病原菌的分离鉴定及其疫苗的制备(1)
初级检验技师考试微生物检验考试题和答案(5)
初级检验技师考试微生物检验考试试题及答案(5)一、名词解释1.血清学诊断2.培养基3.基础培养基4.选择培养基5.鉴别培养基6.菌落二、填空题1.实验室细菌学检查结果的准确与否和标本的选择、、有直接关系。
2.辅助诊断风湿热的抗“O”实验属于。
3.血清学试验一般需作两次.其血清分别取自疾病的和 .第二次抗体效价比第一次时方有诊断意义。
4.对流行性脑炎患者进行细菌学检查.可采集的标本有、和。
5.进行病原菌的分离培养时.从有正常菌群部位采取的标本应接种于培养基或培养基。
6.细菌感染实验室检查中.常用的血清学方法有、和三大类。
7.属于直接凝集反应的血清学试验有和。
三、单项选择题1.目前在传染病的预防接种中.使用减毒活疫苗比使用灭活疫苗普遍.关于其原因下述不正确的是A.减毒活疫苗的免疫效果优于灭活疫苗B.减毒活疫苗刺激机体产生的特异性免疫的持续时间比灭活疫苗长C.减毒活疫苗能在机体内增殖或干扰野毒株的增殖及致病作用.灭活疫苗则不能D.减毒活疫苗可诱导机体产生分泌型IgA. 故适用于免疫缺陷或低下的患者E.减毒活疫苗一般只需接种一次即能达到免疫效果.而灭活疫苗需接种多次2.白百破三联疫苗的组成是A.百日咳类毒素.白喉类毒素.破伤风类毒素B.百日咳死疫苗.白喉类毒素.破伤风类毒素C.百日咳死疫苗.白喉死疫苗.破伤风类毒素D.百日咳活疫苗.白喉活疫苗.破伤风死疫苗E.百日咳活疫苗.白喉死疫苗.破伤风死疫苗3.使用时要注意防止Ⅰ型超敏反应的免疫制剂是A.丙种球蛋白B.胎盘球蛋白C.抗毒素D.白细胞介素E.干扰素4.关于胎盘球蛋白的叙述.错误的是A.由健康产妇的胎盘和婴儿脐带中提取制备B.一般含IgMC.一般不会引起超敏反应D.主要用于麻疹.甲型肝炎和脊髓灰质炎等病毒性疾病的紧急预防E.免疫效果不如高效价的特异性免疫球蛋白5.伤寒病人发病第一周内.分离病原菌应采取的标本是A.血液B.尿液C.粪便D.呕吐物E.脑脊液6.咽喉假膜标本涂片染色后.镜检出有异染颗粒的棒状杆菌.其临床意义在于诊断A.结核病B.军团病C.白喉D.脑脊髓膜炎E.百日咳7.一般需经3~4周培养才能见到有细菌生长的细菌是A.结核分枝杆菌；B.淋病奈氏菌；C.空肠弯曲菌；D.炭疽杆菌；E.军团菌8.在标本的采集与送检中不正确的做法是A.严格无菌操作.避免杂菌污染B.采取局部病变标本时要严格消毒后采集C.标本采集后立即送检D.尽可能采集病变明显处标本E.标本容器上贴好标签9.关于血清学试验结果分析时错误的是A. 试验阳性说明机体接触过相应的病原体；B.单次试验阳性不能完全证明新近感染；C. 试验阴性不能完全排除病原体感染的可能性；D. 试验阳性即有诊断意义E.双份血清标本.后者抗体效价比前者高四倍或四倍以上时有诊断意义。
病原菌分离培养与鉴定
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
（四）生物芯片技术
将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、细胞及组织 等生物样品有序地固定于硅片、尼龙膜等固相支持物上 在一定的条件下进行生化反应。 用化学荧光法、酶标法或同位素法显示反应结果， 通过特定的仪器读取与收集数据，并用软件进行数据 分析，从而判断样品中靶分子的种类和数量。
1929 – Penicillin discovered
1930s– Sulfa drugs discovered
1969 – US surgeon Gen, claims end infectious diseases
