支原体污染的特点及体检
支原体污染及其检测
支原体污染及其检测支原体污染在细胞培养中最为常见，培养体系中支原体污染的最可能途径是经已被支原体污染的细胞蔓延和传扬，据报道目前约有11％的二倍体细胞和传代细胞存在支原体污染；支原体污染的另一重要来源是培养液中加入了被支原体污染的血清。
支原体是一种介于细菌和病毒之间的能自立生活的微生物，它无细胞壁，形态呈多形性。
最小的支原体直径约200nm，可通过滤菌器。
支原体污染后培养基普通不发生混浊，细胞形态无显然变幻，但事实上细胞已受到各方面的潜在影响，如影响DNA合成，代谢减慢，生长被抑制等。
这种污染造成的危害较大，但支原体污染不易被发觉，因此对支原体的污染必需引起足够的重视，应严加防范。
支原体污染常用的检查办法如下。
1．形态学检查常用相差显微镜检测取洁净载玻片，滴加少许待检的细胞悬液，压上盖片，用相差显微镜油镜观看。
如有支原体污染，镜下可见暗色极小颗粒，类似布朗运动，可位于细胞表面或细胞之间。
要注重支原体与细胞破裂后溢出的内容物如线粒体等相区分。
电镜检测：用普通染色办法难以确定时，可用电镜检查。
详见电子显微镜技术一节。
2．支原体染色镜检支原体经低张处理后用地衣红染色观看，本法简便易行，不仅适用于检测支原体，亦可用于检查真菌和细菌。
【材料】 (1)待检疑有支原体污染的培养物； (2）检测用试剂：低张处理液（0.45%），Carnoy固定液（配方：60ml纯加30ml和10m1）,2％的地衣红染液（配方：2g地衣红，60ml加蒸馏水至100m1 )。
【办法】 (1)取材：吸取待检培养液1 ml, 500～800r/min，离心5分钟后去上清液，余留0.2m1备用。
(2）低张处理：用新奇配制的0.45％溶液0.2m1，加入上述待检标本中，静止低张处理10分钟，然后离心去上清液，留取沉淀物0. 2m1，涂片2～3张，晾干。
(3）固定：用新配制的Carnoy液固定2次，共10分钟。
(4）染色：将晾干的涂片用2％的地衣红染5分钟。
支原体 血常规特点
支原体血常规特点
支原体是一类细菌，其感染常导致呼吸道感染，包括支气管炎、肺炎等。
血常规是一种检查方法，用于评估机体的整体健康状况和炎症反应程度。
下面是支原体感染时可能出现的血常规特点：
1. 白细胞计数升高：支原体感染可导致机体炎症反应，使白细胞计数增加，尤其是中性粒细胞计数。
2. 中性粒细胞比例升高：中性粒细胞是一种主要参与炎症反应的白细胞类型，支原体感染时，中性粒细胞比例通常会增加。
3. 淋巴细胞计数降低：支原体感染可能引起淋巴细胞的减少，导致淋巴细胞计数降低。
4. C-反应蛋白（CRP）升高：CRP是一种指示炎症反应程度的标志物，支原体感染时，CRP水平通常会升高。
需要注意的是，血常规结果并不能直接确定是否存在支原体感染，仅能作为辅助诊断参考。
确诊支原体感染需要通过临床症状、体征以及其他实验室检查（如咽拭子培养、PCR检测等）综合判断。
如果怀疑自己或他人可能存在支原体感染，请及时就医并遵循医生的建议进行进一步检查和治疗。
支原体肺炎的诊断和检查
支原体肺炎的诊断和检查摘要：支原体肺炎是由支原体引起的一种常见的呼吸道感染疾病。
本文将介绍支原体肺炎的诊断和检查方法，以便医生能够迅速准确地诊断并制定有效的治疗计划。
引言支原体肺炎是一种由支原体引起的下呼吸道感染疾病，通常表现为咳嗽、咳痰、发热、胸痛等症状。
它对人体的呼吸系统造成了一定的影响，因此早期的诊断和治疗对患者的康复至关重要。
以下是支原体肺炎的常用诊断和检查方法。
临床症状和体征患者最常见的症状是咳嗽和咳痰，可能伴随有发热、胸痛、气急等症状。
临床体征方面，可以发现患者有肺部啰音、肺部实变征象等。
但这些症状和体征缺乏特异性，因此需要经过实验室检查以明确诊断。
实验室检查1. 特异性检查•支原体培养：支原体培养是确诊支原体肺炎最常用的方法之一。
可通过患者的呼吸道分泌物、血液、尿液等样本进行培养，以检测和鉴定支原体的存在。
•酶联免疫吸附试验（ELISA）：ELISA是一种能够检测血清中支原体抗体的方法。
通过检测患者的血清中的特定抗体水平，可以判断是否感染了支原体。
2. 非特异性检查•血常规检查：支原体肺炎可引起白细胞计数升高，中性粒细胞比例增高等炎症反应。
因此，血常规检查可以作为支原体感染的辅助诊断方法之一。
•C-反应蛋白检查：C-反应蛋白是一种血液中的炎症标志物，支原体感染时C-反应蛋白水平可升高，因此可以作为支原体肺炎的非特异性检查指标之一。
