体内药物分析课程必做作业(答案)

必做
影响液-液提取和液-固提取效率的因素分别有哪些？
必做
影响液-液提取的因素有:水相pH提取溶剂离子强度
影响液-固提取的主要因素有:固定相 洗脱液流速 样品装载量
4
评价分析方法的效能指标包括哪些项目？如何求算？
必做
试述体内药物分析方法设定的一般步骤。
答：首先进行文献查阅，设计方案，然后通过实验加以验证。一般实验步骤如下：
必做
2
药物进入体内后一般需经历哪些物理、化学变化？这些变化与药理作用的关系如何？
答：物理变化——系指药物与生物大分子如血浆蛋白的结合反应。
化学变化——系指药物的代谢反应，包括一相代谢（氧化、还原、水解反应）和二相代谢反应（各种结合反应）
由于药物的作用强度与血液中游离药物的浓度密切相关，同时药物经代谢后活性发生了变化，故药物的物理、化学变化与药理作用密切有关。
电化学检测器——适合于具有氧化还原性质的物质，要求流动相必须有一定的电导率，一般为盐类、有机溶剂和水的混合物。
质谱检测器——具有定性定量功能和高的灵敏度。
必做
8
什么是手性药物？为什么要研究手性药物？
必做
常用手性色谱方法有哪些？
答：分子结构中含有不对称碳原子（即手性中心）的药物称为手性药物。
因手性药物两对映体在体内的生物活性有差异，包括药效学差异（竞争拮抗等）和药动学差异（吸收、分布、代谢、排泄）。为正确评价两对映体的作用和进行对映体药物的质量控制，所以要研究手性药物。
必做
体内药物分析方法有哪些？各有何优缺点？
答：体内药物分析方法可分为三大类：
光谱法——包括比色法、紫外法和荧光法。方法优点是操作简便、快速，所需设备简单。其缺点是不具备分离功能，选择性较差，对前处理要求高；比色法和紫外法灵敏度较低。
免疫法——包括放射免疫、酶免疫、荧光免疫等。方法优点是灵敏、专属，操作简便、快速，对样品预处理要求不高。其缺点是精密度较差，需要试剂盒和专属仪器。
以纯品进行测定——选择最佳测定条件（线性，灵敏度、pH、检测波长等）。空白样品测定——按设定的方法进行前处理和测定，考察空白值的大小和干扰程度。
以水代替空白样品，添加标准品后测定，以获得提取回收率的大致情况，从而对前处理中各步操作条件进行选择。
空白样品中添加标准后测定——求样品回收率，建立标准曲线等。
必做
二、名词解释
第X章
题目
要求
1
TDM答：治疗药物监测，为英文“therapeutic drug monitoring”的缩写。
必做
2
一相代谢答：指药物在体内发生的氧化反应、还原反应、水解反应。
必做
二相代谢答：指药物在体内的结合反应，包括：葡萄糖醛酸结合、硫酸酯化、甲基化、乙酰基化、氨基酸缀合、谷胱甘肽缀合等。
紫外检测器——通用型检测器，适合具有紫外吸收的各种物质的检测。
二极管阵列检测器——具有光谱、色谱和三维图谱，可以进行定性和定量分析，以及色谱峰纯度检查。
荧光检测器——专属检测器，适合具有荧光或潜在荧光物质的检测，灵敏度高。
蒸发光散射检测器——适合于无紫外吸收物质的检测，要求流动相必须是挥发性的，不能含有非挥发性的缓冲盐。
答：对内标物的要求：内标物必须是样品中不含有的组分，其保留时间应与待测物tR值相近，但R≥1.5，并具有足够的纯度。
内标物选择原则：内标与被测物相差一个化学元素；或内标与被测物为同系物；或内标与被测物结构相似，或内标与被测物理化性质相似。
必做
什么是正相色谱？什么是反相色谱？
必做
说明RP-HPLC法的常用固定相、流动相、适用范围，及流动相中甲醇等有机溶剂浓度变化对被测组分保留时间的影响。
必做
药物在体内的代谢反应有哪些类型？
必做
3
常用生物样本有哪些？如何采集、储存。
答：常用生物样本有：血样（血浆、血清和全血）、尿样、唾液。
采集与储存：血浆——全血加抗凝剂，离心，取上清液；血清——全血离心，取上清液。采血后必须尽快离心分离出血浆或血清，置－20℃以下冷冻保存。尿样——收集服药后一定时间内尿样，记录体积，混合均匀后取一定量,测定尿中药物浓度，计算一定时间内尿中药物的累积量。唾液——漱口15分钟后收集口内自然流出或经舌在口内搅动后流出的混合唾液，离心后取上清液。样本采集后不能及时测定，可置4℃冷藏，若放置时间较长，则需-20℃～-80℃冷冻保存。
体内实样测定——根据实样测定结果来判断设定的方法是否合理、可行。
以上步骤需要反复试验以获得最佳实验条件。
必做
阐述定量限与检测限的定义、区别及表示方法。
答：定量限——即定量下限（LLOQ），表示药物可定量测定的最低量，须符合一定精密度和准确度要求，常以标准曲线最低浓度点来确定，或以 S/N=5～10确定。检测限（LOD）——表示药物的最低可测度，不必定量，通常以信噪比（S/N）=2~3时被测药物的绝对量表示；两者的区别主要在于是否有定量要求：LOD没有定量要求，而LLOQ则有定量要求。
