两种除藻剂对黄丝藻藻华叶绿素a含量和抗氧化酶活性的影响

CHEN Xiao-hua, WANG Ai-qing, PAN Lian-de, LIU Yi-nong, QIU Jin (Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources of China,
Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China)
Ca=11.64（OD663）-2.16（OD645）+0.10（OD630）×V/M 式中，Ca 为 1 g 藻丝体中所含的 Chl a 量 （mg/g）；V 为 定容的体积；M 为称取的藻丝体的重量。 1.2.3 两种除藻剂对黄丝藻几种抗氧化酶活性的影响 参考 Mitrovic 等[18]的方法，取 0.10 g 黄丝藻藻华的藻丝 体，吸干、剪碎，加入少量的磷酸缓冲液（pH 7.8，内含 4 mmol/L EDTA-Na2）在冰水浴中用超声波细胞粉碎仪破 碎， 匀浆液 8 000 r/min、4℃下离心 20 min， 收集上清 液 ，用 于 测 定 SOD、MDA、CAT，样 品 处 理 完 后 24 h 内 பைடு நூலகம்定完毕。 1.2.4 两种除藻剂对黄丝藻半数有效浓度 （EC50）的测 定 通过显微镜观察， 计数黄丝藻细胞中毒数及总细 胞数，按照周一平[19]的方法，用 SPSS 17.0 计算 EC50 值。 1.3 数据分析
收 稿 日 期 ：2014-05-08 基 金 项 目 ：上 海 市 高 校 知 识 服 务 平 台 项 目 （ZF1206） 作 者 简 介 ：陈 孝 花 （1986-） ，女 ，在 读 硕 士 生 ，E-mail：xhchen 19@ 通 讯 作 者 ： 潘 连 德 （1960- ）， 男 ， 教 授 ，E-mail：ldpan@shou.
生不良影响[1]。 丝状藻类可影响栅藻（Scenedesmus sp）、 微 囊 藻 （Microcystis aeruginosa）[2]、 栅 列 藻 （Scenedesmus sp.）[3] 等 单 胞 藻 类 的 生 长 ， 也 对 水 质 及 黑 藻 （Hydrilla verticillata ） 等 的 生 长 产 生 严 重 影 响 [ 4 ] 。 黄 丝 藻 （Tribonema sp.）属于黄藻门，是形成丝状藻藻华的常见 种 类 ， 适 应 能 力 强[5]， 无 论 是 在 淡 水 水 体 ， 还 是 在 海 水 水 体，均可泛滥成灾，可作为检测水体污染状况的一个重 要 指 标 [6]。
绿素 a（Chll a）含量，用相应的试 剂 盒 测 定 丙 二 醛 （MDA）含 量、超 氧 化 物 歧 化 酶 （SOD）、过 氧 化氢 酶 （CAT）活 性 的 变
化。 结果表明，硫酸铜、异噻唑啉酮对黄丝藻 24、48、72、96 h 的半数有效浓度（EC50）分别为 5.551、4.543、3.646、2.898 mg/L 和 13.712、9.858、8.680、5.114 mg/L。 随 着 浓 度 的 升 高 ，硫 酸 铜 、异 噻 唑 啉 酮 对 黄 丝 藻 的 毒 性 越 来 越 强 ，浓 度 为
Key words: Tribonema bloom; copper sulfate; isothiazoline-ketone; chlorophyll a; antioxidant enzymes
随着水体富营养化程度的加剧， 藻类大量生长繁 殖，其中优势种类很容易形成藻华，丝状藻类的藻华俗 称“青苔、青泥苔、水毛子”。 研究发现，人工湿地维系的 景观水体、 种植观赏水草的池塘、 种草养殖河蟹的水 体、养鱼池塘、稻田等出现了丝状藻藻华泛滥现象，产
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广东农业科学 2014 年第 18 期
两种除藻剂对黄丝藻藻华叶绿素 a 含量 和抗氧化酶活性的影响
陈孝花， 王爱卿， 潘连德， 刘译浓， 邱 进 （上海海洋大学省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室，上海 201306）
摘 要：用不同浓度硫酸铜、异噻唑啉酮对采自养殖池塘的黄丝藻藻华染毒，分时采样，用分光光度计法测定叶
2.40 mg/L 时黄丝藻 Chll a 含量、SOD、CAT 活性较低，而 MDA 含量较高，说明此时黄丝藻细胞已经完全解体。 浓度为
0.42 mg/L 时，各个测量值与对照组差异不显著，说明低浓度两种除藻剂 96 h 内对黄丝藻的毒性较小。 结果说明两种
除藻剂都可以抑制或者杀死黄丝藻藻华，并且硫酸铜对黄丝藻藻华的毒性较异噻唑啉酮强。