影像学检查•胸部X线片：胸部X线片是检查支原体肺炎最常用的影像学方法之一。
它能够显示肺部阴影、肺炎灶、肺部实变等病变，有助于确诊支原体肺炎并判断病变的范围和程度。
•胸部CT扫描：当出现疑似支原体肺炎的复杂病例或胸部X线片结果不明确时，可以进行胸部CT扫描以获得更精确的影像信息。
痰液检查•痰涂片检查：痰涂片检查是一种常用的支原体肺炎的诊断方法，通过显微镜观察痰液标本中的支原体形态特征和数量来确定是否存在支原体感染。
•聚合酶链式反应（PCR）：PCR技术能够通过放大和检测支原体的DNA片段来诊断支原体感染。
支原体感染的临床表现及诊断方法
支原体感染的临床表现及诊断方法支原体感染是一种常见的传染病，由支原体引起，主要感染呼吸道和生殖道。
本文将详细介绍支原体感染的临床表现以及常用的诊断方法。
一、支原体感染的临床表现支原体感染的临床表现多种多样，可分为上呼吸道感染和生殖道感染两类。
1. 上呼吸道感染支原体上呼吸道感染主要表现为咳嗽、咳痰、咽部不适等症状。
部分患者还可能伴有发热、鼻塞、流涕等感冒样症状。
咳嗽通常为刺激性咳嗽，咳痰多为粘稠的白色或黄色。
咽部不适可表现为咽痛、咽干等。
2. 生殖道感染支原体生殖道感染主要表现为尿道炎、阴道炎、附件炎等症状。
男性患者可出现尿道口灼痛、尿道分泌物增多等症状，部分患者还可能出现会阴部不适。
女性患者常伴有阴道异味、白带增多、下腹痛等症状，严重者可能出现月经紊乱、盆腔炎等并发症。
二、支原体感染的诊断方法支原体感染的诊断主要依靠临床症状和实验室检查。
1. 临床症状评估医生会根据患者的症状和体征进行评估，包括询问病史、检查呼吸道或生殖道分泌物等。
根据患者的临床表现，医生可以初步判断是否为支原体感染。
2. 实验室检查支原体感染的实验室检查主要包括核酸扩增检测、免疫学检测和细菌培养。
核酸扩增检测是目前最常用的方法，可以通过采集患者的呼吸道或生殖道分泌物样本，检测支原体的核酸是否存在。
这种方法具有灵敏度高、特异性好的优点，能够快速、准确地诊断支原体感染。
免疫学检测可以检测人体对支原体的免疫反应情况，如支原体特异性抗体的产生。
该方法对于病程较长的患者或治疗后的随访诊断具有一定的价值。
细菌培养可以通过培养患者的分泌物样本，观察是否能够分离出支原体。
该方法虽然能够明确诊断，但需要较长的培养时间，一般不是首选的检测方法。
三、结语支原体感染是一种常见的传染病，临床表现主要包括上呼吸道和生殖道的症状。
诊断时可以通过临床症状评估和实验室检查来确定。
核酸扩增检测是目前最常用的方法，能够快速、准确地诊断支原体感染。
支原体感染的临床表现和诊断方法
支原体感染的临床表现和诊断方法支原体感染是一种由支原体引起的疾病，其临床表现多样化，包括上呼吸道感染、肺炎、泌尿道感染等。
本文将介绍支原体感染的临床表现以及常用的诊断方法。
一、支原体感染的临床表现支原体感染可引起多种疾病，但其临床表现在不同类型的感染中有较大差异。
下面将分别介绍几种常见的支原体感染及其临床表现。
1. 上呼吸道感染支原体引起的上呼吸道感染表现为咽痛、咳嗽、鼻塞、流涕等症状。
患者常有咽部充血、扁桃体肿大等体征，并可出现咽后壁黏膜淡红色或灰白色小斑点。
2. 肺炎支原体肺炎通常表现为咳嗽、咳痰、胸痛、发热等症状。
体格检查可发现肺部湿性啰音或干性啰音，部分患者可出现肺部实变的体征。
3. 泌尿道感染支原体引起的泌尿道感染主要表现为尿频、尿急、尿痛等症状。
女性患者还可出现阴道分泌物增多、灼痛感等症状。
实验室检查可发现尿液中有中性粒细胞、红细胞、细菌等异常。
二、支原体感染的诊断方法支原体感染的诊断主要依靠病史、临床表现和实验室检查。
下面将介绍常用的支原体感染诊断方法。
1. 实验室检查（1）核酸扩增技术（PCR）：PCR技术能够检测支原体的DNA，具有高度敏感性和特异性，是目前最常用的诊断方法之一。
（2）酶联免疫吸附试验（ELISA）：ELISA可以检测支原体抗体，通过检测患者的血清中是否存在支原体抗体来确定感染情况。
2. 临床检查根据患者的临床表现进行相关检查，如咽拭子、痰液培养、尿液常规等。
三、总结支原体感染的临床表现多种多样，包括上呼吸道感染、肺炎、泌尿道感染等。
在诊断方面，实验室检查是常用的诊断方法，包括核酸扩增技术（PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）。
根据患者的临床症状和实验室检查结果，结合医生的临床经验，可以确诊支原体感染，并制定相应的治疗方案。
