肺癌动物肿瘤诱发实验具体步骤及方法
裸鼠成瘤实验方法
裸⿏成瘤实验⽅法肿瘤细胞有良性和恶性之分；癌细胞则是恶性，是会扩散的细胞。
肿瘤细胞包含癌细胞，它们共同特点是从基因⽔平上失控的、能⽆限增殖的细胞。
癌细胞有三个显著的基本特征即：不死性、迁移性和失去接触抑制。
常规较容易成瘤的细胞Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460(⼤细胞肺癌)， SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（⼈⿊⾊素瘤细胞），SGC7901 ⼈胃肿瘤细胞，CNE（⿐咽癌），H1299（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29/HCT116（结肠癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231 乳腺癌， CT26 （⼩⿏结肠癌细胞），U87 （⼈胶质瘤细胞）， MGC-803（⼈胃癌细胞），PC-3 （⼈前列腺癌细胞）。
裸⿏的选择实验室常⽤的是BALB/c-nu裸⼩⿏ ,随着裸⼩⿏年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸⿏体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验⼀般采⽤4--6周龄的裸⿏。
裸⿏成瘤实验技巧1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞⽣长状态⼀定要好，取处于对数⽣长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。
收集细胞前⼀天晚上更换新鲜培养基。
2、胰酶消化细胞后⽤预冷的PBS洗两遍，⽬的为去除细胞中残余的⾎清。
3、⽤PBS或者⽆⾎清培养基吹打细胞沉淀⾄合适的浓度，⼀般⽪下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/⽀，接种体积为0.1-0.2ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml，如若有条件的实验室，也可以加基质胶以加速瘤块的⽣成，基质胶与PBS或⽆⾎清的⽐列为1:1。
4、细胞消化后应尽快接种到裸⿏⽪下，⼀般尽量在半⼩时内完成（如果接种量⼤，可以分批接种），途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。
5、选择的裸⿏⼀般在4-6周龄，体重16-18g左右，种植部位选择⾎供丰富区域，如腋窝中后部。
人非小细胞肺癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体步骤及方法
人非小细胞肺癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体步骤及方法将表达GFP的质粒pRNAT-U6/Neo转染人肺腺癌细胞A549，G418筛选获得稳定表达GFP细胞，对比转染前后细胞的生长活性和成瘤性。
将转染后细胞原位种植裸鼠预定标准处死。
HE染色和免疫组化检测转移灶的位置和数目。
利用KODAK IS2000MM系统检测肿瘤播散情况。
一、实验材料准备1. BALB/c nu/nu裸鼠40只，雄性，4-6周龄，体重18-20 g，无特定病原体(SPF)级饲养。
2. 肺腺癌细胞株A549，用含10%小牛血清的RPMI 1640培养基(美国Gibcobrl公司)，5% CO237℃培养，常规传代。
3. 质粒和筛选药物质粒pRNAT-U6/Neo(美国Genscript公司)，携带Neomycin耐药基因供筛选，在CMV启动子控制下编码cGFP作为转染标记物。
G418(美国Promega公司)800 μg/ml初筛后200 ug/ml维持筛选。
二、细胞的转染1. 哺乳动物磷酸钙转染系统(美国Promega公司)，按照操作指南将质粒pRNAT-U6/Neoo转入A549细胞，转染后24~48 h荧光显微镜下观察转染效率。
2. 后培养液内加G418筛选获得稳定转染。
3. 利用平板克隆形成试验测定细胞克隆形成率>10%后，有限稀释法获得表达GFP阳性细胞。
4. 1月后收获转染细胞，常规传代培养，培养液中加G418(200 ug/ml)维持筛选。
5. 测定转染后A549细胞增殖动力学指标，对比转染前后A549细胞生长曲线，检测转染后细胞的生长活性是否受转染的影响。
6. 待细胞增殖达一定数量后，裸鼠皮下注射转染前后细胞，记录成瘤时间，用公式V=1/2x长x宽计算肿瘤体积，对比转染前后两组裸鼠的瘤体大小以检测成瘤性是否有差别。
三、人肺腺癌A549裸鼠原位种植模型的建立1. 取转染后细胞，用不含血清的RMPI 1640培养液冲洗2次并调整细胞最终浓度为5x106/0.2 ml备用。
