3组织化学染色
特殊染色和组织化学
⒉粘蛋白
在同一种上皮和腺体内常可同时分泌2种 粘液物质，而在同部位的分泌物中两者 的比例和含量都有所不同。
⒉粘蛋白
粘液物质一般具有下列性质： ①对异染性染料具有异染性； ②对碱性染料具有很强的亲和力； ③除胃粘蛋白外，其他粘液遇醋酸时 都会发生沉淀； ④可溶于弱碱性溶液。
2．在心肌病变及其他心血管疾病的研究 用显示糖原的特殊染色，可以观察到由缺 血缺氧所致急性早期心肌坏死病灶内的糖 原明显减少甚至消失，呈均质的浓染状态， 而病灶周围则出现反应性异常糖原增多； 已愈合的心肌梗死灶周围的心肌纤维内可 有糖原颗粒浸润；心肌的横纹肌瘤也有大 量糖原存在。
3．糖原累积病的诊断及研究 用显示糖原的 特染方法可观察到由先天性遗传缺陷引起的 糖原累积病时，心、肝、肾、骨骼肌、单核 吞噬系统等器官内均有大量的糖原堆积。
1、有学者认为从物理学角度看，染色剂和组织 细胞的结合是“溶解”或“吸收”。例如苏丹类染 色剂使脂质着色，就是利用染色剂在脂质中的溶解 度大于在酒精等溶剂中的溶解度这一特性。有些染 色剂是染色剂分子通过渗透和毛细血管作用而被吸 收或沉淀到组织、细胞的小孔中去而着色的‘这种 机制的染色是很少的。
2、另有学者认为染色是染色剂与组织、细胞之间 的化学性结合。如显示含铁血黄素的普鲁士反 应是最典型的例子。
5)蒸馏水洗涤数次。
6)用Schiff试剂浸染5一 10min，如温度低时 可延长浸染时间。
7)倾去Schiff试剂，直 接流水冲洗10min。
8)用明砚苏木素染液浅 染胞核2—3min，过 染时可用o5％盐酸乙 醇液稍分化。
9)流水冲洗5一l0min。
10)乙醇脱水，二甲苯运 明，中性树胶封固。
注意事项
2、类化学方法 有少数方法的染色反应有特 殊性，但机制不明。
免疫组织化学及HE染色实验步骤
免疫组织化学及HE染色实验步骤免疫组织化学和HE（Hematoxylin and Eosin）染色是常用的组织学研究技术。
免疫组织化学用于检测组织中特定抗原的表达，可以帮助研究者了解细胞和组织的功能和性质。
HE染色则是常用的常规组织染色方法，用于观察组织的形态学特征。
下面将分别介绍免疫组织化学和HE染色的实验步骤。
1.获取组织标本：首先，需要获取要研究的组织标本，可以是活体组织或固定的组织。
固定的组织标本一般使用10%缓冲福尔马林进行固定。
2.制备标本切片：将标本切割成适合光镜观察的薄片。
切片厚度一般为3-5微米。
3.去蜡：将蜡包埋组织切片放入蜡溶液中，加热脱蜡，使组织切片恢复水化。
4.抗原修复处理：将切片放入抗原修复液中，通过高温或酶解方法进行抗原修复处理，使细胞或组织中的抗原保持完整。
修复液的选择和具体实验要求有关。
5.阻断非特异性结合：将切片浸入阻断液中，阻断非特异性结合位点，减少假阳性结果。
6.一抗孵育：将合适浓度的一抗溶液加到切片上，使其孵育一段时间。
根据要检测抗原的性质选择合适的一抗。
7.二抗孵育和信号增强：将与一抗结合的二抗溶液加到切片上，同时可以加入信号增强剂，提高检测灵敏度。
8.反应显色：将切片加入显色液中，使阳性细胞或组织部分显示出颜色反应。
常用的显色方法有原位杂交、过氧化物酶法和碱性磷酸酶法等。
9.脱水和封片：经过显色后，将切片在酒精中进行脱水处理，然后用透明介质嵌片，并保护封片，以便于观察。
HE染色的实验步骤如下：1.获取组织标本：同样，首先需要获取组织标本，可以是活体组织或固定的组织。
2.制备标本切片：将标本切割成适合光镜观察的薄片。
切片厚度一般为3-5微米。
3.去蜡和水化：将蜡包埋组织切片放入蜡溶液中，加热脱蜡，然后用醇和水进行水化，使组织切片恢复水化。
