蒽酮比色法快速测定葡萄糖
蒽酮比色法
蒽酮比色法，具体步骤一、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，超声波清洗器，电热恒温水浴锅，抽滤设备，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/mL(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甜高粱，甘草二.操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号1234567葡萄糖标准液（mL）0.10.20.30.40.60.8蒸馏水（mL）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（µg）102030406080在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴沸腾起计时，准确煮沸l0 min，取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品粉碎，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。
3.稀释：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀。
4.测定：吸取1 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水替代提取液。
以下操作同标准曲线制作。
根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。
三、结果处理：C × V总× D样品含糖量（%）= ————————————— × 100%W × V测× 106其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（µg），V总——提取液总体积（mL），V测——测定时取用体积（mL），D——稀释倍数，W——样品重量（g），106——样品重量单位由g换算成µg的倍数。
蒽酮比色法葡萄糖标准曲线操作方法(一)
蒽酮比色法葡萄糖标准曲线操作方法(一)
蒽酮比色法葡萄糖标准曲线操作
引言
蒽酮比色法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法，它通过测量葡
萄糖溶液与蒽酮反应产生的紫色溶液的吸光度，来推断葡萄糖的浓度。
本文将介绍如何操作蒽酮比色法来绘制葡萄糖的标准曲线。
实验材料准备
•蒽酮溶液
•mol/L 磷酸二氢钾溶液
•磷酸(pH=)
•葡萄糖溶液 (不同浓度)
•分光光度计
•塑料比色皿
•移液器
•艾氏试管 (10 mL)
实验步骤
1.准备一组葡萄糖标准溶液，包括不同浓度的葡萄糖溶液和纯磷酸
二氢钾溶液。
葡萄糖的浓度可选取为、、、、和 mg/mL，磷酸二氢钾的浓度为 mol/L。
2.取一定体积的葡萄糖标准溶液，加入到不同的艾氏试管中。
3.分别加入相同体积的磷酸，混合均匀。
4.将每个试管内的溶液均匀地倒入塑料比色皿中。
5.使用分光光度计，在波长为540 nm 处进行初始的零值调整。
6.依次测量每个标准溶液的吸光度，并记录数据。
7.将吸光度数据与标准溶液浓度建立线性回归，绘制葡萄糖的标准
曲线。
数据处理与分析
通过将吸光度数据与标准溶液浓度进行线性回归，可以得到葡萄糖标准曲线的方程式，并利用该方程式可以预测未知葡萄糖样品的浓度。
结论
蒽酮比色法是一种简单、快速而准确的测定葡萄糖含量的方法。
通过制备葡萄糖标准曲线，我们能够利用吸光度测量的数据推断未知葡萄糖样品的浓度。
这项实验不仅可用于葡萄糖测定，也可用于其他具有还原性的物质的测定。
蒽酮比色法测总糖
啤酒中糖含量的测定蒽酮比色法测总糖一．实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
二．仪器与药品1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液（l00 µg/ml）：精确称取100mg干燥葡萄糖，先用蒸馏水定容至100ml，再取出10ml定容至100ml；(2)浓硫酸；(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用；(4)啤酒（不用处理）。
三．实验步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.稀释：吸取啤酒1-2 m1稀释至500ml（先吸取2ml啤酒定容至100ml，再吸取10ml 已稀释的啤酒将其定容至50ml）即2ml→100ml→取出10ml→定容至100ml3.测定吸取1.00ml已稀释的啤酒于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代啤酒。
以下操作同标准曲线制作。
根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。
四．数据记录与处理1.校准空白值2.标准曲线的绘制3.由上面表格可作出下面的曲线Y轴为校正后的A值X轴为葡萄糖的浓度4.待测啤酒编号7 8 9A 0.480 0.472 0.542校正后A值0.484 0.480 0.5465 .数据处理由标准曲线可得：A=7.1256C(*)啤酒的A的平均值为：（0.484+0.480+0.546）/3=0.503将0.503代入(*)式得:C=A÷7.1256=0.0706（mg/ml)则啤酒中总糖的含量为:0.0706×250=17.6（mg/ml)=1.8（g/100ml)。