Today – Bacteria with multi-drug resistance
Fleming Domagk
一、抗菌药物的杀菌机制
• 抑制细菌细胞壁的合成：青霉素、溶菌酶等 • 影响细菌胞浆膜通透性：多粘菌素等抗生素 • 抑制细菌蛋白质的合成：红霉素、链霉素等 • 抑制细菌的核酸代谢：利福平等抗生素 • 抑制细菌的叶酸代谢：磺胺类等抗生素
Cell wall synthesis
collection and transportation of specimen
避免杂菌污染
标本的采集和送检六原则
不同期不同标本 用抗生素以前
采集病变明显部位
标本必须新鲜
运送注意保存
细菌感
（二）病原菌分离培养与鉴定：形态学检查
不染色检查法 压滴法 悬滴法 暗视野显微镜法
检查用仪器 普通光学显微镜 light microscope 暗视野显微镜 dark-field microscope 荧光显微镜 fluorescence microscope ……
动物检验检疫学实验一动物病原细菌的分离与鉴定
动物检验检疫学实验一动物病原细菌的分离与鉴定预览说明:预览图片所展示的格式为文档的源格式展示,下载源文件没有水印,内容可编辑和复制实验一动物病原细菌的分离与鉴定一、实验目的了解动物病原细菌的分离、鉴定的常规程序与基本方法二、实验原理初步分离鉴定：利用细菌在特定的选择培养基上的生长特性，观察细菌培养特征；确定细菌的血清型、毒力因子：血清学检测或PCR检测技术大肠杆菌的培养特征：37℃,培养24h,各种培养基生长特征：普通营养琼脂平板：白色圆形，隆起，中等大小麦康凯琼脂：红色、圆形、隆起、光滑、湿润、边缘整齐、中等大小糖铁琼脂斜面培养基：底层变黄，产酸产气伊红美蓝培养基：黑色、金属光泽革兰氏染色：革兰氏阴性、分散或成对排列、两端钝圆的短杆菌血清学鉴定：玻片凝集实验：颗粒性抗原与相应抗体结合出现凝集沉淀。
大肠杆菌中，为了避免K抗原对O抗原凝集的抑制作用，利用O抗原的耐热性高于K抗原，实验前进行、高压或煮沸处理。
三、实验材料1）材料：可疑病料，需提前三天提供小鼠2）菌株：致病性大肠杆菌菌株3）试剂：营养肉汤、营养琼脂、CT-SMAC琼脂、TSI琼脂、伊红美蓝琼脂培养基、IMViC、大肠杆菌O157标准血清、生理盐水、吉姆萨染色液、酒精或棉球。
4）仪器：显微镜、37℃恒温培养箱、酒精灯、接种棒、剪刀、镊子、载玻片、记号笔、口罩、手套。
四、操作步骤1.分离培养第一天：1.）处死小鼠，无菌解剖2.）观察各脏器是否出现肉眼病理变化；3.）无菌采集内脏病料，通过无菌操作划线接种于普通琼脂平板、改良山梨醇麦康凯（CT-MAC)琼脂平板各一块，37℃培养24h；4.）同时无菌挑取一小块病料，直接涂片，吉姆萨染色，油镜观察组织中的细菌特征；第二天5.）挑取CT-SMAC典型单个菌落分别接种于TSI琼脂斜面、伊红美蓝琼脂和营养肉汤，37℃培养24h。
挑取普通培养基上的菌落进行糖类发酵和IMViC生化实验。
糖（醇）类发酵实验：接种两只葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基，麦芽糖发酵培养基，一支接种，一支对照；接好后置于37℃温箱中培养24h。
细菌的分离、培养和鉴定
鱼的解剖结构：
2）无菌操作
无菌操作是指在环境中一切有生命活动的微生物的 营养细胞及其芽孢或孢子都不存在的状态。微生物 研究过程中，既要避免各种外界的微生物进入操作 对象又要杜绝操作对象污染周围环境的操作技术。 无菌操作是对微生物学工作者最基本的要求，必须 经过严格训练才能形成无菌操作素养。不论何种情 况下，头脑中都应该有这个概念。 无菌操作贯穿于整个分离过程，例如：病料的采集、 器材的准备、具体的操作。所用器械及物品均应事 先灭菌备用，金属器具包装后高压灭菌或煮沸 30min，玻璃器皿可高压灭菌也可干热灭菌，胶皮 塞、培养基等则要高压灭菌。
