细胞唾液酸化相关酶的荧光成像检测新方法研究
钆类造影剂的研究进展
钆类造影剂的研究进展段二月;马建功;程鹏【摘要】In this paper, the Gd(III)-based contrast agents are reviewed from four aspects as fol owed:principles, conditions, research progresses and approaches for improving relaxivity. The research progresses in the fieldsof fluorescent and biological contrast agents are deeply introduced. Moreover, the activity of enzyme, pH and metal ions of biological contrast agents are discussed.%从钆螯合物造影剂的原理、条件、研究进展、以及提高其弛豫效率的方法4个方面进行介绍与总结；在研究进展方面，着重介绍了荧光、生物敏感造影剂；并且从酶活性、金属离子活性、pH活性3个方面对生物敏感造影剂进行了论述。
【期刊名称】《大学化学》【年(卷),期】2016(031)007【总页数】13页(P1-13)【关键词】钆造影剂;原理;弛豫效率;生物活性;荧光探针【作者】段二月;马建功;程鹏【作者单位】南开大学化学学院，天津300071;南开大学化学学院，天津300071;南开大学化学学院，天津300071【正文语种】中文【中图分类】O614.33;G641973年，Lauterbur［1］和Mansfield发明了磁共振成像技术（Magnetic Resonance Imaging，简称MRI），并获得了诺贝尔生物医学奖。
磁共振成像技术可以对内部组织进行检测，是一种非入侵性的成像方式，由于其图像分辨率高，对人体组织尤其是软组织有很高的对比度，并且对人体不会造成损害，已经在世界各地的医院进行应用［2］。
细胞生物学练习题(附答案)
细胞生物学练习题（附答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.下列哪一项不是凋亡的特征A、形成凋亡小体B、细胞体积变小C、发生自吞噬作用D、染色质边集E、细胞破裂正确答案：E2.微丝组装所需能量来自于A、ATPB、GTPC、ADPD、GDPE、UTP正确答案：A3.构成膜糖蛋白和膜糖脂的糖类中带有负电荷的成分是A、葡萄糖胺B、甘露糖C、葡萄糖D、半乳糖E、唾液酸正确答案：E4.关于线粒体蛋白的描述正确的是A、所有线粒体蛋白都是由线粒体编码和合成的B、一些线粒体蛋白由线粒体编码和合成,而其他的则从细胞质运入C、所有的线粒体蛋白都是由细胞质输入的D、线粒体蛋白是从其他线粒体蛋白生成的E、部分线粒体蛋白由线粒体合成后转运到细胞质中正确答案：B5.显示着丝粒的显带方法是A、G显带法B、C显带法C、N显带法D、R显带法E、T显带法正确答案：D6.人体内的红细胞的存活时间约为120天,而正常人的红细胞数目却是相对恒定的。
