细叶黄皮树茎皮乙醇提取物-挥发油的抑菌作用

细叶黄皮树茎皮乙醇提取物\挥发油的抑菌作用摘要:采用纸片扩散法进行抑菌试验以探讨细叶黄皮[Clausena anisum-olens(Blanco.)Merr]茎皮乙醇提取物及其石油醚､氯仿､乙酸乙酯､正丁醇部位的抑菌作用｡结果表明,石油醚､氯仿､乙酸乙酯部位有抑菌作用,氯仿部位对金黄色葡萄球菌､绿脓杆菌､杀螟杆菌､大肠杆菌及枯草杆菌抑菌作用最强,最小抑菌浓度为0.026~0.103 mg/片;石油醚､乙酸乙酯部位最小抑菌浓度均为0.026~0.412 mg/片;挥发油对5种供试菌均有抑制作用,最小抑菌浓度为0.412~0.823 mg/片｡关键词:细叶黄皮[Clausena anisum-olens(Blanco.)Merr]茎皮;提取物;最小抑菌浓度Antimicrobial Activity of Ethanol Extracts and V olatile Oil from the Bark of Clausena anisum-olensAbstract: Bacteriostasis test was conducted to study the antimicrobial activity of petroleum ether, chloroform, ethyl acetate, n-butanol extracts of the bark from Clausena anisum-olens by disk diffusion method. Results showed that the petroleum ether, chloroform and ethyl acetate extracts had antimicrobial activity, and the chloroform extracts had the strongest activity against Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa,Bacillus cereus, Escherichia coli, B. subtilis with a minimal inhibitory concentration (MIC) of 0.026~0.103 mg/piece, and petroleum ether extracts and ethyl acetate showed stronger activity with the MIC of 0.026~0.412 mg/piece. The volatile oil had antimicrobial activity against the five tested bacilus with the MIC of 0.412~0.823 mg/piece.Key words: Clausena anisum-olens bark; extracts; minimal inhibitory concentration(MIC)细叶黄皮[Clausena anisum-olens(Blanco.)Merr]为芸香科黄皮属植物,多年生常绿大灌木或小乔木,主产于我国广西西南部､云南南部､广东新会及越南北部和菲律宾[1,2],又称为鸡皮果､山黄皮｡细叶黄皮为珍稀佳果,果皮､果肉､茎皮均可食用,含有多种氨基酸､维生素及矿物质[2]｡在药用方面,果实可消积去滞､祛痰化气､疏通肠胃｡枝叶可入药,有引气､健胃､止痛､治跌打刀伤､消风肿､去疳积等功效[3]｡细叶黄皮是崇左市大力推广种植的经济树木,市内有多家细叶黄皮果加工厂,近几年来,细叶黄皮产业已成为中越边民增收的主要渠道之一｡目前,有关细叶黄皮的化学成分研究较少,但已有报道,汪云松等[4]从细叶黄皮中提取分离了5个化合物,分别为4-(3-methoxyphenyl-4-O-β-D-glucopyanoside)-2-butanone,3-(4-hydroxyphenyl)-2-propenoicacid,3-(3-methoxyphenyl-4-hydroxy)-2-propenoicacid,3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-propenoic methyl ester,3-hydroxy-4-methoxybenzoic acid｡Wang等[5]从细叶黄皮中提取到7个化合物,分别为anisumarin, isoscopoletin, umbelliferone,anisocoumarin H,capnolactone,aurapten和7-[(E)-7′-hydroxy-3′,7′-dimethylocta-2＇,5-dienyloxy]-coumar｡苏秀芳等[6,7]研究表明,细叶黄皮各个部分都含有丰富的挥发油,其主要成分为芳香类､烯类及酸类｡有关细叶黄皮的抑菌活性研究鲜见报道,为了综合利用细叶黄皮资源,提高中越边民的收入,本研究对细叶黄皮茎皮提取物的抑菌效果进行了实验观察,现将结果报道如下｡1材料和方法1.1试验仪器LDZX-50KBS型立式电热压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂);ZHJH-C1214B型垂直流超净工作台(上海智城分析仪器制造有限公司); GNP-9270型隔水式恒温培养箱(上海精寄宏实验设备有限公司);SPH-211B摇床培养箱(上海世平实验设备有限公司)｡