兽药残留样品前处理技术

去蛋白原理
除蛋白过程是将蛋白质变性处理后， 把与蛋白质结合的药物解离出来，离 心分离出去蛋白。通常除蛋白的方法 是在含蛋白样品中加入适当的沉淀剂 或变性剂，使蛋白质脱水而沉淀（如 有机溶剂、中性盐），有的是由于和 蛋白质形成不溶性盐而析出（如一些 酸类：三氯乙酸、高氯酸、磷酸、苦 味酸）
有机溶剂沉淀剂
与蛋清相比较，蛋黄基本上为疏水性环境， 低极性药物的残留较多。如果需要分别测 定蛋黄和蛋清中的残留，最好将刚产出后 的蛋分离蛋黄和蛋清，避免药物由蛋黄向 蛋清扩散。
奶样
牛 奶 的 含 水 量 约 87% ， 蛋 白 质 （ 以 酪 蛋 白 为 主 ） 为 3.3% ， 脂 肪 （ 甘 油 三 酯 ） 为 3.7%，糖类（乳糖）为4.7%，以及一些无机盐、维生素和酶类（过氧化物酶、脂肪酶 等）。
酶水解是专属性很强的水解结合物的方法。 通常使用的水解酶是β-葡糖苷酸酶、芳基硫 酸酯酶、磷酸酯酶等。
酶水解
β-葡糖苷酸酶可专门水解药物的葡萄糖醛酸苷， 芳基硫酸酯酶和磷酸酯酶分别水解药物的硫酸酯 和磷酸酯。也可用几种酶的混合物，将生物样品 中药物的葡萄糖醛酸酐及硫酸酯同时水解。
除蛋白质
蛋白质
生物样品如肝脏、肾脏、血浆等含 有大量的蛋白质，它们能结合药物， 因此对于某些药物检测，必须先将 与蛋白质结合的药物游离之后再作 进一步处理。
奶中还含有大量由酪蛋白或脂蛋白构 成的束胶体系，当酸化或加热时，束胶结 构解体，蛋白质沉淀析出。非解离性的或 极性较低的药物易由血浆向奶中扩散，导 致奶中残留。与血浆样品类似，奶中的药 物可与蛋白结合。
血样
血液由血浆和血清组成。血浆和血清 的化学成分与组织液相近，测定血浆或血 清中药物浓度，比全血更能反映作用部分 药浓的变化，测定方法一般也可互相通用。 若血浆中含有抗凝剂对测定有影响，则应 使用血清样品。通常药物在血浆中均与血 浆蛋白（白蛋白、球蛋白、糖蛋白、脂蛋 白）发生一定程度的结合，一些药物的蛋 白结合率甚至可达水解的方法有酸水 解和酶水解
酸水解通常使用无机酸（盐酸），至于加入 盐酸的浓度、酸化时间以及是否需要加热等， 随药物性质而异，但最终应通过实验确定。
酸水解
有的药物的结合物则必须采取较剧烈的条件，如 加入3 mol/L盐酸溶液后还必须煮沸1h，水解后 的样品呈强酸性，必要时可用碱液调整pH后再进 行萃取。
甲醇与蛋白形成絮状沉淀易于离心分离，得到澄清的上清液；乙腈与蛋白形成致密沉 淀，易离心除去，沉淀效率较甲醇高。使用时应加入足量的沉淀剂，通常加入量为样 品体积的1.5～2倍。
酸沉淀剂
常用的酸性沉淀剂有三氯乙酸和高氯酸，其 它还有钨酸、钼酸、磷钨酸、磷钼酸和苦味 酸等。酸性沉淀剂能同蛋白质的阳离子形成 不溶性盐而沉淀，必要的条件是溶液的pH要 低于蛋白的等电点。
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3
4
溶剂的极性
溶剂的沸点
溶剂的毒性
残留分析特点
基体复杂
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各目标化合物 性质差异大
02 03
残留浓度低
04
检测限越 来越严格
样品类型
SAMPLE TYPES
兽药残留分析中，最常用的生物样品是组织样品和禽蛋，其 次是奶、血液和尿液样品。
动物组织
肌肉中水分约占75%，蛋白 质（肌浆蛋白、肌原蛋白、胶原 蛋白和弹性蛋白）占19%，脂肪 （中性脂肪、脂肪酸和磷脂）占 2.5% ， 糖 类 占 1.2% ， 以 及 一 些 无机盐、维生素和酶类。肌浆蛋 白（肌红蛋白、糖解酶）可溶于 水，肌原蛋白（肌球蛋白、肌动 蛋白）溶于浓盐水，胶原蛋白和 弹性蛋白（结缔组织）在上述溶 剂中均不溶。
样品预处理
Sample Pretreatment
02
结合物水解
药物在体内经第二相代谢反应之 后，常形成葡萄糖苷酸、硫酸酯 及磷酸酯等结合物。以结合状态 存在的药物多存在于尿中，但也 存在于肝脏、肌肉及血液中。
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禽蛋
禽蛋包括蛋黄和蛋清。蛋黄的含水量约 50% 、 蛋 白 质 16.5% 、 脂 肪 33% 、 糖 类 0.2% ， 以 及 一 些 无 机 盐 、 维 生 素 和 酶 类 （淀粉酶、脂肪酶、磷酸酶、肽酶和过氧 化 氢 酶 ） 。 蛋 清 含 水 量 达 88% ， 蛋 白 质 10.5%和极少量的碳水化合物和脂肪。
LOREM IPSUM
盐沉淀剂
一些无机盐如硫酸铵、硫酸钠 和氯化钠等，能使蛋白质胶体 脱水并中和其电荷，使蛋白质 失去胶体性而沉淀下来。无机 盐中以硫酸铵最常用。
提取与净化
Extraction & Cleanup
03
提取净化方法
液-液萃取 固相萃取
基质固相分散技术 超临界流体萃取
固相微萃取 免疫亲和色谱
尿样
尿液的主要成分是水、尿素及盐类。 在所有体液样品中，尿样最容易获得， 并且样品最多，内含药物（母体药物 及代谢物）浓度高；正常尿液中仅含 微量蛋白质，不需要去蛋白处理。
尿中药物大多呈结合状态，主要以 葡萄苷酸和硫酸酯结合物存在，因 此无论直接测定或萃取分离之前， 都必须将结合态的药物水解，使药 物游离处理。
液-液萃取
可一次进行多个样品的萃取
04
01 通过萃取可将被测组分自大量内源性物 质中分离出来，减少杂质对测定的干扰
经典
02
03 可将萃取液蒸发，使组分富集
操作简单快速、经济实用
液-液萃取常用的有机溶剂有甲醇、乙腈、丙酮、氯仿、二氯甲烷、四 氯化碳、乙醚、叔丁基甲醚、乙酸乙酯、苯、甲苯、正己烷。
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兽药残留前处理技术
Pre-treatment Technology of Veterinary Drug Residue
马勤川 威海德生技术检测有限公司
01
概述
02
样品预处理
03
提取与净化
04
实例分析
目录
01
概述
Introduction
概述
提取
01
净化
02
浓缩
03
样品前处理是指样品的制备和对样品中的待测组分进行提取、净化和浓 缩的过程。样品前处理的目的是消除基质干扰，保护仪器，提高检测方 法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。