常用细胞培养基配方及缓冲液
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方缓冲液和培养基是生物学实验中常用的重要试剂，它们的配方的选择对实验结果有着重要的影响。
下面将介绍几种常用的缓冲液和培养基的配方及其用途。
一、缓冲液配方1.磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液常被用于细胞培养和生物化学实验中，它的使用范围很广。
常用的磷酸盐缓冲液有PBS（磷酸盐缓冲盐水），配方如下：-NaCl8g-KCl0.2g-Na2HPO41.42g-KH2PO40.24g将以上物质溶解在1L的去离子水中，pH值调到7.4，即可得到1×PBS缓冲液。
2. Tris缓冲液Tris缓冲液在分子生物学实验中常被用作DNA和RNA电泳的产物混合液。
常用的Tris缓冲液有Tris-HCl缓冲液和Tris-acetate缓冲液。
以下是Tris-HCl缓冲液的配方：- Tris 12.1 g-HCl(10M,pH7.6)10mL将Tris和HCl分别溶解在800 mL去离子水中，然后添加水调至1 L，pH值调节到目标值即可。
Tris-acetate缓冲液的配方与Tris-HCl相似，只是在Tris-HCl的基础上添加乙酸。
3. Glycine缓冲液Glycine缓冲液常被用于电泳实验中，用于电泳缓冲液和电泳媒介液的制备。
以下是Glycine缓冲液的配方：- Glycine 3 g- Tris 4.8 g-SDS0.207g-EDTA0.37g将以上物质溶解在1 L的去离子水中，pH值调至8.3，即可得到1×Glycine缓冲液。
1.LB培养基LB培养基是最常用的细菌培养基之一，用于培养大肠杆菌等革兰氏阴性菌。
以下是LB培养基的配方：- Tryptone 10 g- Yeast extract 5 g-NaCl10g将以上物质溶解在1L的去离子水中，加热至溶解，然后进行高压灭菌即可得到LB培养基。
2.M9培养基M9培养基是一种缺乏氮、氨基酸和碳的最小培养基，常被用于重组DNA的传输。
几种主要培养基配方
几种主要培养基配方在微生物学和生物化学实验中，培养基是一种提供营养物质，促进微生物或细胞生长和繁殖的人工培养介质。
培养基配方的选择取决于所培养的生物的特性和需要。
以下是几种常见的主要培养基配方：1.液体培养基液体培养基是一种透明液体，主要由多种有机和无机化合物组成。
它提供了细胞所需的所有营养物质，并具有较高的溶解性。
液体培养基可以用于菌苗投放、菌种产生等实验。
常见的液体培养基配方包括：-LB培养基：由蛋白胨、酵母提取物和盐酸混合而成。
适用于大多数细菌的培养。
-TB培养基：类似于LB培养基，但含有甘油和磷酸盐缓冲液。
适用于产生大量细胞质或蛋白质的生物学实验。
-BHI培养基：由脑心肝提取物和酵母提取物组成。
适用于革兰氏阳性菌的培养。
-TSB培养基：由胨、酵母提取物和盐溶液混合而成。
适用于细菌和真菌的培养。
2.固体培养基固体培养基是将适当的凝固剂添加到液体培养基中，形成固体状态。
它用于细菌、真菌和许多其他微生物的分离和培养。
常见的固体培养基配方包括：-培养基琼脂：由琼脂和液体培养基配方混合而成。
适用于各种微生物的培养。
-布置气体：含有牛血、蔗糖和琼脂的培养基。
适用于肺炎球菌和其他嗜血菌的培养。
-罗盘琼脂：含有羊血、肉蔗糖和琼脂的培养基。
适用于嗜肺军团菌的培养。
-马铃薯葡萄糖琼脂：由马铃薯汁、葡萄糖和琼脂组成。
适用于真菌的培养。
3.选择性培养基选择性培养基是一种能够选择特定细菌生长的培养基。
它包含了一些抑制其他微生物生长的成分，以便于所需微生物的分离。
常见的选择性培养基配方包括：- MacConkey琼脂培养基：含有胆盐、素碱和结晶紫的培养基。
适用于革兰氏阴性菌的培养。
-EMB琼脂培养基：含有艾希希氏菌靛蓝和素碱的培养基。
适用于弧菌、大肠杆菌等细菌的培养。
- Pseudomonas琼脂培养基：含有铜硫酸、锌酸和金属钠的培养基。
适用于绿脓杆菌的培养。
4.部分定义培养基部分定义培养基是一种含有部分有机和无机成分的培养基。
常用培养基配制
限制-修饰
rRNA
核糖体核糖核酸
RT
逆转录
RT-PCR
逆转录聚合酶链式反应
SAM
S-腺苷蛋氨酸
SAP
虾碱性磷酸酶
SDA
链置换扩增
/升
终1 X浓度
Na2HPO4x7H2O
64 g
47.8 mM
KH2PO4
15 g
22 mM
NaCl
2.5 g
8.6 mM
NH4
5 g
18.7 mM
添加剂
/升
终1 X浓度
抗生素(如果需要)
氨苄青霉素
50 µg/ml
氯霉素
20 µg/ml