在这个过程中不涉及哪项细胞生物学事件A、细胞分化B、细胞增殖C、细胞凋亡D、细胞坏死E、细胞衰老正确答案：D7.在胚胎发育过程中,内胚层发育为A、骨骼B、消化道上皮C、神经D、肌肉E、表皮正确答案：B8.细胞内的分泌颗粒主要形成于A、附着(或膜结合)核糖体B、滑面内质网C、粗面内质网D、游离核糖体E、高尔基复合体正确答案：E9.关于核仁的结构与功能的错误描述是A、没有包膜的海绵状球体B、主要参与三种RNA的合成C、与核糖体的装配有关D、在分裂细胞中呈现周期性变化E、能被特征性银染着色正确答案：B10.下列关于光面内质网正确的描述是A、光面内质网是由两层单位膜围成的管状内质网B、光面内质网主要化学成分是DNC、脂类、蛋白质D、光面内质网是一个具有多种功能的细胞器E、光面内质网主要功能是合成蛋白质F、光面内质网的标志性酶是糖基转移酶正确答案：C11.染色体中具有防止染色体末端黏着作用的特化部位称为A、次缢痕B、动粒C、主缢痕D、端粒E、着丝粒正确答案：D12.在结构上具有显著极性的细胞器是A、内质网B、过氧化物酶体C、溶酶体D、核糖体E、高尔基复合体正确答案：E13.染色质的着力点A、内层核膜B、外层核膜C、核孔复合体D、核纤层E、核周间隙正确答案：D14.可用激光共聚焦显微镜观察到的是A、超微结构B、显微结构C、蛋白质一级结构D、细胞三维立体结构E、生物大分子空间构象正确答案：D15.相差显微镜的工作原理是将光线通过标本产生的( )转变成人眼可见的( )A、振幅差,相位差B、振幅差,颜色差C、相位差,振幅差D、波长差,颜色差E、波长差,振幅差正确答案：C16.在哺乳动物的核基因中,有三个终止密码,但终止密码UGA在线粒体的mRNA中,却是A、精氨酸(Arginine)的密码子B、亮氨酸(Leucine)的密码子C、色氨酸(Tryptophan)的密码子D、丝氨酸(Serine)的密码子E、起始密码的密码子正确答案：C17.对过氧化物酶体的描述哪项是错误的A、所含酶仅为过氧化氢酶B、有的内含一个类核体C、为膜性囊泡结构D、可清除细胞内E、所含酶是在游离核糖体上合成的F、2O正确答案：A18.关于线粒体下列哪项叙述不正确A、内膜比外膜蛋白质含量高B、由两层单位膜构成C、外膜比内膜脂类含量高D、外膜不是选择通透性膜E、内膜是选择通透性膜正确答案：D19.下面对组蛋白的描述不正确的是A、在染色质中含量稳定B、合成于细胞周期的S期C、不具有组织特异性D、属于酸性蛋白E、与DNA的组装发生于S期正确答案：D20.每一个rRNA基因的袢环称为A、核仁素B、着丝粒C、核仁组织区D、核仁组织者E、异染色质正确答案：D21.下列参与了凋亡执行的caspase家族成员是A、caspase-1B、caspase-8C、caspase-2D、caspase-10E、caspase-3正确答案：E22.普通光学显微镜所能分辨的最小的细胞器是A、高尔基体B、细胞核C、线粒体D、细胞膜E、溶酶体正确答案：C23.含有5S rRNA基因的染色体是A、1号染色体B、2号染色体C、21号染色体D、Y染色体正确答案：A24.原核细胞不具有的特征是A、细胞大小平均为1~10μmB、有核膜、核仁、核基质等构造C、染色质不含组蛋白D、没有细胞内膜系统E、有拟核正确答案：B25.间质细胞中,中间纤维的成分属于A、胶质纤维酸性蛋白B、波形纤维蛋白C、角质纤维蛋白D、结蛋白E、神经纤维蛋白正确答案：B26.蝌蚪尾巴消失即变态属于下列哪一种现象A、细胞坏死B、细胞分裂C、细胞自噬D、细胞分化E、细胞凋亡正确答案：E27.真核生物呼吸链定位于线粒体A、外膜B、基质C、嵴间腔D、内膜E、膜间腔正确答案：D28.下列有关细胞核的描述,错误的是A、细胞核是细胞遗传信息储存、复制和转录中心B、幼稚细胞的核往往较大,成熟细胞的核往往较小C、每个细胞至少具有一个细胞核D、细胞核的出现是区别真核细胞与原核细胞的重要标志E、细胞核是细胞生命活动的调控中心正确答案：C29.关于信号识别颗粒(SRP)的错误叙述是A、存在于胞质溶胶中B、可占据核糖体的A位C、由6个多肽链和一个7SD、可与蛋白质分子中的信号肽结合E、可与位于内质网腔中的SRP受体结合正确答案：E30.