文章结束。
支原体性状特点以及标本采集方法
支原体性状特点以及标本采集方法支原体是一类细菌，具有以下特点和标本采集方法。
支原体的特点：1.小型：支原体是一类非常小的细菌，通常直径在0.2-0.3微米之间。
2.無細胞壁：支原体缺乏典型的细菌细胞壁，这使得它们对许多抗生素不敏感。
3.依赖于寄主细胞：支原体无法独立生存和繁殖，它们需要感染寄主细胞才能生存。
支原体的标本采集方法：1.喉拭子：对于喉咙感染相关的支原体，最常用的采样方法是喉拭子。
采样时，医生会用一根棉签或拭子蘸取样本，轻轻在患者的咽喉部位刮取。
采集后的拭子直接送往实验室进行检测。
2.血液：对于一些支原体感染，如肺炎支原体感染，采集患者的静脉血样本进行检测是非常常见的方法。
3.分泌物：支原体也可以通过分泌物进行传播，例如尿液、生殖道分泌物、眼结膜分泌物等。
对于这些情况，医生会使用适当的采样器具或容器来收集患者的分泌物样本。
4.病灶组织：在一些情况下，支原体感染可能导致组织病变，如支原体肺炎。
在这种情况下，医生可能会采集受影响的组织样本，例如通过胸腔镜检查或活检。
采集支原体标本的注意事项：1.一手在采集标本时要避免污染和交叉感染。
医生和护士在采集标本前要充分洗手并戴上清洁的手套。
2.采集过程应尽可能快速而准确，以保证标本的可靠性。
3.不同的支原体感染，合适的标本采集方法可能会有所不同。
医生在采集标本前应充分了解感染的特点和病情。
4.采集后的标本应尽快送往实验室进行检测，以避免标本质量的降低。
总结：支原体是一类无细胞壁的小型细菌，寄生于寄主细胞并引起感染。
对于支原体感染的标本采集，常用的方法包括喉拭子、血液、分泌物和病灶组织。
在采集标本时需要注意防止污染、快速准确采集，并及时送至实验室进行检测。
儿童支原体感染的诊断和检测方法
儿童支原体感染的诊断和检测方法随着现代医学的发展，人们对于儿童疾病的认知也逐渐提升。
其中，儿童支原体感染是一种常见但容易被忽视的疾病。
支原体是一种微小的细菌，主要寄生在宿主的呼吸道粘膜上，并且可引发呼吸系统感染和其他疾病。
为了及时诊断和治疗儿童支原体感染，医学界不断探索和改进诊断和检测方法。
一、临床表现儿童支原体感染的临床表现多样，且不易与其他疾病区分。
一般来说，儿童感染支原体后会出现发热、咳嗽、喉咙痛等症状，伴有鼻塞、流涕等上呼吸道症状。
部分儿童还可能出现呼吸急促、胸闷等严重症状。
尽管这些症状与其他呼吸道感染相似，但是当症状持续时间较长，且反复发作时，就需要考虑是否是儿童支原体感染了。
二、诊断方法1. 临床评估：医生通过仔细询问患儿的病史、观察病情变化和体格检查等方式，对儿童患者的症状进行评估。
这有助于初步判断是否为支原体感染。
2. 病原学检测：支原体感染的最可靠的诊断方法是通过病原学检测来确认。
这种检测方法可以通过采集喉咽拭子样本、鼻腔样本或者痰液样本进行。
然后，将样本送往实验室进行PCR检测、培养或免疫分析等。
这些方法能够快速、准确地检测出支原体的存在。
3. 血清学检测：血清学检测是通过分析患者的血清中是否存在支原体特异性抗体来诊断感染。
这种方法通过采集患者的血液样本进行实验室检测。
值得注意的是，血清学检测一般用于儿童感染超过3周时，因为抗体在感染后1-3周才能产生。
4. 影像学检查：在儿童支原体感染的诊断中，肺部X光或CT扫描有助于判断是否存在肺炎等相关并发症。
这种检查方法对于评估病情严重程度和指导治疗也具有重要意义。
三、治疗方法一旦确诊儿童支原体感染，及时治疗是非常重要的。
在进行治疗时应遵循个体化原则，根据患儿的年龄、病情和药物敏感性等因素制定合理的治疗方案。
常见的治疗方法包括抗生素治疗和对症治疗。
抗生素治疗能够抑制支原体的生长和繁殖，一般常用的抗生素有红霉素、阿奇霉素等。
而对症治疗则主要针对症状进行控制，如退烧、止咳等。
支原体感染的病学特征和变异情况
支原体感染的病学特征和变异情况支原体感染是一种常见的细菌感染，主要通过直接或间接接触感染者的呼吸道分泌物传播。
这种感染在全球范围内都普遍存在，并且容易造成呼吸道疾病、泌尿生殖道疾病等一系列健康问题。
本文将讨论支原体感染的病学特征及其变异情况。
一、支原体感染的病学特征支原体感染主要通过空气飞沫传播，尤其容易在集体居住或工作环境中传染。
它是一种非细胞内寄生的革兰氏阴性杆菌，具有较小的细胞膜和缺乏细胞壁的特点。
由于其细菌体的形态特征，支原体在常规细菌培养中很难被检测到，因此临床上的诊断主要依靠血清学检测或分子生物学方法。