4.酸性染料处理：将标本切片放入染色液中，使用血红素作为酸性染料，将细胞核染成蓝色。
5.碱性染料处理：将标本切片放入染色液中，使用溴化钡和噻唑蓝作为碱性染料，将细胞质和胞浆染成红色。
HE染色与免疫组织化学染色实验报告[最新]
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HE染色与免疫组织化学染色实验报告1实验目的及意义1.1了解石蜡切片的制作过程1.2 掌握HE染色与免疫组织化学染色的基本原理以及染色方法1.3 熟悉HE染色与免疫组织化学染色后的读片知识2 实验方法及步骤2.1 石蜡切片制作及HE染色步骤2.1.1取材与固定：从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。
2.1.2脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。
再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。
2.1.3浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。
待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。
冷却凝固成块即成。
包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。
2.1.4切片前的准备工作：先将包埋的每块组织周围过多的石蜡切去，四周留约2mm的石蜡块，块两边必须切成平行的直线。
将玻片擦洗干净后均匀涂抹薄薄的一层蛋白甘油，放置冰箱备用。
2.1.5切片与贴片：将预冷的蜡块固定于切片机上，调节切片厚度为6微米，切成薄片。
切下的薄片往往皱折，放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。
2.1.6 脱蜡至水二甲苯Ⅰ20分钟，二甲苯Ⅱ20分钟，无水乙醇3分钟，95％酒精3分钟，80％酒精3分钟，70％酒精3分钟，自来水洗5分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。
2.1.7染色：苏木素液7分钟，自来水洗5分钟，1％盐酸溶液分化30秒，自来水洗5分钟，1％氨水返蓝10秒，自来水洗20分钟，95％酒精3分钟，1％伊红酒精溶液2分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。
2.1.8脱水和透明：95％酒精2分钟，无水酒精Ⅰ2分钟，无水酒精Ⅱ2分钟，二甲苯Ⅰ5分钟，二甲苯Ⅱ5分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。
常用免疫组织化学染色方法-步骤
常用免疫组织化学染色方法( 一)、ABC法：(注，下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行)1.切片经二甲苯Ⅰ5分钟。
2.切片经二甲苯Ⅱ5分钟。
3.无水酒精Ⅰ30秒。
4.无水酒精Ⅱ30秒。
5.95%酒精Ⅰ30秒。
6.95%酒精Ⅱ30秒。
7.90%酒精30秒。
8.80%酒精30秒。
9.70%酒精30秒。
10.自来水洗。
(后面的切片脱蜡至水一般都是1-10)11.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。
12.水洗。
13.抗原修复。
14.PBS洗3次，1分钟/次。