3）细菌分离
► 工具：接种环（接种前后都要严格过火灭菌） ► 接种环境：无菌操作台 ► 接种方法：平板划线
* 以左手持平板，中指、无名指和小指托着平板底,拇指和食指打开上盖，使 盖与底成30º 角，以便划线。 * 右手握接种环，先灭菌铂丝部分，待丝烧红后，再于火焰上灭菌金属棒部 分。把接种环上的病料涂在培养基一侧，一般作5-8次划线。将环上的多余细 菌材料烧掉后，从第1次划线引出第2次划线；再从第2次划线引出第3次划线， 如此反复3-4次划线后，即可把整个平板表面划满，注意每一次划线只能与上 一次划线重叠，这样就可在最后的1-2次划线上出现多量的单个菌落，以便进 行纯培养。
生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
ATB Expression：自动化微生物鉴 定和药敏分析系统
分子生物学技术
分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核 酸检测技术, 包括基因测序、指纹图谱技术、 基因探针技术、聚合酶链反应( PCR)、GC 含量测定等。 PCR和核酸杂交单独或结合在仪器已经形成 比较经典的核酸检测技术, 目前这两者已经 得到了较大范围的推广和应用
实验二肠杆菌科细菌的分离鉴定ⅰ(培养基制备)
熟悉培养基的制备流程
01
掌握培养基的基本成分和作用。
02
熟悉培养基的制备流程，包括称量、溶解、调pH值、灭菌等
步骤。
了解不同培养基的特性和用途，以便选择合适的培养基进行分
03
离鉴定。
了解肠杆菌科细菌的生物学特性
熟悉肠杆菌科细菌的形态、染色、 生长特性等基本生物学特性。
了解肠杆菌科细菌的抗原构造和 抵抗力。
进行分离和纯化。
肠杆菌科细菌鉴定
总结词
鉴定是确定分离得到的肠杆菌科细菌的种类和属性的 过程。
详细描述
在鉴定阶段，可以采用多种方法对细菌进行鉴定。形态 学鉴定可根据细菌的形态、染色反应等特征进行初步分 类。生理生化鉴定则通过检测细菌对不同底物的代谢反 应、酶活性等指标，进一步确定其属、种分类。此外， 分子生物学方法如16S rRNA基因测序也为细菌鉴定提 供了高分辨率和高准确性的手段。通过综合运用这些方 法，可以准确地对肠杆菌科细菌进行鉴定，为后续研究 提供基础数据。
04
实验结果与分析
菌落观察与记录
菌落形态
观察并记录不同菌落的形状、大小、颜色、光泽度等 特征，以便后续的鉴别和分类。
生长速度
记录不同菌落在培养基上的生长速度，了解其生长特 性。
菌落特征
通过显微观察和染色等方法，进一步了解菌落的细胞 形态、排列方式等特征。
生化试验结果分析
糖发酵试验
分析不同菌种对糖的发酵能力，了解其代谢 特性。
05
注意事项与安全防范措施
实验过程中的注意事项
实验前准备
确保实验室内环境清洁，穿戴实验服 和口罩，检查实验器材是否齐全。
培养基制备
按照标准配方准确称量试剂，严格控 制培养基的pH值和灭菌时间，确保 培养基的质量。
病原微生物学实验设计
案例二：某病毒感染动物模型的建立与应用
实验目的
建立某病毒感染的动物模型，研 究病毒感染过程、病理变化及抗
病毒药物的效果。
实验步骤
选择合适的动物、病毒感染、观察 病理变化、抗病毒药物筛选。
实验结果
成功建立病毒感染动物模型，观察 到典型的病理变化，筛选出有效的 抗病毒药物。
案例三
实验目的
利用基因编辑技术，研究病原微生物的基因功能，寻找新的抗菌 药物靶点。
02
鉴定病原微生物的种类 、毒力、耐药性等生物 学特性。