研究肿瘤动物实验报告
肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一。
近年来，随着医疗技术的进步，对肿瘤的早期诊断、治疗及预后评估的研究不断深入。
动物实验在肿瘤研究领域扮演着重要角色，通过模拟人体肿瘤的生长、转移等过程，为临床治疗提供理论依据。
本实验旨在探究肿瘤生长、转移及相关代谢途径，为临床治疗提供参考。
二、实验目的1. 观察肿瘤在动物体内的生长、转移过程；2. 探究肿瘤相关代谢途径；3. 为临床治疗提供理论依据。
三、实验材料与方法1. 实验动物选取健康成年SD大鼠50只，体重180-220g，雌雄各半。
随机分为实验组和对照组，每组25只。
2. 肿瘤细胞采用人肺腺癌细胞系A549，在体外培养至对数生长期。
3. 实验方法（1）肿瘤细胞接种将A549细胞用生理盐水洗涤，调整浓度为1×10^6个/mL，将实验组大鼠背部皮下接种肿瘤细胞，对照组大鼠接种等量生理盐水。
（2）肿瘤生长观察定期观察肿瘤生长情况，记录肿瘤体积、重量等指标。
（3）肿瘤转移观察于接种后第4周，解剖实验组大鼠，观察肿瘤转移情况。
（4）肿瘤相关代谢检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测实验组大鼠血清中肿瘤标志物水平。
1. 肿瘤生长观察实验组大鼠背部皮下肿瘤生长迅速，与对照组相比，肿瘤体积、重量均显著增大（P<0.05）。
2. 肿瘤转移观察实验组大鼠出现肺转移、肝脏转移和淋巴结转移，对照组未出现转移。
3. 肿瘤相关代谢检测实验组大鼠血清中肿瘤标志物水平显著升高（P<0.05）。
五、讨论本实验通过建立大鼠皮下肿瘤模型，观察肿瘤生长、转移过程，并检测肿瘤相关代谢指标，为临床治疗提供理论依据。
1. 肿瘤生长：实验结果表明，A549细胞在大鼠体内生长迅速，与临床肿瘤生长特点相符。
2. 肿瘤转移：实验组大鼠出现肺转移、肝脏转移和淋巴结转移，提示肿瘤转移途径可能与临床肿瘤转移途径相似。
3. 肿瘤相关代谢：实验组大鼠血清中肿瘤标志物水平显著升高，提示肿瘤相关代谢途径可能与临床肿瘤代谢途径相似。
动物试验_体外实验报告
一、实验目的本研究旨在探讨某种新型抗肿瘤药物在体外细胞模型中的抗肿瘤活性，为该药物的临床应用提供实验依据。
二、实验材料1. 细胞：人肺癌细胞系A549、人胃癌细胞系SGC-7901、人乳腺癌细胞系MCF-7。
2. 药物：新型抗肿瘤药物，以DMSO溶解，浓度为1000μM。
3. 主要试剂：RPMI-1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、MTT试剂、二甲基亚砜（DMSO）、细胞计数试剂盒等。
4. 仪器：CO2培养箱、倒置显微镜、酶标仪、离心机等。
三、实验方法1. 细胞培养：将人肺癌细胞系A549、人胃癌细胞系SGC-7901、人乳腺癌细胞系MCF-7分别接种于培养皿中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 药物处理：将培养至对数生长期的细胞以1×104个/孔接种于96孔板，分别加入不同浓度的药物（0μM、10μM、50μM、100μM、200μM、400μM、800μM）处理，每组设6个复孔。
同时设置空白对照组和DMSO对照组。
3. MTT法检测细胞增殖：药物处理48小时后，每孔加入20μl MTT试剂，继续培养4小时。
然后加入150μl DMSO，在酶标仪上测定各孔吸光度（OD）值。
4. 统计分析：采用SPSS 22.0软件进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），P<0.05为差异具有统计学意义。
四、实验结果1. 不同浓度药物对三种肿瘤细胞增殖的影响：随着药物浓度的增加，三种肿瘤细胞的增殖活性均受到抑制。
其中，在50μM和100μM浓度下，A549、SGC-7901和MCF-7细胞的增殖活性显著降低（P<0.05）。
2. 不同浓度药物对三种肿瘤细胞IC50值的影响：通过计算IC50值，发现该新型抗肿瘤药物对A549、SGC-7901和MCF-7细胞的IC50值分别为46.2μM、35.8μM 和43.1μM。
五、讨论本研究通过体外细胞实验，探讨了新型抗肿瘤药物在三种肿瘤细胞中的抗肿瘤活性。
研究肿瘤动物实验报告
研究肿瘤动物实验报告
本报告旨在探讨肿瘤动物实验的研究成果和相关发现。
实验目的是通过对动物模型进行肿瘤实验，从而加深对肿瘤发展机制的理解，挖掘新的治疗方法和疗效评估指标。
实验设计中，我们选用了经典的小鼠肿瘤模型，并通过不同的实验组和对照组进行比较，以确保实验数据的准确性和可靠性。
在实验过程中，我们详细记录了动物模型的建立、肿瘤的发展和治疗干预等关键步骤的信息。
通过对肿瘤动物实验的观察和分析，我们发现了一系列关于肿瘤生长、转移和治疗等方面的重要发现。