15.加入血清孵育20分钟。
16.摔干血清，加入一抗60分钟。
17.PBS洗3次，2分钟/次。
18加入二抗孵育30分钟。
19.PBS洗3次，2分钟/次。
20.加入ABC复合物，孵育30分钟。
21.PBS洗3次，2分钟/次。
22.DAB-H2O2孵育切片5-10分钟。
23.PBS洗，水洗。
24.Harris苏木素染核5-10分钟。
25.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。
(二)、LSAB法。
(SP法)(Labelled streptavidim biotln)1.切片脱蜡至水。
2.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。
3.水洗。
4.抗原修复。
5.PBS洗3次，1分钟/次。
6.加入血清孵育10分钟。
7.摔去血清，加入一抗孵育30-60分钟。
8.PBS洗3次，每次2分钟。
加入二抗，孵育20分钟。
9.PBS洗3次，每次2分钟。
10.加入SP复合物孵育20-30分钟。
11.PBS洗3次，每次2分钟。
12.DAB-H2O2孵育5-10分钟。
13.PBS洗，水洗。
14.Harris苏木素染核5-10分钟。
15.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。
(三)真空负压LSAB法1.切片脱蜡至水。
2.0.3%H2O2甲醇真空负压处理5min.3.水洗。
4.如果需要，可进行抗原修复。
5.PBS洗3次，每次1分钟。
6.加入正常血清真空负压处理5min。
《组织化学染色》课件
科学研究
通过染色技术，研究人员可 以观察和研究细胞的结构和 功能。
药物开发
染色技术也可以用于药物开 发过程中的药效评估和分析。
组织化学染色的原理
组织化学染色的原理是利用化学反应将染料分子与组织或细胞结构中的特定 成分结合，从而产生颜色反应。
组织化学染色的步骤
1
标本制备
将组织标本收集、固定和包埋，以便进行 Nhomakorabea一步的染色过程。
2
染料选择
根据需要染色的组织或细胞成分特点选择合适的染料。
3
固定和染色
将标本与染料处理，使染料与目标结合，并增强染色效果。
优点和限制
优点
组织化学染色可以提供直观的视觉信息，用 于研究和诊断。
限制
染色结果可能受到多种因素影响，例如标本 质量和染色剂的稳定性。
常见问题和解决方法
1 染色结果不明显
可能因为染料浓度不足，可以尝试增加染料浓度。
常用的染色方法
1 酸性染料
酸性染料常用于染色细胞核和某些细胞器，例如血液涂片中的噬菌体。
2 碱性染料
碱性染料主要用于染色胞浆和细胞骨架，如组织切片中的嗜酸性细胞。
3 特殊染料
特殊染料用于特定类型的细胞或组织元素，例如肿瘤标志物的染色。
染色技术的应用
医学诊断
组织化学染色在病理学中广 泛应用于疾病的诊断和鉴定。
《组织化学染色》PPT课 件
欢迎来到《组织化学染色》的课程！在本课程中，我们将深入探讨组织化学 染色的基本原理、常用方法以及应用领域。准备好扩展您的知识，并让我们 一起开始这个令人兴奋的旅程吧！
染色的定义和作用
染色是一种在组织学和生物学研究中常用的技术，通过使用染料将细胞和组织的特定结构染色，以显示 其形态、组织类型和功能特点。
组织化学技术
组织化学技术切片染色方法可以显示不同细胞和组织形态，以及细胞和组织中某些化学成分含量的变化。
一、染色的目的任何冰冻切片、石蜡切片等如果不经过染色，在显微镜下只能看到细胞及其它组织成分的轮廓，即使由于组织内部各种物质的折射指数不同，从光线的明暗上能观察到一些组织结构，但也是极其简单有限的，远不能满足观察和借以诊断的目的。