收集轰击样品所产生的二次电子经转换放大后在荧屏上成像的显微镜是A、倒置显微镜B、相差显微镜C、透射电镜D、荧光显微镜E、扫描电镜正确答案：E31.从发育过程看,以下哪种细胞是中胚层起源的细胞A、色素细胞B、肺泡上皮细胞C、皮肤表皮细胞D、胰腺细胞E、面部肌肉细胞正确答案：E32.全能性最低的细胞是A、受精卵B、精子C、内胚层细胞D、原始生殖细胞E、初级卵母细胞正确答案：C33.下列哪一种不是细胞凋亡的特征A、核DNA在核小体连接处规则性断裂B、核纤层断裂解体C、膜相结构将染色质和细胞器包裹形成凋亡小体D、膜性细胞器溶解E、染色质凝聚成斑块状正确答案：D34.以下由奢侈基因编码的蛋白有A、核糖体蛋白B、胶原蛋白C、糖酵解酶蛋白D、组蛋白E、微管蛋白正确答案：B35.细胞松弛素-B不能影响下列哪项活动A、成纤维细胞迁移B、巨噬细胞吞噬C、肿瘤细胞有丝分裂D、肌细胞收缩E、肿瘤细胞侵袭转移正确答案：D36.以下染色体,常见次缢痕结构的是A、2号染色体B、21号染色体C、Y染色体D、1号染色体正确答案：D37.适于光镜观察的切片厚度通常在A、2nmB、0.2μmC、700~800D、100μmE、1~10μm正确答案：E38.分子伴侣是驻留在糙面内质网内的一类具有重要作用的蛋白质,它们能够帮助新合成的多肽链转运、折叠和组装,以下关于分子伴侣的描述错误的是A、能特意地识别并结合新生肽或部分折叠肽链,协助其折叠、装配和转运B、分子伴侣不参与终产物的形成C、内质网分子伴侣的C端具有内质网驻留信号-KDELD、分子伴侣“陪伴”分泌蛋白,一起被转运至高尔基复合体E、分子伴侣蛋白是细胞内质量监控的重要因子正确答案：D39.下列哪种细胞不含线粒体A、分泌细胞B、肝细胞C、人成熟的红细胞D、肌肉细胞E、表皮细胞正确答案：C40.兼性染色体A、S早期复制的染色质B、染色质螺旋程度低C、S晚期复制的染色质D、常染色质在一定条件下转变为异染色质E、染色质高螺旋程度正确答案：D41.关于微管的超微结构,不正确的叙述是A、管壁由13条直径为5nm的原纤维组成B、原纤维由微管蛋白α、β异二聚体连接而成C、外径24nm,内径15nmD、呈中空的圆筒状结构E、微管蛋白α和β的氨基酸组成和排列不相同正确答案：A42.核纤层蛋白A基因发生突变,最可能导致哪种疾病A、亨廷顿氏综合征B、视网膜母细胞瘤C、苯丙酮尿症D、贫血症E、色盲正确答案：A43.过氧化物酶体的标志酶是A、过氧化氢酶B、尿酸氧化酶C、D-氨基酸氧化酶D、L-氨基酸氧化酶E、L-羟基酸氧化酶正确答案：A44.下列哪一种关于膜组成成分移动性的描述是正确的A、通常脂质在膜平面内移动的速率比蛋白质快B、通常蛋白质在膜平面内移动的速率比脂质快C、只有脂质可以围绕与膜平面相垂直的轴进行自旋,蛋白质不能进行类似运动D、蛋白质和脂质在膜平面移动的速率相同E、脂质和蛋白质在膜小叶间的“flip-flop”运动比它们在膜平面内的移动更易进行正确答案：A45.从细胞裂解组分中应用物理方法实现分离线粒体,会首先考虑使用的仪器是A、电泳仪B、流式细胞仪C、低速离心机D、高(超)速离心机E、分光光度计正确答案：D46.下列哪种成分不属于中间纤维蛋白A、肌球蛋白B、核纤层蛋白C、波形蛋白D、胶质纤维酸性蛋白E、角蛋白正确答案：A47.患者,男,34岁,体检时发现尿糖(+++)。
唾液酸酶测定法在诊断细菌性阴道病中的临床应用
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唾液酸酶测定法在诊断细菌性阴道病中的临床应用
作者：胡立平刘利
来源：《中国当代医药》2009年第05期
[摘要]目的：探讨唾液酸酶法检测(BLUE法)检测细菌性阴道病(baeterial vaginosi.BV)的临床应用。