03
评价药物、疫苗、诊断 试剂等医疗产品的有效 性及安全性。
04
为预防、诊断和治疗感 染性疾病提供科学依据 。
实验设计原则与步骤
科学性原则
实验设计应遵循科学原理，确保实验结果 的客观性和可重复性。
实验设计步骤
明确实验目的、选择实验对象、确定实验 方法、制定实验方案、实施实验、收集和 分析数据、撰写实验报告。
05
病原微生物学实验案例解 析
案例一：某病原菌的分离鉴定及药敏试验
实验目的
从临床样本中分离并鉴定 病原菌，同时进行药物敏 感性试验，为临床诊断和 治疗提供依据。
实验步骤
采集样本、病原菌分离培 养、病原菌鉴定、药敏试 验。
实验结果
获得病原菌的纯培养物， 确定病原菌种类，了解其 对不同药物的敏感性。
实验步骤
选择基因编辑工具、设计基因编辑方案、实施基因编辑、观察病 原微生物的变化。
实验结果
成功对病原微生物进行基因编辑，发现新的抗菌药物靶点，为抗 病原微生物药物的研发提供新思路。
06
实验注意事项与未来展望
实验操作规范与安全防护
严格遵守实验室安全 规定，穿戴好实验服 、手套、口罩等防护 用品。
临床医学检验技术(师)：细菌感染的病原学诊断考试题(题库版)
临床医学检验技术(师)：细菌感染的病原学诊断考试题（题库版）1、单选构成细菌毒力的是（）A.基本结构B.特殊结构C.侵袭力和毒素D.分解代谢产物E.侵入机体的途径正确答案：C2、单选适用于麦康凯琼脂培养基（江南博哥）培养的细菌是（）A.肠道菌B.鼠疫杆菌C.白喉棒状杆菌D.肺炎链球菌E.分枝杆菌正确答案：A参考解析：麦康凯培养基具中等强度选择性，用于分离培养肠道细菌。
3、单选为观察细菌的运动情况，常用下列哪种方法（）A.悬滴法B.革兰染色法C.抗酸染色法D.鞭毛染色法E.墨汁染色法正确答案：A参考解析：观察细菌的运动情况常用悬滴法。
4、单选盛装细菌学检查标本的容器（）A.用75%酒精浸泡24小时后直接应用B.用碘酒浸泡12小时后直接应用C.高压灭菌、煮沸或干燥灭菌D.用浓硫酸处理后直接应用E.用水洗后直接应用正确答案：C参考解析：盛标本的容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或用一次性无菌容器，而不能用消毒剂或酸类处理。
5、单选O/F试验主要用于肠杆菌科细菌和非发酵菌的鉴别，其原因是（）A.肠杆菌科细菌和非发酵菌均为发酵型B.肠杆菌科细菌和非发酵菌均为氧化型C.肠杆菌科细菌为发酵型，而非发酵菌为氧化型或产碱型D.肠杆菌科细菌为氧化型，而非发酵菌为发酵型E.肠杆菌科细菌和非发酵菌均为产碱型正确答案：C参考解析：细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧酵解的称为发酵型，不分解葡萄糖的细菌称为产碱型，氧化发酵试验主要用于肠杆菌科细菌和非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。
6、单选检测梅毒螺旋体最常用的染色方法是（）A.革兰染色法B.抗酸染色法C.负染色法D.镀银染色法E.Giemsa染色法正确答案：D参考解析：梅毒螺旋体普通染色不易着色，常采用Fontana镀银染色法，菌体染成棕褐色且变粗，在光镜下易于查见。
7、单选氧化-发酵试验正确的是（）A.开口管变黄，闭口管不变--发酵型B.开口管变黄，闭口管变黄--发酵型C.开口管不变，闭口管不变--发酵型D.开口管不变，闭口管变黄--氧化型E.铜绿假单胞菌为发酵型正确答案：B参考解析：两支培养基均无变化为产碱型或不分解糖型；两支培养基均产酸为发酵型；若仅不加石蜡的培养基产酸为氧化型。
大肠杆菌疫苗的制备
大肠杆菌灭活苗的制备
实验原理
