胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒说明书
核蛋白提取试剂盒说明书
核蛋白提取试剂盒说明书货号：R0050规格：50T/100T 产品内容：保存：核/浆蛋白抽提试剂2-8℃保存，PMSF 于-20℃保存。
产品简介：本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。
整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。
得到的蛋白可以用于Western blot 等实验。
本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。
然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约2×106个Hela 细胞或40mg 组织）。
操作方法（仅供参考）：*裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
一、对于体外培养细胞：1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM 。
PMSF 需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT 至终浓度0.5mM 。
2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS 洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA 消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。
500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
3．对于悬浮细胞：用PBS 洗一遍，500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4．每20μL 细胞沉淀加入200μL 浆蛋白抽提试剂（2×106个细胞沉淀的体积约20μL 或40mg ）。
5．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。
细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。
6．冰浴10分钟。
7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃12000～16000g 离心10分钟。
8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE 、Western 等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。
碧云天 P0028细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒
使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/ P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. Yuan Q, Li PD, Li BH, Yang XZ, Xu SB, Liu XH, Zhou FX, Zhang WJ. Differential IL-4/Stat6 activities correlate with differential expression of regulatory genes SOCS-1, SHP-1, and PP2A in colon cancer cells. J Cancer Res Clin Oncol. 2008 Jun 7.
6. Chen G, Shen X, Yao J, Chen F, Lin X, Qiao Y, You T, Lin F, Fang X, Zou X, Lin L. Ablation of NF-kappaB expression by small interference RNA prevents the dysfunction of human umbilical vein endothelial cells induced by high glucose. Endocrine. 2009 Feb;35(1):63-74. Epub 2008 Nov 8.
3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。 4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。(对于二百万Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒Cat Number：For Research Use OnlyStore at -20℃for one yearExpire date：一、试剂盒说明本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。
制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。
提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。
二、试剂盒组份组份KGP150 （50 test）KGP1100 （100储存温度test）Buffer A 25 mL 25 mL ×24℃Buffer B 1.5 mL 3．0 mL 4℃Buffer C 12.5 mL 25 mL 4℃DTT 50μL100μL-20℃蛋白酶抑制剂250μL500μL-20℃PMSF（100mM）400μL800μL-20℃三、操作步骤Ⅰ 实体组织蛋白的提取1、组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ，弃沉淀，小心吸取上清转移至另一离心管中；2、上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的紧实细胞体积）；3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL BufferA加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后，4℃离心，16000×g,5min；6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mLBuffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds；8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80℃，避免反复冻融。
试剂盒,人试剂盒,人胞浆免疫球蛋白(CIg)ELISA试剂盒使用说明书
人胞浆免疫球蛋白（CIg）ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆樊克生物供应使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本胞浆免疫球蛋白（CIg）含量。
试验原理：CIg试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CIg浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将CIg和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中CIg的浓度呈比例关系。
胞浆免疫球蛋白试剂盒,elisa试剂盒说明书,ELISA试剂盒,ELISA检测试剂盒,人elisa试剂盒说明书试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗CIg抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
核-胞浆蛋白提取方法
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
