植物氨态氮测定
土壤铵态氮等测定
土壤铵态氮等测定
土壤铵态氮是指土壤中的直接可以被植物利用的氮组分，它可以影响到植物的生长发育和生产力，因此在农业土壤检测和作物肥料管理中具有重要的意义。
测定土壤铵态氮的方法主要有总氮含量测定法和紫外吸收法，实用性较强的是Kjeldhal定氮法和UV-VIS吸收法，下面分别介绍一下。
Kjeldahl定氮法：Kjeldahl定氮法是土壤分析中最常用的测定土壤铵态氮的方法，原理是将氮以氢氧化铵为氢氮，放入铵态氮测定器中，室内加入硫酸和硫酰亚胺溶液，负责水解溶液中的氮。
在给定的温度和时间内，所有的铵态氮都会被氢氧化铵氧化为氮气，此时可以用滴定法测定氮气的浓度，从而计算出氮的含量。
实际应用中，物料质量不同，必须调整配比液的用量，以获得更精确的测定结果。
紫外吸收法：紫外吸收法是一种测定土壤铵态氮的非滴定性方法，它利用光子被吸收的原理，以222、263、280nm为激发波长，将样品中的氮通过新张的反应，通过放射的紫外线，被定量检出。
在实验过程中，土壤样品质量应该控制在0.20-2.00g，铵态氮的检出范围0.02-10mg/L。
紫外吸收法的主要优点是快速准确，但存在污染物干扰检出限低的弊端。
OKeldal定氮法和UV-VIS吸收法是测定土壤铵态氮的两种有效方法，在选择实验方法时应当综合考虑。
Kjeldahl定氮法要求样品质量大，测定结果受污染物干扰小，但实验时间较长；而紫外吸收法实验时间短、效果立竿见影，但容易受吸收中间体所影响，而铵态氮浓度过高时，检出限也会受到影响。
因此，检测时应当根据实际情况，合理选择。
铵态氮和硝态氮测定方法!!!-副本
铵态氮和硝态氮测定⽅法-副本铵态氮测量⽅法（2mol?L-1KCl浸提—靛酚蓝⽐⾊法）1）⽅法原理2mol?L-1KCl溶液浸提⼟壤，把吸附在⼟壤胶体上的NH4+及⽔溶性NH4+浸提出来。
⼟壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作⽤，⽣成⽔溶性染料靛酚蓝，溶液的颜⾊很稳定。
在含氮0.05～0.5mol?L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正⽐，可⽤⽐⾊法测定。
2）试剂（1）2mol?L-1KCl溶液称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于⽔中，稀释⾄1L。
（2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释⾄1L。
此试剂不稳定，须贮于棕⾊瓶中，在4℃冰箱中保存。
（3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢⼆钠（Na2HPO4?7H2O，化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4? 12H2O，化学纯）31.8g和52.5g?L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂⽩粉溶液)5mL溶于⽔中，稀释⾄1L，贮于棕⾊瓶中，在4℃冰箱中保存。
（4）掩蔽剂将400g?L-1的酒⽯酸钾钠（KNaC4H4O6?4H2O，化学纯）与100g?L-1的EDTA⼆钠盐溶液等体积混合。
每100mL 混合液中加⼊10 mol?L-1氢氧化钠0.5mL。
（5）2.5µg?mL –1铵态氮（NH4+—N）标准溶液称取⼲燥的硫酸铵[(NH4)2SO4，分析纯0.4717g溶于⽔中，洗⼊容量瓶后定容⾄1L，制备成含铵态氮（N）100µg?mL –1的贮存溶液；使⽤前将其加⽔稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5µg?mL –1的标准溶液备⽤。
3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。
4）分析步骤（1）浸提称取相当于10.00g⼲⼟的新鲜⼟样（若是风⼲⼟，过10号筛）准确到0.01g，置于150mL三⾓瓶中，加⼊氯化钾溶液100mL，塞紧塞⼦，在振荡机上振荡1h。
植物总氮测定
13.2.1 .1 植株全氮的测定(不包括硝态氮， H2SO4- H2O2消煮，奈氏比色法)[4]13.2.1.1.1 方法原理植物样品在浓H2SO4溶液中，历经脱水碳化、氧化等一系列作用，而氧化剂H2O2在热浓H2SO4溶液中分解出的新生态氧(H2O2——H2O2+ [O])具有强烈的氧化作用，分解H2SO4没有破坏的有机物和碳。