方法：对妇科门诊458疑似BV患者采用全标准检测法(Aresd)和BLUE法对阴道分泌物进行检测。
结果：在458例疑似Bv患者的阴道分泌物中Aresel法检出阳性数为212例，阳性率为46.3％(212／458)，BLUE法捡出阳性数为214例。
阳性率为4617.1％(214／458)，经统计学分析，两者差异无统计学意义(P>O.05)。
结论：采用唾液酸酶测定快速、准确。
操作简便，结果易判认，特异性强，是细菌性阴道病诊断的一项较为灵敏的有效方法。
[关键词]唾液酸酶法测定法：细菌性阴道病：阴道分泌物
[中图分类号]R446.1
[文献标识码]B。
唾液酸羟脯氨酸联合检测试剂盒在肿瘤诊治中的应用ppt课件
英国爱丁堡西部综合医院Sandeep等的一项新研究证实,甲状腺癌生存者发生第二原发肿瘤的危险可增加30%,其他肿瘤生存者的甲状腺癌危险亦增加。[J Clin Endocrinol Metab 2006, 91(5)∶ 1819] 该研究对欧洲、加拿大、澳大利亚和新加坡的13个基于人群的肿瘤登记库的数据进行了综合分析 结果显示,在对39002例原发性甲状腺癌患者的5年随访期间,共发生了2821例第二原发肿瘤,标准化发病比(SIR)为1.31;许多第二原发肿瘤在甲状腺癌发病后1年内被诊断,主要为非黑素瘤皮肤癌、前列腺癌、肾癌、肾上腺肿瘤和非霍奇金淋巴瘤;小肠、结肠、直肠和乳腺等其他部位肿瘤的发病危险则随着随访时间的延长而增加。
初检（临界值筛查）
复检（动态值筛查）
结果处理
开单步棸：点击“检验申请单”---点击“TAM”检测室---点击“唾液酸、羟脯氨酸联合检测” 此项目需空腹抽血，生化管2毫升，标本送至门诊2楼病理科，每天都可以送标本，周五上午出结果。 此项目在医保，农合，收费180元。 建议45岁以上人群做常规筛查。
灵敏
寡糖序列
A
寡糖序列
B
寡糖序列
C
寡糖序列
D
BXTM 高分子载体
灵敏
灵敏
细胞破裂
分泌型标志物直接释放入血
BXTM检测的物质部分为分泌型TM。可在肿瘤细胞正常生长过程释放入血，易于在早期肿瘤血清中检测
常规肿瘤标志物多为胞内型和细胞表面型TM。需在肿瘤细胞坏死解体后释放入血，难以在早期肿瘤血清中检测到
16
100
123.1±26.8
14
87.5
135.7±31.4
16
100
从上述数据可见，对治疗后的癌症患者应用本试剂检测，可作为疗效动态观察指标和鉴别癌症复发转移指标。
蛋白质唾液酸修饰的分析研究
蛋白质唾液酸修饰的分析研究蛋白质唾液酸修饰是一种常见的糖基化修饰形式，广泛存在于哺乳动物的细胞膜、胞外基质以及某些细胞器中的蛋白质上。
该修饰形式在细胞生长、发育、分化、免疫应答等多方面的生物学过程中发挥着重要作用。
蛋白质唾液酸修饰的结构和生物学功能唾液酸是一种多酸性糖类分子，由N-乙酰神经氨酸、N-乙酰半乳糖胺等单元重复的长链结构。
在蛋白质上，唾液酸通常通过在蛋白质表面的特定序列上与糖基转移酶的作用下，连接到蛋白质的N末端或特定残基上。
蛋白质唾液酸修饰对蛋白质的功能有多种影响。
首先，唾液酸修饰可以影响蛋白质的稳定性和可溶性。
在一些情况下，唾液酸修饰可以使蛋白质更稳定，从而促进其折叠和组装。
但是，在其他情况下，唾液酸修饰可能会使蛋白质变得更不稳定，甚至导致蛋白质的聚集和凝集。
其次，唾液酸修饰可以影响蛋白质的亲水性和表面电荷。
唾液酸修饰通常能够增加蛋白质的亲水性和表面电荷，从而使蛋白质更容易与其他生物分子作用和相互作用。
最后，唾液酸修饰还可以影响蛋白质的受体配体特异性和信号传递。
在细胞中，唾液酸修饰的蛋白质可以作为受体或配体参与信号传递，从而调控细胞的生长、增殖和死亡等过程。