℃冰箱保存备用。 7. 沉淀用 PBS 洗涤一次，然后在 4℃，16000×g 条件下离心 5 分钟，弃上清。 8. 在沉淀中加入 200μl②冷的提取液 B，高速涡旋振荡 15 秒。 9. 置冰上 40 分钟，每隔 10 分钟高速涡旋振荡 15 秒。 10. 在 4℃，16000×g 条件下离心 10 分钟。 11. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。 12. 将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
尽可能吸干，收集细胞。 3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 每 5-10×106 中加入 200μl 冷的提取液 A，高速涡旋振荡 15 秒或吹打混匀，置
冰上 15 分钟，中间每隔 5 分钟涡旋振荡或吹打混匀。 5. 再次高速涡旋振荡 5 秒，然后在 4℃，16000×g 条件下离心 5 分钟。 6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80
Journal of Ethnopharmacology
2010 Volume 128, Issue 2,
（IF=3.014）
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4. 每 20ul 细胞压积中加入 200μl 冷的提取液 A，高速涡旋振荡 15 秒或吹打混匀，
Thermo-Scientific-NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒
Thermo-Scientific-NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒描述Thermo Scientific NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒提供了高效的细胞裂解和抽提方法，可在两个小时之内完成胞浆蛋白与核蛋白的分离操作。
NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒的特性：• 快速—在两个小时之内获得胞核与胞浆内的可溶性蛋白组分• 可靠—NE-PER试剂盒已经被950篇以上的发表文献引用• 通用–适用于培养细胞或组织（仅适用于新鲜样本）的核蛋白抽提• 可扩展—两种规格试剂盒，满足从细胞和组织中抽提样本的应用需求• 方便—操作简单，无需超速梯度离心• 兼容性好—获得样本适合于多种下游应用，包括免疫印迹、凝胶迁移分析、蛋白分析、报告基因分析以及酶活性分析NE-PER试剂盒为用户提供了高效的核蛋白抽提方法，用户只需拥有台式微量离心机、离心管和移液器，进行简单的分步式细胞裂解及核蛋白与胞浆蛋白离心分离即可。
NE-PER试剂盒能够高效地将胞浆蛋白与核蛋白溶解和分离为不同组分，交叉污染以及基因组DNA/mRNA 的干扰均降到了最低。
一旦经过脱盐或稀释，分离后的蛋白即可用于免疫分析和蛋白相互作用实验，如迁移率分析(EMSA)、免疫共沉淀(Co-IP)和拉下实验。
分离胞核和制备核蛋白抽提物的方法很多，但大多数制备核蛋白抽提物的制备方法都很耗时，并需要机械匀浆、冻融循环、反复离心或透析，而这些都可能影响核蛋白的完整性。
NE-PER 核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒使用了基于试剂的分离方案，能够分步裂解细胞并从胞浆中分离出完整的细胞核，然后再从基因组DNA与mRNA中抽提核蛋白。
这一温和的过程可在两小时之内完成，且使用培养细胞时仅需标准的桌台式离心机即可。
此外，用户还可以从细胞培养物或组织样本中分离得到具有活性的核蛋白与胞浆蛋白。
本试剂盒能够从两百万个细胞中提出200至500µg胞浆蛋白和100至200µg的核蛋白（浓度为1mg/mL）。
生工 细胞核蛋白提取试剂盒
细胞核蛋白质提取试剂盒 Nucleoprotein Extraction Kit产品编号：C500009 包装规格：50 Assays 产品简介本试剂盒提供独特的组份，采用特殊的非离子型去污剂，以及焦磷酸钠等数种蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制试剂，能够在非变性和低渗的条件下裂解细胞，经过洗涤去除大部分胞质蛋白和膜蛋白，释放的细胞核能够保持完整，再用Lysis Buffer 对细胞核蛋白质进行抽提的同时可以保持核蛋白质的活性，因此该产品可合适用于SDS-PAGE 电泳、Western Blot 、免疫共沉淀、EMSA 、Pull Down 和转录调控等后续蛋白质或分子生物学相关实验的研究，每次可以从107个培养细胞或200 mg 动物组织提取核蛋白质，本试剂盒可以使用50次。
产品特点 1. 提取的核蛋白质可以最大限度的保持蛋白质的活性，可以用于EMSA ，转录因子分析的实验。
2. 可以从50x107个培养细胞或50x200 mg 动物组织提取核蛋白。
3. 整个实验过程只需要45分钟左右。
4. 在提取的过程中，最大限度的减少了膜和胞质蛋白对核蛋白的污染。
5.不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
运输和保存条件常温下运输，在收到后，将磷酸酶抑制剂，PMSF 和DTT 在-20℃的环境中保存，其余2-8℃保存，保质期一年。
产品组成 成分 C500009 Lysis Buffer 10 mL Hypotonic Buffer 50 mL 磷酸酶抑制剂 300 μL PMSF 600 μL DTT60 μL操作步骤A 实体组织蛋白的提取 1. 在每1mL 冷Hypotonic Buffer 加入5 μL 磷酸酶抑制剂，10 μL PMSF 和1 μL DTT 混匀。
冰上保存数分钟待用。
2.将100-200mg 固体组织置于培养皿中，手术剪将小块充分剪碎，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，用PBS 洗涤两次，离心，取沉淀后加入0.6 mL 冷Hypotonic Buffer 混匀， 4℃下玻璃匀浆器上下手动匀浆30-50 次。
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒
使用说明：
1. 准备溶液：室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A备用，在使 用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。取适当量的细胞核蛋白抽提试剂备用，在使用前数分钟内加入 PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下 细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目 的蛋白。
6. Chen G, Shen X, Yao J, Chen F, Lin X, Qiao Y, You T, Lin F, Fang X, Zou X, Lin L. Ablation of NF-kappaB expression by small interference RNA prevents the dysfunction of human umbilical vein endothelial cells induced by high glucose. Endocrine. 2009 Feb;35(1):63-74. Epub 2008 Nov 8.
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产品名称 细胞浆蛋白抽提试剂A 细胞浆蛋白抽提试剂B 细胞核蛋白抽提试剂
说明书
包装 10ml 0.5ml 2.5ml 1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(ST506) 可以向碧云天订购。
5. Lu J, Yue BH, Wang CM, Bai ST, Sheng GY. Efficacy of RNAi-induced down-regulation of wild-type FLT3 on NF-kB pathway in THP-1 cell line. Life Science Journal. 2008;Vol.5,No.2.