使有机氮、磷等转化为无机铵盐和磷酸盐等，因此可以在同一消煮液中分别测定N、P、K等元素的联合测定。
该消煮液除可用半微量蒸馏法定氮外，还可用奈氏比色法测定溶液中氮的含量。
奈氏(Nessler)比色法的原理如下：待测液中的铵在pH=11的碱性条件下，与奈氏试剂作用生成桔黄色配合物，其反应式如下：KOH2KI + HgI2 —— K2HgI4(奈氏试剂)K2HgI4 + 3KOH + NH3 —— Hg2O(NH4I) (桔黄色) + 7KI + H2O上述显色过程受溶液pH的影响很大，溶液pH=4时不显色，从pH=4~11之间随pH升高而颜色加深，pH=11时显色完全，其桔黄色的深浅在显色液NH4＋-N的浓度在0.2~3mg·L-1时符合比耳定律。
凡是在测定溶液中引起混浊的物质中Ca2+、Mg2+、Fe3+、S2-以及酮、醇等，在植物分析中主要是Ca2+、Mg2+离子的干扰，可加酒石酸钠配合掩蔽。
13.2.1.1..2主要仪器开氏瓶(100mL)；控温消化炉，721分光光度计。
13.2.1.1.3 试剂（1）基本试剂：浓H2SO4； 300g·L-1 H2O2；100 g·L-1酒石酸钠溶液；100 g·L-1 KOH溶液；（2）奈氏试剂：溶解HgI2 45.0g 和 KI 35.0g于少量水中，将此溶液洗入1000mL容量瓶，加入KOH 112g，加水至800mL，摇匀，冷却后定容。
放置数日后，过滤或将上清液虹吸入棕色瓶中备用。
（3） 100 μg·mL-1N(NH4+-N)标准溶液：称取烘干NH4Cl(分析纯) 0.3817g溶于水中，定容为1000mL，此为100 μg·mL-1N(NH4+-N) 贮备液。
土壤氮测定方法
土壤氮测定方法引言：土壤氮是土壤中的一种重要养分，对植物的生长发育具有重大影响。
因此，准确测定土壤中的氮含量对于合理施肥和农作物的高产高质量生产具有重要意义。
本文将介绍几种常用的土壤氮测定方法，帮助读者了解和选择适合自己的测定方法。
一、硝态氮测定方法1. 硝酸还原法：该方法是将土壤中的硝态氮还原为亚硝态氮，然后通过显色反应测定亚硝态氮的含量。
具体操作步骤如下：a. 取土壤样品，加入一定比例的三氯化铁和硫酸，使样品中的硝态氮转化为亚硝态氮。
b. 加入显色试剂，与亚硝态氮发生显色反应。
c. 根据显色反应的强度，利用光度计或比色计测定亚硝态氮的含量。
2. 硝酸还原-分光光度法：该方法是将土壤中的硝态氮还原为亚硝态氮，然后利用分光光度计测定亚硝态氮的吸光度。
具体操作步骤如下：a. 取土壤样品，加入一定比例的硫酸和硫化亚铁，使样品中的硝态氮还原为亚硝态氮。
b. 利用分光光度计测定亚硝态氮的吸光度。
c. 根据标准曲线或计算公式计算出土壤中硝态氮的含量。
二、铵态氮测定方法1. 蒸发测定法：该方法是利用土壤中铵态氮易于挥发的特点，将土壤样品经过蒸发处理，然后测定挥发出的铵态氮的含量。
具体操作步骤如下：a. 取土壤样品，加入一定比例的碱液，使铵态氮转化为氨。
b. 将样品进行蒸发处理，使挥发出的氨与酸反应生成盐酸。
c. 通过滴定法或酸度计测定盐酸的含量，从而计算出土壤中铵态氮的含量。
2. 直接测定法：该方法是直接测定土壤样品中的铵态氮含量，不需要经过转化或处理。
具体操作步骤如下：a. 取土壤样品，加入一定比例的提取液，使土壤中的铵态氮溶解。
b. 进行离心或过滤处理，将溶液中的杂质去除。
c. 利用分光光度计或离子色谱仪测定铵态氮的含量。
三、全氮测定方法全氮是土壤中所有形态氮的总和，包括有机氮和无机氮。
测定全氮的方法有多种，常用的包括燃烧-红外吸收法和湿氧燃烧法。
这里以湿氧燃烧法为例进行介绍：1. 取土壤样品，加入一定比例的氧化剂和催化剂。
转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法
六、氮含量〔硝酸盐、亚硝酸盐、游离氨基酸、铵态氮等〕的测定：〔2g〕样品提取液的提取: 称取新颖植物组织2g，参加15ml无离子水研磨成匀浆，置于45℃振荡机中摇动浸提〔或超声波〕lh后用5ml无离子水冲洗干净，然后离心或过滤(如含色素需用活性炭脱色)，滤液备用。
备注〔lg的经历〕：可溶性糖、可溶性蛋白质、VC等需要研磨提取的简单指标也可以使用此提取液按比例测定。
1硝态氮的测定：标准氮试剂：精称KNO3 0.9021g，溶于少量重蒸无离子水中，并定容至250ml，含N 量为500µgNO3一N／ml。