染色的目的，是将染料配制成溶液，将组织切片浸入染色剂内，经过一定的时间，使组织或细胞及其他异常的成分染上不同深浅的颜色，产生不同的折射率，便于在光学显微镜下进行观察。
因此，染色在组织形态学，特别是病理形态诊断、科研和教学工作中，都具有非常重要的意义和实用价值。
二、染色的原理染色就是染色剂和组织细胞相结合的过程。
有关两者结合的原理，有不同的学说，一般认为其过程是化学反应和物理现象。
（一）染色的化学反应在组织细胞内，一般有酸性和碱性区别，酸性物质部分能与溶液中的阳离子结合，碱性物质部分能与溶液中的阴离子结合。
在细胞核中，特别是核内染色质，一般有酸性物质组成（其中主要有核酸），故与碱性染料的亲和力很强，易于染色，以氧化苏木素代表的碱性染料中有染色作用的是阳离子。
在细胞浆中则由碱性物质组成，所以胞浆与酸性染料有较强的亲和力，以伊红染料为代表的酸性染料中有染色作用的是阴离子。
(二) 染色的物理作用1. 毛细作用及渗透作用组织有许多小孔，染料因渗透作用进入组织，它与组织没有牢固的结合，所以是单纯的物理作用，不能称为直接染色作用。
因所谓染色必需是染料留贮于组织内与组织有较稳固的结合。
2. 吸收或溶液作用组织吸收染料，作牢固的结合，组织的着色与溶液颜色相同，但不是和干燥染料的颜色相同。
如复红溶液为红色，所染组织也为红色，而干燥的复红带绿色。
3. 吸附作用吸附作用是固体物理的特性，它能从周围溶液中吸住一些细小的物质微粒，这些微粒可能是溶于溶液中的化合物，也可能是只在溶液中单独存在的离子，如染液中分散的色素粒子进入被染物质的间隙内，由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色。
细胞各种染色方法1
细胞各种染色方法1细胞各种染色方法1细胞是生物体的基本结构单位，研究细胞结构和功能对于理解生命活动的基本原理具有重要意义。
而在细胞研究中，染色方法是最常用的一种技术手段之一、通过染色，可以使细胞内的各种器官、蛋白质、核酸等结构或分子可视化，从而更好地研究细胞的结构与功能。
下面介绍一些常用的细胞染色方法。
1.原位杂交染色原位杂交是一种通过特异性核酸探针与目标细胞中的特定DNA或RNA 序列结合，从而实现靶分子检测和定位的方法。
通过这种方法，可以查看细胞中特定基因或RNA的表达情况，从而揭示该基因或RNA在细胞中的作用。
在原位杂交染色中，探针可以用荧光标记或放射性同位素标记，并使用显微镜观察或放射性成像等方法进行检测。
2.免疫染色免疫染色是一种利用抗体与特定抗原结合的原理，对细胞或组织进行染色分析的方法。
由于抗体可以识别并结合到蛋白质、多肽、糖、核酸等生物分子上，所以免疫染色可以用于检测特定蛋白质或分子的存在和表达水平。
免疫染色可以通过荧光染色或酶标染色来实现，进一步结合显微镜观察和图像分析等方法，可以定量或定位地研究细胞内的各种分子。
3.组织化学染色组织化学染色是一种通过化学反应将细胞或组织中特定分子染色的方法。
常用的组织化学染色方法有哈维氏酸碱性染色、格里姆萨染色、伊红-Wright染色等。
这些染色方法可以用来观察细胞内的DNA、蛋白质、核酸以及细胞器等结构，并通过显微镜观察，从而对细胞和组织的结构和组成进行研究。
4.核酸染色核酸染色是一种利用荧光染料或放射性染料对DNA或RNA进行直接染色的方法。
通过核酸染色，可以观察到细胞和细胞核的形态、数量和分布情况，进而研究细胞的分裂、DNA合成和RNA转录等过程。
核酸染色方法包括荧光染色和核酸复合物染色等，其中荧光染色可用于显微观察，核酸复合物染色则可通过放射性成像等方法进行检测。