卡那霉素
30 µg/ml
四环素
12 µg/ml
半乳糖苷(如果需要)
2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001.
0.1% (w/v)
H2O
至1升
稀释溶液的pH至8.3
5X Tris-三(羟甲基)甲基甘氨酸-SDS电泳缓冲液
/升
终1 X浓度
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方LB液体培养基：加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。
LB固体培养基：每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。
SOB液体培养基Bacto-蛋白胨 20g酵母抽提物 5gNaCl 0.5g加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。
使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。
SOC液体培养基SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。
麦康凯固体培养基每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。
NA固体培养基加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。
TB培养基：将下列组分溶解在0.9L水中：各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ 0.72 mol/L K2HPO4的溶液。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。
溶液Ⅰ葡萄糖 2.25 g 50mmol/L1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。
溶液Ⅱ10 mol/L NaOH 2ml10% SDS 10ml用水定容至100 ml，现配现用。
溶液Ⅲ5 mol/L 醋酸钾 60ml冰醋酸 11.5ml水 28.5ml高压灭菌后保存。
高盐TE缓冲液10mmol/L Tris.Cl, pH 8.0*0.1mmol/L EDTA, pH 8.0*1mol/L NaCl于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB抽提液2%（w/v）CTAB(古立烷基三乙基溴化铵)100mmol/L Tris.Cl,pH 8.0 *1.4mol/L NaCl于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB/NaCl 溶液（10% CTAB/0.7mol/L NaCl）在80ml H2O中溶解4.1g NaCl,缓慢加入10一CTAB（十六烷基三乙基溴化铵），同时加热并搅拌。
常用细胞培养基配方及缓冲液
常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是为了在体外维持细胞生长和增殖所设计的一种营养液。
细胞培养基的配方要求提供细胞所需的基本营养物质，如氨基酸、糖类、维生素和激素，并提供适当的pH和离子平衡。
同时，缓冲液也是细胞培养过程中不可或缺的一部分，用于稳定细胞培养基的pH，维持细胞正常的生长环境。
下面列举几种常用的细胞培养基配方及缓冲液：1. DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)-细胞培养基配方：-DMEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：无2. RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute Medium) -细胞培养基配方：-RPMI1640培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)溶液，浓度为25mM，用于稳定pH。
3. MEM (Minimum Essential Medium)-细胞培养基配方：-MEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)- 缓冲液：盐酸/NaOH缓冲体系，通常用NaHCO3/N-2-羟乙基piperazine-N'-2-乙磺酸(HEPES)缓冲。
4. Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)-细胞培养基配方：-HBSS培养基粉末-对应体积的无菌水-缓冲液：无5. L-15 Medium (Leibovitz's L-15 Medium)-细胞培养基配方：-L-15培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。
6. DMEM/F12 Medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium and Ham's F-12 Medium)-细胞培养基配方：-DMEM/F12培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。
emb培养基配方
emb培养基配方
为了正确培养细菌或细胞，需要使用合适的培养基，包括营养成分，
缓冲剂和各种添加剂。
以下是一种常用的复合培养基Emb的配方。
配方：
1.营养成分
-心脏脲液（心脏提取物和脲）：促进细菌或细胞的生长和繁殖。
-蛋白胨：提供氨基酸和碳源，支持生物体的代谢。
-酵母提取物：提供维生素和微量元素，满足微生物的特殊需求。
-葡萄糖：能提供细菌或细胞的能量，促进生长。
-水解酪蛋白：提供氨基酸和碳源。
2.缓冲剂
-磷酸盐缓冲液：维持pH值的稳定性，使培养基保持在适宜的酸碱度。
3.添加剂
-硑粉：增加培养基的凝胶性，以固定细菌或细胞。
-小苏打：中和培养基中的酸性物质，使pH保持在适宜范围。
-矿物油：用于创建一个氧气不可透过的屏障，以提供微生物所需的
厌氧条件。
-红色亚甲基色素：用于鉴别一些微生物的生长。
有利于减少真菌和
细菌混合培养。
以上是Emb培养基的基本配方，提供了必需的营养物和添加剂以支持
细菌或细胞的生长。
根据具体的实验需求，还可以对配方进行调整和定制。
需要注意的是，制备培养基时，应严格控制各组分的比例和浓度，以
确保培养基的质量和稳定性。
此外，还应注意无菌操作和储存条件，以避
免培养基受到污染和降解。
Emb培养基在微生物学和细胞生物学研究中被广泛应用，主要用于革
兰氏阴性杆菌的培养和鉴别。
根据需要，可以对培养基进行不同的改进和
调整，以满足特定微生物的生长要求和实验目的。
生物实验常用溶液的配制(整理版)
生物实验常用溶液的配制一、DNA电泳相关：1、DNA电泳缓冲液：（1）Tris-乙酸（TAE）缓冲液：TAE较为常用，且价格低，但其缓冲能力较弱。
所以TAE电泳需要蠕动泵使两极贮液槽进行液体循环，而且TAE需要经常更新；且要加入EDTA，目的在于鳌合二价离子，抑制DNase，以保护DNA。
① TAE使用液：1×：40mmol/L Tris-乙酸1mmol/L EDTA② TAE贮存液（每L）：50×：242g Tris碱57.1ml 冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）（2）Tris-硼酸（TBE）缓冲液：① TBE使用液：0.5×：0.045mol/L Tris-硼酸1mmol/L EDTA② TBE贮存液（每L）：5×：54g Tris碱27.5ml 硼酸20ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）（3）Tris-磷酸（TPE）缓冲液：① TPE使用液：1×：90mmol/L Tris-磷酸2mmol/L EDTA② TPE贮存液（每L）：10×：108g Tris碱15.5ml 85%磷酸40ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）2、1%（线性DNA分子大小为400-6000）琼脂糖凝胶DNA电泳操作过程：①制胶：按要求取1g琼脂糖加入1×TAE（或0.5×TAE）电泳缓冲液100ml，置于三角瓶中，在沸水浴或微波炉中加热至琼脂糖溶解（一般中低火温，3-5min即可）；②溶液冷却至60℃，加入EB至0.5μg/ml（2-3ml即可）,充分混匀；③迅速倒入备好的胶模中；④凝胶完全凝固后，小心移去梳子和封口胶带，将凝胶放入电泳槽中；⑤加入能没过胶面1mm深的电泳缓冲液（TAE）；⑥DNA样品与加样缓冲液（溴酚蓝）混合后，用微量移液吸头加样；⑦盖上电泳槽并通电，使DNA向正极移动（黑极→红极），1-5V/cm（80V电压左右）进行电泳（30min 左右）；⑧电泳完毕，切断电源，取出凝胶于紫外投射光源下观察并拍照。