5％水杨酸一硫酸溶液：称取水杨酸5g，溶于100ml浓H2SO4(比重1．84)中，搅拌溶解后贮于棕色瓶内，冰箱中至多保存l周，最好现用现配。
2mol／L NaOH溶液：称取NaOH 80g放入500ml硬质烧杯中，参加重蒸无离子水200ml，溶解后定容至l000ml。
操作方法标准曲线制作取：50ml容量瓶6只(编号)，依次参加标准氮试剂5、l0、l5、20、25、30ml，用无离子水定容，那么成为50、100、l50、200、250、300 ug／ml 的氮系列标准溶液；再取干沽50ml三角瓶7只，分别装入上述系列溶液0．2ml，剩下的1只三角瓶参加无离水0.2ml(作为O 点)；然后分别参加5％水杨酸一硫酸溶液0.8ml，混匀静置20--30min(显色)；最后参加2mol／L NaOH溶液l9ml，混匀。
冷却后利用751分光光度计，于410nm下比色，记录光密度(OD)值；并以OD 值为纵座标，以标准氮(0、50、l00、150、200、250、300 ug)为横座标，绘制一条标准曲线(通过原点的直线)。
0.1ml滤液＋0.4ml 5％水杨酸一硫酸溶液，混匀静置20--30min(显色)；最后参加2mol／L NaOH溶液9.5ml，混匀。
冷却后利用751分光光度计，于410nm下比色，记录光密度(OD)值；结果计算按照公式A= CV1/(WV2) 计算。
植物铵态氮实验报告
一、实验目的1. 了解植物体内铵态氮的生理作用及其与植物生长的关系。
2. 掌握植物铵态氮含量的测定方法。
3. 通过实验，提高对植物营养生理学知识的理解和应用能力。
二、实验原理植物吸收氮素主要以铵态氮和硝态氮两种形式。
铵态氮是植物体内氮素代谢的重要形式，对植物生长和发育具有重要作用。
本实验采用苯酚-次氯酸钠法测定植物体内铵态氮含量。
苯酚-次氯酸钠法：在酸性条件下，苯酚与铵态氮反应生成苯酚-铵，苯酚-铵在碱性条件下与次氯酸钠反应生成黄色化合物，通过比色法测定黄色化合物的吸光度，从而计算出植物体内铵态氮含量。
三、实验材料1. 植物样品：小麦、玉米、大豆等。
2. 试剂：苯酚、次氯酸钠、盐酸、氢氧化钠等。
3. 仪器：电子天平、酸度计、分光光度计、研钵、移液管、试管等。
四、实验步骤1. 样品处理：将植物样品洗净、烘干、磨碎，过40目筛，准确称取0.5g（精确到0.0001g）样品置于50mL锥形瓶中。
2. 水解：向锥形瓶中加入5mL 0.1mol/L盐酸，充分振荡，使样品充分溶解。
3. 反应：向锥形瓶中加入2mL苯酚-次氯酸钠溶液，充分振荡，使样品与试剂充分反应。
4. 测定：用酸度计测定溶液pH值，调整至8.5，在分光光度计上测定黄色化合物的吸光度。
5. 计算铵态氮含量：根据标准曲线，计算出样品中铵态氮含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以铵态氮浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算出样品中铵态氮含量。
3. 结果分析：比较不同植物样品的铵态氮含量，分析其与植物生长的关系。
六、实验结论1. 通过本实验，掌握了植物铵态氮含量的测定方法。
2. 实验结果表明，植物体内铵态氮含量与植物生长密切相关，不同植物品种对铵态氮的吸收和利用能力存在差异。
3. 本实验为进一步研究植物营养生理学提供了实验依据。
七、实验注意事项1. 实验过程中，注意溶液的pH值，确保反应条件适宜。
2. 称量样品时，注意精确度，避免误差。
实验三 植物营养(铵态氮,硝态氮)
高级植物生理实验报告植物营养农学院农药学东保柱20132020542013年12月27日实验1 植物组织铵态氮含量的测定（茚三酮比色法）一、实验原理植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成氨，前者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋白质。
测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的茚三酮比色法。
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。
根据蓝紫色的深浅，在580nm 波长下测定吸光值。
本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服茚三酮的不稳定性。