蛋白质唾液酸修饰的分析方法由于唾液酸的复杂性和多变性，蛋白质唾液酸修饰具有极高的结构多样性和异质性，因此对其进行分析和鉴定是非常具有挑战性的。
目前，主要的蛋白质唾液酸修饰分析方法包括质谱法、酶切法、化学还原法和长江色谱法等。
质谱法是一种常用的蛋白质唾液酸修饰分析方法。
通过质谱仪对蛋白质分子进行直接检测和分析，能够准确地鉴定唾液酸修饰的位置、类型和数量。
但该方法需要高度纯化的样品和高灵敏度的质谱仪，因此通常需要耗费较多的时间和成本。
酶切法是一种基于唾液酸的序列特异性的酶切反应的分析方法。
通过对唾液酸区域进行特定酶的消化和识别，可以确定唾液酸的类型和修饰位置。
该方法操作简单，但受所用酶的限制，可能无法鉴定所有唾液酸修饰的类型。
化学还原法是一种基于唾液酸与亚硫酸盐之间可逆反应的分析方法。
细胞生物学考试题及参考答案
细胞生物学考试题及参考答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.在DNA分子中,若A+T=60%,则G的含量是A、0.4B、0.3C、0.6D、0.1E、0.2正确答案：E2.关于糖蛋白的描述,哪一项是正确的A、参与蛋白质糖基化的蛋白质B、参与糖的分解代谢过程的酶C、具有(N-连接或O-连接)寡糖侧链的糖基化了的蛋白质D、参与糖苷键形成的酶E、具有一个脂肪酸侧链的糖基化了的蛋白质正确答案：C3.下列与内质网蛋白质合成无关的是A、SNAREsB、分子伴侣C、SRPD、核糖体E、信号肽正确答案：A4.下列哪种情况不是由膜脂分子的两亲性特点造成的A、两个膜泡可重组形成一个新的膜泡B、膜脂分子在水中形成双分子层结构C、膜的部分区域可以向内凹陷或向外凸起D、膜脂分子在水面形成单分子层结构E、膜发生断裂后游离端会自发闭合正确答案：C5.不同残余体内含不同残余物质,形态差异明显。
下列哪种残余体由同心层状、板状和指纹状排列的膜性成分构成A、髓样结构B、脂褐质C、残留体D、多泡体E、含铁小体正确答案：A6.由糖类成分完成的细胞功能不包括A、构成细胞外结构物质B、介导细胞间的相互识别C、储存能量D、作为细胞内第二信使参与信号转导E、提供能量正确答案：D7.可用激光共聚焦显微镜观察到的是A、生物大分子空间构象B、超微结构C、显微结构D、蛋白质一级结构E、细胞三维立体结构正确答案：E8.核蛋白中的核定位信号通常富含A、精氨酸、组氨酸B、组氨酸、赖氨酸C、精氨酸、甘氨酸D、赖氨酸、甘氨酸E、赖氨酸、精氨酸正确答案：E9.电镜下一对中心粒是A、两个互相平行的筒状小体B、两个筒状小体C、两个互相垂直的筒状小体D、一个筒状小体E、一对球状小体正确答案：C10.下列不具有两亲性的分子是A、胆固醇B、卵磷脂C、唾液酸D、孔蛋白E、神经节苷脂正确答案：C11.根据信号肽假说,与附着核糖体形成需要成分无关的是A、信号识别颗粒B、核糖体结合蛋白C、信号肽D、分子伴侣E、信号识别颗粒受体正确答案：D12.中间纤维参与的细胞活动是A、肌肉收缩B、核分裂C、纺锤体形成D、染色单体分离E、胞质分裂正确答案：B13.Arp2/3复合物生成的新微丝与原微丝的夹角是A、60度B、65度C、70度D、75度E、80度正确答案：C14.下列有关细胞核的描述,错误的是A、细胞核的出现是区别真核细胞与原核细胞的重要标志B、细胞核是细胞生命活动的调控中心C、幼稚细胞的核往往较大,成熟细胞的核往往较小D、细胞核是细胞遗传信息储存、复制和转录中心E、每个细胞至少具有一个细胞核正确答案：E15.rRNA的加工和核糖体大小亚基前体颗粒的装配发生在A、核仁中B、线粒体中C、细胞核中D、粗面内质网中E、滑面内质网中正确答案：A16.