细胞染色是细胞生物学研究中非常重要的一种手段，通过染色可以使细胞内的各种结构与分子可视化，从而更好地研究细胞的结构与功能。
肿瘤组织染色方法
肿瘤组织的染色方法主要有以下几种：
HE染色：也被称为苏木精-伊红染色，是组织学和病理学最常用的染色方法之一。
其原理是不同组织结构与不同染料的结合程度不同，染料苏木精能将嗜碱性结构（包括核糖体、细胞核等）染成蓝色，而伊红能将嗜酸性结构（包括细胞质、细胞外基质等）染成粉红色。
这种方法可以观察比较肿瘤组织和正常组织的结构和细胞形态等差异。
特殊染色：也是科研及病理实验的重要手段之一，其主要原理是利用各种特定的染料进行染色，以识别组织细胞中的不同组分，包括网状纤维、胶原纤维、弹性纤维、肌肉、纤维素及淀粉等组分。
通过这种方法，可以对比分析肿瘤组织和正常组织的这些组分的形态差异性。
组织化学染色：通过组织化学染色的方法检测肿瘤细胞质中某种物质的存在，用于鉴别肿瘤组织来源及类型，如黏液、糖蛋白、黑色素和含铁血黄素等。
免疫组化染色：是病理诊断常规检测技术，应用抗原与抗体特异性结合的免疫学原理，通过标记抗体的显色剂进行染色。
以上是肿瘤组织染色的主要方法，每种方法都有其特定的应用范围和目的。
在实际应用中，应根据具体的实验需求和目的选择合适的方法。
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特点：此法简单可靠，染色时间短，常用于活 检病理组织检查。
结缔组织染色——网状纤维染色
网状纤维染色的应用 肿瘤的诊断和鉴别诊断： 癌和肉瘤的鉴别：癌巢周围存在网状纤维；
肉瘤中网状纤维围绕每个细胞 尤文氏瘤和淋巴瘤：尤文氏瘤无网状纤维，
肌组织染色，神经组织染色 按染色对象种类分类：切片染色法，组织块
染色法，大体标本染色法
染色方法的命名
按发明者姓名命名：如Van. Gieson（VG） 染色
按所有染料分类：如苏丹IV染色，锇酸染色 按所染组织分类：如网状纤维染色 其他分类：
染色中易出现的问题和对策
选择适当的组织处理方法：包括固定液和切 片的选择，如脂肪和酶类染色需冰冻切片
• 应做阳性切片作对照，保证染色结果的可靠性。 • 染色所用的器皿都必须清洗。
常用染色方法和应用
结缔组织染色
结缔组织由细胞和细胞间的骨架成分构成， 分为无定形的间质（如硫酸盐和非硫酸盐黏多 糖）和定形或纤维型间质（如胶原纤维，弹力 纤维。网状纤维）。各种纤维成分的识别有助 于病理学的诊断和鉴别诊断。
退行性染色：又称后退性染色，先使组织着色过度， 再用某些溶液脱去多余染液，达到合适染色强度
媒染剂：具有促进染色能力，对染料和组织都有亲 和力并与染料和组织结合在一起的试剂。如硫酸铝 钾等
染色的常用术语
促，如乙酸
异染性染色：组织经过盐基性染料染色后，出现与 染料不同的颜色
淋巴瘤内存在大量网状纤维 脑膜瘤和胶质瘤：脑膜瘤有网状纤维。胶质
瘤少
结缔组织染色——网状纤维染色
网状纤维染色的应用
某些梭形细胞肿瘤的诊断：已被免疫组化取代，很少用 ①平滑肌瘤的瘤细胞间可见大量平行分布的网状纤维； ②纤维肉瘤则见大量网状纤维密集包绕细胞； ③滑膜肉瘤的梭形细胞产生网状纤维少。
染料和染色的原理
二、染料的分类
染料的来源分类：天然和合成染料 化学反应分类：碱性染料、酸性染料、中性染料 用途分类：
细胞核染料：苏木素，核固红，结晶紫等 细胞质染料：伊红，酸性复红，苦味酸等 脂肪染料：油红O，苏丹III，苏丹IV 纤维结缔组织染料：苦味酸，亮绿等
染料和染色的原理
三、染料的原理
分化：指用某种溶液选择性脱去过深的着色，并使 不应着色的组织细胞成分脱色的过程，HE染色时的 盐酸酒精分化