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方LB液体培养基：Bacto-蛋白胨10g酵母抽提物5g氯化钠10g加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。
LB固体培养基：每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。
SOB液体培养基Bacto-蛋白胨20g酵母抽提物5gNaCl 0.5g加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。
使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。
SOC液体培养基SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。
麦康凯固体培养基每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。
NA固体培养基牛肉浸膏3g酵母浸膏1g蛋白胨蔗糖琼脂粉5g 10g 15g加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。
TB培养基：将下列组分溶解在0.9L水中：Bacto-蛋白胨12g酵母抽提物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ 0.72 mol/L K2HPO4的溶液。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。
溶液Ⅰ葡萄糖2.25 g 50mmol/L1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。
溶液Ⅱ10 mol/L NaOH 2ml10% SDS 10ml用水定容至100 ml，现配现用。
溶液Ⅲ5 mol/L 醋酸钾60ml冰醋酸11.5ml水28.5ml高压灭菌后保存。
高盐TE缓冲液10mmol/L Tris.Cl, pH 8.0*0.1mmol/L EDTA, pH 8.0*1mol/L NaCl于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB抽提液2%（w/v）CTAB(古立烷基三乙基溴化铵)100mmol/L Tris.Cl,pH 8.0 *1.4mol/L NaCl于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB/NaCl 溶液（10% CTAB/0.7mol/L NaCl）在80ml H2O中溶解4.1g NaCl,缓慢加入10一CTAB（十六烷基三乙基溴化铵），同时加热并搅拌。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
L-组氨酸盐酸盐
21.88
21.88
氯化胆碱
0.50
0.50
L-羟脯氨酸
10.00
10.00
叶酸
0.01
0.01
L-异亮氨酸
40.00
40.00
i-肌醇
0.05
0.05
L-亮氨酸
60.00
60.00
维生素K3
0.01
0.01
L-赖氨酸盐酸盐
70.00
70.00
烟酸
0.025
0.025
L-蛋氨酸
L-亮氨酸
59.05
59.05
盐酸吡哆醛
2
2
L-赖氨酸盐酸盐
91.25
91.25
盐酸吡哆醇
0.031
0.031
L-蛋氨酸
17.24
17.24
核黄素
0.219
0.219
L-苯丙氨酸
35.48
35.48
盐酸硫胺
2.17
2.17
L-丝氨酸
26.25
26.25
胸苷
0.365
0.365
L-苏氨酸
53.45
53.45
L-谷氨酰胺
292
292
292
292
292
—
—
292
292
甘氨酸
—
—
—
7.5
7.5
—
—
—
—
L-组氨酸盐酸盐
42
42
42
42
42
42
42
42
42
L-异亮氨酸
52
52
52
52
52
52
52
52
52
L-亮氨酸
52
52
52
52
52
52
52
—
52
L-赖氨酸盐酸盐
72.5
72.5
72.5
72.5
72.5
72.5
72.5
MD500
MD501
氯化钙
200.00
140.00
D-葡萄糖
1000.00
1000.00
九水硝酸铁
0.70
0.70
谷胱甘肽（还原型）
0.05
0.05
氯化钾
400.00
400.00
盐酸鸟嘌呤
0.30
0.30
无水硫酸镁
97.67
97.67
次黄嘌呤
0.30
0.30
磷酸二氢钾
—