首先，我们观察到肿瘤在小鼠体内呈现出逐渐增大的趋势，并表现出不同的生长速率和特点。
此外，我们还注意到肿瘤可通过血液或淋巴系统进行转移扩散，进一步危及生命。
在治疗实验中，我们使用了常见的抗肿瘤药物，观察和记录了肿瘤对药物的反应和治疗效果。
结果显示，不同药物对肿瘤的治疗效果具有一定差异，且肿瘤对药物基因的敏感性也存在差异。
这些发现为肿瘤治疗提供了新的思路和策略。
此外，我们还做了一系列生物学分析，包括组织切片、免疫组织化学染色和基因表达分析等。
通过这些实验，我们深入了解了肿瘤的组织学特征和分子机制，为进一步研究提供了有效的实验数据和依据。
总结而言，肿瘤动物实验为我们提供了关于肿瘤的重要信息和
数据。
通过对动物模型中肿瘤的观察和实验干预，我们深入了解了肿瘤的发展机制、治疗响应和分子特征。
这些发现为肿瘤治疗和研究提供了新的理论基础和临床指导。
在未来的研究中，我们将进一步优化实验设计，加强实验数据的统计和分析，以推动肿瘤研究的进一步发展和转化应用。
肺癌动物造模实验报告
#### 一、实验背景肺癌是全球范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。
为了深入研究肺癌的发病机制、评估治疗效果和寻找新的治疗方法，建立可靠的肺癌动物模型至关重要。
本实验旨在通过二乙基硝胺（DEN）诱导小鼠肺癌，构建一种可靠的肺癌动物模型，并对其进行详细观察和分析。
#### 二、实验材料与方法##### 1. 实验动物选用SPF级C57BL/6小鼠，雄性，体重18-22g，购自某实验动物中心。
##### 2. 实验药物二乙基硝胺（DEN），纯度≥98%，购自某化学试剂公司。
##### 3. 实验方法（1）动物分组：将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
（2）实验组：每周对实验组小鼠进行1次皮下注射1% DEN水溶液，每次剂量为56mg/kg，连续注射12周。
（3）对照组：每周对对照组小鼠进行1次皮下注射等体积的生理盐水。
（4）观察指标：观察小鼠的生长状况、行为表现、体重变化等，并在实验结束后进行病理学检查。
#### 三、实验结果##### 1. 小鼠生长状况实验期间，实验组小鼠生长状况与对照组无明显差异，体重变化无显著性差异。
##### 2. 小鼠行为表现实验组小鼠在实验过程中出现不同程度的咳嗽、呼吸困难等症状，而对照组小鼠无明显异常。
##### 3. 病理学检查实验结束后，对实验组和对照组小鼠进行病理学检查，结果显示：（1）实验组小鼠肺组织出现明显的病理改变，表现为肺泡壁增厚、肺泡腔内细胞增生、肺泡结构破坏等；（2）部分实验组小鼠肺组织中出现肿瘤细胞，呈浸润性生长，符合肺癌的特征；（3）对照组小鼠肺组织无异常。
#### 四、讨论与分析本实验通过二乙基硝胺诱导小鼠肺癌，成功构建了一种可靠的肺癌动物模型。
实验结果显示，实验组小鼠在实验过程中出现咳嗽、呼吸困难等症状，病理学检查发现肺组织出现明显的病理改变，符合肺癌的特征。
与对照组相比，实验组小鼠的肺组织出现肿瘤细胞，表明本实验构建的肺癌动物模型具有可靠性。
师兄又放大招啦！肺癌模型构建大全（内附独家视频）
师兄又放大招啦！肺癌模型构建大全（内附独家视频）展开全文导读肺癌是中国乃至全球最恶性的肿瘤，在各类肿瘤中的发病率及死亡率一直位居第一，成为威胁人类健康的头号杀手。
同时，肺癌也是临床研究的重要领域，每年与肺癌相关的SCI论文超过万篇，其中肺癌动物模型已逐渐成为其机制研究及药物研发必不可少的工具。
本期有幸邀请到了有多年经验的博士师兄，为大家介绍在研究中经常用到的几种肺癌动物模型。
肺癌发病率和死亡率2017年2月4日，国家癌症中心公布的最新数字显示，在中国恶性肿瘤发病率为270.59/10万，死亡率为163.83/10万，其中肺癌为发病率、死亡率双率第一，每年约59.1万人死于肺癌，其中男性居多，约40.2万。
同样在美国，2017年1月5日，美国癌症协会的统计表明，如下表所示，在美国男性和女性中肺癌的致死率依然是位居第一［1］。
图1. 美国癌症发病率和死亡率肺癌细胞的分类根据肺癌的分化程度和形态特征，目前肺癌主要分为两大类，即非小细胞肺癌和小细胞肺癌，前者主要包括腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌［2］。
常见的肺癌模型肺癌模型主要分为CDTX肺癌细胞移植模型（皮下移植模型和原位移植模型），PDTX（人源肿瘤组织异种移植模型）和基因修饰的肺癌模型，下面依次介绍。
一、CDTX肺癌细胞移植模型肺癌模型中，根据接种部位主要分为皮下和原位移植模型，在这类模型中需要选择正确的肺癌细胞株，可以参考上表中肺癌细胞分类，并根据实验目的选择正确的荷瘤模型，如皮下荷瘤主要用于单独研究肿瘤生长情况。
1. 皮下荷瘤定义：根据研究的肺癌类型及基因突变情况，选取状态好的肿瘤细胞移植于小鼠皮下。
例如，我们研究KRAS突变的肺癌，通常选取KRAS突变的A549细胞，细胞量为1x106－3x106/只。