必做
6
酶免疫分析答：酶免疫分析是在放射免疫分析基础上发展起来的一种免疫分析方法，以酶代替同位素来标 记药物，酶与底物、辅酶等反应后引起吸收光谱变化而被检测。
必做
7
反相HPLC答：即流动相极性大于固定相极性的HPLC。
必做
ODS答：即十八烷基硅烷键合硅胶，为常用反相HPLC的固定相。
必做
三、填充题
第X章
必做
常用免疫分析有哪几种？相互间区别在哪些方面？
答：常用免疫分析有放射免疫法、酶免疫法、荧光免疫法、化学发光免疫法等，它们的主要区别在于标记物不同，由此采用的测定方法也不同。
必做
在RIA中，结合物与游离标记物的分离方法有哪些？
必做
7
气相色谱仪最常用检测器是什么？有何特点？适用范围？
必做
GC法定量方法与内标选择原则？
必做
3
常用生物样品有血样（血浆、血清、全血），尿样，唾液等
必做
常用去蛋白的方法有蛋白质沉淀法（加蛋白质沉淀剂，如：三氯乙酸，高氯酸，Zn2+，Cu2+，硫酸铵，氯化钠，甲醇，乙腈，丙酮等）和组织酶消化法（加蛋白水解酶如：胃蛋白酶，胰蛋白酶，枯草菌溶素等）
必做
生物样品中药物与代谢物的提取方法有液-液提取和液-固提取等
常用手性HPLC法有：手性衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法。
必做
9
毛细管电泳有哪几种分离模式？
毛细管电泳分离模式有毛细管区带电泳，胶束电动色谱，毛细管凝胶色谱，毛细管等电聚焦，毛细管等速电泳，移动界面毛细管电色谱。
必做
10
常用联用技术有哪些？
常用联用技术有LC-MS，GC-MS，GC-GC，HPLC-HPLC，GC-HPLC，免疫分析-HPLC等
必做
影响液-液提取的因素有水相pH 值、提取溶剂和离子强度等。
必做
4
分析方法认证的主要指标线性范围、 准确度、精密度、专属性、灵敏度、 稳定性等
必做
体内药物分析方法包括光谱法（比色、紫外、荧光），色谱法（HPLC、GC、GC-MS、LC-MS），免疫分析法（放射免疫、酶免疫、荧光免疫）等。
必做
5
紫外光谱法消除干扰的方法有差示光谱法、导数光谱法、双波长法等
色谱分析法——包括HPLC, GC, LC/MS, GC/MS等。方法优点是具有分离分析功能，是评价其它方法的参比方法。
必做
5
紫外法消除干扰的方法有哪些？说明原理和应用条件。P82
必做
1.差示分光光度法（1）利用最大吸收波长进行测定
（2）利用最小吸收波长处的增色效应进行测定
（3）利用最大吸收与最小吸收之差（即振幅）进行测定
必做
6
在放射免疫分析中，结合物与游离标记物的分离方法有沉淀法、吸附法、固相法、差速迁移法、双抗体法
必做
7
气相色谱法中常用的检测器有氢焰离子化检测器、氮磷检测器、电子捕获检测器、MS等
必做
液相色谱中常用检测器有紫外检测器（可变波长、二极管阵列）、荧光检测器、电化学检测器、蒸发光散射检测器、MS等。
必做
反相HPLC法常用流动相有甲醇-水，乙腈-水，四氢呋喃-水
必做
8
手性HPLC法常用测定方法有手性试剂衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法。
必做
9
在毛细管电泳中，驱动荷电物质前进的两个重要作用力是电泳流和电渗流。
必做
四、单选题
第X章
题目
要求
1
尿中异烟肼及乙酰异烟肼的比色测定是利用（B）专属反应（KCN－氯胺T反应）
2.双波长测定法
如何进行激发光谱和荧光光谱的测定？P91页
必做
荧光物质吸收紫外光后被激发出荧光，如果将激发荧光的光源用单色器使其分光后，测定在每一波长的激发光照射下，物质所发射的荧光，以荧光强度对激光光波长作图，得到荧光物质的激光光谱，实际上，激发光谱就是荧光物质的吸收光谱。激发光谱中最高峰的波长，能使荧光物质发出最强烈的荧光。如果使激发光的波长和强度保持不变，而让物质所发生的荧光通过单色器色散，依次将不同波长的荧光照射于接收器上，并依次测其荧光强度，然后以荧光强度对相应的荧光波长作图，得到该物质的荧光发射光谱，简称荧光光谱。
《体内药物分析》课程作业
一、问答题
第X章
题目
要求
1
什么是体内药物分析？与常规药物分析相比，体内药物分析有哪些特点？
答：体内药物分析旨在通过各种分析手段，了解药物在体内的数量与质量变化。获得药物代谢动力学的各种参数和信息，从药品生产、临床医疗、实验研究等方面对所研究药物作出估计和评价。与常规药物分析相比，体内药物分析具有干扰杂质多、样品量少且浓度变化大，不能再度获得完全相同的样品、有时要求较快提供结果、要有一定的仪器设备、工作量大等特点。
必做