蓝化作用（返蓝）：苏木素在酸性条件下呈红色， 碱性条件下呈蓝色，HE染色时在酸分化后，再用碱 性水使核变蓝，称蓝化
染色方法的分类
按照染色方法分类 一般方法分类：常规染色，特殊染色等 按主要组织和细胞成分分类：结缔组织染色，
从而使脂质着色。
染料和染色的原理
三、染料的原理
化学机制： 组织和细胞中含有碱性和酸性物质，分别与染料中的阳
离子和阴离子结合。 如HE染色：细胞核主要由核酸构成，与碱性染料-苏木
素结合，而胞浆主要由碱性物质构成，与酸性染料-伊红 结合。
染色的常用术语
普通染色：又称常规染色，即指HE染色（haematoxylin and eosin HE）
特殊染色在临床病理学中的应用
染色的意义和目的
用染料对组织切片进行处理，使组织中的不同 成分被染上相应的颜色，产生不同的折射率，以 利于光镜观察和分析。病理染色属于生物性染色 的范畴。
特殊染色（special staining）
应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显 色剂，显示组织或细胞的正常结构或病理过程中出现 的异常物质、病变及病原体等，称特殊染色（Special staining） 。
染色液的有效期和保存方式 染色液的浓度和pH值 染色时间的控制 染色前切片的预处理：如脱甲醛色素，脱汞
盐固定液的汞结晶等
染色中易出现的问题和对策
• 注意特染的应用范围，如某种病变应用什么方法染色才能 达到目的，一般根据HE切片所见，选择适当的特染方法。
• 必须掌握各种特殊染色的结果，避免导致错误的结论或严 重的误诊，如在网染时把胶元纤维误以为网状纤维。
结缔组织染色——网状纤维染色
网状纤维的特性
网状纤维是构成组织的网状支架 广泛分布于实质器官内，其中最丰富的区域是肝脏、脾脏、
淋巴结、骨髓、基膜、血管等 形态学上为交织成网的纤细纤维 化学成分为网状蛋白，一种特殊的胶原蛋白，抗酸 病理状态下可转化为胶原纤维 具有嗜银性，又称嗜银纤维 HE染色着色淡，特殊染色可显示
染料和染色的原理
一、染料的特点：
组织病理学染料是生物学染色剂 对所染组织成分具有亲和力 染色剂中同时具备发色团和助色团才具有染色功
能 发色团是使染料显色的化学团（色原），一种染
料由一个或多个发色团，染料颜色取决于发色团 多少和强弱。 助色团指使色原产生电离成为盐类，对被染物产 生亲和力的原子团
特殊染色：除HE以外的所有染色，显示特定的组织结构 和成分。
单一染色：用一种染料进行的染色，如甲苯胺蓝染幽门螺 杆菌
多色染色：用两种以上染液染色的方法，如三色染色 对比染色：又称复染或衬染，先将某一成分或结构染色后，
再用另一种染料染其他成分，如苏木素衬染细胞核
染色的常用术语
进行性染色：渐进性染色，采用低浓度的染液，使 组织成分着色自浅入深，直到达到合适强度，
结缔组织染色——网状纤维染色
网状纤维染色的原理
网状纤维染色方法很多，但基本原理相同，即经过 氧化剂的氧化使网状纤维对银离子具有选择性的亲和 能力（嗜银性），并在媒染剂的作用下网状纤维吸附 二氨合银离子，在经甲醛将其还原为黑色金属银而显 示出网状纤维。
结缔组织染色——网状纤维染色
常用网状纤维的染色方法 Gomori染色法
物理机制： 毛细管渗透作用：染色剂沿组织间微孔渗透到组织中。 吸收或溶解作用：组织吸收或溶解染料而着色，如脂肪染
色 吸附作用：染料的色素粒子浸润组织中，因分子引力，色
素粒子被吸附而染色
• 例如脂肪染色:
苏丹类染色剂在脂质中的溶解度＞酒精中的溶 解度
溶解于酒精的苏丹类染色剂与组织中的脂质 接触时，染色剂就从溶液中“转移”到脂质中，