胃蛋白酶的基因在转录和翻译后的分泌途径是A、前途径B、调节性途径C、结构性途径D、后途经E、随机性途径正确答案：B17.以下由管家基因编码的蛋白有A、血红蛋白B、核糖体蛋白C、胶原蛋白D、膜抗原E、肌钙蛋白正确答案：B18.蝾螈肢体再生时顶端外胚层帽下,去分化的肌细胞在后续的再生过程中会出现在新生肢体的( )部位A、神经组织B、骨组织C、表皮组织D、软骨E、肌肉组织正确答案：E19.普通光学显微镜的理论分辨率A、1-10μmB、0.2μmC、527nmD、1.4E、1正确答案：B20.与微管相关蛋白tau蛋白异常有关的疾病是A、家族性高胆固醇血症B、维生素C缺乏病C、单纯性大疱性表皮松解症D、重症肌无力E、阿尔茨海默病正确答案：E21.G.Blobel和D.Sabatini于1975年提出信号肽假说,以下关于该假说不正确的描述是A、核糖体与糙面内质网结合属于功能性结合B、核糖体与糙面内质网结合是特异性的C、核糖体与糙面内质网结合是暂时性的D、核糖体与糙面内质网结合受时间和空间的限制E、核糖体与糙面内质网结合不受时间和空间的限制正确答案：E22.一般来讲,tRNA柄部末端从5`→3`的三个碱基顺序是A、CAAB、AACC、CACD、CCAE、ACC正确答案：D23.关于电子显微镜的错误叙述是A、被观察的样品需制备成超薄切片B、在荧光屏上成像C、分为透射式和扫描式两大类D、利用电子束作照明源E、实际分辨率可达0.002nm正确答案：E24.动物细胞分裂时形成的收缩环是下列哪种成分主要构成的A、微管蛋白B、结蛋白丝C、肌动蛋白丝D、角蛋白丝E、波形蛋白丝正确答案：C25.原核细胞的染色体是A、一条与RNA、组蛋白结合在一起的DNAB、一条与组蛋白结合在一起的DNAC、一条不与RNA、组蛋白结合在一起的裸露的DNAD、一条以上裸露的DNAE、一条以上与RNA、组蛋白结合在一起的DNA正确答案：C26.细胞中的下列化合物中,哪项属于生物大分子A、过氧化氢酶B、葡萄糖C、游离水D、无机盐E、胆固醇正确答案：A27.下列不能用于细胞分离的方法是A、差速离心B、免疫磁珠法C、流式细胞仪D、层析E、LCM正确答案：D28.下列关于肌动蛋白的叙述,错误的是A、G肌动蛋白是球形蛋白,因此不具有极性B、肌动蛋白具有ATP结合位点C、肌动蛋白与肌球蛋白形成的异二聚体是构成微丝的基本单位D、肌动蛋白具有阳离子结合位点E、细胞内γ肌动蛋白构成微丝组装的核心正确答案：A29.对细胞分化发挥远距离调控作用的是A、环境因素B、细胞质C、位置信息D、细胞间相互作用E、激素正确答案：E30.MORF4基因能表达一种与细胞衰老死亡有关的转录因子,该基因突变可导致细胞永生化,而将MORF4基因片段导入到缺失MORF4基因的永生化细胞后,可使永生化细胞衰老。
活体生物发光成像技术
活体生物发光成像技术-是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA活体生物发光成像技术-是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA，采用荧光报告基团(GFP、RFP、Cyt及dyes等)进行标记，利用一套非常灵敏的光学检测仪器，让研究人员能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。
学术术语来源——绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞的分离鉴定文章亮点：1 利用显性遗传的表达绿色荧光蛋白的转基因大鼠作为细胞供体，进行了骨髓间充质干细胞的分离和培养，成功获得了稳定表达绿色荧光蛋白的大鼠骨髓间充质干细胞。