二、仪器设备研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计三、试剂1. 10%醋酸(100mL)2. 1% 抗坏血酸（100mL）3. 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g定容至1000mL）4. pH5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L 醋酸（冰醋酸11.55mL稀释至1000mL）加41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠16.4g或三水醋酸钠27.2g 配成1000mL）。
5. 水合茚三酮试剂：1.1g茚三酮放到烧杯中，加入15mL正丙醇，摇匀，溶解，后加入30ml正丁醇和60ml乙二醇，混匀，再加9mL pH5.4醋酸缓冲液，混匀。
保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限10天。
四、操作步骤1. 标准曲线的绘制以下表所示量从5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馏水至2mL，对照加2mL 蒸馏水，后在各试管中加入3mL 水合茚三酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。
盖上试管塞，于沸水中加热15分钟，取出后搅拌冷却15分钟。
冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL，在波长580nm 处测吸光值，以铵态氮浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
土壤—铵态氮的测定—光度法
铵态氮的测定—光度法1 范围本方法适用于土壤低含量铵态氮的测定。
2 原理土壤用氯化钾溶液浸提，浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，借以光度法测定。
含氮量在0.05mg/L～0.5mg/L范围内，吸光度与铵态氮含量成正比。
3 试剂3.1 氯化钾溶液：2mol/L，称取149.1g氯化钾，溶于水中，再稀释至1000mL。
3.2 苯酚溶液：称取10g苯酚（C6H5OH）和100mg硝基铁氰化钠（Na2Fe(CN)5NO·2H2O），溶于水中，再加水稀释至1000mL。
此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
硝基铁氰化钠有剧毒，使用时应注意。
3.3 次氯酸钠碱性溶液：称取10g氢氧化钠、7.06g磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）、31.8g磷酸钠（Na3PO4·12H2O）和10mL次氯酸钠溶液（NaOCl，称取5.25g次氯酸钠溶于100mL水中，即含5%有效氯的漂白粉溶液），溶于水中，再加水稀释至1000mL。
贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
3.4 掩蔽剂：称取40g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）溶于100mL水中。
再称取10g EDTA二钠盐溶于100mL水中。
然后将两种溶液按等体积混合，每100mL混合溶液中加0.5mL 10mol/L氢氧化钠溶液。
3.5 铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。
使用前再稀释成1mL含2.5µg N 的工作标准溶液。
4 仪器4.1 振荡机。
4.2 分光光度计。
4.3 锥形瓶，200mL。
4.4 容量瓶，50mL，100mL。
5 操作步骤5.1 待测液的制备：称取20.00g新鲜土样（精确至0.01g）置于200mL锥形瓶中，加入100.00mL氯化钾溶液，加塞，放在振荡机上振荡1h。
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植物组织氨基酸含量的测定（改良的茚三酮比色法）
一、实验原理
植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成氨，前者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋白质。