1.2菌种金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureu)､绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa) 菌种购于广东微生物研究所;枯草杆菌(Bacillus subtilis)､大肠杆菌(Escherichia coli)､杀螟杆菌(Bacillus cereus)菌种由广西大学农学院提供｡1.3植物材料细叶黄皮茎皮于2010年7月采摘于龙州校县响水镇,由广西民族师范学院化学与生物工程系黄秋婵副教授鉴定为细叶黄皮(Clausena anisum-olens)｡1.4方法1.4.1细叶黄皮茎皮提取物的提取1)细叶黄皮茎皮乙醇及各部分提取物的提取｡细叶黄皮茎皮阴干,粉碎,用体积分数为75%的乙醇浸泡3 d,减压蒸馏至浸膏状,乙醇浸膏一部分留做抑菌实验,一部分依次用石油醚､氯仿､乙酸乙酯及正丁醇萃取,得到各部位浸膏,置4 ℃冰箱保存备用｡2)细叶黄皮茎皮挥发油的提取｡称取切碎的新鲜细叶黄皮树茎皮500 g,进行水蒸气蒸馏,馏出液用50 mL石油醚萃取3次,合并萃取液,加入无水Na2SO4静置12 h,回收溶剂得挥发油,挥发尽溶剂后得乳黄色油状物,置4 ℃冰箱保存备用｡1.4.2抑菌试验1)细菌悬液的制备｡分别用无菌棉签蘸取供试菌接种于10 mL牛肉膏蛋白胨液体培养基,于37 ℃下摇床培养18 h,进行菌种活化｡活化后的细菌做10倍系列稀释,并活菌计数｡用无菌水将细菌分别配制成约106 CFU/mL浓度的细胞悬浮液｡2)抑菌圈的测定｡小滤纸片(直径为6 mm)放入干燥培养皿中,在120 ℃下蒸气灭菌20 min｡把培养基倒入培养皿中,待培养基自然冷却凝固后,用移液枪从每种菌种吸取100 μL,放入到相应的培养皿中,然后均匀涂布｡将试药(以哈药集团制药总厂生产的头孢拉定为对照药剂)浸泡的纸片置于平板内,于37 ℃左右恒温培养,18~24 h 后观察结果｡如果滤纸片周围无菌则说明有抑菌作用,即有抑菌圈｡有明显抑菌作用的测其抑菌圈的直径｡2结果与分析2.1抑菌活性初筛按照上述试验方法,发现细叶黄皮茎皮乙醇提取物(浓度约为1.21 mg/片)对金黄色葡萄球菌､绿脓杆菌､大肠杆菌､杀螟杆菌､枯草杆菌有抑制作用,因而用丙酮将乙醇提取物倍比稀释为系列浓度,浸泡滤纸片过夜,做抑菌试验,同时算出滤纸片所含的药液量[8],结果如表1｡试验结果表明,细叶黄皮茎皮乙醇提取物对金黄色葡萄球菌､绿脓杆菌､大肠杆菌､杀螟杆菌､枯草杆菌具有较强的抑制作用,其对大肠杆菌抑制作用最强,最低抑菌浓度为0.026 mg/片｡考虑到乙醇提取物为粗提物,成分很复杂,为了了解抑菌物质所存在的溶剂部位,因此做了乙醇提取物的石油醚､氯仿､乙酸乙酯及正丁醇部位初步抑菌试验(浓度均为1.645 mg/片),结果如表2所示｡试验结果表明,石油醚､氯仿､乙酸乙酯部位对供试菌均有抑制作用,正丁醇部位在该浓度下对供试菌均无抑制作用｡2.2石油醚､氯仿和乙酸乙酯部位最低抑菌浓度将细叶黄皮茎皮石油醚､氯仿和乙酸乙酯部位用丙酮倍比稀释为系列浓度进行抑菌活性检测(4片/皿),结果见表3｡由表3可以看出,细叶黄皮茎皮乙醇提取物的石油醚､氯仿､乙酸乙酯部位对金黄色葡萄球菌､绿脓杆菌､大肠杆菌､杀螟杆菌､枯草杆菌均有抑制作用｡这3个部位对大肠杆菌抑制作用都较强,最低抑菌浓度均为0.026 mg/片｡而对照药剂头孢拉定对5种供试菌均具很强的抑制作用,最小抑菌浓度只有0.408 μg/片;细叶黄皮茎皮提取物对5种菌的抑制作用相对较弱,但其作为一种植物药,具有安全､无毒的特点,值得深入研究｡2.3细叶黄皮茎皮挥发油最低抑菌浓度用石油醚将挥发油倍比稀释为系列浓度进行抑菌活性检测｡结果如表4,细叶黄皮茎皮挥发油对5种供试菌均有抑制作用,最小抑菌浓度为0.412~0.823 mg/片｡3结论试验结果表明,细叶黄皮茎皮乙醇提取物对革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌均有抑制作用,抑菌成分主要在石油醚､氯仿和乙酸乙酯部位,氯仿部位抑菌作用最强,最低抑菌浓度为0.026~0.206 mg/片｡细叶黄皮的茎皮挥发油对5种供试菌均有抑制作用,最小抑菌浓度为0.412~0.823 mg/片,其抑菌浓度比石油醚部位相对较小｡有关细叶黄皮茎皮的有效成分提取分离及抑菌作用值得深入研究｡参考文献:[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M]. 北京:科学出版社,1997.138.[2] 黄峰,何铣扬,雷艳梅. 极具发展前景的细叶黄皮果[J]. 广西热带农业,2005(4):30-31.[3] 谭江文,黄永平. 细叶黄皮是石山贫困地区农民增收致富门路——关于龙州､崇左､扶绥等县发展细叶黄皮的调查[J]. 广西林业,2004(4):22-23.[4] 汪云松,沈月毛,何红平. 河口细叶黄皮化学成分研究[J]. 有机化学,2003,23(增刊):144.[5] WANG Y S,HUANG R,LI N Z,et al. Coumarins from Clausum-olens Merr[J]. Biosci Biotechnol Biochem,2010,74(7):143-152.[6] 苏秀芳. GC-MS法分析鸡皮果叶挥发油的化学成分[J]. 安徽农业科学,2008,36(25): 10956-10957.[7] 苏秀芳,梁振益. GC-MS法分析山黄皮茎根挥发油的化学成分[J].时珍国医国药,2010,21(6):1540-1542.[8] KHAN M R,OMOLOSO A D. Antibacterial and antifungal activities of Dracontomelondao. [J]. Fitoterapia,2002,73(4): 327-330.。