植物可溶性糖测定
植物可溶性糖(soluble sugar)测定:蒽酮比色法糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物。
在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。
该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。
实验用品721型分光光度计，分析天平，研钵，恒温水浴锅，烧杯，刻度试管，大试管，移液管，漏斗，玻璃棒，试管架，吸耳球，滤纸试剂：活性炭，酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。
实验步骤1.可溶性糖的提取：称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。
在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min，定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
2.显色及比色：吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。
从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。
3.绘制标准曲线：取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、30、60、90、120、150、180μg。
按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。
试剂（ml) 管号1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液 0 0.15 0.3 0.45 0.6 0.75 0.980%酒精 1.0 0.85 0.7 0.55 0.4 0.25 0.1蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 5葡萄糖浓度（ul/ml) 0 30 60 90 120 150 180 样品中含糖量％：设V为植物样品稀释后的体积（m L）；C为提取液的含糖量(μg/ m L)；W为植物组织鲜重(g)可溶性糖含量％＝( C×V)/(W×106) ×100%可溶性糖(SS) 含量的测定: 根据赵世杰[20 ] 的方法。
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
操作步骤
葡萄糖标准曲线的制作
取6支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2个重复：
管号0 1 2 3 4 5
标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热10min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却10min。
在652nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定
将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。
在652nm波长下迅速测定各管吸光值。
根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。
Cri-J。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
蒽酮比色法[宝典]
![蒽酮比色法[宝典]](https://img.taocdn.com/s3/m/4776734776232f60ddccda38376baf1ffc4fe367.png)
蒽酮比色法蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。
蒽酮比色法测糖试验蒽酮比色法测定多糖含量1、蒽酮比色法测糖试验一实验目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法二实验原理蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
三实验器材及试剂马铃薯干粉可调试移液器或移液管可见分光光度计（723型）电子分析天平水浴锅电炉子蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml 备用。
四、操作1.制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。
以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml ）为横坐标作图得标准曲线。