2 经鉴定后的间充质干细胞传代至10代时仍具有很强的增殖能力，采用油红O和茜素红染色方法进一步证实，在不同的诱导条件下，其可分别向成脂和成骨方向分化。
结果说明稳定表达的绿色荧光蛋白未影响到骨髓间充质干细胞的多向分化潜能，可作为良好的示踪因子。
关键词：干细胞；骨髓干细胞；绿色荧光蛋白；骨髓间充质干细胞；转基因大鼠；细胞表型；成骨分化；成脂分化；辽宁省自然科学基金主题词：骨髓；间质干细胞；绿色荧光蛋白质类；大鼠，转基因摘要背景：转基因动物提取的间充质干细胞自身携带绿色荧光蛋白，与传统病毒、质粒转染相比，能在活细胞中稳定地表达，可较快筛选其修饰的细胞。
目的：观察绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性。
方法：取2周龄的绿色荧光蛋白转基因大鼠双侧长骨骨髓，采用全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞。
流式细胞术分析第5代绿色荧光蛋白阳性骨髓间充质干细胞的细胞表型，并分别加入成骨及成脂条件培养液进行体外多向诱导分化，采用茜素红钙盐染色和油红O染色进行鉴定。
结果与结论：成功获得了稳定表达绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞表达CD90和CD105，不表达或弱表达CD14和CD45。
经成骨诱导3周后茜素红染色可见有橘红色钙盐沉积，经成脂诱导3周后油红O染色见红色的脂滴。
荧光成像技术在材料学中的应用研究
荧光成像技术在材料学中的应用研究随着科学技术的不断进步，材料学的研究也在不断地发展。
其中，荧光成像技术成为了研究领域中的一个热点。
荧光成像技术通过使用荧光染料或标记物的能量转移和辐射来显示物质在样品中的位置和形状。
目前，这种技术被广泛应用于药物发现、细胞生物学、低维材料的研究以及材料学领域中的其他科学领域。
在材料学中，荧光成像技术可以用来研究各种材料的结构和性质。
这种技术需要一种荧光染料或标记物，能够被材料可逆结构或特定理化环境所感应，并且能够与材料形成稳定的结合。
然后，使用激光或其他光源照射材料，荧光发射信号会被检测器检测并转化为可视化的图像。
一种常用于材料学中的荧光染料是螺旋丝氨酸二聚体（SpyTag-SpyCatcher），这种染料是由一种短肽和一种酶组成的。
这种染料可以在材料表面上自组装，并发射出荧光信号。
在研究中，通过更改染料中肽的序列和酶的种类，可以使染料能够识别和结合多种材料，并研究材料的结构和性质。
荧光成像技术在低维材料的研究中也有广泛的应用。
例如，石墨烯具有低维结构和独特的电学和光学性质。
石墨烯表面上的氧官能团可以与荧光染料结合，通过荧光成像技术可以研究石墨烯的结构和性质变化，进一步了解其应用在电子和光电器件中的潜力。
此外，荧光成像技术还可以用于研究船舶、航空和汽车制造等领域中的材料纳米结构的研究。
通过使用荧光标记物对这些材料进行表征，可以研究它们的组成、表面形貌和微观结构。
总的来说，荧光成像技术在材料学领域中的应用是非常广泛的。
其具有非常高的灵敏度和分辨率，且可以用于研究各种材料的结构和性质。
相信随着技术的不断发展，荧光成像技术在材料学领域中将会有更多的应用，推动材料学领域的发展。
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细胞唾液酸化相关酶的荧光成像检测新方法研究糖基化是一种重要的蛋白质翻译后修饰,它们在各种基础生命活动的过程中起重要作用,并且对机体的恶性转化特别敏感。
绝大部分聚糖的生物合成发生在细胞的内质网和高尔基体中,然而即使在糖蛋白生物合成之后,聚糖结构的修饰依然在酶催化作用下不断的进行着,这一过程称为聚糖重构。