具体的操作视频和分组请参考往期内容（3.8 移植性肿瘤模型的建立之皮下荷瘤），此处不再赘述。
2. 原位荷瘤定义：将肿瘤细胞通过注射等方式移植到模式动物肺部构建的动物模型。
裸鼠成瘤实验-超详细资料
裸鼠成瘤实验-超详细资料裸鼠成瘤实验总结-超详细资料接种量接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。
皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。
接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。
如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。
因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。
要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。
皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时分进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。
注射前针头稍微动一动，能动就申明在皮下，不然大概在皮内或者肌肉内。
普通来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包的。
主要靠针头稍微动一动来判断。
是否应用免疫抑制剂裸鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（2mg每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以进行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实践中是不是真有人这么做呢？楼上说的文献中也有报道，而且还有预先用放射照射抑制动物免疫功能再接种的方法，但是一般常规应用中大多数时候不推荐这么做。
另外还有一个问题应该被考虑到，大家现在都在琢磨着怎么让肿瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人为的把肿瘤生长加速，其实对实验并不好。
因为造模周期短，很可能生长速度也会被加快，肿瘤可能很快就溃烂了，这样就不得不被迫中止实验，而用药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，这样是很不利的。
体内小鼠实验方案
实验报告抗肿瘤药物体内活性研究一、实验原理聚合物胶束的粒径约为0-200 nm，可以利用肿瘤组织的增强渗透保留效应(EPR)，选择性地透过肿瘤血管并积累在肿瘤组织，实现被动靶向；被特定官能团修饰的聚合物胶束则能响应部位的物理化学变化，实现靶向部位的载体聚集和药物定点释放。
抗肿瘤药物的反复使用容易导致肿瘤细胞产生多药耐药性(MDR)，肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性后，对结构与作用机制不同的其它抗肿瘤药产生交叉耐药的现象极大的限制了化疗药物的疗效。
纳米药物传递系统如脂质体、胶束、纳米粒等作为MDR逆转策略越来越引起关注。
胶束能通过EPR效应使药物选择性地在肿瘤部位累积和释放，增加细胞内药物浓度，缓控释药物，并通过靶向细胞上特异受体对应的配体修饰，达到主动靶向，从而逆转肿瘤细胞耐药。
盐酸阿霉素(DOX·HCl)，属于蒽环类抗生素，能够抑制癌细胞遗传物质核酸的合成，具有广谱的恶性肿瘤的治疗效果，广泛用于宫颈癌细胞、卵巢癌、乳腺癌、恶性淋巴瘤、肺癌、肝癌等的治疗。
然而，阿霉素的急性和慢性毒副作用限制了其在临床上的广泛应用，急性毒副作用包括恶心、呕吐、骨髓抑制和心率失常;慢性毒性表现为肝脏、大脑和肾脏的损伤，对心脏具有不可逆的剂量依赖性的损伤。
用聚合物构建新型药物胶束传递系统，提高对疏水性药物的包载能力和药物稳定性;通过小分子修饰实现被动和主动靶向。
此外,通过相关实验考察作为药物载体的聚合物胶束的耐药能力，以此来证明聚合物胶束的生物安全性好、稳定性高、载药量高、响应性强、靶向性准、缓控释性能好。
二、实验目的1.运用抗肿瘤药物在小鼠体内评价方法，筛选出具有高表达、特异性、高亲和力的主动/被动靶向、无细胞毒性、抗肿瘤效果好的聚合物胶束。
2.动物体内抑瘤实验基于活体成像技术，建立药物抗肿瘤效果活体动物影响研究方法。
三、实验内容1.动物模型将状态良好的细胞消化，用培养液稀释至1×106 cells/mL细胞密度，吹匀后于每只小鼠加入细胞悬液100 μL，培养。
肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法.