表1 蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作沸水浴中准确煮沸10min，取出用流水冷却，室温放10min,于620nm处比色葡萄糖浓度（mg/ml）2.样品含量的测定样品液的制作：精确称取马铃薯干粉0.1g置于锥形瓶中—→加入30ml沸水—→沸水浴30min（不时摇动）—→取出，3000rpm离心10min（或过滤）—→反复洗涤残渣2次—→合并滤液—→冷却至室温—→定容到50ml的锥形瓶中—→再从中取出1ml，再定容到10ml的容量瓶中样品液的测定：（1）取4支试管，按照表2加样（加蒽酮时需要冰水浴5min冷却）表2 蒽酮比色法定糖——样品的测定（2）加样冷却完成后置沸水中煮沸10min，取出流水冷却放置10min，620nm 处比色测量各管OD值。
（3）以1号试管作为调零管，2、3、4号管的OD值取平均后从标准曲线上查出样品液相应的含糖量。
3．结果计算：C×Vw = ————×100%m，式中w：糖的质量分数（%）C：从标准曲线中查出的糖质量分数（mg/ml）V：样品稀释后的体积（ml）m：样品的质量（ml）2、蒽酮比色法测定多糖含量一试验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
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蒽酮比色法快速测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量
蒽酮试剂与碳水化合物生成一种蓝绿色物质,是糖类特有的反应。
不经分离而进行系统测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量基于以下三点:第一在室温下葡萄糖与蒽酮试剂不显色,此温度下果糖显色5min的吸收值与果糖在100℃显色5min吸收值几乎相等。
第二稀碱与糖溶液共热时,可破坏葡萄糖、果糖,而蔗糖不被破坏。
第三淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。
(二)试剂
(1)蒽酮试剂:称0.4g蒽酮溶于100ml88%硫酸中(约84份体积97%浓硫酸与16份体积水混合,密封在磨口瓶中)。
溶解后置水中冷却备用。
此液当天配制。
(2)2mol/L氢氧化钾溶液。
(3)3mol/L盐酸溶液
(5)标准糖贮备液:精确称取250mg干燥的分析纯的糖(葡萄糖、果糖、蔗糖),分另移至250ml 容量瓶中,配成1mg/ml浓度溶液。
溶剂用蒸馏水和75%乙醇均可。
(6)标准糖工作液:用移液管吸取10ml标准糖贮备液于100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。
此液含糖为100μg/ml。
(三)测定步骤
1.工作曲线绘制用2ml吸量管按表取标准糖工作液(葡萄糖不多于160μg,果糖不多于80μg,蔗糖不多于100μg)于干洁的试管(16×180mm)中,用蒸馏水分别调整其体积为
2.0ml。
从滴定管中加入蒽酮试剂6.0ml。
摇匀并立即置于沸水浴中加热5min,取出立即在冷水中迅速冷却(不断摇动)。
用 2.0ml蒸馏水重复上述操作,作为空白溶液。
在分光光度计中,以640nm
2.样品中糖的提取谷物或植株体烘干、粉碎。
精确称取烘干样品(谷物0.2g、植株体0.1g 左右)放入研钵中,加加5ml蒸馏水磨至均匀,以5ml蒸馏水将均匀物全部移入离心管中,离心(3000r/min)5min。
离心液倒入干净试管中。
再向盛有沉淀的离心管加5ml蒸馏水并搅拌沉淀物,离心(重复二次),合并离心液于50ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。
此液用干葡萄糖、果糖及蔗糖的测定(A液)。
以10ml3mol/L盐酸将离心管中沉淀物全部转移到容量瓶中,盖上玻塞,放在沸水浴中煮沸40～45min,取出冷却至室温,加3mol/L氢氧化钠溶液10ml中和其酸性,以蒸馏水定容至50ml,从中取2ml溶液,加蒸馏水至50ml,混匀。
此液用用淀粉的测定(B液)。
3.蔗糖的测定精确吸取样品液(A)10ml,加入2mol/L氢氧化钾溶液2ml,置沸水浴中煮沸10min。
取出迅速冷至室温,加蒸馏水稀释至50ml,摇匀。
精确吸取稀释液2ml至一干净试管中,按标准曲线绘制步骤加蒽酮试剂显色测定,得光密度值E蔗。
4.蔗糖的结果计算
从蔗糖工作曲线求得蔗糖量为S(μg),按下式计算样品中蔗糖百分含量。
式中:
S──待测样品液中蔗糖量(μg)
W──样品称重(g)
V1──用于测定的样品稀释液的体积(ml)
V2──用于分析的样品稀释液总体积(ml)
V3──样品液总体积(ml)
V4──用于氢氧化钾水解的样品液体积(ml)
5.葡萄糖、果糖的测定取样品液(A)10ml加蒸馏水至50ml,往两支干净试管中分别加入2ml 样品稀释液其中一支加蒽酮试剂6ml,摇匀,在沸水浴中煮沸5分钟,取出立即浸入自来水冷却至室温,在640nm下测定光密度E100。
另一支试管,加蒽酮试剂6ml,摇匀,在常温下显色5min,同上述操作测定光密度E常温。
由E常温查果糖工作曲线求得样品液果糖量为F(μg),按下式计算样品中果糖、葡萄糖含量。
6.果糖、葡萄糖的结果计算
由E100-E常温查葡萄糖工作曲线求得样品液中葡萄糖量为G(μg),按下式算葡萄糖百分含量。
7.淀粉测定取样品液(B液)2ml,再加6ml蒽酮试剂,摇匀,放在沸水浴中煮沸5min,取出,立入在冷水中冷却至室温,在640nm下测定光密度E淀粉,以E淀粉查葡萄糖式计算淀粉百分含量:
式中:
Y──查标准曲线得淀粉水解稀释测定液糖量(μg)
V0──-水解液总体积(ml)
W──样品称重(g)
V1──水解稀释液体积(ml)
0.9──换算糖为淀粉量
V2──用于稀释的样品液体积(ml)
V3──用于比色时样品稀释液体积(ml)。