测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的茚三酮比色法。
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。
根据蓝紫色的深浅，在580nm波长下测定吸光值。
本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服茚三酮的不稳定性。
二、仪器设备
研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计
三、试剂
1. 10%醋酸(100mL)
2. 1% 抗坏血酸（100mL）
3. 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g定容至1000mL）
4. pH
5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L 醋酸（冰醋酸11.55mL稀释至1000mL）加41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠1
6.4g或三水醋酸钠2
7.2g 配成1000mL）。
5.水合茚三酮试剂：1.1g茚三酮放到烧杯中，加入15mL正丙醇，摇匀，溶解，后加入30ml正丁醇和60ml乙二醇，混匀，再加9mL pH5.4醋酸缓冲液，混匀。
保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限10天。
四、操作步骤
1. 标准曲线的绘制
以下表所示量从5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馏水至2mL，对照仅加2mL 蒸馏水，后在各试管中加入3mL 水合茚三酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。
盖上试管塞，于沸水中加热15分钟，取出后搅拌冷却15分钟。
冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL，在波长580nm 处测吸光值，以氨态氮浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
试管号 1 2 3 4 5 6 7
试剂（mL） 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 1.8
氨态氮浓度 0 0.5 1 2 3 4 5 （μg/mL）
2.称取0.5g 新鲜植物材料，放入研钵中，加入5mL 10%醋酸，研磨
后以蒸馏水稀释至100mL ，混匀，通过滤纸过滤，弃去最先滤下的一部分滤液后过滤到100mL三角瓶中。
3.从剩下的滤液中取2mL 放入试管中，加3mL 水合茚三酮试剂和
0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。
盖上试管塞，于沸水中加热15分钟。
同时将盛有对照溶液（提取液用蒸馏水代替）的试管加热。
4.取出后搅拌冷却15分钟。
加热形成的红色茚三酮试剂被氧氧化而
褪色，茚三酮与氨基酸形成的蓝紫色反应产物仍然存留并变得更
加鲜明。
冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL ，混匀。
在波长
580nm 处测光密度值，根据标准曲线查得数值代入以下公式计算
氨态氮含量。
（10-6×100×C）
X（100g 样品中的氨态氮毫克数）=×100
n
C：比色液中氨态氮浓度（μg/mL）
n：样品重量（g）
100：分析溶液总体积（mL）
5.实验结果与分析
氨态氮含量标曲：
序号 1 2 3 4 5 6 7 氨态氮浓度0 0.5 1 2 3 4 5 OD值0.152 0.237 0.318 0.415 0.484 0.607 0.718
方程：y=0.1073X+0.181
测定样品液的OD580值为：0.939
标曲查得：0. 939=0.1073C-0.181 C=10.38μg/mL
（0.1×10×10.38μg/mL）
X（100g 样品中的氨态氮毫克数）= ×100=10.38mg/100g
（2×0.5）
故：该植物中氨态氮的含量为10.38mg/100g。