机化合物， 因其结构中氮原子上的未共用电子对而大 多呈碱性。
小檗碱(berberine)
苦参碱(matrine)
N
延胡索乙素(corydalis)
旋光性与胜利活性相关，左旋体比右旋 体生理活性强
3. 沉淀反应
生物 碱的 酸性 水溶 液或 稀醇 溶液
重量分析法： （1）将生物碱从中药制剂中提取，用适
宜的方法使其生成沉淀，干燥后直接称重
优点: 计算简便，不用换算因数，不必考虑生
物碱的分子量。
缺点
挥发性生物碱，蒸发提取溶剂或加热、 干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离 时可发生水解的生物碱不可用此法。
本法测定的关键在于 介质的pH值， 酸性染料的性质， 有机溶剂的性质。
2.苦味酸盐法：
凡是在弱酸或中性溶液中能与苦味酸定量 发生沉淀的生物碱,都可按本方法测定含量。
a.是滤取生物碱-苦味酸盐沉淀，加碱使生 物碱-苦味酸盐解离，然后以有机溶剂提出生 物碱，将苦味酸的碱性水溶液进行比色，再 换成生物碱的含量。
取样量大，操作时易乳化，费时。
（2）加入某些试剂，使生物碱生成不溶性 沉淀，称量沉淀,计算生物碱的含量。
优点： 取样量少，灵敏度高。 缺点 繁琐，影响因素多，干扰多。
2. 分光光度法：
（1）直接测定法
利用生物碱自身的光吸收直接进行比色 测定的方法。
一般用于药味较少，干扰不大的中药制 剂中生物碱的含量测定。
在恒定的高效液相色谱条件下，各种生 物碱都具有一定的保留时间，可作为定性 鉴别的参数。一般要求取得两个色谱系统 的保留时间，或应用二级管阵列检测器作 出鉴定
四、含量测定 (一)总生物碱含量测定
1.化学分析法 包括重量分析和容量分析 主要使用酸碱滴定法
酸碱滴定法：
a.游离生物碱不溶于水，可先将生物碱溶 于过量标准酸溶液中,再用标准碱溶液回滴
二、结构特征与理化性质
（一）结构特征
基本母核为2—苯基色原酮，现泛指 两苯环通过中央三碳链相互联结而成的 一类化合物。
（二）理化性质 1.物理性质：多数为结晶性固体 2.溶解度 3.酸碱性：具有酚羟基，显酸性 4.显色反应：与分子中酚羟基及γ-吡喃
酮环有关。 5.紫外吸收
鼻炎康片中黄芩甙的薄层色谱
取片剂细粉，加50％乙醇于60℃水浴 中热浸30分钟，滤过，取滤液点于聚酰胺 薄膜上，用36％醋酸展开，以黄芩甙为对 照品，展开后于紫外灯下观察（365nm)， 黄芩甙呈紫色斑点，Rf值约为0.30。
3．纤维素薄层色谱 用于分离黄酮甙类较好， 原理与纸色谱相同， 色谱流动相可用纸色谱所有的流动相。
（2）离子对萃取比色法
原理：
在一定的pH介质中，有机碱与一些 酸性染料或磺酸类、酸类的阴离子，定量 的结合为有色离子对，此离子对可定量的 溶于某些有机溶剂，然后在一定的波长下 测定有机溶剂或经碱化后释放的染料的吸 收度。
1.酸性染料比色法：
BHBH
H InHIn
I nB H B H I n
4.呈色反应
+ 酸性染料 一定pH值 有色配合物
5.碱性 生物碱碱性强弱是中药制剂分析时供试 品溶液制备、某些分析方法建立及条件选择 的依据。
三、定性鉴别 （一）一般理化鉴别 沉淀反应是生物碱最常用的鉴别方法。 有些成分也可与试剂生成沉淀而造成假
阳性结果。
(二) 色谱鉴别 1．薄层色谱法
本方法可不需要标准对照品，但需注
意生物碱生成单盐或双盐，并要注意样品
的净化。
(二)单体生物碱含量测定
1．薄层色谱法
薄层色谱技术在生物碱类成分分离和测定 须结合生物碱的通性选择合适的提取溶剂制 成供试品溶液，需要采用化学方法提取和纯 化，常用液-液萃取或液-固萃取，或结合生 物碱的特性进行纯化。常使用碱性展开剂或 在碱性气氛中展开。在薄层直接扫描定量
时，须首先作一工作曲线，目的是考察工 作曲线是否为通过原点的直线，以便决定 采用外标一点法或外标两点法进行定量， 其次需要找出线性范围，以便摸索样品点 样量。采用薄层直接扫描定量还需要随行 对照品进行，同时要考察稳定性，同板、 异板效应和精密度等。
2．高效液相色谱
生物碱类成分进行高效液相色谱分析时， 可采用正相、反相和离子对色谱，其中以 反相高效液相色谱应用较多。
等。
配合作用的条件是黄酮类成分必须具 备下述条件之一者，即5-羟基(a)、3-羟基(b) 或邻二酚羟基(c)，(a)、(b)都是羟基与4位 羰基共同与金属离子形成络合物的。
(三)薄层色谱法
黄酮类成分的薄层定性，一般采用吸附薄 层，常用的吸附剂有硅胶与聚酰胺，也有用 纤维素、硅酸镁、氧化镁。硅胶色谱分离弱 极性化合物较好；聚酰胺色谱分离含游离酚 羟基的黄酮及其甙颇为理想；而纤维素薄层 则适用于分离多糖甙混合物。展开后的显色 反应可采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂 相配合的方法。