支原体感染主要引发上呼吸道感染、肺炎、结膜炎、尿道炎等疾病。
其症状包括咳嗽、流鼻涕、喉咙疼痛、发热等。
感染后，病情一般会在1到3周内自行缓解，但也有些患者可能会出现慢性感染，持续数月或数年不愈。
二、支原体感染的变异情况1. 基因变异支原体具有较高的基因变异率，使其能够不断适应宿主的免疫压力和环境的变化。
这种基因变异导致了支原体的免疫逃避能力提高，同时也增加了其耐药性。
2. 菌株变异支原体可分为多个不同的血清型和菌株，其中P1血清型是最常见的，也是最容易引起疾病的类型。
不同的支原体菌株对宿主的致病性、传播能力和感染程度也有所不同。
3. 抗药性变异随着抗生素的广泛使用，支原体对抗生素的耐药性逐渐增加。
已经发现了多种耐药支原体菌株，包括对四环素、大环内酯类和氟喹诺酮类等抗生素的耐药。
4. 病情变异支原体感染的病情表现可以有很大的变异性。
有些感染者可能只出现轻微的症状，而另一些人则可能出现明显的呼吸道症状、泌尿系统症状或结膜炎等表现。
病情和症状的严重程度可能与宿主的免疫状态、感染菌株和基因变异有关。
综上所述，支原体感染在临床上有着明确的病学特征，并且会呈现出一定的变异情况。
了解这些特征和变异情况有助于医生更好地诊断和治疗该感染，同时也提醒公众采取措施预防感染的发生。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2um)并独立生活的微生物。
约有1%可通过滤菌器。
支原体无细胞壁形态呈高度多形性。
可为圆形、丝状或梨形。
支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。
电镜下观察支原体膜为三层结构。
其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。
支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。
横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央无颗粒群或中央束。
支原体代谢需固醇类物质、部分种类需要精氨酸、O 2或葡萄糖，每一种支原体都有自身持点。
多数支原体适合于偏碱条件下生存(P H7.6—8.0)，对酸耐受性差。
对热比较敏感，对一般抗生素不敏感。
支原体污染细胞后。
培养液可不发生混浊。
多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解。
因此易被忽视。
但个别严重者，可致细胞增殖缓慢。
甚至从培养器皿脱落。
为确定有无支原体污染可做如下检酗：①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油镜观察。
支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。
②荧光染色法：荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258，可使支原体内含有的DNA着色，染色后用荧光显微镜观察。
具体方法如下：首先将细胞接种盖玻片上，在细胞未长满前取出玻片，用不合酚红的Hanks液漂洗一下，用l： 3醋酸甲酵固定10Min，然后用生理盐水漂洗。
置于用生理盐水配浓度为50pg／ml的Hoechst 33258中染色10min。
染色后用蒸溜水洗1—2min。
向细胞面滴加pH5.5磷酸缓冲液数滴，然后置荧光显微镜下观察。
镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。
③电镜检查；用扫描电镜方法简便快速。
也可以利用透射电镜。
④DNA分子条文检查或支原体培养等方法：检出率高。
但方法较为复杂支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。
它不同于细胞，也不同于病毒。
支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。
支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。
细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题。