致病性大肠杆菌是人和多种动物（猪、鸡等）的致病菌之一。
疫苗免疫是控
后者容易吸收和释放。
实验目的
1、
2、掌握细菌性疫苗的灭活原理与方法
3、
4、掌握疫苗的乳化原理与方法
5、
6、掌握细菌性疫苗的制备方法
实验器材与试剂
匀；
（3）乳化：将油相加入烧杯中电动搅拌，缓慢加入水相(油相︰水相为2:1)，逐渐增大搅拌速度，在组织搅拌机下以10000～12000r/min搅拌3min，停2min，
重复3次，将菌苗分装。
（4）外观检测：观察疫苗的外观；
（5）稳定性检测：将疫苗置离心管中，3500r/min离心15min，观察有无分
层或破乳；
（6）剂型检测：将疫苗滴于冷水表面，不分散为油包水型，分散则为水包油型；粘度检查:用出口内径为1.2mm的1mL吸管在常温下吸满1mL疫苗后垂直
思考题
1、
2、灭活和乳化过程有哪项注意事项？
3、
4、如何评价疫苗效果？。
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病原菌的分离鉴定及其疫苗的制备（1）
一、实验目的
熟悉水产细菌性病原的分离、培养、纯化与鉴定的基本方法，了解所
分离细菌性病原的形态特征及培养特点，了解细菌性灭活疫苗制备的
基本过程。
二、实验材料
患白内障病虎纹蛙（或其他患细菌性疾病的水产动物）、健康虎纹蛙、脑膜炎败血黄杆菌（虎纹蛙白内障病的病原）
三、实验药品、用具
2216E 琼脂平板、 2216E 琼脂斜面、福尔马林、无菌蒸馏水、生理盐水、磷酸缓冲液、接种环、解剖刀、剪刀、镊子、滴管、纱布、白瓷盘、酒精棉球、灭菌试管、 96 孔板、注射器、酒精灯、离心机（包
括离心管）、水族箱、记号笔、
四、实验操作程序
（一）病原菌的分离与鉴定
1 ．培养基的制备
（ 1 ）普通肉汤培养基：
按以下剂量称取各种试剂（先称取盐类再称蛋白胨及牛肉膏），置于
铝锅或搪瓷缸中。
牛肉膏 5g 磷酸氢二钾 1g
蛋白胨 10g 蒸馏水 1000ml
氯化钠 5g pH 7 . 4 ～ 7 . 6
初配好的培养基呈酸性故要用 NaOH 调整。
将 pH 测定后的肉汤培养
基用滤纸过滤，将过滤好的肉汤分装试管、盐水瓶、三角烧瓶等容器，待灭菌。
（ 2 ）普通营养琼脂培养基
普通肉汤 1000ml
琼脂 20g
琼脂是由海藻中提取得一种多糖类物质，对病原性细菌无营养作用，但在水中加温可融化，冷却后可凝固。
在液体培养基中加入琼脂 1 .
5 ～ 2 ％即可固定培养基，如加入 0 . 3 ～ 0 . 5 ％则成半固体培养基。
将称好的琼脂加到普容肉汤中，加热煮沸，待琼脂完全融化后，将 pH 调至 7 . 4 ～ 7 . 6 。
琼脂融化过程中需不断搅拌，并控制火力，不使培养基溢出或烧焦，并注意补充蒸发掉的水份。
加热溶解好的培养基可用滤纸进行过滤，固体培养基要用 4 层纱布趁热过滤（切勿使培养基凝固在纱布上），之后按实验要求，将配制好的培养基分装入试管或三角瓶中，包扎好待灭菌，将培养基置于高压蒸汽锅内，121 ℃ 灭菌 15 ～ 30min ，趁热将试管口一端搁在玻棒上，使之有一定斜度，凝固后即成普通琼脂斜面，也可直立，凝固后即成高层琼脂。
盐水瓶中的普通琼脂以手掌感触，若将瓶紧握手中觉得烫手，但仍能握持者，此即为倾倒平皿的合适温度（ 50 ～60 ℃ ），每只灭菌培养皿倒入约 15 ～ 20ml ，将皿盖盖上，并将培养皿于桌面上轻轻回转，使培养基平铺于皿底，即成普通琼脂平板。
培养基中的某种成分，如血清、糖类、尿素、氨基酸等在高温下易于分解、变性，故应过滤除菌，再按规定的量加入培养基中。
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