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胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒
产品编号产品名称包装
SINP001 胞浆－核蛋白抽提试剂盒50×
产品简介：细胞核和细胞浆目前成为研究细胞组分的两个热点，获得高浓度的细胞核蛋白和细胞浆蛋白成为得到好的研究结果的重要实验过程。
本试剂盒主要原理是在低渗透压条
件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，离心得到细胞核沉
淀。
最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒是本公司
非放射性EMSA试剂盒（cat; SIDET001, SIDET003, SIDET004,）实验成功的重要部
分，经BCA测定24cm2贴壁细胞(或50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)抽提物，核蛋白
浓度约为 2.5ug/ul或更高。
抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，
footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
本试剂盒可足够您进行
50次抽提操作！
包装清单：
试剂包装总量
5X Buffer A 1瓶35ml/瓶
2X Buffer B1支 1.5ml/支
Solution I（溶液I）1支 1.75ml/支
Solution II（溶液II）1支 1.75ml/支
Solution III（溶液III）1支 1.5ml/支
PMSF Solution 1支0.85ml/支
User Manual (说明书)
1份1份/Kit
保存温度： 4℃保存。
Ⅰ.准备抽提试剂：按照下列方法制备胞浆－核蛋白抽提液：
1.制备3ml胞浆蛋白裂解液I ：
试剂体积
5X Buffer A0.6ml
Solution I（溶液I）30ul
Solution II（溶液II）30ul
PMSF Solution 15ul
dd-H2O 2.325ml
总体积 3.0ml
注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。
2.制备1.02ml胞浆蛋白裂解液II：
试剂体积
Solution III（溶液III）20ul
胞浆蛋白裂解液I 1.0ml
总体积 1.02ml
3.制备1ml核裂解液：
试剂体积
2X Buffer B25ul
Solution I（溶液I）0.5ul
Solution II（溶液II）0.5ul
PMSF Solution0.25ul
dd-H2O23.75ul
总体积 50ul
注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。
Ⅱ. 细胞核蛋白抽提步骤：
贴壁细胞胞浆蛋白—核蛋白制备：
1.将50ml规格的细胞培养物（细胞生长面积约24cm2）置于冰盒上低温操作。
2.弃培养瓶中上清培养液，加3ml 冷1X PBS于细胞培养瓶中漂洗细胞两次。
3.取1.5ml胞浆蛋白裂解液I漂洗细胞一次，弃漂洗后的缓冲液。
4.取1.0ml胞浆蛋白裂解液II于培养瓶中溶解细胞，可用1.0ml移液枪贴壁吹打细胞多次,可
以在显微镜下观察细胞的裂解情况。
5.尽量吸干净培养瓶中的裂解液，转入1.5ml离心管中，4℃，14000 rpm 离心2min.
6.用移液器分开上清和沉淀，上清液即为胞浆蛋白液，请于－80℃保存。
7.取0.5ml胞浆蛋白裂解液I漂洗沉淀一次，4℃，14000 rpm 离心2min，弃上清。
8.取50ul 核裂解液重悬沉淀，4℃，静置离心管30min,并不是剧烈震动重悬沉淀。
同时调离
心机冷却至4℃。
9.4℃，14000rpm 离心 20min.
10.取上清液（即核抽提物）与－80℃保存。
悬浮细胞胞浆—核蛋白制备：
1. 将细胞培养物置于冰盒上低温操作，将离心机。
2. 将约8ml细胞培养物（50ml规格培养平培养）转入离心管中，3000rpm离心3min，弃上清，
获得细胞。
3. 再用1.5ml 1X PBS漂洗细胞两次, 3000rpm离心，弃漂洗后的1X PBS，同时将离心机冷却
至4℃。
4. 加1.5ml胞浆蛋白裂解液I于离心管中，漂洗细胞一次，3000rpm离心2min，弃上清。
5. 加1.0ml胞浆蛋白裂解液II于离心管中，混悬沉淀，低温下振荡约5-10min溶解细胞。
6. 4℃，14000 rpm 离心2min。
7. 用移液器分开上清和沉淀，上清液即为胞浆蛋白液，请于－80℃保存。
8.取0.5ml胞浆蛋白裂解液I漂洗沉淀一次，4℃，14000 rpm 离心2min，弃上清。
9. 用50ul 核裂解液重悬沉淀，4℃，静置离心管30min。
10.4℃，14000rpm 离心 20min.
11. 取上清液（即核抽提物）与－80℃保存。
Ⅲ. 注意事项：
1.收到本试剂盒后，请立即检查试剂瓶的包装与密封是否完好。
若有破损请在接货后24
小时内与本公司联系。
2.本试剂盒有效期为12个月，请严格按照试剂瓶上的说明保存所有试剂。
3.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
4.本操作步骤及试剂用量是以24cm2贴壁细胞(或1瓶50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)为例
进行操作获得50ul核蛋白和1.0ml胞浆蛋白。
如果您每次抽提的量增加，您可以按比例
配制抽提试剂，如：抽提48cm2贴壁细胞(或2瓶50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)您可以
制备6ml胞浆蛋白裂解液I，2.0ml胞浆蛋白裂解液II和100ul核裂解液.
5.获得的核蛋白浓度的大小和您抽提健康细胞密度有关。
6.PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很
快失效。
7.使用本试剂盒抽提得到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白都可以直接用BCA法测定蛋白浓度。
8.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。