在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。
国内外研究表明，95％以上是以下四种支原体：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和莱氏无胆甾原体（idlawii），为牛源性。
以上是最常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。
支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。
组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染；严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。
支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。
支原体最突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如 -内酰胺类、万古霉素等完全不敏感；对多粘菌素（polymycin）、利福平、磺胺药物普遍耐药。
对支原体最有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮；其他类抗生素如氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小抑制作用，所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。
InvivoGen公司研究开发的新一代支原体抗生素M-Plasmocin能有效地杀灭支原体，不影响细胞本身的代谢，并且用M-Plasmocin处理过的培养细胞，不会重新感染支原体。
红霉素有效，而且不影响细胞生长。
网友“smilewf”经验是细胞刚开始被支原体污染，细胞生长极为缓慢，而且状态不好，细胞之间及底部总有一些亮晶晶的颗粒状物质，换液后好些，但过2天又会增多，培养液清亮，严重时象一层细沙铺在瓶底。
刚开始以为是消化过头引起的细胞的碎片和细胞内的颗粒，后来发现与胰酶消化无关。
使用红霉素（就在医院的门诊购买，很便宜）后这种现象明显好转，背景干净，细胞生长很快，状态明显好转，但好像红霉素不能完全根治支原体感染，停药后一段时间可以复发，但如果细胞很重要有没有多余的细胞时可以考虑一试，我用后觉得效果不错。
网友“zllxash”的经验：支原体是细胞培养中最常见的，干扰实验结果的一种污染。
但由于不易被察觉，有些污染的细胞仍在继续使用。
据查，目前各实验室使用的二倍体细胞和传代细胞中约有11%的细胞受到支原体污染。
因此，对支原体污染应严加防范。
用卡那霉素预防支原体污染有效。
检测方法：1、相差显微镜检测；2、低张处理地衣红染色观察；3、DNA荧光染色法；4、电镜检测；5、3-H胸腺嘧啶掺入法；6、聚合酶链反映法；7、免疫学方法； 8 、支原体的培养。
对于支原体污染的细胞，可以采取补救措施：1、抗生素排除法：可以用5-10倍于常用量的冲击法，加入高浓度抗生素后作用24-48小时，再换入常规培养液，有时可能有效。
推荐用量：庆大霉素 200ug/ml ,四环素10ug/ml ，卡那霉素50ug/ml 。
对于支原体污染抗生素应用，预防性应用比污染后使用好。
2、 加温除菌：根据支原体耐热性能差的特点。
将受支原体污染的细胞置于41度中作用5-10小时可以杀灭支原体。
但由于41度对培养细胞本身也有较大的影响，故处理前，应先进行预试验，确定出最大限度杀伤支原体而对细胞影响较小的处理时间。
支原体菌株来源：M.Arginini ATCC23838 精氨酸支原体,M.FermentaneATCC19989发酵支原体 ,M.SalivariumATCC23064唾液支原体 ,M.HominisATCC23114人型支原体 ,M.OraleATCC23714口腔支原体 ,M.HyorhinisATCC29052猪鼻支原体。
其共同引物序列来自16s和23s保守区域，外部引物为Ｆ1 5′-ＡＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＧＣＴＧＧＴＡＡＴ-3′，Ｒ1 5′-ＧＴＴＣＡＴＣＧＡＣＴＴＴＣＡＧＡＣＣＣＡＡＧＧＣＡＴ-3′；内部引物为 Ｆ2 5′-ＧＴＴＣＴＴＴＧＡＡＡＡＣＴＧＡＡＴ-3′，Ｒ2 5′-ＧＣＡＴＣＣＡＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＴ-3′。