键和反应结束后，用三甲基硅氯烷等 进行后续处理，尽量减少参与羟基，增加 单体覆盖度。
第二节黄酮类制剂的分析
（一）概述 黄酮类化合物为自然界广泛存在的一大
类化合物，多具有颜色，在植物体内大部分 与糖结合成甙，一部份以游离形式存在。
芦丁(rutin)
黄芩苷(baicalin)
槲皮素(quercetin)
展开剂中大多含醇,酸,水,或二者兼有。
常用的溶剂系统有：
甲醇-水(8∶2), 分离黄酮甙元及甙，
乙醇-水-乙酰丙酮(2∶4∶1),水-乙醇-丁酮乙 酰 丙 酮 (13∶3∶3∶1), 苯 - 丁 酮 - 甲 醇 (6∶2∶2), 分离黄酮甙元；
甲 酸 - 甲 醇 - 乙酸乙 酯 (1∶21∶8), 乙 酸 - 水 (1∶2), 分离黄酮甙。
苯-乙酸乙酯(7.5∶2.5)或苯-丙酮(9∶1)，分 离黄酮甙元衍生物如甲醚或乙酸酯中性成 分；
甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)，分离双黄酮 成分。
溶剂系统中各组分的配比可根据薄层色谱 的需要加以调整。
例 淫羊藿的鉴别
供试液制备
取本品粉末0.5g,加50％乙醇30ml置水 浴上回流30分钟,放冷,滤过,滤液蒸干乙醇后, 加水少量溶解,加至聚酰胺小柱上,先后用水, 乙醇各l00ml洗脱,收集乙醇洗脱液,蒸干,残 渣用乙醇溶解,使成1ml,作为供试品溶液。
显相同的黄色荧光斑点。 注意事项 温度在25℃以上；控制湿度在18-47％
范围内色谱效果较好.
1
2
3
4
5
6
ห้องสมุดไป่ตู้
样品：
1.淫羊藿甙
2.淫羊藿 3.箭叶淫羊藿
4.朝鲜淫羊藿 5.柔毛淫羊藿 6.巫山淫羊藿
2．聚酰胺薄层色谱
聚酰胺薄层色谱用于分离含游离酚羟基 的黄酮甙与甙元较好。由于各种黄酮类成 分取代基团的性质、多少和位置的不同， 与聚酰胺形成氢键的能力有所差异而得到 分离。
二、结构特性和理化性质 （一）结构特性
大多含有C，H，N，O组成 结构复杂，结构类型较多 氮原子有多种形式 有羧基,酚羟基等酸性官能团及酯键取代
(二)理化性质
1. 物理性质
多为结晶型固体，少数为液体
一般生物碱为白色或无色，但结构中具 有较长共轭体系，并有助色团的可显不 同颜色
为了克服游离硅醇基的影响 :
(1)流动相方面的改进：
a.加入硅醇基抑制剂，最常用的硅醇基 抑制剂是三乙胺;
b.在流动相中加入离子对试剂;
c.在流动相中加入季铵盐试剂，例如在 水-甲醇流动相中加入0.01mol／L的溴化四 甲基胺。
(2)固定相方面的改进：
封尾技术可以使填料的检核更彻底。
b. 在pH为7的缓冲液中，使生物碱与 苦味酸结合成盐，用氯仿提取此盐，然后 再以pH为11的碱性缓冲液使氯仿中苦味酸 盐解离，并将苦味酸提取到碱性水溶液中 再进行比色。
c.直接在pH为4～5的缓冲溶液中，用 氯仿提取生物碱苦味酸盐，将氯仿提取液 直接进行比色。
3.雷氏盐比色法：
生物碱与雷氏盐生成沉淀后，将沉淀分离， 溶于丙酮，于520～526nm波长处比色测定 吸收度，换算生物碱的含量。
操作：
取样品液5～10mL，加入数滴盐酸，然 后加入少许镁粉，如果有黄酮、黄酮醇或 其二氢化合物存在，数分钟后则可产生橙 色或红色。必要时，需作空白试验。
2．与金属盐类试剂的配合反应
黄 酮 类 成 分 能 与 金 属 离 子 如 Al3+ ，
Zr4+等产生络合作用，产生荧光或颜色加深
生物碱的雷氏盐沉淀的丙酮溶液所呈现的 吸收特征，是由于分子结构中的硫代氰酸铬 铵部分，而不是结合的生物碱部分，其吸收 值与样品或溶剂无关。
硫代氰酸铬铵在丙酮中的克分子吸收 系数为106.5(单盐)或213.0(双盐)。故可 根据其吸收值A按下式直接测得样品重
W =（ A/ε）×M×V/1000
黄酮、黄酮醇
I带 330～350
Ⅱ带/nm 250～270
双氢黄酮 310～330(弱) 275～290
异黄酮
无I带吸收
250～270
查耳酮
360～390 240～260(较弱)
一、定性鉴别 定性分析方法主要有 化学显色反应
薄层色谱
(一)化学显色反应
1.还原反应
盐酸-镁粉反应显色反应的机理是黄酮类 成分经还原反应后生成花色甙元及其二聚 物。
第五章、中药制剂中各类化 学成分的分析
内蒙古医学院药物分析教研室
第一节 生物碱类成分分析
一、概述 生物碱是生物界除生物体必须合成的
含氮化合物之外的所有含氮的有机化合物， 因其结构中氮原子上的未共用电子对而大 多呈碱性。
小檗碱(berberine)
苦参碱(matrine)
N
延胡索乙素(corydalis)
旋光性与胜利活性相关，左旋体比右旋 体生理活性强
3. 沉淀反应
生物 碱的 酸性 水溶 液或 稀醇 溶液