聚糖重构主要受两类酶的催化作用,糖基转移酶和糖苷水解酶,它们的作用分别为生成和降解糖苷键。
由于细胞的糖基化程度通常与疾病,尤其是肿瘤,密切相关,因此糖基转移酶和糖苷水解酶作为潜在的药物靶点和肿瘤诊断标志物引起了研究人员的极大兴趣。
唾液酸化是糖基化中一个备受关注的分支,可以在附着于蛋白质或脂的聚糖链末端位置引入唾液酸(N-乙酰神经氨酸),肿瘤细胞中唾液酸的表达普遍是异常的。
糖缀合物上唾液酸的表达主要受唾液酸转移酶和唾液酸酶的活性的影响。
然而在大多数情况下,肿瘤细胞中唾液酸化异常改变的机理,唾液酸化相关酶的活性与唾液酸化聚糖的表达之间的相互关系仍然未知。
为了阐明唾液酸化相关酶的生物学和病理学功能以及使其作为疾病诊断和治疗的工具,发展检测唾液酸转移酶和唾液酸酶活性的新方法已成为迫切需求。
因此,本工作将化学生物学,细胞学和分子生物学等进行交叉结合,并利用荧光显微技术,纳米材料等,设计发展了新型分析检测方法和纳米探针,对肿瘤细胞中唾液酸转移酶,唾液酸酶的活性分别进行了原位无创检测,为研究聚糖生物合成机理、肿瘤临床诊断和药物开发提供了有力工具。
具体包括以下两个部分工作:1、基于化学选择性识别的活细胞内唾液酸转移酶活性检测唾液酸化的聚糖结构是由唾液酸转移酶(Sialyltransferase,ST)催化合成的,为了阐明唾液酸转移
酶的生物学和病理学功能,对唾液酸转移酶活性进行评估是十分必要的。
然而对细胞内唾液酸转移酶活性的变化进行原位无创检测的方法依然有限,针对这一问题,本工作设计了基于FRET成像的传感平台用于原位检测细胞内唾液酸转移酶的活性并跟踪唾液酸化进程。
四甲基异硫氰酸罗丹明标记的去唾液酸胎球蛋白(TRITC-AF)作为唾液酸转移酶的底物可发生唾液酸化,异硫氰酸荧光素标记的氨基苯硼酸(FITC-APBA)作为化学选择性识别探针可对唾液酸化产物进行特异性识别,两者在脂质体囊泡的作用下被运载到细胞内。
FITC-APBA对唾液酸化TRITC-AF的识别导致FRET信号的产生,通过对FRET 效率进行图像分析可获得唾液酸转移酶活性的相应信息。
利用这一方法,我们对唾液酸转移酶活性与恶性肿瘤、细胞周期、细胞表面唾液酸化以及唾液酸化抑制剂的相互关系进行了研究。
这一方法为研究聚糖生物合成机理、肿瘤临床诊断和药物开发提供了有力工具。
2、中性pH荧光增强型成像用于监测活细胞内溶酶体唾液酸酶活性溶酶体唾液酸酶(Lyso-Neus)是一类位于溶酶体的糖苷水解酶,可以切断糖蛋白或糖脂分子的糖基末端与唾液酸残基相连接的糖苷键,将唾液酸残基水解脱除。
本工作发展了一种中性pH条件下荧光增强型成像策略,利用一种具有唾液酸酶活性响应性并可定位于溶酶体的纳米探针,可对活细胞溶酶体中的唾液酸酶活性进行成像检测。
该纳米探针以静电相互作用和共价结合的方式,分别将分枝状聚乙烯亚胺(BPEI)和唾液酸酶底物4-甲基香豆素基-N-乙酰基-Ca-D-神经氨酸(4MUNA)组装到3-氨基苯硼酸(APBA)修饰的氧化石墨烯(GO)纳米片的表面获得。
该纳米探针通过细胞膜表面的网格蛋白介导的内吞作用进入细胞的溶酶体,
溶酶体中的唾液酸酶特异性的切割纳米探针上无荧光的4MUNA中的糖苷键,使4-甲基香豆素(4MU)从GO纳米片的表面释放。
在BPEI的质子海绵效应作用下,具有pH响应荧光性质的4MU可以从酸性的溶酶体中逃逸到中性的细胞浆中而荧光显著增强,利用4MU产生的荧光,实现了细胞内溶酶体唾液酸酶活性的检测。
本方法还能动态监测细胞内溶酶体唾液酸酶活性在生物过程中的变化,如细胞凋亡早期溶酶体唾液酸酶活性的变化,为研究唾液酸酶的生物学作用提供了一个强有力的工具。