ＰＣＲ反应体系和条件：10×缓冲液(10ｍＭＴｒｉｓ-ＨＣｌ、500ｍＭＫＣｌ、20ｍＭＭｇＣｌ2、0.01%明胶)、ＰｒｉｍｅｒＦ1、Ｒ1、Ｆ2、Ｒ2的浓度为2ｎｍｏｌ/μＬ、2.5ｍＭｄ ＮＴＰｓ、Ｔａｑ酶、Ｈ2Ｏ、石蜡油覆盖。
反应温度和时间为:94℃/2ｍｉｎ预变性、94℃/30ｓ变性、55℃/1ｍｉｎ退火、72℃/1ｍｉｎ延伸,循环30次后72℃延伸5ｍｉｎ。
第1次ＰＣＲ反应取模板10μＬ,第2次ＰＣＲ反应以第1次ＰＣＲ扩增产物为模板取1μＬ。
一种名为BM-Cyclin的化学试剂，除体外培养癌细胞中支原体污染具体方法：1、选用抗支原体药物(BM-Cyclin-1、2 )，磷酸缓冲液配制，溶液抽滤除菌，0～4℃保存。
2、细胞处理过程：细胞传代同时加BM-Cyclin-1 10μg/ml，37℃培养3天；胰蛋白酶消化、传代，加入BM-Cyclin-2 5μg/ml，37℃培养3天；继续传代追加BM-Cyclin-2 5μg/ml一次，培养2～4天(如细胞污染严重可重复上述处理过程)弃药液，D-Hank’s液洗2次，胰蛋白酶消化传代，进行常规培养。
3 、在细胞检测或实验前，最好再用常用量的5倍庆大霉素或卡那霉素作短时间处理，每天30～60分钟。
支原体的污染是目前细胞实验室比较普遍存在的问题，用药物来杀灭支原体虽是一种重要措施，毕竟是一种补救方法，而且清除后，支原体仍可重新污染细胞。
因此，重要的还在于预防，如严格选用无支原体污染的牛血清，保持细胞培养间洁净和严格无菌操作等。
网友“arlbor”把从网上和书上看到的一些资料与大家讨论一下吧:细胞株若受到细菌、真菌、支原体、或是特定病毒等之污染时，会严重的影响实验的结果。
而细菌、真菌等之微生物污染时，较易自培养基等的外观变化察觉。
但是若受到支原体之污染时，细胞之外观较无明显变化，但是其污染会造成细胞之生长速率缓慢、细胞产生病变之型态改变等等变化。
各国细胞库支原体污染的统计表，如下：国家 受支原体污染(%) 报告年度USA－FDA 15 1993(past 30 years)USA－ATCC 15-20 1992Japan－(IFO，RIKEN，JCR 80~30~22 1981 1987-19931998Germany－DSM 36 1990-1994Argentina 65 1987Israel 32 1986-1993China 95 1990造成支原体高污染率的原因为：1、支原体size 0.1~0.8 um，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um）2、支原体污染时，没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化3、过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式4、细胞流通间缺乏品管，造成实验室间的相互污染5、研究或操作人员忽略污染问题而支原体污染了来源:1、已受污染的细胞2、操作人员的疏失3、已受污染的培养基、血清4、操作环境不良、实验器具不洁等由于支原体为人体口腔中之正常菌丛，实验室之操作人员的污染亦可能为污染源，须十分注意。
而万一细胞已受支原体污染时，最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃，以免污染其它洁净的细胞株。
但是若是坚持要作去除支原体污染，有以下几种方法，只不过结果会与原始的细胞特性有差异。
去除支原体污染：1、抗生素处理：BM-cyclin（Roche），MRA（mycoplasma removal agent，ICN），Ciprofloxcin（Bayer），Enrofloxacin （Bayer）2、Nucleic acid metabolites：5-bromouracil，Hoechst 33258，bromodeoxyuridine3、Anti-sera预防与控制方面可从以下各点加强注意：G 设备方面：1、使用已作支原体测试ok之细胞株2、于另一隔离之区域操作未知是否有支原体污染之细胞3、使用不添加抗生素的培养基培养细胞G 检测方面：定期以标准的支原体检测方法检测细胞、培养基、血清、ddH2O有否被支原体污染。