60.00
酚红
20.00
20.00
1640细胞培养基
成分（mg/L）
MD800
MD801
MD802
MD803
四水硝酸钙
100
100
100
100
氯化钾
400
400
400
400
无水硫酸镁
48.84
48.84
48.84
48.84
氯化钠
6000
6000
6000
5850
磷酸氢二钠
800
800
—
800
L-精氨酸
200
200
200
200
L-天门冬酰胺
50
50
50
50
L-天门冬氨酸
20
20
20
20
L-胱氨酸盐酸盐
65.15
65.15
65.15
65.15
L-谷氨酸
20
20
20
20
L-谷氨酰胺
300
300
300
300
甘氨酸
10
10
10
10
L-组氨酸
15
15
15
15
L-羟脯氨酸
20
20
20
20
L-异亮氨酸
50
50
50
50
L-亮氨酸
50
50
50
50
L-赖氨酸盐酸盐
pH（加碳酸氢钠）
7.7±0.3
7.4±0.3
7.6±0.3
7.3±0.3
渗透压（无碳酸氢钠）
250±5%
280±5%
245±5%
243±5%
渗透压（加碳酸氢钠）
300±5%
290±5%
285±5%
295±5%
以上数据仅为参考，以产品说明书为准。
199细胞培养基
成分（mg/L）
MD500
MD501
成分（mg/L）
—
5957.5
酚红
5
—
—
5
维生素H
0.2
0.2
0.2
0.2
D-泛酸钙
0.25
0.25
0.25
0.25
氯化胆碱
3
3
3
3
叶酸
1
1
1
1
i-肌醇
35
35
35
35
烟酰胺
1
1
1
1
对氨基苯甲酸
1
1
1
1
盐酸吡哆醇
1
1
1
1
核黄素
0.2
0.2
0.2
0.2
盐酸硫胺
1
1
1
1
维生素B12
0.005
0.005
0.005
0.005
氯化钠
6800.00
8000.00
D-核糖
0.50
0.50
无水磷酸二氢钠
121.74
—
乙酸钠
50.00
50.00
磷酸氢二钠
—
47.70
胸腺嘧啶
0.30
0.30
L-丙氨酸
25.00
25.00
吐温80
20.00
20.00
L-精氨酸盐酸盐
70.00
70.00
尿嘧啶
0.30
0.30
L-天门冬氨酸
30.00
30.00
250±5％
240±5％
渗透压（加碳酸氢钠）
295±5％
285±5％
300±5％
294±5％
300±5％
289±5％
299±5％
290±5％
281±5％
以上数据仅为参考，以产品说明书为准。
DMEM/F12细胞培养基
成分（mg/L）
MD206
MD207
成分（mg/L）
MD206
MD207
无水氯化钙
116.6
维生素B12
0.68
0.68
L-丙氨酸
4.45
4.45
L-天门冬酰胺
7.5
7.5
pH（无碳酸氢钠）
5.8±0.3
5.8±0.3
L-天门冬氨酸
6.65
6.65
pH（加碳酸氢钠）
6.8±0.3
6.9±0.3
L-半胱氨酸盐酸盐
17.56
17.56
渗透压（无碳酸氢钠）
279±5%
277±5%
L-谷氨酸
7.35
6800
无水氯化镁
—
—
93.68
—
磷酸氢二钠
—
47.88
—
—
无水磷酸二氢钠
121.74
—
121.74
121.74
L-精氨酸盐酸盐
21
21
21
21
L-胱氨酸盐酸盐
15.65
15.65
15.65
15.65
L-谷氨酰胺
292
292
292
—
L-组氨酸盐酸盐
15
15
15
15
L-异亮氨酸
26
26
26
26
L-亮氨酸
94
氯化钠
4505
D-葡萄糖
4500
无水磷酸二氢钠
108.7
酚红
15
五水亚硒酸钠
0.0173
HEPES
5958
L-丙氨酸
25
丙酮酸钠
110
L-精氨酸盐酸盐
84
维生素H
0.013
L－天门冬酰胺
25
烟酰胺
4
L－天门冬氨酸
30
盐酸吡哆醛
4
L-胱氨酸盐酸盐
91.24
D-泛酸钙
4
L-谷氨酸
75
核黄素
0.4
L-谷氨酰胺
48.84
48.84
亚油酸
0.042
0.042
氯化钠
6999.5
6999.5
硫辛酸
0.105
0.105
无水磷酸二氢钠
54.35
54.35
酚红
8.1
8.1
磷酸氢二钠
71.02
71.02
1,4-丁二胺二盐酸盐
0.081
0.081
七水硫酸锌
0.432
0.432
丙酮酸钠
55
55
L-精氨酸盐酸盐
147.5
147.5
—
72.5
L-蛋氨酸
15
15
15
15
15
15
15
—
15
L-苯丙氨酸
32
32
32
32
32
32
32
32
32
L-脯氨酸
—
—
—