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瘤株的组织学类型和生长特征趋于稳定，并 能在同系、同种或异种动物体内移植并连续传代。
生长特征，包括接种成活率、生长速度、自 动消退率、宿主寿命与宿主反应等。
细胞系：原代培养物经首次传代成功后即为细 胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系 所组成。
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(3)瘤细胞悬液接种法 如每次需要接种的动物数量较多时，可用瘤细胞 悬液接种:
取几个瘤块 --->除去坏死部分 ---> 混合瘤块 ---> 剪成小块 --->匀浆器单向研匀 ---> 放入无菌容器 ---> 生理盐水稀释成1:3~1:4悬液
每只动物接种0.2ml；整个操作应在30min内完成；每 次抽吸前应将细胞混匀。
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[结果判定] 给药后每天观察肿瘤生长情况，记录发生时 间和位置。 肿瘤结节长到一定程度,每周用脚规测量皮下肿 瘤2次。测定肿块的最大径(a)和最小径(b)。 肿瘤体积(cm3) = ab2/2
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将肿瘤体积变化对时间作出生长曲线,可由曲线 的斜率变化判断药物抑制肿瘤生长的作用,尤其 应观察肿瘤能否完全消退。
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它比前述的自发性和诱发性动物肿瘤更易实施。 现有移植性肿瘤接种成功率可达100%, 可在同一 时间内获得大量(数十至百余只动物)、生长相当 均匀的肿瘤。
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一、动物的选择
移植性肿瘤常用的动物为小鼠、大鼠和地鼠。 研究药物的抗肿瘤作用可选择三种或三种以上小 鼠、大鼠的移植性肿瘤进行实验治疗；抗肿瘤药 物筛选时，每批动物的来源应一致；
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一、诱发性肿瘤动物模型的基本方法
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肺癌肿瘤诱发实验具体步骤及方法
1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发小鼠肺癌
（1）小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次剂量56 mg/kg，DEN总剂量达到868 mg；
（2）观察时间为100天左右时，发癌率可达40%。
（3）DEN总剂量达到1176 mg，观察时间为半年左右时；发癌率可达94%。
2．乌拉坦诱发肺腺癌
（1）小鼠（A系，1～11/2月龄）较大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%乌拉坦生理盐水液0.1～0.3 ml，间隔3～5日再注，共注2～3个月，每只小鼠用量约为100 mg；
（2）注后3个月肺腺癌发生率为100%，而且多数为多发性，这种诱发瘤为良性。
3．苯并芘诱发肺腺癌
（1）猴气管内注入3，4-苯并芘（苯并花为3～15 mg与等量之Fe2O3混合液），每周一次，共10次；
（2）6只猴中有2只诱发肺的鳞状上皮癌。
4．硫酸铵气溶胶诱发肺腺癌
（1）用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入；
（2）13个月后所有大鼠都发生了肺腺癌。
5．甲基胆蒽诱发肺腺癌
（1）用0.2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混合后给金地鼠气管内注入，每次0.1 ml（含甲基胆蒽5 mg）每周一次，共6次；
（2）53周后有62.5%动物发生了肺癌。