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3 L 透明锥形瓶 中，日 光 灯 光 照 ，光 暗 比 为 12 h∶12 h， pH 值为 7~8，24 h 充气培养，光照强度为 2 000 lx。 硫 酸 铜 、 异 噻 唑 啉 酮 浓 度 分 别 设 定 为 0.42、0.75、1.00、 1.36、2.40 mg/L 等 5 个梯度，并设 对照，每组设 3 个重 复。 1.2.2 两种除藻剂对黄丝藻叶绿素 a 含量的影响 每 隔 24 h 取 样一次，测定 叶绿素 a（Chlorophyll a, Chl a） 含量。 取 0.06 g 黄丝藻藻华，用吸水纸吸干，剪碎，加入 2~3 mL 90%丙酮和 少 量 的 MgCO3 于 冰 水 浴 中 进 行 超 声波细胞破碎，于暗处，转入有刻度的离心管中，定容 至 6 mL，离心 10 min（ 3500~4 000 r/min），取上清液分 布于分光光度计测定 663、645、630 nm 下的吸光度值。 Chl a 含量的按照下列公式计算：
药物可以通过多种途径抑制丝状藻 类生长 ， [11,14] 其 中改变抗氧化酶的活性就是很重要的一种。 藻细胞内 超 氧 化 物 岐 化 酶 （SOD） 活 性 变 化 及 脂 质 过 氧 化 程 度 对 于研究药物对藻类的毒性有重要意义。 丝状藻类的研 究主要是针对其作为初级生产者对周围环境的影 响[2, 15-17]，而作为有害藻华的研究较少。 因此，本研究通 过两种除藻剂对黄丝藻毒性的试验研究， 了解其基本 特性， 为使用和评价合适的控制丝状藻藻华的药物提 供依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料 硫酸铜 （分析纯）， 异噻唑啉酮 （14%）、 丙二醛
（MDA） 试 剂 盒 、 超 氧 化 物 歧 化 酶 （SOD） 试 剂 盒 、 过 氧 化 氢酶（CAT）试剂盒、考马斯亮蓝蛋白试剂盒均购自南京 建成生物工程研究所，其他试剂均为分析纯。
黄丝藻藻华采集于上海浦东新区临港某场的水草 种 殖 池 塘 ，该 池 塘 种 植 伊 乐 藻 （Elodea canadensis）、苦 草 （Vallisneria spiralis） 和 轮 叶 黑 藻 （Hydrilla verticillata），放养少量鱼虾蟹。 黄丝藻藻华在该池塘常 年产生，危害严重。 1.2 试验方法 1.2.1 藻 类 培 养 及 药 物 浓 度 设 定 按 照 藻 类 生 长 抑 制试验的标准方法，取一定质量的黄丝藻藻华培养于
Abstract: In this study, Tribonema bloom taken from the bottom of pond were exposed to different concentrations of sulfuric copper and isothiazolone -ketone, and sampled at different time. Then the chlorophyll a (Chl a) contents were measured by spectrophotometer, and malondialdehyde (MDA) content, superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) activities were measured by using corresponding kits. The results showed that the effect concentration 50%(EC50) of copper sulfate and isothiazolone-ketone on the Tribonema blomm for 24 h, 48 h, 72 h, 96 h were 5.551, 4.543, 3.646, 2.898 mg/L and 13.712 mg/L, 9.858, 8.680, 5.114 mg/L, respectively, and the toxicity enhanced with the concentration increasing. At the concentration of 2.40 mg/L, the Chl a content, SOD, and CAT activities reached to the minimum, but the MDA content achieved to the peak, suggesting that the cells of Tribonema sp. completely disintegrated at this time. At the concentration of 0.42 mg/L, no significant differences between measurements and control group were observed, indicating that low concentrations of copper presented less toxicity within 96 h. The results indicate that the two algaecides both can suppress or kill Tribonema bloom and copper sulfate had more toxic to algaecide compared with isothiazolin-ketone.